TWEAK及其受体Fn14在大鼠骨关节炎(OA)关节软骨和滑膜中的表达

目的 检测肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导因子14 (fibroblast growth factor inducible 14,Fn14) mRNA及蛋白在大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨和滑膜中的表达情况,初步了解TWEAK及其受体Fn14在OA发病中的作用.方法 42只大鼠中随机选取18只行膝关节前交叉韧带切断(anterior cruciate ligament transection,ACLT)制作OA模型作为实验组,另外18只接受手术但不切断前交叉韧带作为假手术组,剩余6只作为正常对照组.饲养至1、2、4周时,实验组及假手术组随机各取6只处死,6只正常对照组在第4周处死,采集所有动物关节软骨及滑膜组织,用实时定量PCR及Western blot分别检测TWEAK和Fn14在mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 术后第2和第4周实验组动物关节滑膜中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表达水平显著上调,与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第2周实验组动物关节软骨中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表水平与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TWEAK及其受体Fn14的mRNA及蛋白表达水平在大鼠OA关节软骨及滑膜组织中的表达显著增高,它们可能是参与OA的重要细胞诱导因子.     

TWEAK/Fn14蛋白在胰腺癌组织中的表达

目的 通过检测并比较肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂（TWEAK）和人成纤维细胞生长因子诱导型14（Fn14）在正常胰腺组织、慢性胰腺炎及胰腺癌组织中的表达,分析探讨TWEAK/Fn14通路在胰腺癌发展过程中的作用。方法 收集在四川大学华西医院胰腺外科行手术治疗、切除的胰腺组织标本,并经病理检察证实,胰腺癌标本50例,慢性胰腺炎标本40例,正常胰腺组织标本30例。采用免疫组化检测胰腺组织中TWEAK和Fn14的表达,并分析TWEAK表达与胰腺癌临床病理特征的关系。结果 TWEAK阳性表达率在胰腺癌为36.0%（18/50）,高于慢性胰腺炎17.5%（7/40）及正常胰腺组织13.3%（4/30）,组间差异有统计学意义（ P<0.05）,表达强度亦为胰腺癌组织＞慢性胰腺炎＞正常胰腺组织（ P<0.05）。Fn14在胰腺癌组织（4.0%）和正常胰腺组织（7.0%）阳性表达率低,胰腺炎组织中未发现阳性表达。TWEAK阳性表达率和高表达率在Ⅱ期患者中随着肿瘤疾病分级增加而增加（ P<0.05）。而各病理分级中,TWEAK阳性表达率、高表达率和EI评分的差异均无统计学意义。结论 TWEAK/Fn14参与了胰腺癌的发生发展过程。TWEAK在胰腺癌中高表达,Fn14呈低表达。     

糖蛋白YKL-40在骨关节炎中的表达

目的探讨YKL-40在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法用免疫组化SP法、原位末端标记技术(TUNEL)等检测YKL-40在22例骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中YKL-40的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.05);实验组软骨细胞凋亡程度与YKL-40的表达呈正相关(P<0.05)。结论YKL-40骨关节炎发生发展有密切关系。     

NLRP3炎症体分子与AECOPD患者的相关性研究

[目的]探讨NLRP3炎性体信号通路相关分子在慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者中的表达水平及其临床意义。[方法]选取河南大学淮河医院AECOPD患者48例作为实验组,对照组为我院体检中心的同期健康体检人员46例,用PCR法检测NLRP3炎性小体在实验组及对照组外周血单个核细胞(PBMC)的mRNA表达水平,比较NLRP3基因在两组中的表达差异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测下游炎症因子IL-1β和IL-18在两组中的表达水平。用肺功能仪测定两组研究对象的肺功能情况。[结果]AECOPD患者PBMC中的NLRP3 mRNA表达水平明显高于健康对照组水平,且二者差异具有统计学意义(P<0.05)。AECOPD患者血清IL-1β、IL-18和NLRP3水平明显高于健康对照组血清蛋白水平,且二者差异具有统计学意义(P<0.05)。AECOPD患者血清IL-1β、IL-18和NLRP3含量与肺功能指标FEV1/FVC、FEV1%呈负相关(P<0.05)。[结论]AECOPD患者NLRP3炎性小体水平升高,且与肺功能负相关,可能是评价患者病情轻重的重要指标。     

ASC与Caspase-1在PBC患者外周血中的表达研究

目的 探讨ASC与Caspase-1在原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病过程中的影响.方法 采用实时荧光定量PCR、Western blot、焦磷酸测序及ELISA等方法分别检测30例 PBC患者及健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)中Caspase-1与ASC的mRNA和蛋白的相对表达情况,以及ASC启动子区甲基化状况和血浆中Caspase-1和IL-18的表达水平.结果 PBC组患者PBMC中Caspase-1、ASC mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P<0.05).ASC启动子区域Island 1(IS1)各位点甲基化率明显低于对照组(P<0.05),Island 2(IS2)各位点甲基化率小于背景值,未发生甲基化.PBC组血浆中Caspase-1与IL-18的水平明显高于对照组(P<0.05).ASC mRNA与Caspase-1 mRNA的表达呈明显正相关(P<0.05);ASC启动子区域IS1的第1、2、4和5位点的甲基化率与ASC mRNA的表达均呈负相关(P<0.05),第3、6位点甲基化率则与其表达无相关性(P>0.05);血浆中Caspase-1与IL-18水平呈明显正相关(P<0.05).结论 ASC和Caspase-1参与了PBC的免疫炎性反应.     

TWEAK/Fn14在预测克罗恩病肠壁纤维化中的作用

目的 测定肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子（TWEAK）/成纤维细胞生长诱导因子14（Fn14）在克罗恩病（CD）患者血清及结肠组织中的表达,初步探讨TWEAK/Fn14是否可作为预测CD肠壁纤维化的指标之一。方法 收集67例CD患者和33例健康对照者的外周血标本,采用ELISA法检测血清TWEAK水平。同时收集29例接受手术治疗的CD患者结肠手术标本和15例接受手术治疗的结肠癌患者手术标本中正常结肠组织,采用免疫组化法测定结肠组织中TWEAK、Fn14的表达水平。采用免疫荧光法计数结肠组织中Fn14、α平滑肌肌动蛋白（αSMA）双阳性细胞数。 结果 CD患者血清TWEAK的表达水平较对照组升高（ P0.01）,其中合并肠狭窄或肠梗阻的患者升高尤为明显（ P0.05）。血清TWEAK水平与结肠手术史（ r=0.295, P=0.015）、肠狭窄（ r=0.290, P=0.017）及肠梗阻（ r=0.453, P=0.000 1）相关。ROC分析提示TWEAK用于预测CD并发肠壁狭窄的曲线下面积为0.67（95%CI:0.54~0.80, P=0.020）。 免疫组化结果显示合并肠梗阻的CD患者结肠组织中TWEAK和Fn14的表达水平高于无肠梗阻的CD患者和对照组（ P0.05）。免疫荧光结果显示Fn14和αSMA双阳性的细胞数量在伴有肠梗阻的CD患者结肠黏膜中明显增加（ P0.05）。结论 TWEAK/Fn14通路可能在CD肠壁纤维化中扮演着重要角色。     

α2M在骨关节炎动物模型中的表达及意义

目的探讨α2M在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法成年新西兰大白兔24只,根据文献采用石膏固定方法制作骨关节炎动物模型,用免疫组化、原位末端标记技术(TUNEL)等方法检测α2M在兔膝关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中α2M的表达实验组阳性率均高于对照组(P<0.05);实验组软骨细胞凋亡程度与α2M的表达呈负相关(P<0.05)。结论α2M与骨关节炎发生发展有密切关系。     

TWEAK/Fn14在人结肠癌细胞SW480中的表达及对移植瘤血管发生的影响

目的 观察肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)与其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)在结肠癌细胞SW480中的表达及其对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 结肠癌细胞系SW480脂质体法稳定转染TWEAK反义寡核苷酸(ASODN)、错义寡核苷酸(SCODN)分别培养;采用四唑盐比色试验(MTT)法检测肿瘤细胞增殖情况,RT-PCR法检测TWEAK及Fn14 mRNA的表达情况,细胞免疫荧光法检测细胞中的TWEAK及Fn14蛋白的表达;分别将空白对照组、LF对照组、ASODN组、SCODN组肿瘤细胞注射裸鼠皮下,观测各组裸鼠移植瘤体积、相对肿瘤增殖率,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡指数;免疫印迹法检测肿瘤组织血管生长因子(VEGF)C、D的表达.结果 空白对照组、LF对照组、SCODN组之间结肠癌肿瘤细胞的增殖情况及裸鼠移植瘤体积、肿瘤相对增殖率及肿瘤凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05);与上述3组相比,ASODN组肿瘤细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),TWEAK与其受体Fn14 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),裸鼠移植瘤体积、相对肿瘤增殖率明显降低(P<0.05),肿瘤凋亡指数无明显变化(P>0.05),而VEGF-C、D蛋白表达量显著降低.结论 抑制TWEAK表达可能通过抑制VEGF的表达抑制结肠癌细胞及移植瘤增殖.     

uPA/uPAR在骨关节中的表达及与软骨细胞凋亡的关系

目的探讨uPA/uPAR在骨关节炎软骨中的表达及与软骨细胞凋亡的关系。方法成年新西兰大白兔24只,根据文献采用石膏固定方法制作骨关节炎动物模型,用免疫组化、原位末端标记技术(TUNEL)等方法检测uPA/uPAR在兔膝关节软骨中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨中uPA/uPAR的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.05);实验组软骨细胞凋亡程度与uPA/uPAR的表达均呈正相关(P<0.05)。结论uPA/uPAR与骨关节炎发生发展有密切关系。     

不同透析膜对终末期肾病患者IL-18水平的影响

目的 探讨终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)患者血浆白细胞介素18(IL-18)水平以及不同透析膜对其的影响,并判断其能否作为评价透析膜生物相容性的指标.方法 30例ESRD患者分为未透析组和维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)组,MHD组随机分为纤维素生物膜组(650)和聚砜膜组(F6)各10例,同时健康者10例为对照组.应用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组血浆中IL-18水平,以及外周血单个核细胞(peripherial blood mononuclear cells,PBMC)经及未经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预的培养上清中IL-18的水平,同时以半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测PBMC中IL-18 mRNA的表达.结果 ESRD未透析组及MHD组透析前、后血浆IL-18水平较正常对照组明显升高(P＜0.05),MHD组透析前、后血浆IL-18水平无明显变化(P＞0.05).ESRD未透析患者的PBMC经LPS刺激后IL-18培养上清水平无明显变化(P＞0.05),mRNA表达量则显著降低(P＜0.05);650组透析后PBMC经LPS刺激后IL-18培养上清水平及mRNA表达量均降低(P＜0.05),F6组透析后PBMC经LPS刺激后IL-18培养上清水平及mRNA表达量均明显升高(P＜0.05).结论 (1)ESRD患者体内处于微炎症状态;(2)从血浆IL-18水平变化看,血液透析不能改善ESRD患者体内炎症状态;(3)聚砜膜较纤维素生物膜能改善患者的单核细胞对抗原的反应能力;(4)IL-18可作为评价透析膜生物相容性的指标之一.     

骨关节炎患者关节软骨及滑膜中MMP-9、IL-6的表达

目的探讨骨关节炎中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、白介素6(IL-6)mRNA和蛋白的表达。方法采用免疫组织化学技术检测60例骨关节炎病例(OA组)及20例正常对照关节软骨及滑膜MMP-9、IL-6蛋白的表达水平;采用原位分子杂交技术检测30例OA及10例正常对照关节软骨及滑膜MMP-9、IL-6 mRNA的表达水平。结果 MMP-9 mRNA和蛋白在OA组阳性表达的积分光密度(IOD)值均高于正常对照组[(8.38±2.29)vs(3.52±1.36),P<0.01;(9.18±3.58)vs(3.83±1.48),P<0.01],OA中二者的表达正相关性(r=0.924,P<0.01);IL-6 mRNA和蛋白在OA组阳性表达的IOD值均高于正常对照组[(8.74±3.62)vs(5.91±1.53),P<0.01;(8.96±3.57)vs(6.87±1.43),P<0.01],OA中二者的表达亦正相关(r=0.917,P<0.01);MMP-9 mRNA、IL-6 mRNA及相应蛋白在OA中的表达均正相关(原位杂交r=0.426,P<0.05;免疫组化r=0.444,P<0.01)。结论 MMP-9、IL-6在OA关节软骨与滑膜中呈高表达,二者对OA的发生发展可能起促进作用。     

大鼠角膜缘移植后角膜缘上皮中RANTES和MCP-1表达的意义

目的:研究RANTES和MCP-1在大鼠角膜缘移植模型中的动态表达,探讨其与移植排斥反应发生的关系. 方法:将大鼠随机分为同种异体移植组(AG组)、自体移植组(SG组),并以健康大鼠作为正常对照组(N组),用定量竞争性RT-PCR的方法,在术后(POD)1, 4, 7, 11, 14, 21和30 d分别检测各组大鼠RANTES和MCP-1 mRNA的含量,并观察大鼠眼表变化,判断排斥反应的发生. 结果:术后5 d开始AG组出现排斥反应,8~10 d达到高峰. RANTES和MCP-1 mRNA含量术后均大幅增加(P<0.05),RANTES于POD7达峰,MCP-1于POD11达峰,随后均持续下降. POD1, 4 AG组与SG组RANTES与MCP-1 mRNA含量无差异,POD7～30均有明显差异. 结论:动态检测RANTES和MCP-1 mRNA含量,可能有助于临床上对角膜缘移植排斥的诊断和对预后的估计.     

下肢静脉性溃疡RANTES的表达

目的 探讨RANTES在下肢静脉性溃疡的表达及意义.方法 采用半定量RT-PCR方法检测下肢静脉溃疡患者、单纯下肢静脉功能不全患者和健康人下肢外周血RANTES mRNA的表达.结果 溃疡组血液RANTES mRNA的表达与无溃疡组和对照组相比有显著性差异(P<0.01);无溃疡组和对照组相比有显著性差异(P<0.01).结论 RANTESmRNA高表达可能是下肢静脉性溃疡发病机制之一.     

辛伐他汀对肾移植后高脂血症患者RANTES及其受体CCR5 mRNA表达的影响

目的: 探讨肾移植术后高脂血症患者外周血RANTES (regulated on activation normal T-cell expressed and secreted)及其受体CCR5(chemokine receptor 5) mRNA表达及治疗. 方法: 根据患者肾移植术后6～8 mo的血脂水平分血脂正常组(n=30)和血脂增高组(n=30),血脂增高组又根据辛伐他汀治疗时间分1.5 mo治疗组(n=30)和3 mo治疗组(n=30),并设正常对照组(n=30),利用RT-PCR检测各组患者外周血RANTES和CCR5 mRNA表达水平. 结果: 各组肾功能正常,胆固醇酯,三酰甘油,低密度脂蛋白水平均按对照组,血脂正常组,血脂增高组顺序递增(P<0.05),3 mo治疗组较1.5 mo治疗组有显著降低(P<0.05);RANTES及其受体CCR5 mRNA表达水平按对照组,血脂正常组,血脂增高组顺序递增,1.5 mo治疗组和3 mo治疗组均较血脂增高组有显著降低(P<0.05),而3 mo治疗组又明显低于1.5 mo治疗组(P<0.05). 结论: RANTES及其受体CCR5 mRNA表达可能在移植肾慢性损伤早期起作用;高脂血症能加重已增高表达,辛伐他汀治疗可降低表达.     

黄芪总黄酮对佐剂性关节炎模型大鼠IL-4、IFN-γmRNA表达影响的研究

目的:研究黄芪总黄酮对佐剂性关节炎模型大鼠IL-4、IFN-γmRNA表达的影响,探讨黄芪总黄酮治疗类风湿性关节炎的免疫学机制。方法:将实验用Waster大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,分别给生理盐水和黄芪总黄酮灌胃,采用RT-PCR的方法检测各组大鼠外周血淋巴细胞分泌IL-4、IFN-γmRNA表达的水平;结果:模型组大鼠外周血单个核细胞表达IFN-γmRNA的表达显著高于正常组(P<0.05),经用药治疗后,实验组明显降低,与模型组比较呈显著性差异(P<0.05)。模型组大鼠外周血单个核细胞IL-4mRNA的表达显著低于正常组(P<0.05),而治疗后实验组与模型组比较无显著性差异。结论:佐剂性关节炎发生与Th1/Th2平衡及相关细胞因子失调有一定相关性,黄芪总黄酮可调节佐剂性关节炎模型大鼠外周血细胞因子表达水平,减轻关节滑膜的炎性损害。     

IL-21对非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡及survivin基因表达的影响

目的:探讨IL-21对非霍奇金淋巴瘤细胞的生长和凋亡的影响及其可能机制。方法:通过MTT(噻唑兰比色法)检测观察IL-21对Raji细胞生长的影响;流式细胞仪观察24 h后IL-21对细胞凋亡的影响;RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)检测IL-21对survivin mRNA的表达水平的影响。结果:IL-21对Raji细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖关系(P<0.05);0,10,50,250μg/L组细胞凋亡率分别为0.00%,7.26%,15.12%,22.57%,药物组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01或<0.05);随着IL-21浓度升高,survivin的表达水平逐步下降(P<0.05)。结论:IL-21可以抑制淋巴瘤细胞的生长和诱导其凋亡,其机制可能与降低survivin的表达有关。