二乙基亚硝胺诱发新生大鼠肝癌的实验模型

用肝化学致癌物二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）按照Ｐｅｒａｉｎｏ诱癌模式建立ＤＥＮ大鼠肝：癌模型，并对ＤＥＨ作用时间与次数加以改进，多阶段观察大鼠肝脏癌前期病变、肿瘤发生率及６种酶组织化学染色。结果表明本实验诱癌过程短，敏感性高，方法简单；碱性磷酸酶（ＡＫＰ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）及羧酸酯酶作为肝癌酶标记具有潜在的应用价值。提示以新生大鼠肝细胞活跃增生为基础的Ｐｅｒａｉｎｏ诱发肝癌模式，改进ＤＢＮ的处理方式，对于大鼠癌前期病变和肿瘤发生有较大的影响。涉及的影响因素可能与大鼠性别及ＤＥＮ的双重效应有关。     

还原型谷胱甘肽对DEN诱发大鼠肝癌的预防作用

目的：研究还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）对化学致癌原Ｎ－二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱致雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠肝癌的保护作用。方法：雄性 ＳＤ大鼠 ７５只分成 ７组，每天 ＤＥＮ ８ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｇ 诱发大鼠肝癌模型，分别不同途径预防性给予ＧＳＨ。结果：对照组１６ｗ后大鼠的肝脏癌变率为７６．５％，伴有镜检典型的弥漫性癌结节、畸型核分裂和重度肝硬化及胆管炎，于 １２ｗ及 １６ｗ ＡＫＰ及 γ－ＧＴ明显增高；同剂量 ＤＥＮ １６ｗ伴以 ＧＳＨ １５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、 １０００ｍｇ／ｋ（ｉｐ）及 １０００ｍｇ／ｋｇ（ ｉｇ） １６ｗ，明显降低癌变率，分别降为１１．１％、１６．７％、１６．７％及１８．２％；ＧＳＨ大剂量组大鼠未癌变，肝组织仅见少量纤维增生，ＡＫＴ及γ－ＧＴ值与正常大鼠无显著差异；ＤＥＮ诱癌１２ｗ后用ＧＳＨ治疗４ｗ对大鼠肝脏癌变率无明显防治效果。结论：早期用外源性 ＧＳＨ对 ＤＥＮ诱发大鼠肝癌有预防作用，ＤＥＮ诱发肝癌形成后用ＣＳＨ无效。     

c—fos蛋白在大鼠肝癌发生中的表达及意义

采用免疫组织化学ＡＢＣ法，对二乙基亚硝胺（ＤＥＮ０诱发大鼠肝癌发生过程中ｃ－ｆｏｓ蛋白在肝组织中的表达进行了系统观察。结果：正常大鼠肝细胞不表达ｃ－ｆｏｓ蛋白，诱癌第４周即可见少量肝细胞呈ｃ－ｆｏｓ蛋白阳性表达。随诱癌发展进程，肝细胞ｃ－ｆｏｓ蛋白表达逐渐增强，至诱癌中期（８－１２周），肝增生结节内部分肝于ｃ－ｆｏｓ蛋白阳性表达。诱癌晚期（１８周），癌结节内大部分肝癌细胞亦呈ｃ－ｆｏｓ蛋白阳性表达     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌变过程中3种基因的原位表达

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌变过程中３种基因的原位表达［郑杰，武忠弼，阮幼冰等．中华病理学杂志，１９９５，２４（５）：３０９］应用原位杂交技术对大鼠肝组织在二乙基亚硝胺（ＤＥＮＡ）诱癌过程中Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、Ｈ－ｒａｓ的表达进行了研究，以了解癌基因...     

复方当归柴胡提取液对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌前病变的抑…

为探索肝癌的化学预防，应用抑制二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）致大鼠癌前病变肝细胞增生酶异常灶（ＧＧＴ灶）发生短期实验模型，研究对肝炎有一定疗效的逍遥散加减加基础组成的复方当归，柴胡提取液（９５４合剂）对ＤＥＮ致肝癌作用的影响，并与已知抑制物甘草甜素（ＧＬ）相比较，结果显示９５４合剂和ＧＬ对ＤＥＮ诱发肝癌前病变ＧＧＴ灶的数量及大小均有明显抑制作用，与单给ＤＥＮ的对照组相比，差异非常显著（Ｐ〈０．０５～Ｐ〈０     

大鼠肝癌诱发过程中肝组织细胞间粘附分子-1的异常表达

目的研究大鼠肝癌诱发过程中细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的不同表达。方法采用二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌模型，分别检测非特异性药物反应、非癌性增生性改变和肝癌发生３个阶段６个时相的肝组织中ＩＣＡＭ－１的表达。结果在诱癌的前２个阶段ＩＣＡＭ－１的表达逐渐增强，到２０周左右ＩＣＡＭ－１的表达到高峰，其后表达减弱。结论ＩＣＡＭ－１的这种不同表达可能与细胞因子对肝细胞的不同刺激及肝癌结节的数量和大小有关。     

干扰素和卡介苗对肝癌大鼠单核巨噬细胞释放TNF的影响

目的：观察干扰素和卡介苗对肝癌大鼠单核巨噬细胞释放ＴＮＦ的影响，方法：以二乙基亚硝胺（ＤＥＭ）诱发大鼠肝癌，正常大鼠和肝癌大鼠分别腹腔注射干扰素（ＩＦＮα－２ｂ）、卡介苗（ＢＣＧ）或二者联用。从各组正常大鼠和肝癌大鼠体内分离出高纯度的血单核细胞、肺、脾和腹腔内的巨噬细胞，体外分别与人肝癌细胞联合培养，以ＥＬＩＳＡ酶联反应分别测定培养液中的ＴＮＦ含量。从未用免疫制剂的肝癌大鼠体内分离出高纯度的血单核     

细胞融合肝癌疫苗体内抗肿瘤特异性及T细胞作用的初探

目的：观察大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与自体激活Ｂ细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与Ｔ细胞亚群的关系。方法：（１）应用聚乙二醇（ＰＥＧ）融合大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与激活Ｂ细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；（２）事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌ＢＥＲＨ－２细胞和大鼠膀胱癌ＮＢＴ－Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；（３）该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠ＣＤ４单抗或抗ＣＤ８单抗多次注射，以清除大鼠ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：ＢＥＲＨ－２细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而ＮＢＴ－Ⅱ细胞可致瘤；事先清除ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌ＢＥＲＨ－２细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了ＣＤ４＋细胞后不能被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤，清除了ＣＤ８＋细胞后则可被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用，这种作用与ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ细胞有关     

免疫制剂对肝癌大鼠单核巨噬细胞抑人肝癌细胞增殖作用的影响

以ＥＤＮ诱发大鼠实验性肝癌，同时连续１２周分别腹腔注射干扰素α－２ｂ，卡介苗，济南假单胞菌苗和ＩＦＮ和ＢＣＧ二者联用，对照组给予生理盐水。在诱癌过程第８，１２，１６周从同只大鼠体内分离出高纯度的腹腔巨噬细胞，血单核细胞，肺巨噬细胞和脾巨噬细胞，并分别与人肝癌细胞联合培养，采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定免疫制剂在４种效应细胞抑人肝癌细胞增殖作用的影响。     

干扰素和卡介苗对肝癌大鼠枯否细胞释入TNF和IL—1的影响

以二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，分别给予正常大鼠和肝癌大鼠干扰素（ＩＦＮα－２ｂ）、卡介苗（ＢＣＧ）或两者联用。从各组正常大鼠和肝癌大鼠肝中分离出枯否细胞（ＫＣ），体外与人肝癌细胞联合培养，分别测定培养液中的ＴＮＦ和ＩＬ－１含量。从未用免疫制剂的肝癌大鼠肝中分离出ＫＣ，体外培养给予ＩＦＮα－２ｂ或ＢＣＧ均促进ＫＣ（正常和肝癌大鼠，在体和离体）释放ＴＮＦ和ＩＬ－１，并均以两者联用效果最佳，使Ｋ     

侧脑室注射β-内啡肽及其抗血清对大鼠血浆唾液酸水平的影响

①目的探讨β－内啡肽（β－ＥＮＤ）对大鼠血浆唾液酸（ＳＡ）水平的影响。②方法在Ｗｉｓｔａｒ大鼠侧脑室分别注射浓度为２５，５０和１００μｍｏｌ／Ｌ的β－ＥＮＤ（生理盐水对照）和抗β－ＥＮＤ血清（正常兔血清对照），注射前及注射后５，１５，２５和３５ｍｉｎ分别取血，紫外分光光度仪测ＳＡ含量。③结果注射β－ＥＮＤ后大鼠血浆ＳＡ水平较注射前均降低，并且随β－ＥＮＤ浓度的增加，ＳＡ水平降低所需的时间逐渐缩短；注射抗β－ＥＮＤ血清后大鼠血浆ＳＡ水平较注射前升高。④结论外源性及内源性的β－ＥＮＤ均参与了降低大鼠血浆ＳＡ水平的调节过程，并且呈一定的量效依赖关系。     

981208冲剂抑制二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌细胞增殖活性

目的：探讨中药981208冲剂对二乙基亚硝胺（DEN）诱癌过程中肝细胞增殖活性的影响。方法：建立DEN诱肝癌大鼠模型，采用免疫组化染色方法及计算机图像分析技术检测了981208冲剂对诱癌过程中肝细胞阳性表达细胞增殖核抗原（PCNA）、H－ras蛋白及诱癌后期溴化脱氧尿嘧啶（Brd-U)细胞标记指数的影响。结果：DEN诱肝癌过程中，PCNA、H-ras阳性表达呈逐渐增加趋势，两表达显正相关。981208冲剂可明显抑制诱癌过程中两蛋白的阳性表达，显降低诱癌后期Brd-U细胞标记指数。结论：中药981208冲剂可抑制大鼠肝癌形成过程中肝细胞增殖活性，从而延缓肝细胞癌变的过程。     

内皮素和一氧化氮在烧冲复合伤肺损伤中作用的研究

目的 探讨内皮素（ＥＴ）和一氧化氮（ＮＯ）在大鼠烧冲复合伤肺损伤中的作用机制。方法 大鼠烧冲复合伤后给予ＥＴ受体（ＥＴＲ）拮抗剂和Ｎ 酶（ＮＯＳ）抑制剂治疗，检测与肺损伤密切相关的指标的变化。结果 烧冲复合伤大鼠血清和肺组织氧自由基丙二醛（ＭＤＡ）含量、肺组织弹力纤维（ＥＦ）和血管性血友病因子（ｖＷＦ）含量均出现了显著变化（Ｐ〈０．０５），给予ＥＴＲ拮抗剂和ＮＯＳ抑制剂治疗分别可减轻和加重这些指标     

三种功效的中药方剂阻断大鼠肝癌前病变

目的：研究功效不同的３种方药对二乙基亚胺胺（ＤＥＮ）致大鼠肝癌前病变艇。方法：建立Ｓｏｌｔ－Ｆａｒｂｅｒ二步有短期动物模型,用９８１２０８冲剂、三石猫胶囊和复方丹参注射液３种中药进行干预,光镜及电镜下观察肝组织、细胞形态学变化;组织 色比较ｒ－谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）变灶的个数及面积,结果：３种 均可减轻ＤＥＮ致大鼠肝脏细胞毒性损害,抑制癌前变异细胞的增生;对肝癌前ＧＧＴ阳性灶的个数／ｃｍ＾２和面积     

不同病程糖尿病大鼠肾脏一氧化氮变化与氧自由基的关系

为探讨糖尿病（ＤＭ）大鼠肾脏一氧化氮（ＮＯ）变化与氧自由基的关系,测定链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱导的ＤＭ大鼠及对照组（ＮＣ）于病程２,８,１６周时肾组织ＮＯ含量一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性,指质过氧化物（ＬＯＰ）水平及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活生变化。结果表明：ＤＭ大鼠肾脏ＮＯ水平及ＮＯＳ活性随病程的延长由升高至下降;各病程ＤＭ大鼠肾脏ＬＰＯ水平均高于同批ＮＣ     

老年大鼠听力与耳蜗组织化学,免疫组织化学变化实验观察

自然老年大鼠（２８月龄）和成年鼠（３月龄），用７Ｓｌｌ－Ａ型电反应测试仪确定听阈并记录Ｉ波潜伏期和Ｉ－Ｖ波间期，耳蜗琥珀酸氢酶（ＳＤＨ）、ＰＡＳ、坚牢蓝组化染色和神经特异性和烯醇化酶（ＮＳＥ），Ｓ－１００的免疫组化当色（ＡＢＣ）法，分别观察耳蜗毛细胞、神经节细胞、听神经纤维及鞘膜变化。结果：老年大鼠听性脑干反应阈值升高，ＳＤＨ活性减弱，节细胞人可见多个脂褐素颗粒，神经纤维排列稀疏，节细胞内ＮＳＥ免     

脂质过氧化作用在大鼠肝癌早期病变形成中的意义

本文对大鼠肝癌形成早期脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量，谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）活力，谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）活力和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活力的变化规律进系统观察。结果表明：ＬＰＯ含量从ＤＥＮ（二乙基亚硝胺）注射后第二周开始逐渐上到第五周肝癌结构节形成时达最高水平。ＧＳＴ活力在第一周上升。且可为含ＡＡＦ（０．０２％Ｎ－２乙酰氨基笏）饲料的喂养而增强。ＧＳＨ－ＰＸ和ＣＡＴ活力均在第三周后逐渐下降     

脂质过氧化作用在大鼠肝癌早期病变形成中的意义

本文对大鼠肝癌形成早期脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量、谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）活力和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活力的变化规律进行了系统观察。结果表明：ＬＰＯ含量从ＤＥＮ（二乙基亚硝胺）注射后第二周开始逐渐上升，到第五周肝癌结节形成时达最高水平。ＧＳＴ活力在第一周上升，且可为含ＡＡＦ（０．０２％Ｎ－２－乙酰氨基笏）饲料的喂养而增强。ＧＳＨ－ＰＸ和ＣＡＴ活力均在第三周后逐渐下降。上述变化的有序性、规律性及其相互关系表明，脂质过氧化物增加及其清除酶系统机能障碍在肝癌早期病变形成中起重要作用。     

卵圆细胞在实验性肝癌发生中的作用

目的：观察诱癌过程中ｃＨａｒａｓ、ｐ２１蛋白、ＡＦＰ及ＰＣＮＡ在肝细胞及肝卵圆细胞中的表达变化。方法：用化学致癌剂３′甲基４二甲基氨偶氮苯（３′ｍｅｔｈｙ１４ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏａｚｏｂｅｎｚｅｎｅ,３′ＭｅＤＡＢ）诱发ＳＤ大鼠肝癌,通过免疫组化、原位杂交等方法检测各相关因子在肝细胞及肝卵圆细胞内的表达。结果：诱癌４周,大鼠肝内出现大量的卵圆细胞,呈ＰＣＮＡ强阳性。６～８周,部分增生的卵圆细胞ｐ２１ｒａｓ及ＡＦＰ阳性反应。原位杂交显示,诱癌的第４～８周,ｃＨａｒａｓ的阳性表达细胞呈逐渐增多趋势;１４周时,ｃＨａｒａｓｍＲＮＡ阳性表达细胞减少;至１７周,所有癌组织内显示ｃＨａｒａｓ基因表达阴性,而癌旁组织内则可见ｒａｓ基因的大量表达。结论：卵圆细胞是宿主受化学致癌剂作用后发生肝癌的始动细胞,与肝癌的发生有着密切的联系。     

干扰素和卡介苗对肝癌大鼠枯否细胞释放TNF和IL－1的影响

以二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，分别给予正常大鼠和肝癌大鼠干扰素（ＩＦＮα－２ｂ）、卡介苗（ＢＣＧ）或两者联用。从各组正常大鼠和肝癌大鼠肝中分离出枯否细胞（ＫＣ），体外与人肝癌细胞联合培养，分别测定培养液中的ＴＮＦ和ＩＬ－１含量。从未用免疫制剂的肝癌大鼠肝中分离出ＫＣ，体外培养给予ＩＦＮα－２ｂ、ＢＣＧ或两者联用，测定ＴＮＦ和ＩＬ－１。结果显示：ＩＦＮα－２ｂ或ＢＯＧ均促进ＫＣ（正常和肝癌大鼠，在体和离体）释放ＴＮＦ和ＩＬ－１，并均以两者联用效果最佳，使ＫＣ释放ＴＮＦ为对照组的２～５倍，ＩＬ－１活力提高５０％～８０％。此结果为联用免疫制剂增强ＫＣ抗肝癌细胞的最佳效果提供了科学依据。