同型半胱氨酸代谢及相关疾病

同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)是体内蛋氨酸代谢过程中形成的一种含硫氨基酸。自1969年美国哈佛大学的McCully 提出 HCY 与动脉粥样硬化(AS)有关的假说后,HCY 日益受到关注。越来越多的研究表明,血 HCY 升高除是动脉硬化性血管疾病的独立危险因素外,还可引起神经管畸形(neural tube defects,NTDs)、先天性心脏畸形(congenitalheartd efects)等出生缺陷类疾病,而且与老年性痴呆、帕金森病密切相关。一、HCY 的代谢同型半胱氨酸又称高半胱氨酸,包括三种形式:同型半胱氨酸、双硫同型半胱氨酸和混合型同型半胱氨酸。正常人体内主要以蛋白质结合形式存在,游离的同型半胱氨酸很少。HCY 是蛋氨酸循环的重要中间产物,蛋氨酸在 ATP 的参     

牛磺酸抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

以~3H-胸腺嘧啶参入和细胞计数的方法,观察牛磺酸对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制效应。结果表明,培养液中加入牛磷酸(5、10和20mmol/L)能明显抑制培养的自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)VSMC的~3H-胸腺嘧啶参入,降低其细胞计数。牛磺酸对血管紧张素Ⅱ(10~(-7)mmol/L)刺激的VSMC增殖亦呈剂量依赖地抑制效应。     

异种免疫核糖核酸对小鼠脾淋巴细胞~3H-UR参入的影响

本文以~3H-UR(~3H-尿苷)参入为指标,观察了经异种免疫核糖核酸致敏的小鼠脾淋巴细胞早期RNA合成的变化。发现异种免疫核糖核酸可促进淋巴细胞内RNA的合成,此效应受放线菌素D的抑制。免疫核糖核酸的这种活性要求RNA大分子的完整性,而与DNA和蛋白质无关。 与免疫核糖核酸相对照,从正常淋巴纽织提取的RNA可抑制淋巴细胞培养中RNA的合成,表现为~3H-UR参入减少;免疫核糖核酸经核糖核酸酶处理后也使淋巴细胞的~3H-UR参入减少,说明外源性RNA的降低产物可竞争性地抑制~3H-UR的参入,而免疫核糖核酸对淋巴细胞培养的~3H-UR参入呈现两种相反的影响:即一方面可通过促进RNA合成增加参入;另一方面又可因本身降解产物的存在而竟争性地抑制参入。     

液质联用法测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量

目的 建立液质联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)定量分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的方法.方法 采用LC-MS法检测,ZORBAX Eclipse XDB-C8(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相组成:1‰甲酸水-甲醇(95:5),流速:0.8 mL/min;柱后分流检测,分流比2:1;柱温:25 ℃;ESI电离源:负离子检测模式;干燥气流速:10.0 L/min;雾化室压力:30 psig;干燥气温度:350 ℃.选择离子方式检测(SIM):S-烯丙基-L-半胱氨酸m/z 160和S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜m/z 176.结果 S-烯丙基-L-半胱氨酸在0.062 5～2 μg/mL浓度范围内线性关系良好,检测限0.01 μg/mL,日内RSD 4.11%、日间RSD 4.49%, 方法平均回收率为101.63%.结论 此方法简单、准确,适于分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量,并且测得该提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的平均含量为0.514 μg/mg.     

药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸的酶法合成

目的 利用在大肠杆菌中高效重组表达的O-乙酰丝氨酸(硫醇)裂解酶A(OASS-A)合成药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸,并对合成产物进行纯度及结构鉴定.方法 通过PCR扩增目的基因Cys K,并连接到pET-22b(+)载体上构建原核表达质粒,重组体转到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达,重组蛋白采用Ni2-树脂柱亲和层析纯化,利用SDS-PAGE鉴定表达纯化蛋白,通过HPLC对合成产物纯度进行检测,应用1H NMR技术对化合物进行结构鉴定.结果 成功构建了OASS-A原核表达载体,在IPTG诱导下获得了高效表达.重组酶高效合成非蛋白质氨基酸S-苯基-L-半胱氨酸.合成的化合物以晶体形式析出,采用HPLC和1HNMR技术对其结构进行了鉴定,合成产物的纯度为100％.结论 利用大肠杆菌中重组表达的OASS-A能够高效合成药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸.     

表没食子儿茶素没食子酸酯体外代谢的方法研究

目的 研究体外代谢EGCG的方法,并用高效液相色谱法对EGCG及其产物进行测定.方法 在适当的pH和温度下,在正常大鼠的肝脏匀浆加入底物S-腺苷蛋氨酸(SAM)和Mg2+,进行EGCG体外代谢,用高效液相色谱法检测EGCG及其代谢物.结果 EGCG可在体外大鼠肝匀浆作用下进行有效代谢,可用高效液相色谱法对EGCG及其代...     

右归丸对甲减生化指标的影响

目的:研究右归丸加减联合小剂量甲状腺素治疗对老年亚临床甲状腺功能减退患者糖脂代谢、血清同型半胱氨酸和尿酸水平的影响.方法:将2012年4月～2014年5月期间我院收治的90例亚临床甲状腺功能减退患者纳入研究,随机分为两组,观察组患者接受右归丸加减联合小剂量甲状腺素治疗,对照组患者接受小剂量甲状腺素治疗,比较两组患者的糖脂代谢、血清同型半胱氨酸和尿酸水平.结果:(1)血脂代谢:观察组患者的甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白水平低于对照组(P＜0.05);(2)血糖代谢:观察组患者的空腹血糖水平、HOMA-IR低于对照组(P＜0.05),ISI高于对照组(P＜0.05);(3)血清同型半胱氨酸和尿酸水平:观察组患者的血清同型半胱氨酸和尿酸水平低于对照组(P＜0.05).结论:右归丸加减联合小剂量甲状腺素治疗有助于改善糖脂代谢、降低血清同型半胱氨酸和尿酸水平,是治疗老年亚临床甲状腺功能减退的理想方法.     

液质联用法测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量

 目的 建立液质联用（liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS）定量分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的方法。方法 采用LC-MS法检测,ZORBAX Eclipse XDB-C8（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,流动相组成：1‰甲酸水-甲醇（95:5）,流速：0.8 mL/min;柱后分流检测,分流比2:1;柱温：25℃;ESI电离源：负离子检测模式;干燥气流速：10.0 L/min;雾化室压力：30 psig;干燥气温度：350℃。选择离子方式检测（SIM）：S-烯丙基-L-半胱氨酸m/z 160和S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜m/z 176。结果 S-烯丙基-L-半胱氨酸在0.062 5~2 μg/mL浓度范围内线性关系良好,检测限0.01 μg/mL,日内RSD 4.11%、日间RSD 4.49%, 方法平均回收率为101.63%。结论 此方法简单、准确,适于分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量,并且测得该提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的平均含量为0.514 μg/mg。     

蛋氨酸负荷试验诊断同型胱氨酸尿症

本文研究同型胱氨酸尿症患者和健康志愿者负荷L-蛋氨酸或DL-蛋氨酸后,比较他们尿中该氨基酸和同型胱氨酸的水平。结果表明本症患者与健康志愿者的不同处是尿中存在大量同型胱氨酸。正常人负荷蛋氨酸后尿中无可检出的异常产物同型胱氨酸,同型胱氨酸尿症患者系缺乏胱硫醚β-合酶的纯合子,不能对蛋氨酸进行正常代谢而产生大量同型胱氨酸。     

同型半胱氨酸的临床研究进展

同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一种含硫基的氨基酸,它由蛋氨酸去甲基化而来,是蛋氨酸分解过程中产生的中间产物,其本身并不参与蛋白质的合成。近年来随着检测水平的提高和分子生物学技术的发展,越来越多的研究证实,高Hcy血症不仅与冠状动脉粥样硬化性心脏病有关,也是缺血性脑血管病的一个独立危险因素。Hcy的致病机制越来越受到重视,现将近年来有关研究进展综述如下。Hcy的来源及代谢途径Hcy来源于饮食摄取的蛋氨酸,是蛋氨酸循环中S-腺苷Hcy水解反应后的产物,同时又是胱硫醚B合成酶(CBS)合成胱硫醚的底物。血液中的总Hcy包括Hcy、…     

肝性脑病护理体会

肝性脑病是严重肝病引起的意识行为异常和昏迷为主的中枢神经系统功能失调,与来自肠道的有害物质进入脑部诱发昏迷有关。一般资料:本组病历35例,男29例,女6例,平均年龄50岁。发病机理:①氨中毒:氨中毒仍是肝性脑病特别是氮性或外源性肝性脑病发病的重要原因。②硫醇:肝脏损害对代谢紊乱,使蛋氨酸的中间产物(甲基硫醇和二甲基硫化物)     

二乙基亚硝胺对大鼠肾代谢通路的影响

目的：探讨与二乙基亚硝胺(diethyl nitrosamine,DEN)肾毒性有关的肾代谢标志物及其参与的代谢通路。 方法：将19只大鼠随机分为两组：健康对照组(n=9),给予大鼠灭菌食用水自由饮用;DEN给药组(n=10),给予大鼠 0.1 mg/mL DEN溶液自由饮用。18周后麻醉并处死大鼠采集肾组织进行磁共振代谢组学检测和病理学检测。结果： 与健康对照组比较DEN给药组大鼠肾代谢物的含量变化比较明显,如丙氨酸、牛磺酸、醋酸盐、丙酮酸、胆碱含 量显著减少,而肌酸、甘氨酸、氧化三甲胺、蛋氨酸、脯氨酸、乳酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸含量显著增加。 结论：DEN给药组大鼠肾组织有5种代谢通路发生了明显的变化,包括缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸生物合成通路,甘 氨酸,丝氨酸和苏氨酸代谢通路,丙酮酸代谢通路,糖酵解和糖异生通路及半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路。     

Mg~(2+)和牛磺酸对内皮素促血管平滑肌细胞增殖的影响

本工作应用培养的家兔主动脉血管平滑肌细胞,通过细胞计数和~3H-胸腺嘧啶核苷参入的方法,观察到内皮素可以刺激血管平滑肌细胞的增殖;同时,内皮素的这种效应可以被Mg~(2+)和牛磺酸拮抗。     

正常成纤维细胞与羊水细胞~(35)S参入的研究

细胞中的氨基多糖(GAG)是无机硫离子唯一能参入的大分子。Fratantoni等应用~(35)SO_4=参入实验证明粘多糖贮积症(MPS)是由GAG分解受阻引起。我们对15例正常人皮肤成纤维细胞与8例羊水细胞~(35)S参入与矫正进行了研究,得出正常数值,为应用本方法进行MPS的诊断、分型与产前诊断打下了基础。     

牛磺酸对大鼠肝纤维化的防治作用及机制的初步观察

目的观察牛磺酸对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型中星状细胞凋亡的影响及其保护机制。方法将实验动物分为正常对照组、模型组和牛磺酸组,采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,研究牛磺酸对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)、Ⅱ型前胶原(PCI)、肝药酶和抗转化生长因子β1(TGF-β1)以及对激活的肝星状细胞凋亡的影响。结果与模型组比较,牛磺酸组ALT、HA、PCⅡ水平降低,肝细胞色素P450、细胞色素bs含量提高,TGF—β1的表达明显减少,同时促进了激活的肝星状细胞凋亡,明显减轻纤维化程度。结论牛磺酸有抑制TGF—β1的表达,促进激活的肝星状细胞凋亡的作用,具有明显的抗肝纤维化作用。     

牛磺酸对高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化的拮抗作用

目的 探讨牛磺酸对高同型半胱氨酸血症(HHcy)致兔动脉粥样硬化的拮抗作用. 方法采用高L-蛋氨酸饮食方法建立兔HHcy血症模型,补充牛磺酸作防治药物,以正常家兔为对照,检测各组血清同型半胱氨酸(Hcy)等生化指标,并通过血管超声和组织学观察腹主动脉血管病理变化.结果 蛋氨酸组第4w、8w时血清Hcy、丙二醛(MDA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量显著高于同期正常组(P<0.01, P<0.05),而超氧化物岐化酶(SOD)活力则明显降低( P<0.01);牛磺酸组Hcy显著高于对照组(P<0.01),MDA、TG、TC含量显著低于蛋氨酸组( P<0.01),而SOD比蛋氨酸组显著增高(P<0.01).血管超声和组织学观察,蛋氨酸组腹主动脉内膜明显增厚、有斑块形成;牛磺酸组,血管内膜较光滑、结构排列整齐无斑块. 结论牛磺酸拮抗Hcy诱导的血管损伤效应,发挥抗AS形成作用.     

培养的钙化大鼠心肌细胞牛磺酸转运障碍

目的探讨离体培养钙化幼鼠心肌细胞牛磺酸(Tau)跨膜转运功能及牛磺酸转运体(TAUT)和半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)mRNA含量的改变及意义。方法以β-磷酸甘油培养心肌细胞;氨基酸分析仪测定细胞牛磺酸含量;3H标记的牛磺酸测定心肌细胞牛磺酸转运;竞争性定量RT-PCR测定心肌细胞TAUT和CSDmRNA水平。结果与非钙化大鼠心肌细胞相比,钙化心肌细胞牛磺酸含量减少27%(P<0.05),细胞3H-牛磺酸摄入程度降低,最大转运速率(Vmax)减少39%(P<0.01),Km值两组间差异无显著性(P>0.05);钙化心肌细胞TAUTmRNA含量减少45%(P<0.01),而CSDmRNA增加25%(P<0.05)。结论钙化心肌细胞牛磺酸转运功能障碍,TAUT表达减少,而CSD表达增加。     

肝泡球蚴病组织中S-100~+DC(树突状细胞)、巨噬细胞及淋巴细胞的免疫组化研究

应用免疫组化技术,对12例人肝泡状棘球蚴(Em)及6例肝海绵状血管瘤瘤旁肝组织内S-100~+DC、CD_(68)~+细胞(巨噬细胞)、OPD_4~+细胞(T辅助细胞)及CD_(20)~+细胞(B淋巴细胞)进行了定量比较研究。结果显示:(1)S-100~+DC、OPD_4~+细胞及CD_(20)~+细胞在Em组均明显高于海绵状血管瘤组(P<0.05);(2)在Em组中OPD_4~+细胞数量多于CD_(20)~+细胞数(P<0.05);(3)S-100~DC数与OPD_4~+细胞呈负相关(r_s=-0.5818,P<0.05)。提示S-100~+DC在人肝Em的免疫反应中有某些作用,其作用环节有待阐明。     

药物性肝损伤

本文概述了药物性肝损伤的机理及其有关的化学基础:药物直接损伤肝脏;药物在肝微粒体酶作用下产生毒性中间代谢产物损伤肝脏;肝毒性药物(包括其中间代谢产物的分子、离子属性以及毒性中间代谢产物的形成与药物分子化学类型之间的关系)。最后,简述了防止或减轻药物性肝损伤的措施。     

硝酸甘油减轻对乙酰氨基酚肝毒性的作用与机制

目的:研究硝酸甘油(GTN)对对乙酰氨基酚(AP)肝毒性的影响与机制.方法:小鼠ip GTN 0.1～1.6 mg/kg.15 min后ip AP 300 mg/kg,6 h后测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST);GTN(1.6 mg/kg)预处理小鼠,测定AP半数致死量(LD50);荧光法测定肝蛋白S-亚硝基化水平;分光光度法测定肝谷氨酸脱氢酶(GDH)活性;S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)处理GDH纯酶,Saville-Griess法测定其S-亚硝基化水平,并观察对N-乙酰-P-苯醌亚胺(NAPQI)灭活GDH效应的影响.结果:GTN降低AP导致的ALT,AST升高,使AP对小鼠LD50由321 mg/kg上升至762 mg/kg;GTN引起肝蛋白S-亚硝基化水平升高,使AP对肝GDH的抑制作用完全消失;GSNO诱发GDH纯酶发生S-亚硝基化,且不影响酶活性,但修饰后的GDH不被NAPQI灭活.结论:GTN可减轻AP肝毒性,其机制与诱发肝蛋白巯基S-亚硝基化,减少NAPQI与蛋白(如GDH)巯基的共价结合有关.