固相间接血凝法检测伤塞杆菌O抗体及其临床初步应用

建立了固相间接血凝法（ＳＰ－ＰＨＡ）用于检测伤寒杆菌Ｏ抗并与间接血凝法（ＬＰＳ－ＰＨＡ），酶联ＡＳ蛋白ＥＬＩＳＡ法及经典的肥达氏试验作了比较，ＳＰ－ＰＨＡ法敏感性优于ＬＰＳ－ＰＨＡ《肥达氏试验（Ｗｉｄａｌ‘ｓ）与酶联Ａ蛋白ＥＬＩＳＡ法（ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ）相近。伤寒患者血清Ｏ抗全阳性纺为８８．２％（１５／１７），发热待查阳性纺为３．６％（２／５５），３０例献血员血清Ｏ抗体均为阴性。该法敏感、特异、     

肿瘤及多种疾病患者血清P53蛋白和抗体检测

目的检测不同疾病患者血清P53蛋白和抗体的阳性率。方法采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清P53抗体,夹心ELISA法检测P53蛋白。结果血清P53蛋白总阳性率为3．73％,抗体总阳性率为12．98％。恶性肿瘤、良性肿瘤、非肿瘤性疾病患者的P53蛋白阳性率分别为4．20％、0％及3．74％;P53抗体阳性率分别为14．23％、4．41％及13．02％。卵巢癌阳性率最高（41．67％）,其次为鼻咽癌（33．33％）、白血病（24．24％）。肝硬化、慢性乙型肝炎、慢性胆囊炎、结肠息肉、慢性阑尾炎等患者中也发现有血清P53蛋白和抗体阳性。结论血清P53蛋白和抗体作为一种无创性检测指标可用于肿瘤的辅助诊断及早期发现,但其实际应用价值尚需进一步评价。     

儿童病毒性脑炎患儿Colti病毒感染研究

目的：了解儿童病毒性脑炎患儿Colti病毒感染的情况。方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测2000年1月至2003年12月在广州市儿童医院住院，临床诊断为病毒性脑炎的198例患儿血清标本263份（双份血清65例，单份血清133例）的IgG抗体。用反向被动血凝抑制试验检测乙脑病毒抗体。结果：65例惠儿的双份血清Colti病毒抗体滴度呈4倍或以上增高的7例，阳性率为10．8％（7／65），其中8倍或16倍升高者5例（7．7％，5／65），可以确诊为Cohi病毒感染。133例患儿的单份血清阳性为10例，阳性率为7．5％（10／133）。两种方法检测的结果，有4种血清抗体反应类型，第1种是仅查到Colti病毒抗体，占2．53％（5／198）；第2种是仅查到乙脑病毒抗体．占2．53％（5／198）；第3种是既壹到Colti病毒抗体，又查到乙脑病毒抗体，占6．06％（12／198）；第4种是既未查到Cohi病毒抗体，又未查到乙脑病毒抗体，占88．88％（176／198）。结论：以上检测为我市首次检测到Colti病毒抗体，说明我市不仅存在Colti病毒引起的感染，而且也存在Colti病毒引起的脑炎患者。     

重组日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶单克隆抗体在急性血吸虫病临床诊断中的应用

目的研究重组抗原26ku日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶（SjGST）及其单克隆抗体在血吸虫患者分子诊断中的应用。方法用已纯化的重组SjGST抗原免疫近交系（BALB／c）小鼠,数周后取免疫鼠脾细胞,与SP2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合,选择性培养基筛选出杂交瘤细胞,经有限稀释法克隆化,扩大培养制备针对重组SjGST抗原的单克隆抗体细胞株。亲和层析法纯化单克隆抗体。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测急性血吸虫病患者和非流行区正常人血清。结果成功获得重组蛋白26 ku SjGST,十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳显示与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带。成功获得能够长期分泌抗重组SjGST单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA与蛋白质印迹试验均显示杂交瘤细胞培养上清中含有重组SjGST抗体。ELISA检测患者血清结果表明,26kuSjGST用于急性血吸虫病患者血清中抗体检测的阳性率为90．6％,26 ku SjGST抗体用于急性血吸虫病患者血清中循环抗原检测的阳性率为59．4％。结论该重组蛋白用于急性血吸虫病患者血清中抗体的检测具有良好的免疫反应性,26 ku SjGST抗体对循环抗原的检测可作为抗体检测的有效补充。     

合成肽检测抗α1-肾上腺素受体自身抗体方法及其临床意义

目的 建立α1－肾上腺素受体（anti－α1－AdR）自身抗体的ELISA，评价其与高血压的关系。方法 以合成的α1－肾上腺素受体细胞外第二环功能表位肽段（α1－192－218位氨基酸）作抗原，建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA），检测98例难治性高血压、96例非难治性高血压患者和40例正常人血清中anti－α1－AdR。结果 阳性参考血清批内变异系数（CV)批间CV分别为0．072、0．101。用抗原吸收后，吸光度（A）值降低1．3倍。98例难治性高血压患者中，anti－α1－AdR的阳性率为36．7％（36／98），明显高于非难治性高血压组13．53％（13／96）和正常血压对照组（5．0％（2／40）。结论 检测抗α1－肾上腺素受体自身抗体的方法特异性和敏感性较高，操作简便，检测该抗体有助于难治性高血压的原因和指导降压药物的选择。     

数种检测抗核抗体、抗盐水可提取核抗原抗体方法的对比分析

目的：评价检测抗核抗体和抗盐水可提取核抗原（ENA）抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）的性能。方法：将相关纯化抗原包被的ELISA试剂和间接免疫荧光抗核抗体（IFANA）试验、免疫印迹法（IBT）和对流免疫电泳地（CIE）等用于20份系统性红斑狼疮（SLE）、10份干燥综合征（SS）患者以及30份健康对照血清中自身抗体的检测。结果：ELISA和IFANA抗核抗体筛选试验对结缔组织病诊断的敏感性和特异性差异无显著性（P＞0．05），但5例IFANA阴性ELISA阳性的患者血清经鉴定为抗SS－A和／或dsDNA抗体阳性；1例ELISA阳性则IFANA阴性的正常人血清经证实为ELISA试验假阳性，ELISA、CIE、IBT3种方法检测抗Sm抗体对诊断SLE的特异性均达到100％，敏感性差异无显著性（P值均＞0．05）。ELISA与IBT相比，在抗SS－A抗检检测上更为敏感（P＜0．01）。ELEISA与CIE法相比对抗SS－B抗体的检测也更敏感（P＜0．05）。结论：本研究中所用的ELISA抗核抗体检测试剂敏感性，特异性较好。     

利用斑点免疫渗滤法（DIFA）检测伤寒抗体的方法学研究

[目的]利用斑点免疫渗滤法（DIFA）检测伤寒抗体，并探讨临床诊断价值。[方法]采用斑点免疫渗滤法（DIFA）检测伤寒的菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原及甲、乙副伤寒的鞭毛（H）抗原的特异性抗体，用以诊断伤寒和副伤寒。通过抗原及相应抗体的制备，完成最佳实验条件的确定，包括对硝酸纤维素膜（NC）上抗原的包被时间、包被浓度、包被体积，待检血清的加样量，酶标SPA的最佳工作浓度，显色剂的量及结果的判定，最终确定斑点免疫渗滤法（DIFA）的操作过程为抗原包被为2μl，浓度为200亿／ml，放置4℃冰箱18～24h备用。用小牛血清封闭，待检血清加样量为10μl，待渗滤后洗3次，加酶标SPA10μl，待渗滤后洗3次，加底物10μl，5～10min观察结果。用确定好的DIFA法检测临床标本（15例阳性血清，36例阴性血清），并与肥达反应相比较。[结果]15例阳性血清DIFA法检测阳性率15／15（100％），而肥达反应阳性率为10／15（66．7％）。36例阴性对照血清DIFA法检测假阳性率1／36（2．8％），肥达反应检测假阳性率4／36〈11．1％），说明DIFA法敏感性和特异性优于肥达反应。[结论]DIFA有较高的敏感性和特异性，且操作简单、快速、无需特殊设备，易于临床推广。     

肺癌与幽门螺杆菌感染相关性研究

目的探讨肺癌与幽门螺杆菌（Hp）感染的关系。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法，对50例肺癌患者和50例非肿瘤患者进行血清幽门螺杆菌血清学抗体（Hp-IgG）和幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白抗体（Hp-CagA-IgG）检测。结果①肺癌组Hp-IgG阳性率92．0％，平均抗体水平250．714U／ml。显著高于对照组的阳性率44．0％（P〈0．01）和平均抗体水平77．674U／ml（P〈0．01）。②肺癌组Hp-CagA-IgG阳性率88．0％，显著高于对照组的阳性率20．0％（P〈0．01）。③鳞癌Hp-IgG平均水平（322．10U／ml），明显高于腺癌和小细胞癌（163．92U／ml、196．66U／ml）（P〈0．05）。结论肺癌与Hp感染密切相关，鳞癌平均Hp-IgG水平明显高于腺癌和小细胞癌。     

乙型肝炎患者血清抗HBs独特型抗体免疫复合物的检测

用聚乙二醇沉淀，胰蛋白酶处理乙型肝炎（乙肝）患者血清后，再用酶联免疫吸附法检测检样中的含抗ＨＢｓ独特型抗体免疫复合物（抗ＨＢｓ－Ａｂ２－ＩＣ）。结果发现，乙肝患者血清中ＩｇＧ，ＩｇＭ类抗ＨＢｓ－Ａｂ２－ＩＣ检出总阳性率分别为：急性乙型肝炎１４．５％（９／６２），慢性活动性肝炎２１．９％（２８／１２８），慢性迁延性肝炎１２．５％（２／１６）。抗ＨＢｓ－Ａｂ２－ＩＣ阳性者的抗ＨＢｓ独特型抗体检出率８４     

脂多糖-被动血凝试剂诊断伤寒的临床评价——附210例临床检测结果分析

目的：验证伤寒脂多糖－被动血凝（ＬＰＳ－ＰＨＡ）诊断试剂的临床应用价值。方法：对２１０例疑似伤寒、副伤寒病人血清用ＬＰＳ－ＰＨＡ诊断试剂作快速诊断检测，并与血培养和伤寒血清凝集反应（肥达反应）作比较。结果：９１例血培养伤寒或副伤寒杆菌阳性者伤寒ＬＰＳ－ＰＨＡ阳性７７例（８４．６％），肥达反应阳性６６例（７２．５％），血培养阳性者的ＬＰＳ－ＰＨＡ与肥达反应阳性率比较有统计学显著差异（Ｐ＜０．０５），特别是早期病人（病程在７天内）的阳性率（７５．０％）显著高于肥达反应（３３．３％）。结论：ＬＰＳ－ＰＨＡ诊断试剂对诊断伤寒、副伤寒优于肥达反应。     

分离培养和血清学试验诊断肺炎支原体早期感染的应用及评价

目的应用并评价肺炎支原体（MP）快速培养法、被动凝集法检测总抗体和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测免疫球蛋白M（IgM）抗体在MP感染早期诊断中的价值。方法应用MP快速培养法对该院2009年10月至2010年4月260例急性下呼吸道感染住院患者的咽拭子标本进行培养,同时用被动凝集法检测患者血清中MP的总抗体和ELISA检测MP的IgM抗体。结果260例急性下呼吸道感染患者咽拭子MP快速签定培养法培养阳性58例。阳性率22。3％。被动凝集法检测总抗体阳性83例．阳性率31．9％。ELISA检测IgM抗体阳性67例,阳性率25．8％。结论MPIgM抗体检测试剂因其方便,快捷,可作为优先检测试验。     

伤寒、副伤寒抗体间接血凝检测方法建立

[目的]用间接血凝试验取代传统的肥达氏反应。[方法]提取伤寒、副伤寒菌脂多糖抗原，致敏醛化的人“O”型红细胞，分别制备出伤寒、副伤寒O、A、B抗原致敏醛化红血球。将血凝法与肥达氏反应做平行样品对比试验。[结果]证明两法抗体滴度差别有高度显著性。[结论]血凝法更敏感、无漏诊，更利于伤寒的早期诊断。     

伤寒血清学快速诊断胶乳试剂的研制及应用

为寻求更简便，快速的伤寒病血清学诊断方法，以Ｓ．ｔｙｐｈｉ０９０１菌株脂多糖（ＬＰＳ）致敏胶乳，研制出伤寒血清学快速诊断胶乳试剂（ＬＰＳ－Ｌａｔｅｘ）。检测６９份确诊伤寒病患者血清，阳性率为９１．３％高于肥达反应阳性率（７９．７％），分别以肥达反应，间接血凝试验，ＬＰＳ－Ｌａｔｅｘ三种方法检测５６２份疑似伤寒病患者血清，总符合率为９３．４１％，表明ＬＰＳ－Ｌａｔｅｘ法诊断伤寒病简便，快速，有较高敏     

严重急性呼吸道综合征冠状病毒Spike蛋白抗原特异性的临床应用研究

目的 探讨严重急性呼吸道综合征（SARS）患者的SARS冠状病毒（SARS—CoV）抗体产生情况以及SARS-CoVSpike蛋白抗原的特异性。方法 运用酶联免疫法（ELISA）和蛋白质印迹法（WesternBlotting）检测95例SARS患者体内抗体的产生情况和验证病毒Spike蛋白抗原的特异性。结果 95例SARS患者血清抗体结果中，大部分患者出现抗体阳性，抗SARS-CoVIgM总阳性率为91．6％（87／95），抗SARS-CoVIgG总阳性率为97．9％（93／95）；高暴露人群组和正常对照组的抗SARS-CoVIgM和抗SARS-CoVIgG阳性率为0％。经过携带Spike-protein基因的重组病毒Ad-sn感染COS-1细胞后表达的s蛋白抗原，使用SARS患者抗血清能够检测出特异性蛋白条带；重组病毒感染CNE-2细胞后，表达的S蛋白抗原，能够通过不同患者抗血清同时检测到相应的特异性抗原蛋白。结论 SARS患者感染SARS-CoV后，体内可产生相应抗体；利用SARS患者所产生特异性抗血清，可以检测出克隆SARS-CoV的Spike基因所表达的Spike蛋白。     

过敏性皮肤病患者血清过敏原检测分析

目的探讨血清过敏原体外检测在过敏性皮肤疾病病因筛查中的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对311例过敏性皮肤病患者和30名健康对照者血清中吸人性及食人性过敏原进行检测。结果311例患者血清总IgE抗体阳性率92．3％（287／311），而特异性IgE阳性率为81．0％（252／311），明显高于健康对照组6．7％（P〈0．005），其中吸人组特异性IgE阳性率49．5％（154／311），尘螨、粉尘阳性率最高，屋尘次之；食人组特异性IgE阳性率41．5％（129／311），牛奶阳性率最高，虾、鲜贝次之。结论过敏原与过敏性皮肤病关系密切，尘螨、粉尘、牛奶是皮肤病患者主要致敏原，血清过敏原检测可提示确切的过敏原，对临床诊断、治疗和预防具有指导意义。     

373例普通住院患者梅毒酶免疫法筛查阳性结果分析

目的探讨普通住院患者梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）筛查阳性病例在不同年龄组和临床科室的分布情况,分析ELISA法梅毒抗体检测的应用价值。方法用ELISA法对普通住院患者进行梅毒抗体初筛,阳性者进一步做梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）和梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）。结果28970例临床标本ELISA法筛查阳性373例（1．29％）,与TPPA符合率为97．86％;其中328例TRUST滴度小于或等于1：2,占ELISA法的87．94％。20岁以下患者ELISA法阳性率为0．47％（6／1282）,20～50岁以下和50～70岁以下年龄组阳性率分别为1．19％（206／17372）和1．01％（93／9240）,而70岁以上老年人阳性检出率高达6．32％（68／1076）。几乎全部临床科室均有梅毒筛查阳性病例,其中妇产科、肿瘤科、血液科、眼科和泌尿外科的阳性率分别为2．75％、2．51％、1．71％、2．05％和1．57％,显著高于普通住院患者平均阳性水平。结论ELISA法是较好的梅毒筛查试验。大部分筛查阳性病例并非梅毒现症感染患者,主要分布在妇产、肿瘤、泌尿等临床科室,并且妇科肿瘤和其他恶性肿瘤及老年性疾病患者可能为生物学假阳性。     

梅毒血清学实验的方法评价

目的探讨RPR、Trust、免疫印迹法（WB法）、血凝TPPA法、ELLSA法的敏感性。方法RPR、Trust、WB法、血凝TPPA法、ELLSA法。结果非特异性抗体检测：（1）RPR试验结果,进口RPR试剂检测86份梅毒血清,阳性80份,阴性6份。阳性率94．2％。国产RPR检测86份梅毒血清,阳性78份,阳性率为90．1％。114份对照血清中进口RPR10份阳性,国产试剂2份阳性。结果经Χ^2检验,差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）Trust试验结果：试剂（1）、（2）检测86份梅毒血清,均为80份阳性,6份阴性,阳性率为94．2％。对照组中,两种试剂均有2份阳性结果,经Χ^2检验,差异无统计学意义（P〉0．05）。特异性抗体检测：3种特异性抗体检测结果,TPPA法测定86份梅毒血清,72份阳性,14份阴性,阳性率为83．7％。ELISA法测定86份梅毒血清,75份阳性,11份阴性,阳性率为87．2％。WB法测定86份梅毒血清,86例均为阳性反应,阳性率为100％。3种特异性抗体检测法检测114份对照血清无一份阳性。结论比较3种方法检测抗体发现,WB法最先检测到血清中的47000蛋白抗体,47000蛋白抗体可作为梅毒的早期诊断指标,45000、15500、17000蛋白抗体和心磷脂抗体在治疗后变化明显,可考虑作为疗效观察的指标。WB法具有高度敏感性和特异性,对梅毒的确诊,尤其对早期梅毒的诊断具有特殊的价值。     

梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达及在梅毒血清学诊断中的初步应用

目的克隆、表达梅毒螺旋体（Tp）外膜蛋白Tp0453，建立间接ELISA法，探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法构建重组质粒pQE32／Tp0453，IPTG诱导表达，SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达结果；Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白，间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人血清中特异性IgG抗体。结果成功构建了重组质粒pQE32／Tp0453；SDS-PAGE检测诱导产物显示有一分子量约为32000的特异蛋白带，免疫印迹检测其只与Tp IgG抗体具有阳性反应；重组蛋白用作ELISA包被抗原检测Tp阴阳性参比血清，特异度和灵敏度均为100％；检测患者血清中特异性IgG抗体结果与TPPA法符合率为98．2％。结论表达的Tp043重组蛋白具有较好的免疫反应活性，可望用于梅毒的血清学诊断。     

肥达试验在甲型副伤寒诊断中的价值

甲型副伤寒是由沙门菌属A群（S．paratyphiA）引起的急性传染病，其症状和体征缺乏特异性，细菌培养阳性率不高，且所需时间较长，早期诊断困难。由于感染者可产生相应的O和H（A）抗体，因此常用肥达试验对患者血清抗体进行检测，辅助诊断。但是肥达试验对于甲型副伤寒的诊断价值存有争议，且无一致的诊断标准，所以评价肥达试验在甲型副伤寒中的诊断价值具有非常重要的意义。     

双抗体夹心ELISA测定人广泛型线粒体肌酸激酶方法的建立

目的建立测定人血清广泛型线粒体肌酸激酶（uMtCK）浓度的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法应用原核表达的uMtCK重组蛋白免疫小鼠获得7株单克隆抗体,采用棋盘格滴定法筛选出最佳双抗体组合,其中抗体19F11进行辣根过氧化物酶（HRP）标记作为检测抗体,抗体3C1作为俘获抗体,建立检测人uMtCK双抗体夹心ELISA方法,并进行方法学评价。同时采用该法检测50名健康体检者和85例肿瘤标志物[甲胎蛋白（AFP）或癌胚抗原（CEA）]阳性患者的血清。结果通过筛查获得配对抗体,建立检测人uMtCK的双抗体夹心ELISA方法。该法的检测限为28．8ng／mL,批内变异系数（CV）为4．5％～7．7％,批间CV为8．2％～13．5％,平均回收率为97．1％。用该法检测50名健康体检者血清uMtCK浓度,结果均为阴性;85例肿瘤标志物阳性患者中有15例检出uMtCK,浓度为52．8～1442．2ng／mL。结论建立的双抗体夹心ELISA可以用于测定人血清uMtCK浓度。