microRNA-21调节宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4的表达研究

目的探讨microRNA(miR)-21-反义寡核苷酸(ASODN)对宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4基因表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法宫颈鳞癌SiHa细胞分3组,采用LipofectamineTM2000转染试剂,miR-21调控组转染miR-21抑制剂的ASODN,miR-21抑制剂阴性对照的ASODN,空白对照组不转染。Cell Titer和荧光TUNEL分别检测转染前后SiHa细胞增殖和凋亡的变化,流式细胞仪分析细胞周期,实时RT-PCR检测miR-21和PDCD4mRNA水平表达,Western blot检测靶蛋白PDCD4表达。结果 AS-miR-21组与阴性、空白对照组相比,SiHa细胞生长明显抑制,而阴性和空白对照组比较无明显差异;细胞凋亡率分别为(9.7±0.52)%、(3.6±0.17)%和(3.4±0.36)%;细胞周期结果显示AS-miR-21组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,与对照组间差异显著(P<0.05);实时RT-PCR结果显示,miR-21表达下降而PDCD4表达升高。Western blot检测结果显示,PDCD4表达AS-miR-21组明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论 AS-miR-21可有效抑制miR-21在宫颈鳞癌SiHa细胞中的表达并上调PDCD4基因表达,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

胃癌中高表达的miR-21对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:研究miR-21在胃癌中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:通过实时荧光定量PCR检测30例胃癌手术切除组织和周围正常组织中以及10株胃癌细胞中miR-21的表达情况。通过CCK8法、Annexin-Ⅴ+PI、流式细胞仪检测、划痕实验,观察过表达miR-21对胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移等生物学行为的影响。结果:定量real-time PCR结果显示miR-21在胃癌组织中高表达(P0.05),miR-21过表达细胞株增殖能力增强,与阴性对照组和空白对照组对比差别具有统计学意义(P<0.01),miR-21转染细胞划痕愈合速度较对照组快。结论:miR-21在胃癌中呈高表达,过表达miR-21可以促进BGC-823胃癌细胞的增殖能力和迁移能力,但对凋亡和细胞周期影响不明显。     

小干扰RNA下调GLI1基因的表达对MKN28细胞转移侵袭行为的影响

目的利用siRNA技术下调GLI1基因的表达,在体外研究GLI1对MKN28胃癌细胞侵袭转移能力的影响。方法脂质体法将GLI1 siRNA转染MKN28胃癌细胞,采用RT-PCR观察GLI1 siRNA转染前后GLI1在mRNA水平的变化情况。培养MKN28胃癌细胞,将细胞分为转染GLI1 siRNA组、阴性siRNA组和对照组后,分别采用Transwell小室法检测各组细胞的侵袭和转移能力。结果转染GLI1 siRNA后GLI1基因表达在24 h和48 h明显下调。侵袭和转移实验显示:GLI1 siRNA组侵袭和转移细胞数目均低于阴性siRNA组和对照组(P<0.05),而阴性siRNA组和对照组间的差异均无统计学意义。结论转染GLI1 siRNA特异下调GLI1基因表达,在体外抑制胃癌MKN28细胞的侵袭和转移,可能是胃癌靶向治疗的靶点。     

miRNA-381靶向PTEN对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制研究

目的 探讨与研究miRNA-381靶向10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因(PTEN)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法 将处于对数生长期的BGC-823细胞平均分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别转染miRNA NC 20 nmol/L与miRNA-381 mimic 20 nmol/L、40 nmol/L。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移情况,实时定量PCR检测miRNA-381表达情况,Western blotting检测PTEN蛋白表达情况。结果 转染后24 h、48 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、miRNA-381表达量高于对照组,差异均具有统计学意义(P 0. 05);实验2组高于实验1组,两组比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、PTEN蛋白相对表达量均显著低于对照组,实验2组也较实验1组显著降低,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。与转染后24 h相比,转染后48 h三组细胞增殖指数、凋亡指数、迁移指数以及miRNA-381相对表达量均显著增加,而PTEN蛋白相对表达量仅对照组显著增加,两个实验组均显著降低(P 0. 05)。结论 在胃癌细胞中,miRNA-381可通过靶向抑制PTEN表达,从而促进胃癌细胞增殖与迁移,抑制胃癌细胞的凋亡。     

RNA干扰MBP-1基因对胃癌细胞SGC-7901增殖影响

目的：探讨 MBP-1（c-myc promter binding protein 1,MBP-1）基因表达沉默对胃癌细胞株 SGC-7901细胞增殖影响。方法实验分3组：空白对照组（未转染胃癌细胞）、阴性对照组（转染错义序列）和干扰组（转染 MBP-1 shRNA）。设计2条针对MBP-1基因的小干扰 RNA 片段及1条阴性对照 siRNA,并构建入 pSIREN-retroQ 质粒。将构建的重组 pSIREN-retroQ 质粒通过 Lipofectamine 2000脂质体转染胃癌 SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳转株细胞。Real time PCR 和 Western blot 分别检测MBP-1表达。MTT 法对 MBP-1干扰后 SGC-7901细胞增殖进行检测。结果通过 PCR 扩增阳性克隆及测序,说明已成功构建MBP-1干扰及对照重组 pSIREN-retroQ 质粒。通过 Lipofectamine 2000脂质体将重组质粒转染胃癌 SGC-7901细胞,并通过嘌呤霉素筛选2周,说明已成功构建 MBP-1干扰及对照 SGC-7901稳转株细胞。Real time PCR 检测,干扰组 MBP-1 mRNA 相对表达量与空白对照组相比显著下调（P ＜0.05）。Western blot 检测 MBP-1蛋白表达,干扰组 MBP-1表达量与空白对照组相比也都显著下调。MTT 法检测结果表明,MBP-1干扰组细胞在48、72、96和120 h 增殖能力比空白对照组都有显著的升高（P ＜0.05）。结论下调 MBP-1基因表达能明显促进胃癌细胞 SGC-7901的增殖,从而为胃癌基因治疗提供了新靶点。     

miRNA-195在膀胱癌细胞中功能的研究

目的研究微小RNA(miRNA)-195对人膀胱癌细胞5637增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体方法将miRNA-195转染至人膀胱癌细胞5637(miRNA-195组),同时以只转染病毒载体的5637细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转染细胞中miRNA-195的表达量。采用噻唑蓝(MTT)法、细胞计数法和集落形成实验测定miRNA-195对5637细胞体外增殖的影响。采用划痕试验、Transwell实验、Matrigel肿瘤细胞侵袭实验检测miRNA-195对5637细胞迁移、侵袭能力的影响。结果实时荧光定量PCR检测结果表明转染后的5637细胞高表达miRNA-195。MTT法、细胞计数法及集落形成实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞在体外的增殖,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。划痕实验、Transwell实验以及Matrigel肿瘤细胞侵袭实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞的迁移和侵袭能力,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-195能够抑制膀胱癌细胞5637在体外的增殖、迁移以及侵袭能力。     

miRNA-21对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗增敏作用的研究

目的探讨microRNA-21 (miRNA-21)对宫颈癌Hela/DDP耐药的影响及其相关机制。方法实时荧光定量PCR(Real-PCR)检测Hela细胞、Hela/DDP、转染后miR-21-siRNA组及miR-21-neg中miRNA-21的表达量。MTT法检测顺铂(DDP)对Hela/DDP增殖的影响;流式细胞仪分析Hela/DDP细胞周期及凋亡率;Western blot检测顺铂处理过的Hela/DDP中PTEN蛋白的表达。结果在Hela/DDP组中miRNA-21明显高于Hela组,差异具有统计学意义(P0.05);转染miRNA-21siRNA后,Hela/DDP中miRNA-21明显低于空白对照组及阴性对照组,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组及阴性对照组相比,顺铂作用Hela/DDP后,转染miRNA-21 siRNA组细胞增殖抑制率、凋亡率及PTEN蛋白表达水平均升高,并呈现G0/G1期阻滞作用,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-21可抑制Hela/DDP细胞增殖、阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡,进而提高Hela/DDP细胞对顺铂的敏感性,可能与宫颈癌Hela/DDP细胞中PTEN蛋白合成增加有关。     

siRNA 干扰的 DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究

目的：探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-catenin、MMP14表达情况。结果转染DKK1 siRNA至Ishikawa细胞使细胞中DKK1基因表达水平降低21.00%（t＝3.05,P＜0.05）, DKK1蛋白表达降低39.35%（t＝40.97,P＜0.01）。侵袭实验中DKK1 RNAi组的细胞均数140.8±4.733,高于空白对照组的细胞均数123.7±6.700,癌细胞的侵袭能力增强13.82%。迁移实验中DKK1 RNAi组细胞均数（152.0±3.528）高于空白对照组（130.6±4.061）,癌细胞的迁移能力增强16.39%。DKK1 siRNA处理后,细胞中活性β-catenin、MMP14荧光增强,提示表达水平上升。结论 DKK1具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的作用。Wnt/β-catenin信号通路参与了DKK1这一作用过程。DKK1不失为抑制子宫内膜癌转移的有效治疗靶点。     

miR-421靶向PDCD4促进前列腺癌DU145细胞增殖的实验研究

目的研究MicroRNA-421(miR-421)促进前列腺癌DU145细胞增殖的作用及潜在的分子机制。方法培养前列腺癌DU145细胞,分为对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-421组、miR-421+pcDNA组、miR-421+pcDNA-细胞程序性死亡基因4(PDCD4),miR-NC组转染miR-NC、miR-421组转染miR-421、miR-421+pcDNA组转染miR-421及pcDNA质粒、miR-421+pcDNA-PDCD4组转染miR-421及pcDNA-PDCD4质粒,MTS法测定细胞增殖活力,荧光定量PCR测定PDCD4的mRNA表达水平,western blot测定PDCD4的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-421与PDCD4的靶向结合。结果与对照组及miR-NC组比较,miR-421组的增殖活力增加,PDCD4的表达水平及野生型PDCD4双荧光素酶报告基因的荧光活力均降低(P<0.05);与miR-421+pcDNA组比较,miR-421+pcDNAPDCD4组的增殖活力降低,PDCD4的表达水平增加(P<0.05)。结论 miR-421对前列腺癌DU145细胞的增殖具有促进作用,靶向抑制PDCD4是miR-421发挥这一作用的潜在分子机制。     

miR-373对人胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-373在人胃癌SGC7901细胞中表达情况及其对胃癌细胞增殖、迁移的影响。方法人胃癌SGC7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞采用反转录PCR法检测miR-373相对表达量。人胃癌SGC7901细胞分为miR-373类似物组、miR-373抑制物组和空白对照组,分别转染miR-373 mimic、miR-373 inhibitor和miR-373 NC。转染后24、36、48、72 h,采用MTT法检测3组细胞增殖率,转染后48 h,采用Transwell小室迁移实验检测迁移细胞数。结果胃癌SGC7901细胞miR-373相对表达量(0.39±0.05)明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞(0.23±0.04)(P0.05);miR-373类似物组细胞miR-373相对表达量(0.78±0.11)明显高于miR-373抑制物组(0.17±0.02)和空白对照组(0.36±0.06)(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后24 h,3组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P0.05),转染后36、48、72 h,miR-373类似物组细胞增殖率明显高于miR-373抑制物组和空白对照组(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后48 h,相同面积下miR-373类似物组迁移细胞数[(181.28±11.29)个]明显多于miR-373抑制物组[(61.82±8.29)个]和空白对照组[(109.73±8.22)个](P0.05),空白对照组多于miR-373抑制物组(P0.05)。结论 miR-373可能作为癌基因作用于胃癌组织,且能增强胃癌细胞的增殖和迁移能力。     

OTUB2表达下调对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)表达下调对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法采用Lipofectmine 2000转染试剂向MGC-803细胞中转染OTUB2小干扰RNA(si-OTUB2)序列(si-OTUB2组)和si-NC序列(si-NC组),以不进行任何转染的胃癌MGC-803细胞作为空白对照组。分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中OTUB2mRNA及蛋白的表达水平。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果与空白对照组和si-NC组比较,siOTUB2组细胞中OTUB2mRNA及蛋白表达水平降低(P0.05),细胞增殖能力减弱(P0.05),细胞迁移数和侵袭数减少(P0.05),细胞中PCNA、N-cadherin和p-AKT蛋白表达水平降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P0.05)。结论下调OTUB2可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

MicroRNA-1184在胃癌细胞中的表达及作用

摘要:目的探讨 MicroRNA-1184( miR-1184)在胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞增殖、迁移、细胞周期及凋亡等生物学行为中的作用。方法通过实时荧光定量 PCR检测胃癌组织及人胃黏膜上皮细胞系GES-1中miR-1184的表达水平;通过 CCK-8试验、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验及细胞划痕试验检测胃癌细胞的增殖和迁移能力;通过流式细胞术检测胃癌细胞系的细胞周期及凋亡率的变化;通过Western blot 检测胃癌细胞上皮-间质转化( EMT)、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过双荧光素酶报告基因试验检测miR-1184与异柠檬酸脱氢酶3(NAD+)a( IDH3A)的靶向关系。结果与胃癌旁组织及人胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-1184在胃癌组织中呈低表达(t=2.54,P<0.05),且在胃癌细胞系BGC-823 和 MGC-803中呈低表达(t= 13.99,P<0.001;t= 14.85,P<0.01)。与对照组相比,转染miR-1184抑制剂可促进胃癌细胞的增殖(t=9.28, P<0.05)、迁移(t=9.24, P<0.001). EMT进程,G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡减少(t=6.57,P<0.01);转染 miR-1184模拟物可抑制胃癌细胞的增殖(t=7.34 ,P<0.001)、迁移(t=9.24,P<0.001)、EMT进程、G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡增加(t= 20.33 ,P<0.000 1) ;miR-1184可与IDH3A靶向结合,其抑制剂可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量增加(t=11.32 ,P<0.001),而其模拟物可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量减少(t=20.91,P<0.0001)。结论miR-1184 在胃癌组织和细胞系中呈低表达,可影响胃癌细胞增殖、迁移EMT进程、细胞周期G,/S期转换及细胞凋亡等生物学行为。     

miR-21对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响

目的探讨miR-21对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响。方法采用不同浓度的miR-21慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞,通过MTT实验检测乳腺癌MCF-7细胞增殖情况,采用免疫印迹与双荧光素酶实验检测miR-21与PDCD4蛋白的调控关系,使用划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测miR-21对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响。结果对照组与使用浓度为0、20、40 nmol/L的miR-21-inhibitor慢病毒转染后的乳腺癌MCF-7细胞增殖速度分别为(81.24±4.65)×10`4、(72.15±6.19)×10~4、(70.25±5.59)×10~4、(52.92±7.08)×10~4,差异均统计学意义(P0.05)。抑制miR-21表达后,PDCD4蛋白的表达水平相应下调,且转染miR-21-inhibitor后,野生型PDCD4-3'非翻译区的表达活性受到一定程度抑制。抑制miR-21表达后,乳腺癌MCF-7细胞的侵袭、迁移能力均受到抑制,miR-21-inhibitor组与对照组细胞侵袭数量及细胞迁移率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-21通过调控PDCD4蛋白的表达以影响乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭行为。     

胃癌细胞中STAT1的表观遗传学调控机制的研究

目的研究抑制信号传导和转录激活因子1(STAT1)基因表达对胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭、迁移等表观遗传学特性的影响。方法将胃癌细胞分为三组:空白对照组不做任何处理,空载体对照组、STAT1 SiRNA处理组分别转染SiRNA和特异性干扰STAT1基因表达的STAT1 SiRNA。蛋白质印迹法(Western Blot)检测STAT1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性;Transwell法检测MKN-45细胞侵袭、迁移能力。结果抑制STAT1表达后,MKN-45细胞的增殖活性、侵袭以及迁移能力显著降低(P0.05),且STAT1 SiRNA处理组细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9表达量较空白对照组明显降低(P0.05);空载体对照组与空白对照组细胞的增殖活性、侵袭以及迁移能力、VEGF、MMP-9、MMP-2表达量比较差异均无显著性(P0.05)。结论 STAT1可能通过调控肿瘤细胞的转移能力以及血管生成等抑制胃癌细胞增殖及侵袭、迁移能力。     

下调人乳腺癌MCF-7细胞系miRNA-221和miRNA-222表达对抑制肿瘤细胞增殖及迁移能力的探讨

目的通过敲低微小RNA(microRNA,miRNA)-221和miRNA-222的表达上调组织金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)的方法来研究人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖和迁移能力。方法根据miRBase数据库中Homo sapiens(hsa)-miRNA-221和hsa-miRNA-222的寡核苷酸序列和一段无义序列分别设计并重组成质粒:反义抑制miRNA-221(antisense-miRNA-221,AS-miRNA-221)、反义抑制miRNA-222(antisense-miRNA-222,AS-miRNA-222)、共同反义抑制miRNA-221/222(antisense-miRNA-221/222,AS-miRNA-221/222)和无义抑制(Scramble),并将其分别利用脂质体LipofectamineTM2000转染进人乳腺癌MCF-7细胞中,经G418筛选后建立稳定表达的对照细胞株[未转染正常细胞(Control组)和无义抑制细胞(Scramble组)]和低表达miRNA-221、miRNA-222细胞株(即ASmiRNA-221组、AS-miRNA-222组和AS-miRNA-221/222组)。转染24 h后于荧光显微镜下观察转染效率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组细胞中miRNA-221和miRNA-222的表达量,采用逆转录PCR检测各组细胞中质粒载体上携带的抗性neo基因的表达情况,以此来验证转染是否成功;分别采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测TIMP3和金属蛋白酶17(ADAM17)的表达差异;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测并绘制生长曲线,观察低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力;采用划痕修复实验观察转染后细胞的迁移能力。结果转染24 h之后,在荧光显微镜下观察到各转染组细胞的绿色荧光蛋白表达较多,即转染效率较高。检测转染后各组细胞中neo基因、miRNA-221和miRNA-222的表达。与Control组比较,Scramble组、ASmiRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组neo基因表达明显升高;与Scramble组比较,AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组miRNA-221和miRNA-222的表达量明显降低,即证实转染了反义抑制miRNA-221/222的低表达稳定细胞株构建成功。与Scramble组比较,AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组细胞TIMP3 mRNA表达升高,而其调控的ADAM17水平降低。生长曲线显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力明显受到抑制。划痕修复实验结果显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的迁移能力降低。结论通过敲低miRNA-221、miRNA-222、上调TIMP3表达可以抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和迁移能力。     

特异性小干扰RNA靶向沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨RNA干扰沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响。方法将人大肠癌【刖。细胞常规分为空白对照、阴性对照组和实验转染组。体外化学合成RIP1基因序列特异性小干扰RNA（siRNA）,Hegene介导转染人大肠癌细胞株Lovo细胞;采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测特异性siRNA对RIP1基因在mRNA水平上沉默效果;转染后采用噻唑蓝（MrI’r）比色法检测siRNA对细胞增殖的影响;流式细胞周期法检测siRNA对细胞周期的影响;Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力。结果成功转染RIP1siRNA的大肠癌Lovo细胞,RT-PCR显示RIP1mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制（P〈0．05）;GO～G1期细胞[（54．68±1．54）％]明显多于阴性对照组[（48．48±1．96）％]和空白对照组[（43．92±1．68）％];RNA干扰明显抑制Lovo细胞迁移力和侵袭力（21±2．731掷．43±2．064）。结论RIP1siRNA可有效抑制大肠癌Lovo细胞RIP1基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖。促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,RIP1siRNA能有效调控Lovo细胞恶性生物学行为。     

特异性hTERT-siRNA介导RNAi在Hela细胞中的实验研究

目的:探讨RNA干扰对宫颈癌Hela细胞人端粒酶逆转录酶基因的抑制效应。方法:化学合成靶向于hTERT基因的4个siRNA片段和1个阴性对照小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)片段,分siRNA 1-4、control siRNA和空白对照组共6个组,分别用阳离子脂质体转染法将其导入Hela细胞内,通过RT-PCR和WesternBlot方法分别检测宫颈癌细胞转染后细胞hTERT mRNA和蛋白水平,MTS法检测细胞生长增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:siRNA-3组端粒酶活性明显下降,hTERT mRNA表达水平明显下降,hTERT蛋白表达明显下降,细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向于hTERT的siRNA能特异性抑制宫颈癌Hela细胞hTERT基因,下调hTERT mRNA及蛋白表达水平,抑制癌细胞生长增殖,促进宫颈癌细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗研究提供实验依据。     

RNAi-chk1在抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长作用的实验研究

目的观察chk1-RNAi联合放疗对Lewis肺癌细胞的抑制及凋亡情况。方法以脂质体Lipofectimine-2000介导,将chk1-536的siRNA表达载体转染小鼠Lewis肺癌细胞株,将其分为空白对照组、错义序列组、siRNA组,2Gy照射组、2Gy照射+错义序列组、2Gy照射+siRNA组。应用MTT法检测转染细胞抑制率、流式细胞术分析转染siRNA后细胞的凋亡,并应用RT-PCR检测转染细胞chk1-mRNA表达水平。结果 chk1-siRNA转染联合辐射组的Lewis肺癌细胞,与对照组相比较生长增殖受抑制、细胞凋亡增加;MTT法检测和流式细胞术分析示:chk1-siRNA转染联合辐射组的Lewis肺癌细胞生长增殖受抑制,细胞凋亡增加(P<0.05);同时,RT-PCR法检测该组细胞中chk1mRNA表达量下降(P<0.05)。并且siRNA转染可增加2Gy照射引起的Lewis肺癌细胞凋亡。结论针对chk-1的RNAi可以提高Lewis肺癌细胞的抑制率及放疗引起的肿瘤细胞的凋亡,对肿瘤有治疗作用,与放疗有协同作用。     

miRNA-21siRNA对宫颈癌Hela细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨microRNA-21(miR-21)siRNA对宫颈癌Hela细胞周期和细胞凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR检测Hela细胞转染后siRNA干扰组及阴性对照组中miR-21的表达量。流式细胞仪分析Hela细胞周期及凋亡率的变化。结果转染siRNA干扰载体后,实时荧光定量PCR检测Hela细胞中miR-21明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05),空白对照组与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P0.05);siRNA表达载体可明显增加细胞凋亡率,并显现出G_0/G_1期阻滞作用。结论miR-21siRNA干扰载体可以高效地抑制宫颈癌Hela细胞miR-21基因的表达,增强细胞的凋亡,并使细胞周期阻滞于G_0/G_1期。     

SNRPA对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及Snail1信号通路的影响

摘要：目的?检测小核核糖核蛋白多肽A(SNRPA)在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达，分析SNRPA调控锌指转录因子1(Snail1)对人胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。方法?通过对GAPIA数据库进行检索以及western blot验证，以确定SNRPA在胃癌组织中的表达情况，并对患者临床病理参数进行统计学分析。进一步检测胃癌细胞系AGS、HGC27、SGC7901、BGC823和MGC803中SNRPA蛋白及mRNA的表达水平。在胃癌细胞系AGS和SGC7901中分别转染SNRPA siRNA和SNRPA过表达质粒，采用CCK8及EdU细胞增殖试验检测转染后细胞的增殖活性；Transwell细胞迁移和侵袭试验检测细胞迁移能力；western blot检测相应蛋白质的表达；敲减Snail1后进一步验证SNRPA调控Snail1介导胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。结果?SNRPA在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。此外，在AGS细胞系中SNRPA的表达水平最高，而在SGC7901细胞系中SNRPA的表达水平最低。在AGS细胞系中，敲减SNRPA后，其细胞增殖活性显著低于阴性对照组(P<0.05)，且细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。在SGC7901细胞系中，转染SNRPA过表达质粒后，其增殖活性明显高于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显增高(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。在AGS细胞系中，转染Snail1 siRNA后，其细胞增殖活性明显低于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。而在SGC7901细胞系中，SNRPA过表达质粒和Snail1 siRNA共转染后，与对照组相比，其细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭能力差异均无统计学意义(P>0.05)。结论?SNRPA在胃癌组织中高表达；SNRPA通过上调Snail1表达促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。