心律宁片剂中氧化苦参碱的萃取及其含量测定的研究

采用超临界CO2流体法提取苦参中的氧化苦参碱,以0.1mL/L氨水作碱化剂,在45℃、压力42MPa的条件下萃取2h,并用高效液相色谱法对萃取液中的氧化苦参碱进行定量分析,结果表明该方法可靠,精密度高,同时也为其他生物碱利用超临界CO2流体萃取法的萃取及定量建立了一种快速、简便、有效的方法。     

苦参碱对肾小管间质MMP-3和TIMP-1的影响

目的:观察苦参碱对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾小管间质MMP-3和TIMP-1表达水平的影响,初步探讨其对小管间质纤维化的作用机制.方法:实验分为正常组(A组)、假UUO组(B组)、UUO组(C组)、苦参碱低剂量治疗组(D组)、苦参碱高剂量治疗组(E组)和福辛普利对照组(F组).运用免疫组化技术观察第7 d、14 d各组大鼠的MMP-3和TIMP-1表达水平,采用Pearson分析方法分析二者在C组中的相关性.结果:在C组和各药物组中,MMP-3表达水平在第7 d、14 d均显著低于A组和B组(P<0.05),但各药物组的表达水平明显高于C组(P<0.05);TIMP-1在A组和B组的表达最低,各药物组的表达水平显著低于C组(P<0.05);MMP-3 和TIMP-1在E组与F组间均无统计学差异(P>0.05);MMP-3与TIMP-1在C组的免疫组化半定量分析呈显著负相关(P<0.01).结论:苦参碱可部分恢复肾小管间质MMP-3的表达,降低TIMP-1的表达,延缓肾小管间质纤维化的进程.     

苦参碱抗肝纤维化的临床研究

苦参碱是天然药物苦参根提取物中的一种纯成分.本文研究了苦参碱在治疗慢性病毒性肝炎中对肝纤维化指标(HA,LN,PCⅢ,Ⅳ-C)合成的影响,对临床疗效进行了观察,并对苦参碱抗肝纤维化的机制进行了探讨. 　　……     

苦参碱对前列腺癌细胞增殖及雄激素受体功能的抑制作用

目的:探讨苦参碱(matrine)对雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)的增殖及雄激素受体(androgen re-ceptor,AR)表达的抑制作用。方法:分别用0.5、1.0、1.5、2.0、3.0g/L浓度的苦参碱作用于LNCaP细胞12、24、36h后MTT法检测细胞生长活性;台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线;24h后流式细胞仪测定细胞周期变化;24h后Western印迹法检测细胞内AR的表达。结果:苦参碱能抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度苦参碱组之间与不同作用时间组之间的差异均有显著性意义(P<0.01)。苦参碱诱导LNCaP细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P<0.01);细胞内AR的表达随苦参碱剂量依赖性减少(P<0.01)。结论:苦参碱通过下调细胞内AR表达和阻滞细胞周期进展来抑制LNCaP细胞的体外生长。     

苦参碱对肠癌HT-29细胞株增殖的抑制作用及其机制

目的观察苦参碱对肠癌HT-29细胞株增殖、凋亡的影响，探讨苦参抗肿瘤的作用机制。方法采用细胞培养、噻唑盐比色法（MTT）、流式细胞分析（FCM）、端粒酶重复片段扩增（TRAP）方法，分析测定苦参碱对肠癌HT-29细胞株增殖、凋亡及端粒酶活性的影响。结果用0、3、6、8、10μg/L苦参碱培养HT-29细胞24h后，其增殖抑制率分别为：0、33．7％、59．0％、66．7％、69．0％。中效浓度（5μg／L）苦参碱培养HT-29细胞0、24、48、72h后：细胞凋亡百分比分别是0．85％、15．31％、17．99％、26．58％；端粒酶活性随苦参碱处理时间延长而明显降低。结论苦参碱通过抑制DNA合成、诱导细胞凋亡、抑制端粒酶活性等多方面、多途径抑制肠癌HT-29细胞株增殖，达到抗肿瘤的作用。     

苦参碱联合T淋巴细胞对人胃癌细胞的杀伤作用

苦参碱是从中药苦参的干燥根中提取的一类活性物质,它在防治肝炎、抗肝纤维化、抗病毒、抗肿瘤等方面有重要应用价值[1-2].研究结果表明,它的毒副作用小,能提高机体免疫力[3-4].本研究利用植物血凝素(PHA)-L、单克隆抗淋巴细胞抗体(OKT)-3、白细胞介素(IL)-2诱导活化T淋巴细胞,探讨苦参碱对人外周血T细胞增殖的影响及其联合T细胞对体外胃癌细胞的杀伤的影响.     

氧化苦参碱辅助治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目的观察肝炎灵注射液联合氧化苦参碱对慢性乙型肝炎的治疗效果.方法将250例慢性乙型肝炎患者随机分为观察组(146例)和对照组(104例).对照组应用肝炎灵注射液70 mg肌内注射,1次/d,疗程为2个月;同时服用肌苷、维生素C 6个月.观察组在此基础上辅以氧化苦参碱口服,200 mg/次,3次/d,疗程为6个月.结果观察组血清谷丙转氨酶复常率及HBeAg、HBV-DNA转阴率均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01).结论氧化苦参碱能有效抑制乙肝病毒复制,是辅助治疗慢性乙型肝炎安全有效的药物,同时做好相应护理也十分重要.     

氧化苦参碱抑制人肝癌细胞EGF和EGFR表达的研究

目的:探讨氧化苦参碱对人肝癌细胞EGF及EGFR表达的影响。方法:将肝癌细胞株BEL-7402在37℃、5%CO2条件下培养、传代。按氧化苦参碱浓度分为1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml3组,对照组不加氧化苦参碱,每组设6个平行孔,每孔加入细胞1×105/ml,培养24h、48h和72h,分别进行EGF及EGFR的免疫组化染色。结果:不同浓度的氧化苦参碱均抑制EGF和EGFR在人肝癌细胞的表达,随着培养时间的延长,EGF和EGFR表达阳性率下降显著,在1000μg/ml组24h、48h和72h的EGF和EGFR阳性率均较500μg/ml组和250μg/ml组同时段的阳性率下降显著(P〈0.05,P〈0.01)。500μg/ml组和250μg/ml组同时段的阳性率无明显差异。结论:氧化苦参碱对EGF和EGFR的抑制途径可能是其抗肝癌机制之一。     

苦参碱抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3细胞增殖和诱导凋亡机制的研究

目的 探讨苦参碱抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖、诱导细胞凋亡的可能机制,为临床雄激素非依赖性前列腺癌的治疗提供一定的实验基础和理论依据.方法 应用活性Caspase-3检测、Western blot印迹分析不同浓度苦参碱作用PC-3细胞后其Caspase-3表达的差异,并通过荧光免疫细胞化学染色、Western blot印迹分析研究不同浓度苦参碱对PC-3细胞Bax/Bcl-2表达的影响.结果 Caspase-3检测显示不同浓度苦参碱均可上调Caspase-3表达.随着苦参碱浓度的增加,Caspase-3表达的荧光强度升高,Caspase-3/β-actin积分密度值亦升高,呈现剂量依赖性关系(P<0.01).Bax、Bcl-2蛋白表达分析显示不同浓度苦参碱作用PC-3细胞后,Bax蛋白的表达增加,Bcl-2蛋白表达下降.Bax表达的荧光强度及Bax/β-actin积分密度值随着苦参碱浓度的增加而升高,呈现剂量依赖性关系(P<0.01);Bcl-2表达的荧光强度及Bcl-2/β-actin积分密度值随着苦参碱浓度的增加而下降,亦呈现剂量依赖性关系(P<0.01).结论 苦参碱抑制PC-3细胞增殖并诱导细胞凋亡可能涉及到了线粒体.细胞色素C/Caspase-9/Caspase-3途径.     

氧化苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

目的 研究氧化苦参碱对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法 将不同浓度的氧化苦参碱作用于人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别培养24、48、72h后采用MTT法检测 HFFB增殖活性,Western blot检测Ⅰ、Ⅲ型胶原合成情况,RT-PCR 检测胶原mRNA的表达.结果 在0～1mg/ml浓度范围内,氧化苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖没有明显影响(P ＞0.05);Western blot结果 显示Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成受到明显抑制,并且这种抑制作用具有明显的时间浓度依赖性(P ＜0.01);RT-PCR结果 显示Col α1(Ⅰ)、Col α1(Ⅲ) mRNA的表达也受到明显抑制.结论 氧化苦参碱可以抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的合成.     

高糖对大鼠腹膜间皮细胞分泌FOXP3mRNA的影响及苦参碱的干预作用

目的:研究高糖刺激下大鼠腹膜间皮细胞分泌叉头状螺旋转录因子(FOXP3mRNA)及苦参碱的干预作用,探讨腹膜纤维化发生机制。方法:通过体外培养大鼠腹膜间皮细胞(PMCs),依据加入药物浓度分成5组:2.5%葡萄糖组(n=10,A);2.5%葡萄糖+苦参碱组(n=10,B);4.25%葡萄糖组(n=10,C);4.25%葡萄糖+苦参碱组(n=10,D);空白对照组(仅加不含血清的DMEM/F12培养基),分别于第24 h、48 h、72 h收集培养上清液,采用RT-PCR检测FOXP3mRNA的表达,同时观察各组大鼠腹膜间皮细胞光镜下的表现。结果:光镜下,可见对照组和B组腹膜间皮细胞小,呈圆形、梭形或不规则形,生长密集。A、C、D组腹膜间皮细胞大、呈梭形、分布较稀疏;在含2.5%高糖A组,FOXP3mRNA的表达相对水平较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);而在4.25%高糖C组,FOXP3mRNA的表达较对照组增加明显,差异有统计学意义(P<0.01)。在含苦参碱溶液的B组和D组中,PMCs表达FOXP3mRNA的相对水平B组较A组减少,但差异无统计学意义(P>0.05);D组较C组下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱能拮抗高糖致大鼠腹膜间皮细胞分泌FOXP3mRNA,从而保护腹膜间皮细胞。     

苦参碱调控Snail2表达水平抑制转化生长因子β1诱导的人腹膜间皮细胞上皮间充质转分化

目的 研究苦参碱对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导腹膜间皮细胞上皮间充质转分化(EMT)后转录因子Snail2的影响.方法 采用TGF-β1刺激人腹膜间皮细胞并同时予不同浓度苦参碱干预处理,实验分为空白对照组、TGF-β1(5 ng/ml)诱导组、TGF-β1+0.4 mg/ml苦参碱干预组、TGF-β1+0.6 mg/ml苦参碱干预组、TGF-β1+0.8 mg/ml苦参碱干预组和TGF-β1+1.0 mg/ml苦参碱干预组.实时荧光定量PCR和Western印迹检测Snail2、上皮标志分子E钙黏蛋白(E-cadherin)和间质标志分子α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、胶原Ⅲ(ColⅢ)的表达,Western印迹检测Smad2、Smad3和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的蛋白磷酸化水平.结果 TGF-β1(5 ng/ml)刺激能上调人腹膜间皮细胞Snail2、α-SMA、FN和ColⅢmRNA和蛋白的表达水平,上调Smad2、Smad3和ERK1/2的蛋白磷酸化水平,下调E-cadherinmRNA和蛋白的表达水平;苦参碱(0.4、0.6、0.8、1.0 mg/ml)干预处理后能下调Snail2和α-SMA、FN和ColⅢmRNA和蛋白的表达水平以及ERK1/2的蛋白磷酸化水平,上调E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平.结论 TGF-β1能诱导人腹膜间皮细胞EMT,苦参碱可能通过ERK1/2信号通路下调Snail2的表达水平来抑制TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞EMT.     

苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞的影响

目的 研究苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞系WBF-344细胞的增殖及AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.方法 用MTT法检测苦参碱含药血清对WBF-344细胞增殖的影响,免疫细胞化学及RT-PCR方法检测苦参碱含药血清对WBF-344细胞AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.结果 5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清作用于WBF-344细胞24 h、48 h、72 h均有不同程度的抑制增殖作用,且存在时间、剂量依赖性.正常培养WB-F344细胞有少量AFP、Notch1蛋白和mRNA表达,肝癌前病变模型组血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达上调,苦参碱含药血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达较模型组血清AFP、Notch1蛋白和mRNA表达下调. 结论肝癌前病变模型组血清可能具有诱导WBF-344细胞向肝癌细胞方向分化的作用,苦参碱含药血清可逆转此作用,以上作用与调节Notch1表达关系密切.     

苦参碱对雄激素依赖性前列腺癌细胞的影响

目的：探讨苦参碱（Matrine）对雄激素依赖性前列腺癌细胞株（LNCaP）凋亡及前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）表达的影响。方法：分别用0.5g／L、1.0g／L、1.5g／L、2.0g／L浓度的苦参碱作用于LNCaP细胞12h、24h、36h后MTT法检测细胞生长活性;24h后流式细胞仪测定细胞凋亡的变化;24h后Western印迹法检测细胞内Bel-2和Bax的表达;12h、24h、36h后化学发光法检测LNCaP细胞培养液中PSA的变化。结果：苦参碱能抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度苦参碱组之间与不同作用时间组之间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。苦参碱诱导LNCaP细胞凋亡,各浓度组凋亡细胞比例均显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;LNCaP细胞内Bcl-2含量呈浓度依赖性下降,Bax含量呈浓度依赖性升高（P〈0.01）;LNCaP细胞培养液中PSA的表达显著下降（P均〈0.05）。结论：苦参碱能显著抑制LNCaP细胞的体外生长,诱导其凋亡,并抑制PSA的表达。     

含有机硫配体的三元钨杂多化合物的制备及表征

研究了缺位取代的三元钨杂多化合物配位水被有机硫配体取代的杂多化合物的制备 .用二步合成法首次制备了 2种晶体 .[(C4H9) 4 N] 4H2 SiW11O39CuS(CH3) 2 和 [(C4H9) 4 N] 4H2 SiW11O39ZnS(CH3) 2 .通过电子光谱、拉曼和红外光谱、核磁共振谱、热分析等对其进行了表征 .     

苦参碱对喉鳞癌细胞株Hep-2侵袭转移的影响

目的:研究不同浓度苦参碱对喉鳞癌细胞株Hep-2侵袭和转移的影响及其作用机制。方法:Hep-2细胞体外培养,经0g/L、0.1g/L、0.2g/L和0.3g/L苦参碱分别处理1h、8h及48h,细胞黏附实验检测细胞黏附力,细胞迁移实验检测细胞运动力,细胞侵袭实验检测细胞侵袭力,RT-PCR法检测Hep-2细胞MMP-2和MMP-9mRNA的表达。结果:不同浓度苦参碱与对照组比较,苦参碱能有效抑制Hep-2细胞的黏附力、运动力和侵袭力(P<0.01),且能下调Hep-2细胞MMP-2和MMP-9mRNA的表达(P<0.01)。结论:苦参碱能抑制Hep-2细胞的浸润转移能力,其机制可能与下调MMP-2和MMP-9mRNA的表达使Hep-2细胞的黏附力、运动力和侵袭力下降有关。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响

目的研究苦参碱对人瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响.方法将苦参碱作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,分别测定其分泌胶原、Ⅲ型前胶原、细胞内胶原含量.结果苦参碱可减少瘢痕成纤维细胞分泌胶原、细胞内胶原和Ⅲ型前胶原的含量.结论苦参碱在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原的合成.     

苦参碱对大鼠精子膜脂流动性的实验研究

目的 研究苦参碱(Matrine,Mat)对大鼠精子膜脂流动性的影响.方法 给成年SD雄性大鼠灌服抗生育剂量的Mat (20mg/kg·d-1),6周后,取大鼠附睾精子应用荧光偏振法测定其膜脂流动性,生化法测定精子丙二醛(malondialdehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量的变化.结果 给药6周后,实验组与对照组比,精子的膜脂流动性降低(P＜0.05),MDA含量增加(P＜0.01),SOD含量减少(P＜0.01).结论 Mat使大鼠精子膜脂流动性降低;精子的氧化应激和有效的抗氧化能力之间的失衡是Mat所致雄性大鼠不育的可能机制.     

氧化苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究氧化苦参碱(OMT)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKFB)的影响及其机制.方法 将不同浓度的OMT作用于HKFB,分别培养24、48、72h后采用四唑盐比色法(MTT)检测HKFB增殖活性,末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 当氧OMT浓度大于1.0mg/ml时,体外培养HKFB增殖受到抑制、出现凋亡;当OMT浓度小于1.0mg/ml时,其对HKFB的增殖及凋亡无明显影响.结论 一定浓度的OMT可以抑制HKFB增殖并促进其凋亡,提示OMT具有潜在的治疗瘢痕疙瘩作用.     

苦参碱诱导人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的凋亡研究

目的 研究苦参碱对人乳腺癌MCF—7／ADR细胞的生长抑制作用及诱导凋亡机制。方法 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的半数抑制浓度(IC50)，用荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果 0．3—2．5g／L浓度苦参碱对MCF—7／ADR细胞有明显的抑制作用，并诱导发生凋亡，实验范围内细胞凋亡的比率与药物浓度呈一定相关。结论 苦参碱能抑制人乳腺癌MCF—7／ADR细胞的生长，其机制与阻止细胞周期的进程，启动细胞自身调控程序，诱导凋亡有关。