放疗前、中c-myc蛋白表达与宫颈癌细胞凋亡和增殖的关系

目的：探讨在放射治疗前、中宫颈癌细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达与细胞凋亡和增殖的关系。方法：对 ４８例宫颈癌患者分别于放疗前、放疗 ２０Ｇｙ／２周取活检,石蜡包埋。应用原位ＤＮＡ缺口未端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测细胞凋亡,应用免疫组化法对ｃ－ｍｙｃ蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行检测。结果。 ４８例宫颈癌患者放疗前、放疗 ２０Ｇｙ凋亡阳性率分别为６７％、８５％,有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。放疗前ｃ－ｍｙｃ蛋白阳性表达率为 ７８％,ＰＣＮＡ阳性表达率为８６％,放疗２０Ｇｙ其表达率分别为４３％和５５％,放疗前、中比较均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。放疗２０Ｇｙ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与凋亡有明显相关性。放疗前及放疗２０Ｇｙ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与ＰＣＮＡ表达有相关性。结论：ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与宫颈癌细胞增殖有关,亦与放射诱导宫颈癌细胞凋亡有关。     

热休克蛋白27/转录激活因子5复合物在高糖诱导足细胞凋亡中的意义

目的研究足细胞内热休克蛋白27(HSP27)是否与转录激活因子5(ATF5)形成复合物及其在足细胞凋亡中的意义。方法高糖刺激体外培养的小鼠肾小球足细胞系建立细胞凋亡模型,应用Hochest染色、流式细胞技术测定细胞凋亡。应用Western印迹分析技术检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径的活化,应用免疫共沉淀技术检测HSP27和ATF5形成复合物的变化,阻断实验观察MAPK信号途径对高糖调节足细胞HSP27与ATF5形成复合物以及足细胞凋亡的影响。结果成功建立了高糖刺激足细胞凋亡的模型,30mmol/L高糖刺激48h凋亡率(27.2%±8.9%)显著高于5.5mmol/L正常糖(对照)48h组(10.6%±2.7%,P<0.05)。正常糖(对照)组细胞HSP27与ATF5即可形成复合物,而在高糖刺激12hHSP27与ATF5形成的复合物明显增加为正常糖组的195%±36%(P<0.05)。高糖刺激30min即可使细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和p38活化。进一步阻断实验显示ERK1/2活化抑制剂可以减弱高糖刺激引起HSP27和ATF5形成复合物的效应(PD98059+高糖组为109%±19%,高糖组211%±46%,P<0.05),同时加重高糖诱导细胞凋亡(PD98059+高糖组凋亡率为51%±4%,高糖组凋亡率为27%±9%)(P<0.05)。p38活化抑制剂不影响高糖刺激引起的HSP27和ATF5形成复合物(SB20358+高糖组为290%±43%,高糖组为231%±20%,P>0.05),但可减轻高糖诱导细胞凋亡(SB20358+高糖组凋亡率为16%±6%,高糖组凋亡率为27%±9%)(P<0.05)。结论高糖依赖ERK1/2信号通路而不是p38信号通路刺激足细胞HSP27与ATF5形成复合物的增加,蛋白复合物可能在高糖诱导的足细胞凋亡中起保护作用。     

Caspase-3融合蛋白基因的构建及其对HeLa细胞凋亡的诱导作用

目的：观察重构型caspase-3及其N-端融合蛋白的表达对HeLa细胞的凋亡诱导作用。方法：用反转录PCR获取人caspase-3基因,用重组PCR方法构建人重构型caspase-3及其融合蛋白基因,将基因克隆入表达载体pcDNA3,脂质体法转染HeLa细胞,通过细胞计数、电镜观察、MTT法等检测被转染细胞的生长及其凋亡状况。结果：成功获得了caspase-3基因,构建了重构型caspase-3基因和重构型caspase-3与绿脓杆菌外毒素（PE）转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因及其表达载体,与对照组相比,在转染后1-4d内,两种基因的表达均导致HeLa细胞存活数减少,大量细胞发生凋亡,且二活性相当。结论：重构型caspase-3及其融合蛋白可以诱导转染的HeLa细胞发生凋亡。     

肿瘤坏死因子诱导的U937细胞凋亡与Bcl-2基因表达的关系

目的 探讨肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）诱导的Ｕ９３７细胞凋亡与Ｂｃｌ－２基因表达的关系。方法 首先用ＴＮＦ处理Ｕ９３７细胞,提取小片段ＤＮＡ进行ＤＮＡ断裂分析,并通过ＲＴ－ＰＣＲ检测细胞的Ｂｃｌ－２基因ｍＲＮＡ表达,继而以磷酸钙沉淀法将Ｂｃｌ－２基因转染到Ｕ９３７细胞,用Ｇ４１８筛稳定转染子,然后用不同剂量ＴＮＦ处理后观察转染与未转染细胞的存活率。结果 ＴＮＦ诱导的Ｕ９３７细胞Ｂｃｌ－２基因的ｍＲＮＡ表     

细胞凋亡调节基因蛋白表达与前列腺癌的预后

目的 :探讨细胞凋亡调节基因蛋白表达与前列腺癌临床预后的关系。方法 :采用免疫组化染色方法 ,检测 5 7例前列腺癌中Fas及其配体 (FasL)、bcl 2、bax的表达 ,并同前列腺癌临床和病理特征一起 ,先后进行单因素和多因素分析。结果 :bax在前列腺癌低分化肿瘤中的表达强于在高分化肿瘤中的表达 (P <0 0 5 ) ;FasL表达可能对生存预后有一定影响 ,而肿瘤分化程度与临床分期仍是重要的预后指标。结论 :FasL表达可能与前列腺癌预后有关。     

阿那曲唑对乳腺癌组织c-myc表达的影响

目的:探讨阿那曲唑对初次罹患乳腺癌患者癌组织c-myc表达的影响.方法:在患者知情情况下,行乳腺癌切除术前3 d到1 wk,获取40例患者部分肿瘤组织后,对患者施予阿那曲唑治疗.手术过程中获取肿瘤组织.将肿瘤组织研磨后,Western Blot分析乳腺癌组织中c-myc的表达.同时免疫组化检测乳腺癌组织雌激素受体表达情况.并用ELISA方法检测患者治疗前后血清中的雌二醇水平.结果:40例患者中,雌激素受体阳性患者为28例,占70%.经阿那曲唑治疗后,雌激素受体阴性患者c-myc表达无明显变化(P＞0.05);雌激素受体阳性患者c-myc表达有显著变化(P＜0.05),其中23例患者c-myc表达明显降低,2例没有变化,3例升高.阿那曲唑能够降低所有患者的外周血雌二醇的水平.结论:对于绝经后的乳腺癌雌激素受体阳性患者,阿那曲唑能够有效地降低癌基因c-myc的表达,从而降低癌细胞的转移性.     

反义p21WAF1/CIP1基因转染对肾癌细胞凋亡抑制作用的影响

目的 探讨p21^WAF1/CIP1基因在顺铂诱导的GRC-1肾癌细胞凋亡过程中的作用。方法 使用脂质体转染方法将正义p21^WAF1/CIP1基因及反义p21^WAF1/CIP1基因基因分别导入GRC-1肾癌细胞系中，对所获转染细胞进行形态学观察和流式细胞仪检测。结果 在正义p21^WAF1/CIP1基因基因转染后GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导细胞凋亡的作用增强；在反义p21^WAF1/CIP1基因基因转染后GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导细胞凋亡的作用受到抑制。结论 在GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导的细胞凋亡至少部分是通过p21^WAF1/CIP1基因基因发挥作用。p21^WAF1/CIP1基因基因作为一个与细胞凋亡的相关基因可能参与肾癌细胞凋亡的调控。     

鼻咽癌肿瘤细胞增殖与凋亡关系及其分子机制的研究

目的了解鼻咽癌肿瘤细胞增殖与凋亡的关系及ｂｃｌ２表达在发病机制中的作用。方法１５例癌旁组织,６５例鼻咽癌用免疫组化技术标记ｂｃｌ２、ＰＣＮＡ,ＨＥ染色中作核分裂像计数,并将后两者合并为增殖指数;用ＩＳＥＬ法显示４４例鼻咽癌及１５例癌旁组织中的细胞凋亡。结果①鼻咽癌ＰＣＮＡ、核分裂像、凋亡细胞数均显著高于癌旁组织,但均与组织分型无关。增殖指数与凋亡细胞数呈正相关。②ｂｃｌ２在鼻咽癌中高表达,与组织分型有关,与凋亡细胞数呈负相关。结论①鼻咽癌肿瘤细胞具有高水平增殖的同时也具有高水平的凋亡,其肿瘤本身是高水平基础上增殖与凋亡失衡的结果。②ｂｃｌ２不是调控肿瘤细胞凋亡的唯一因素,但其抑制细胞凋亡的功能在鼻咽癌发病机制中有重要作用。     

凋亡蛋白Bax在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导恶性淋巴瘤细胞耐药中的调节作用

目的探讨凋亡蛋白Bax在恶性淋巴瘤细胞对肿瘤坏死因子凋亡诱导配体（TRAIL）凋亡抵抗中的调节作用,为临床克服肿瘤耐药提供治疗靶点。方法分别采用500彬LTRAIL和／或10nmol／L蛋白酶体抑制剂PS-341处理恶性淋巴瘤细胞（CRL）和正常对照细胞（HRC）。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。荧光显色技术检测细胞半胱氨酸蛋白水解酶-8酶活性。Western印迹检测细胞中Bax蛋白表达水平。免疫沉淀技术（IP）检测Bax蛋白的活性及构象变化。结果与HRC细胞比较,CRL细胞对TRAIL存在显著抵抗,24h凋亡指数仅为21％,前者为32％,两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）;同时在TRAIL作用过程中CRL细胞中Bax表达呈下降趋势,24h表达量仅为正常量的5／17。当联合使用PS-341后,可有效抑制Bax蛋白降解,6h表达量为正常量的1．2倍,显著增加活性;同时增加半胱氨酸蛋白酶．8酶活性,6h为26．5μmol·L^-1·h^-1·mg^-1蛋白,从而增加细胞凋亡,6h凋亡指数达54％,与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论促凋亡蛋白Bax的下调表达参与恶性淋巴瘤细胞对TRAIL耐药性。合理的使用蛋白酶体抑制剂可通过抑制蛋白降解,增加其活性来有效克服肿瘤耐药。     

c-myc基因蛋白在外阴白斑和外阴鳞癌中的表达及临床意义

目的：研究c-myc基因蛋白在外阴白斑和外阴鳞癌中的表达。方法：采用SABC免疫组化法,对71例外阴白斑和21例外阴鳞癌标本进行c-myc基因蛋白检测。结果：c-myc基因蛋白在正常组织中主要分布在细胞核,外阴白斑各型和鳞癌组织中主要分布在细胞浆。外阴白斑各型与鳞癌组相比较,经X^2检验,正常组（X^2＝11．072,P＜0．05）,增生组（X^2＝5．692,P＜0．05）、硬化萎缩组（X^2＝16．488,P＜0．05）、混合组（X^2＝6．497,P＜0．05）和不典型增生组（X^2＝1．072,P＞0．05）。21例鳞癌标本,I级,Ⅱ级,Ⅲ级中c-myc蛋白的阳性率 分别为100．0％（9／9）,85．7％（6／7）,60．0％（3／5）。结论：c-myc基因蛋白 表达和分布与外阴白斑分型有关,外阴鳞癌和不典型增生组织中表达阳性率明显高于外阴白斑各型,c-myc基因蛋白的过度表达可能与外阴鳞癌的发生有一定的关系。     

致敏豚鼠气道及肺组织c—myc基因的表达与哮喘发病的关系

研究原癌基因在哮喘发病中的作用。方法以卵蛋白致敏诱发豚鼠哮喘建立实验模型。用分子杂交技术分别观察正常及哮喘发作后ｃ－ｍｙｃ在豚鼠气道及肺组织中的表达水平。结果：原癌基因ｃ－ｍｙｃ在豚鼠哮喘发作后即刻表达增强，且呈时间依赖关系，并可被糖皮质激素部分抑制。     

食管癌组织hTERT和c-Myc的表达

目的 :探讨食管癌及癌前病变组织中端粒酶催化亚单位 (hTERT)基因及c Myc蛋白的表达以及相互关系方法 :采用原位杂交法检测 4 2例食管癌组织、37例不典型增生组织及 12例正常食管组织中hTERTmRNA的表达 ;用免疫组化S P法检测c Myc蛋白表达 .结果 :在正常食管粘膜 不典型增生 食管癌组织中 ,hTERTmRNA的阳性表达率分别为 0 ,4 8.6 % ,83.3% ;c Myc蛋白阳性表达率分别为 0 ,4 5 .9% ,5 9.5 % .食管癌、不典型增生组织中hTERTmRNA与c Myc蛋白阳性表达率较正常食管粘膜组织差异有显著性 (P<0 .0 1,P =0 .0 0 2 ,P <0 .0 1,P =0 .0 0 4 ) ,癌组织中hTERTmRNA阳性表达率较不典型增生组织差异有显著性(P =0 .0 0 2 ) .食管癌组织中hTERTmRNA表达与临床分期、淋巴结转移有关 (P =0 .0 1,P =0 .0 4 4 ) ,c Myc蛋白表达与淋巴结转移有关 (P =0 .0 2 6 ) ;结果还显示hTERTmRNA和c Myc蛋白表达具有相关性 (P <0 .0 1) .结论 :c Myc蛋白与hTERT基因的过度表达在食管癌的发生发展过程中具有重要作用 ,c Myc蛋白在转录水平上调控hTERT基因的表达 ,激活端粒酶 ,可能是食管癌发生发展的重要阶段     

严重烧伤大鼠心肌[Ca2+]i浓度变化及与原癌基因c-fos、c-myc表达的关系

目的：了解大鼠严重烧伤后心肌细胞胞内游离钙离子浓度[Ca^2 ]i动态变化特征及与原癌基因c-fos、c-myc表达的关系。方法：复制Wistar大鼠30％体表面积（TBSA）Ⅲ度烧伤模型，随机分为烧伤组，补液组，维拉帕米治疗组和对照组。烧伤后不同时相点处死动物。Fura-2/AM测定大鼠心肌细胞胞内游离钙离子浓度，原位杂交技术检测心肌c-fos、c-myc mRNA的表达。结果：心肌细胞胞内游离钙离子逍度单烧组和补液组明显升高（IP＜0．01），维拉帕米治疗组轻度升高（P＞0．05），在0．5h,72h两个时相点，三个实验组心肌细胞[Ca^2 ]i明显低于对照组（P＜0．01）。除了维拉帕米治疗组c-fos、c-myc表达与钙离子浓度无相关性（r＝0．74，P＞0．05），其它各实验组c-fos、c-myc的表达与心肌细胞钙离子浓度成正相关性。结论：烧伤导致心肌细胞钙超载，补液不能阻止[Ca^2 ]i升高，而烧伤后大鼠心肌细胞原癌c-fos、c-myc的表达与胞内游离钙离子浓主有密切关，钙离子可能参与烧伤后心肌细胞原癌基因表达的调节。     

白血病患者治前骨髓塑料包埋切片c-myc原癌基因表达的初步研究

目的 探讨急、慢性白血病治疗前骨髓塑料包埋切片内ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的变化。方法 使用冷丙酮固定结合简易三步塑懈体系,观察了２２例急、慢性白血病患者骨髓活检ＧＭＡ地切片内白血病细胞ｃ－ｍｙｃ表达的检测结果。结果 急性髓系白血病（ＡＭＬ）时,１９％￣６９％白血病细胞内含有ｃ－ｍｙｃ蛋白,其含是在每例患者中多变。比较之下,治前的急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和慢性髓系白血病（ＣＭＬ）慢性期中就罕有检出     

c-myc和c-fos的阳性表达与肝细胞癌发生的相关性研究

目的：探讨c-myc和c-fos的阳性表达与肝细胞癌（HCC）发生的相互关系及11盏床意义。方法：运用免疫组化检测技术,分别检测肝癌组织、癌旁组织、正常肝脏组织中c-myc和c-los编码蛋白的表达。结果：正常肝组织c-myc和c-los均无阳性表达,而肝癌、癌旁组织均出现不同程度c-myc和c-los表达。c-myc在癌组织表达率为51．43％（36／70）,癌旁组织表达率为34．29％（24／70）,c-los在癌组织表达率为20．00％（14／70）,癌旁组织表达率为7．14％（5／70）,二者比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）。研究还发现,肝癌组织中c-myc和c-fos的表达存在相关性,一种基因的表达会导致另一种基因表达的升高。c-myc和c-los癌基因的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小无关,但与HCC的分化程度、UICC分期有关,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：癌基因c-myc、c-fos表达增强与HCC的发生、发展有密切关系。     

蛇床子素对宫颈癌Hela细胞凋亡的作用研究

目的 探讨蛇床子素对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的作用及可能的机制.方法 经不同浓度蛇床子素处理体外培养的宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,半定量RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达.结果 与对照组比较,不同浓度的蛇床子素均可明显抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、诱导细胞凋亡,增高细胞内ROS水平,降低Bcl-2/Bax的表达比例,且具有一定的剂量依赖性.结论 蛇床子素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并促进细胞凋亡,与升高细胞ROS水平、促进激活促凋亡因子Bax的表达和抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达有关.     

bcl-2、c-myc基因表达在去甲二氢愈创木酸诱导人恶性胶质瘤细胞凋亡中的意义

目的：观察bcl-2、c-myc在去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞凋亡中的变化及意义。方法：利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测培养细胞凋亡的情况,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2、c-myc基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:①一定浓度的NDGA处理SHG－44细胞12－96h,均可诱导SHG－44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;②经NDGA处理细胞后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞调亡的发生密切相关;③原位杂交结果显示,NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA诱导SHG－44细胞的凋亡可能与其下调bcl-2、c-myc基因的表达有关,但其确切机制有待进一步深入研究。     

Bcl-2基因在子宫内膜癌组织中的表达

目的 :探讨bcl 2基因在子宫内膜癌组织中的表达情况。方法 :应用免疫组织化学法 ,检测 2 9例子宫内膜癌患者癌组织中bcl 2基因的表达 ,对比其差异。结果 :随着手术病理分期的增加bcl 2在子宫内膜癌中的表达有上升的趋势 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;随着组织学分级的增加有下降 ,但差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :bcl 2基因在子宫内膜癌组织中有表达 ,可能与子宫内膜癌发展有关     

新生鼠缺氧缺血再灌注后海马c-Fos, c-Jun的表达与神经保护

目的：探讨新生鼠缺氧缺血再灌注后c-fos,c-jun表达与神经元损伤后存活的关系。方法：7日龄SD鼠，经弹性管穿线阻断右颈总动脉3h，予低氧1h；制备成缺氧缺血脑损伤（HIBD）模型。后施以不同时期的再灌注，彩色多普勒监测血流。用免疫组织化学的方法，观察c-fos,c-jun在仔鼠HIBD后不同再灌注时间点海马的表达变化。Thionin染色观察神经元的凋亡。结果：HIBD组右侧海马c-fos,c-jun 6h达高峰，24h稍降，48h又升高，7d后显降低但仍明显高于对照组（P＜0．01）。对照组c-fos,c-jun有极少数表达。Thionin染色发现：CA1区锥体细胞在HIBD再灌注24h后神经元有明显凋亡（P＜0．01），但7d后细胞凋亡无统计学意义（P＞0．05），CA3，DG区神经元也保持形态上的完好。对照组海马各区仅极少数神经元凋亡。结论：c-Fos,c-Jun参与HIBD后海马神经元损伤后修复和存活。