4种核酸提取方法在流行性感冒病毒核酸检测中的比较

目的：比较常见的4种核酸抽提方法，比较其对流行性感冒（流感）病毒检测的敏感性差异，为实验室应用和结果的评价提供依据。方法：对已确定效价的甲1型流感病毒，作10^-2～10^-5系列稀释，选用Roche公司Hish Pure Viral RNA Kit、QIAGEN公司的Rneasy mini Kit、国产Z生物公司RNA提取试剂盒和Invitrogen公司Trizol试剂等4种核酸提取方法提取上述标本核酸模板，采用罗氏公司的RT-PCR试剂盒，用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对其进行评价。结果：在对不同病毒拷贝数流感病毒的检测中，4种核酸提取方法以Roche公司High Pure Viral RNA Kit提取效率最高，以此提取效率作为100％，则QIAGEN Rneasy mini Kit、Invitrogen Trizol和国产Z生物公司RNA提取试剂盒的平均提取效率依次为89．71％、75．30％、68．00％。经方差分析及t检验，4种方法之间存在显著性差异（P均〈0．05）。对临床标本的检测，也获得相似结果。结论：各试剂之间提取核酸的效率存在差异，应该选择性价比较好的方法进行临床标本的实验室RNA提取。     

不同保存条件下血清荧光定量检测HCV RNA的研究

[目的]了解不同的保存条件对血清标本HCVRNA检测结果的影响。[方法]荧光定量逆转录聚合酶链法(FQ-RT-PCR)。[结果]血清标本4℃存放5d HCV RNA检测结果和室温放置5d、-20℃反复冻融5次的HCV RNA检测结果差异均无统计学意义。[结论]血清标本4℃保存5d，室温保存5d，-20℃反复冻融5次，不影响HCV RNA的检测结果。HCV RNA检测结果重复性不好，应考虑内外源RNase的降解作用及所用试剂的特异性、敏感性、重复性等因素的影响。     

3种血浆HIV-1 RNA定量方法检测质量评价

目的:评价3种血浆HIV-1 RNA定量方法的检测质量效果。方法:120份HIV-1阳性血浆样本分别用Amplicor、NASBA和bDNA2.0试剂盒测定其HIV-1 RNA浓度,之后对其敏感性、相关性以及批内和批间重复性进行统计学分析。结果:3种试剂盒对120份血浆样本的检测敏感性分别为75.83%(Amplicor)、66.67%(NASBA)和70.00%(bDNA2.0);平均HIV-1RNA浓度(log10拷贝/ml)分别为4.12±0.92(Amplicor)、4.05±0.88(NASBA)和4.04±0.77(bDNA 2.0);相关性比较中,差异有<0.50 log10的样本百分率分别为73.96%(Amplicor-bDNA2.0)、72.41%(NASBA-bDNA2.0)和68.09%(Amplicor-NASBA);批内重复性分析中,差异<0.50 log10的样本百分率分别为96.55%(Amplicor)、85.71%(NASBA)和100.00%(bDNA2.0);批间重复性分析中,差异<0.50 log10的样本百分率分别为96.77%(Amplicor)、83.33%(NASBA)和96.77%(bDNA2.0)。结论:3种病毒载量检测试剂盒定量血浆HIV-1RNA方法可靠,敏感性接近,相关性和重复性良好。     

新型丙型肝炎病毒核酸定量试剂检测性能验证

目的验证新型丙型肝炎病毒核酸定量试剂的检测性能。方法运用ABI 7500荧光定量PCR仪,按CNAS-CL02-A009文件要求,分别验证其精密度、正确度、线性及可报告范围和抗干扰能力等指标。结果精密度:低浓度和高浓度样本的重复精密度标准差值均小于3/5TEa,低浓度和高浓度样本的中间精密度标准差值均小于4/5TEa;正确度:2017年卫计委10份室间质评样本的检测结果均在靶值允许的上下限范围之内,且与靶值的偏倚均≤±7.5%,正确率高达100%;线性及可报告范围:新型试剂在50IU/ml～1×10~8 IU/ml范围内具有良好的线性关系,线性回归方程为y=0.988x+0.1891,R~2=0.9996>0.95;抗干扰能力:2g/dl的血红蛋白、28mg/dl的总胆红素、3000mg/dl的甘油三酯、40g/L的总IgG对检测结果没有影响。结论新型试剂具有重复性好、稳定性高、结果准确可靠、线性范围宽、抗干扰能力强等优势,其检测性能满足ISO15189要求,可有效用于临床样本检测并适合于在各医学实验室推广使用。     

荧光定量RT-PCR检测血清标本中的肠道病毒RNA

[目的]建立一种快速,灵敏,易操作的通用肠道病毒荧光定量RT-PCR检测方法用于血清标本检测。[方法]在肠道病毒5'端的保守区域中选取所有型别肠道病毒一致的基因组序列设计通用引物及Taqman探针。优化反应体系,建立RT-PCR荧光定量检测系统,测定了TCID50(50%组织培养感染剂量/ml)的CoxB3病毒培养液进行10倍稀释以检测最低检测病毒量,用45份心肌炎患者血清标本和122例人群血清标本进行检测。[结果]荧光定量RT-PCR系统对于CoxB3病毒的最低检测量为0.01TCID50/ml并且可以检测到小于1000拷贝/ml的质粒DNA,定量线形范围达到5个数量级,相关系数达到0.993。45份病毒性心肌炎患者急性期血清临床标本中31份阳性,阳性率为68.9%。122份人群血清标本中肠道病毒阳性标本19份,阳性率15.6%。[结论]应用TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测血清标本,为肠道病毒的临床诊断及流行病学调查提供了一种快速,高灵敏度的实用方法.     

不同保存条件下血清荧光定量检测HCV RNA的研究

[目的 ]了解不同的保存条件对血清标本HCVRNA检测结果的影响。 [方法 ]荧光定量逆转录聚合酶链法(FQ RT PCR)。 [结果 ]血清标本 4℃存放 5dHCVRNA检测结果和室温放置 5d、-2 0℃反复冻融 5次的HCVRNA检测结果差异均无统计学意义。 [结论 ]血清标本 4℃保存 5d ,室温保存 5d ,-2 0℃反复冻融 5次 ,不影响HCVRNA的检测结果。HCVRNA检测结果重复性不好 ,应考虑内外源RNase的降解作用及所用试剂的特异性、敏感性、重复性等因素的影响。     

HCV RNA检测在献血者筛选中的应用分析

目的　探讨我国目前采供血模式下将HCVRNA检测用于献血者筛选的可行性与必要性。　方法　采用HCV核酸扩增酶免检测技术检测 4170例抗 -HCV阴性及 76例抗 -HCV阳性献血者血清HCVRNA。　结果　 4170例抗 -HCV阴性血清中未检出HCVRNA阳性 ,76例抗 -HCV阳性者中 ,两种试剂检测抗 -HCV阳性者HCVRNA检出率 48.0 % ,单试剂检测抗 -HCV阳性者HCVRNA检出率 9.80 %。　结论　HCVRNA检测目前尚不能完全取代血清学检测用于献血者筛选。     

血液混样HCV/HIV-1 RNA全自动提取方法的应用评价

目的：建立献血者全自动核酸检测方法，探讨在我国血液筛查中引进全自动核酸筛查的可行性。方法：选用STAR2000加样仪进行血样汇集(24人份)，在COBAS AMPLICOR进行扩增和检测分析结果，从灵敏度及抗干扰能力方面进行评价。结果：用国际标准核酸质控品考评及常规应用，表明全自动汇集、全自动核酸提取及扩增和检测95％的检出限量HCV RNA和HIV-1 RNA分别为17．4IU／ml和20．6cp／ml，20mg／ml胆红素、1g／dl血色素及中等程度的脂血对结果无影响。通过对16512个样本共688汇集池分析，HCVRNA阳性1例(ELISA亦阳性)，HIV-1 RNA未检出阳性。结论：血液混样MPLC全自动核酸提取方法可应用于血液HCV RNA和HIV-1 RNA的筛查工作。     

乙型肝炎病毒RNA在慢性乙型病毒性肝炎不同HBeAg状态下的临床研究

目的 通过观察HBeAg不同状态下慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)的HBV RNA表达水平、检出率分析以及与HBV DNA、HBsAg的相关性,探索血清HBV RNA在CHB管理中的价值。方法 本研究共纳入2021年1月—12月在杭州市西溪医院门诊及住院部就诊的CHB患者253例,包括HBeAg阳性的患者103例和HBeAg的阴性患者150例,检测血清HBV RNA定量,并分析其与HBsAg、HBV DNA等的相关性。结果 在HBeAg阳性组与HBeAg阴性组之间,HBV RNA及HBV DNA的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.001)。HBeAg阳性患者的HBV RNA、HBV DNA、HBsAg、ALT、AST定量均高于HBeAg阴性患者。HBeAg阳性组中,血清HBV RNA与HBV DNA、HBsAg成正相关(r值分别为0.855、0.669,P<0.001);HBeAg阴性组中,血清HBV RNA与HBV DNA、HBsAg成正相关(r值分别为0.476、0.375,P<0.001)。在CHB未治患者中HBV RNA与HB...     

荧光定量RT-PCR定量检测诺如病毒方法的建立及其评价

目的:建立荧光定量RT-PCR快速检测诺如病毒GⅠ、GⅡ的方法,以用于患者标本的检测、分型及绝对定量。方法:经过优化筛选出最佳反应体系及反应条件,建立荧光定量RT-PCR快速检测诺如病毒的方法;制作两种不同型号的荧光定量PCR仪的绝对定量标准曲线,并从灵敏度、特异性、重复性、对患者标本检测能力等方面对建立的方法进行综合评价。结果:该方法在两种不同型号的仪器上对108~101copy/μl范围内的病毒,具有良好的线性关系,最低灵敏度为101copy/μl。与容易引起腹泻症状的轮状病毒、腺病毒、星状病毒、肠道病毒均无交叉反应;诺如病毒GⅠ、GⅡ两种常见感染人类的亚型之间无交叉反应。批内及批间重复性实验的标准差在0.10~0.59、变异系数在0.43%~2.84%之间,显示该方法重复性较好。用该方法共检测腹泻患者粪便标本181份,其中33份诺如病毒阳性,随机抽取10份阳性标本测序分析,结果证实均为诺如病毒。结论:本研究建立的诺如病毒荧光定量RT-PCR检测方法,灵敏度、特异性、重复性、对患者标本的检测能力等均显示较好的结果,且能快速区分GⅠ、GⅡ两种感染人类的重要亚型,在诺如病毒的快速检测中有着实际推广意义。