仙茅提取物体外抗氧化活性研究

目的 探讨仙茅提取物的抗氧化活性.方法 先用80%乙醇,然后用蒸馏水对仙茅进行提取,其中醇提浸膏依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取;水提部分经醇沉,制备仙茅粗多糖.分别观察仙茅各提取物对羟基自由基 (·OH)、1,1-二苯基-2-苦基苯肼自由基(DPPH·)的清除率以及对Fe~(3+)还原力.结果 与抗坏血酸比较,仙茅提取物对自由基均有较强清除作用,对·OH的清除率乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>粗多糖>总醇提物,IC_(50)值分别为0.247、0.358、0.796和0.871 mg/ml;对DPPH·的清除率乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>总醇萃取物>氯仿萃取物>石油醚萃取物>粗多糖,其IC_(50)值分别为0.026、0.055、0.620、0.071、0.122和0.275 mg/ml.不同提取物对Fe~(3+)有较强还原能力,还原力大小为:乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>总醇提物>氯仿萃取物>石油醚萃取物>粗多糖.结论 仙茅具有明显的抗氧化活性,在抗衰老方面有广泛的应用前景.     

家蝇幼虫分泌物抗菌组分的抗菌效果观察及筛选

目的筛选家蝇幼虫分泌物中的抗菌组分并测定其抗菌活性。方法用盐析、凝胶过滤层析、反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化分泌物中抗菌蛋白肽,以大肠埃希菌为指示菌种,采用平板滤纸片法检测抗菌活性,并观察其对金黄色葡萄球菌等多种细菌的抗菌活性。结果经50%~80%硫酸铵盐析沉淀、Sephadex G-100、G-50凝胶过滤柱层析分离得到一活性峰,该活性峰对大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌等细菌显示较强的抗菌作用,进一步用反相高效液相色谱纯化,该活性峰由3个活性组分构成。结论家蝇幼虫分泌物中含有3个抗菌组分,对多种革兰氏阳性及阴性菌具有较强的抗菌活性。     

光枝勾儿茶提取物的抗氧化活性

目的 探讨光枝勾儿茶提取物的抗氧化活性.方法 采用80%乙醇进行回流提取,其中醇提浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取.分别考察光枝勾儿茶各提取物对羟基自由基 (·OH)、二苯代苦味基肼自由基(DPPH·)的清除率以及对Fe3+的还原力.结果 与抗坏血酸(Vc)比较,光枝勾儿茶提取物对自由基均有较强清除作用,对·OH的清除率Vc>乙酸乙酯萃取物>石油醚萃取物>正丁醇萃取物>水层部分,半清除率浓度(IC50,mg/ml)分别为0.061、0.099、0.344、0.770、1.709;对DPPH·的清除率Vc>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>水层部分>石油醚萃取物,其半清除率浓度(IC50,mg/ml)分别为0.004 6、0.011 1、0.019 2、0.028 3、0.058 6.不同提取物对Fe3+有较强还原能力,还原力大小为:Vc>乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>石油醚萃取物>水层部分.结论 光枝勾儿茶具有明显的抗氧化活性,在抗衰老方面有广泛应用前景.     

藏荆芥不同溶剂提取物清除DPPH活性的研究

目的通过DPPH自由基清除实验研究藏荆芥提取物的体外抗氧化活性。方法将藏荆芥提取物依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇进行萃取,各组分都配制成适当稀释倍数的溶液,采用DPPH法测定各组分的抗氧化活性,并计算各组分的IC50。结果藏荆芥二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、正丁醇、石油醚提取部分都具有明显清除DPPH自由基的作用。结论藏荆芥提取物对DPPH自由基的清除率与样品浓度存在较明显的量效关系,藏荆芥具有较强的抗氧化能力。     

楮实提取物体外抗氧化活性的研究

目的 探讨楮实提取物的体外抗氧化活性.方法 先用80%乙醇,然后用蒸馏水对楮实进行提取.其中醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,水提部分经醇沉、干燥后得到楮实粗多糖.运用羟基(·OH)自由基体系、二苯代苦味基肼(DPPH·)自由基体系和对Fe~(3+)的还原能力实验,比较楮实各提取物的抗氧化活性.结果 楮实提取物对·OH自由基和DPPH·自由基均有较好的清除作用,其中总醇提取物对·OH自由基的清除能力最强,其IC_(50)值为0.28 mg/ml;乙酸乙酯提取物对DPPH·自由基的清除效果最好,其IC_(50)值达到0.08 mg/ml;各提取物对Fe~(3+)均有较强的还原能力,乙酸乙酯提取物还原效果最为明显.结论 楮实提取物具有一定的抗氧化活性,在抗衰老方面有广泛的应用前景.     

黏细菌93431次级代谢产物的分离纯化及活性测定

目的 从黏细菌发酵产物中寻找抗乳腺癌活性物质.方法 采用分析型高效液相色谱和制备型高效液相色谱对黏细菌93431菌株发酵产物的甲醇浸提液进行分析与分离,采用MTT法,以人乳腺癌细胞株MCF-7、人胚肺成纤维细胞株MRC作为实验模型,对提取的各组分活性进行测定.结果 从黏细菌93431菌株的发酵产物中分离得到4种组分,其中93431-1在质量浓度100 μg/mL、作用24h时,对MCF-7细胞的抑制率达51.65％,对MRC细胞的抑制率为17.54％.结论 黏细菌93431菌株中93431-1对MCF-7细胞有良好的抑制作用,且对MRC细胞毒性较小.     

家蝇幼虫分泌物抗菌肽的分离及其部分特性

目的 分离家蝇（Musca domestica）幼虫分泌物抗菌肽并研究其部分理化特性。 方法 用超滤、固相萃取、反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化家蝇幼虫分泌物抗菌肽；测定抗菌肽对多株革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）；比较其在不同pH值（pH 6.0～9.0）、不同阳离子浓度（Mg²⁺ ：（0.5×10-3～10.0×10-3）mol/L，Na⁺、K⁺：（10×10^-3～100×10^-3）mol/L）及不同小鼠血清浓度（12.5％～75％）环境中抗菌活性的变化。 结果 超滤分离获得的活性蛋白相对分子质量为Mr 3 000～30 000，该蛋白经20％、30％、70％及80％乙腈洗脱，其组分均有活性，其中以70％乙腈洗脱组分活性较强且稳定。进一步用RP?鄄HPLC从70％洗脱组分中纯化出两个抗菌活性肽。抗菌肽对大肠埃希菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的MIC值分别为32.738、16.369、65.475 及32.738 μg/ml 。在培养基pH值为6～9、不同阳离子浓度及不同小鼠血清浓度的环境中，各实验组的A ₅₇₀增加量均小于0.05，而对照组的A570增加量多为0.3以上，各实验组与对照组比较，其差异均具有统计学意义（P值均<0.01）。 结论 用固相萃取等方法从家蝇幼虫分泌物中可快速分离出具有较强活性的抗菌肽。该抗菌肽在不同条件下均具有较好的抗菌效果。     

一种合成CIT毒素的新方法

目的黄绿青霉素的合成。方法黄暗青霉菌接种于已高压灭菌的大米中混匀,培养数日后,将霉变大米的乙醇提取液,旋转蒸干,溶于苯,浓缩后得到的粗毒素在硅胶柱上层析,依次用苯、乙醚、乙酸乙酯、丙酮洗脱,收集乙酸乙酯部分浓缩,4℃放置2 d后结晶。结果所得产物经高效液相色谱检测成分单一,纯度高。结论用大米做培养基产量高,杂质少;新的柱层析法易分离,利结晶。     

24,25-双羟维生素D的测定及其临床应用

本文采用乙醇/二氯甲烷粗提血清样品,经高压液相色谱分离后用蛋白竞争结合测定24,25(OH)_2D的含量。测得北京地区6月中旬正常值为4.42±1.75nmol/L(1.84±0.73ng/ml)(n=31),无性别差异。慢性肾衰、肝硬变和服抗癫痫药患者血清24, 25(OH)_2D低于正常值,小儿佝偻病、脉管炎、小儿肾病和服糖皮质激素患者血清24, 25(OH)_2D未见异常,维生素D过量患者有升高的趋势。     

以Cathelicidin序列为模板设计合成抗菌肽的抗菌特性研究

目的研究以Cathelicidin序列为模板设计合成的抗菌肽对金黄色葡萄球菌的抗菌特性。方法根据NCCLS的方法,测定合成的抗菌肽对游离金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）;配制5%的红细胞悬液,与抗菌肽混合孵育后测定540 nm的吸光度;金黄色葡萄球菌的过夜培养物加入80μg/ml的抗菌肽,37℃培养4 h,每隔1 h测定菌落数,比较在抗菌肽作用下活菌数随时间的变化。结果抗菌肽的MIC为16μg/ml,MBC为128μg/ml;100μg/ml抗菌肽的溶血性小于10%;抗菌肽作用4 h后,金黄色葡萄球菌活菌数（5.63±0.10）lg（cfu/ml）,与对照组相比有显著性差异（P〈0.05）。结论通过序列设计人工合成的抗菌肽对金黄色葡萄球菌有较强的活性,且溶血性较小。     

红茶菌发酵液抑菌作用研究

目的 研究不同pH值下红茶菌发酵液及其蛋白提取液的抗菌作用,为探寻新的抗菌物质奠定基础. 方法 采用K-B纸片扩散法检测不同pH值下红茶菌发酵液及不同量的蛋白提取液分别对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑菌作用. 结果 红茶菌发酵液在酸性条件下对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的生长具有明显的抑制作用,而在碱性条件下均未表现出抑制作用;红茶菌蛋白提取液对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌有抑菌活性,红茶菌发酵液及蛋白提取液对白色念珠菌无明显抑菌作用. 结论 红茶菌发酵液具有明显的抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生长的作用.红茶菌发酵产生的蛋白质类物质是红茶菌液中的抑菌活性成分之一,具有用作食品抑菌剂的潜在价值.     

华支睾吸虫15/16 ku蛋白的纯化与部分氨基酸顺序测定

目的进一步证明华支睾吸虫成虫15/16 ku蛋白(Cs15/16)用于诊断的免疫活性,同时测定其部分氨基酸顺序,便于今后对此蛋白的人工合成等分子生物学研究及其相关免疫学研究.方法用高效液相色谱技术(HPLC)自华支睾吸虫粗抗原(Clonorchis sinensis adultworm antigens,CAA)中提纯15/16 ku蛋白,用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定其抗原活性,并使用蛋白质自动测序仪测定其N端部分氨基酸顺序.结果3个具有抗原活性的纯化样品(H3、H11及H13)中,H13的诊断效果接近CAA,敏感性达90%,特异性95%.分别测获3个纯样的N端15、14和20个氨基酸残基(aa),其中H11的N端14个aa与H13的前14个完全相同.结论进一步证明了Cs15/16为有效的诊断抗原,测获的部分氨基酸顺序可为更深入的研究提供参考.     

鳖甲抗肝纤维化活性物质的筛选与分离鉴定

目的 筛选鳖甲抗肝纤维化的活性物质,并对其进行分离鉴定.方法 在生物化学与药理学跟踪技术下,通过膜分离技术筛选鳖甲抗肝纤维化的活性部位;采用凝胶色谱柱分离法在活性部位筛选活性组分;应用高效液相色谱分离法对活性组分进行分离纯化;通过4700串联飞行时间质谱仪对鳖甲活性纯化组分进行结构鉴定.对数据进行方差分析和组间q检验. 结果筛选出鳖甲蛋白质和肽类的分子量＜6000的物质具有生物学活性,从而确定了鳖甲抗肝纤维化的活性部位.将活性部位分离为8个组分(Bjl～Bj8),筛选出Bj4、Bj6和Bj7三个活性组分.对活性组分Bj7进行分离纯化,得到7个纯化组分(Bj701～Bj707);经筛选得出Bj704和Bj707的生物学活性较为显著.通过4700串联飞行时间质谱仪对Bj707纯化组分Bj707-A进行测试,选择质/荷比为526、542和572三个丰度最强的分子离子峰,用De Novo Explorer分析软件进行分析,测出该3个肽类化合物的氨基酸序列分别为NDDY(Asn-Asp-Asp-Tvr)、NPNPT(Asn-Pro-Asn-Pro-Thr)、HGRFG(His-Gly-Arg-Phe-Gly);根据分子离子峰的丰度判断,M572的肽类化合物含量最高.结论 应用学科交叉的研究方法,提取分离并鉴定了鳖甲抗肝纤维化的3个活性肽类物质,为鳖甲用于临床抗肝纤维化、新药开发奠定了基础.     

新疆天山八种蕨类植物体外抑菌活性初探

目的筛选新疆天山蕨类植物抑菌活性的种类及明确药用部位,为合理开发提供科学依据.方法用双层平板打孔法和滤纸片法,对8种蕨类植物营养叶或孢子叶的乙醇提取液进行了抑菌试验.结果 8种植物对实验菌有不同程度抑制作用,其中,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的作用最强,对枯草杆菌、绿脓杆菌和变形杆菌的作用较弱,而对白色念珠菌无任何抑菌作用.结论新疆天山蕨类植物具有一定的抑菌作用.     

桦褐孔菌的不同提取物对胃癌BGC-823细胞株生长抑制作用的体外观察

目的 研究桦褐孔菌不同提取物对人胃癌BGC-823细胞株生长的抑制作用.方法 制备桦褐孔菌水提取物、石油醚提取物(醚提物)、乙酸乙酯提取物(酯提物)后,采用MTT法,测定3种提取物作用下的胃癌BGC-823细胞株生长的抑制作用.结果 桦褐孔菌水提取物、醚提取物、酯提取物对胃癌BGC-823细胞株的生长均有抑制作用,终浓度在80 g/ml、48 h,体外最大抑制率分别达到51％、60％、62％.结论 桦褐孔菌的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物对人胃癌BGC-823细胞株生长抑制作用高于水提取物.     

猕猴桃果实内生菌株的鉴定及其发酵液抑菌活性初探

目的从新鲜猕猴桃果实中分离鉴定内生细菌并分析其生物学特性及抑菌谱。方法采用平板对峙法初筛选猕猴桃株发酵液对链格孢菌有明显拮抗作用的内生菌、打孔法复筛猕猴桃菌株发酵液对铜绿假单胞菌的抑菌活性,采用平板倾注法测定不同浓度内生菌对标准菌株和临床菌株的抑菌活性。基于内生菌的形态特征、生化特性、电镜扫描结果及16SrDNA基因序列同源性分析,采用MEGA5.0软件N-J法建立系统发育树,进行遗传进化分析。结果从猕猴桃果实分离获得3株内生细菌。平板对峙生长初筛试验显示其中一株具有抑菌活性,该菌株发酵液对链格孢菌有抑制作用;打孔法复筛实验显示发酵液对铜绿假单胞菌的抑菌活性最明显,其发酵液能抑制标准菌株大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及临床菌株中的革兰阴性菌大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷柏菌生长,不能抑制临床革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌及肺炎链球菌的生长。该菌株被鉴定为粪肠碱杆菌(16rDNA同源性为99%)。结论获得了一株对部分临床革兰阴性菌有抑制作用的猕猴桃果实内生菌,鉴定为粪肠碱杆菌,为主要抑菌成分有待进一步研究。     

日本血吸虫SIEA28kDa分子抗原的二维凝胶电泳分析

目的分析鉴定日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)28kDa抗原组分.方法用高效液相离子交换法对电泳纯SIEA28kDa抗原组分进一步分离纯化,对获得的色谱纯SIEA28kDa抗原组分进行二维凝胶电泳分析.结果SIEA经双向凝胶电泳分离、银染后获得的SIEA-2D图谱蛋白斑点以pI 3～7和Mw14～66 kDa范围最多.进一步经图象采集、PDQuest 2D软件分析SIEA双向电泳图谱,计算在相同的设定值条件下获取的蛋白质斑点数,测得SIEA-2D电泳图谱平均为(948±89)个蛋白质斑点数.电泳纯SIEA28kDa抗原组分用高效液相离子交换法纯化后,280、220 nm波长色谱图均为一个两侧对称、光滑的高峰曲线,色谱洗脱液对其活性光密度图也为一个两侧对称、光滑的高峰曲线.二维凝胶电泳银染色可见一个显色饱和度高的蛋白质圆斑,免疫印迹分析为一个显色饱和度高的单一圆斑.结论色谱纯SIEA28kDa抗原组分为单一分子,其等电点为5.7.     

五种药用植物萃取物对四种组织来源肿瘤细胞体外增殖抑制作用的观察

目的检测药用植物白千层、大果榕、山苍子、匍匐滨藜、牛大力萃取物的体外抗肿瘤活性。方法采用MTT实验,检测白千层、大果榕、山苍子、匍匐滨藜、牛大力的萃取物对人肺腺癌细胞(SPCA-1)、肝癌细胞(BEL7402)、胃癌细胞(GSC)和白血病细胞(K562)的体外增殖抑制作用,抑制率超过50%即被确定为抗肿瘤有效活性萃取部位,则进一步测定有效活性萃取部位的半数抑制率(IC50)。结果五种药用植物的部分萃取物对四种肿瘤细胞的增殖有较强的抑制作用。结论白千层、大果榕、山苍子、匍匐滨藜、牛大力的萃取物在体外对SPCA-1、BEL-7402、GSC-7901、K562肿瘤细胞的增殖有不同程度的抑制作用。     

3种天山蕨类植物体外抑菌活性研究

目的筛选新疆天山蕨类植物抑菌活性种类和药用部位.方法用滤纸片法,用3种蕨类植物营养叶、孢子叶和茎的乙醇提取液,对7种供试菌进行了抑菌活性测试.结果 3种蕨类植物营养叶、孢子叶和茎对6种实验菌都有良好的抑菌活性;3种蕨类植物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和八叠球菌有较强的抑菌作用,对短芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和铜绿假单孢菌的作用较弱,而对白色念珠菌无任何抑菌作用.结论不同浓度的样品具有不同程度的抑菌作用.     

常见葡萄球菌感染及耐药分析

目的了解浙江省湖州市中心医院常见葡萄球菌感染现状及耐药特点。方法将2003-01~2003-12湖州市中心医院采集的360株葡萄球菌采用常规方法分离,用Vitek-32全自动微生物分析仪进行菌种鉴定及药敏试验。结果分离到金黄色葡萄球菌205株,表皮葡萄球菌95株,溶血性葡萄球菌60株。其中耐甲氧西林葡萄球菌共247株,包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌131株(36.4%),耐甲氧西林表皮葡萄球菌72株(20.0%),耐甲氧西林溶血性葡萄球菌44株(12.2%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和溶血性葡萄球菌均呈多重耐药特征,未发现耐万古霉素、替考拉宁的葡萄球菌。结论耐甲氧西林葡萄球菌检出率呈明显上升趋势,合理使用抗生素,尤其万古霉素的使用,已成为当务之急。