海人酸致痫大鼠海马CA3区神经元线粒体损伤及妥泰的保护作用

目的：观察海人酸（KA）诱导的癫痫持续状态（SE）大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤及妥泰（TPM）的保护作用。方法：用TPM干预。用KA诱导大鼠SE 2?h，并评估大鼠的行为学表现。于SE终止后3?h制作脑切片，光镜观察神经元的大体损伤，电镜进一步观察线粒体的超微结构。结果：KA组出现痫性发作的时间为注入KA后(15.3±4.6)?min，而TPM组为(26.1±5.3)?min，两组差异有统计学意义（P＜0.05）。KA组大鼠的线粒体损伤为（3.67±0.34）级，TPM组为（2.48±0.21）级，两组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：KA诱导的SE可导致海马神经元线粒体损伤，妥泰对此具有抑制作用。     

海人酸致痫大鼠海马CA3区神经元线粒体损伤及caspase 3的表达

目的：观察海人酸（kanic acid,KA）诱导的癫痫持续状态（status epilepticus,SE）大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤及caspase 3表达的变化。方法：用KA诱导大鼠SE 2?h,分别于SE终止后第3、6、24?h取脑,用电镜观察海马CA3区线粒体的超微结构,同时用免疫组化方法检测相同部位caspase 3表达的变化。结果：SE终止后3?h可见到海马线粒体超微结构损伤,从肿胀到膜的完整性破裂。caspase 3的表达在SE后6?h开始增加,于第24小时明显增高。结论：在实验性SE模型中,海马线粒体的超微结构在早期即有损伤,caspase 3在线粒体损伤后数小时才出现表达,并于SE后24?h明显增高。     

托吡酯对海人酸致癫痫状态大鼠海马caspase-3表达的影响

观察海人酸（KA）诱导的癫痫持续状态（SE）大鼠海马区caspase 3表达的变化及托吡酯（TPM）对其的影响。方法：用TPM预处理；用KA诱导成年雄性Wistar大鼠SE模型。分别于SE终止后第3、12、24、48?h取脑，行HE染色做海马普通病理检查，并用免疫组化方法检测caspase 3的表达变化。结果：嗜酸性神经元在SE后24～48?h最多；caspase 3的表达亦于SE后同一时点明显增加；TPM在SE后24和48?h?点明显降低caspase 3的表达。结论：在实验性SE模型中，TPM可降低海马caspase 3的表达，从而减轻SE后脑损伤。     

托吡酯对红藻氨酸致癫痫状态大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 观察托吡酯(topiramate,TPM)对红藻氨酸(kainic acid,KA)致癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元凋亡的影响.方法 取大鼠120只,随机分为TPM组、KA组及生理盐水(NS)对照组,每组再分为四个小组,分别用于SE后3 、12 、24 和48 h四个时点.每小组10只大鼠.TPM组用TPM预处理.采用KA诱导大鼠SE.进行行为学评估、HE染色及TUNEL染色,并用免疫组化方法检测海马caspase-3的表达变化.结果 TPM组大鼠的癫痫发作迟于KA组.HE及TUNEL染色显示,TPM组大鼠海马的病理损伤轻于KA组.免疫组化结果显示,TPM组caspase-3的表达明显低于KA组.结论 TPM对KA诱导的SE发作具有抑制作用,并能显著降低海马caspase-3的表达,从而减轻癫痫所致的海马神经元损伤.     

缺血再灌注大鼠海马神经元超微结构的变化

目的:观察缺血再灌注大鼠海马神经元超微结构的改变.方法:雄性SD大鼠32只,随机分为缺血再灌注组和假手术组.缺血再灌注组制备缺血再灌注模型,电镜下观察两组大鼠海马神经元超微结构的变化.结果:缺血再灌注可使海马神经元超微结构尤其是线粒体出现明显损伤;缺血再灌注2h出现的神经元水肿、线粒体肿胀等损伤是可逆的;再灌注6h受损神经元增多,细胞器减少,线粒体外膜、线粒体嵴断裂;再灌注12h神经元损伤更为严重,残存的线粒体崩解呈空泡状.结论:缺血再灌注可损伤大鼠海马神经元超微结构,其作用机制可能与线粒体内Ca2 超载、NOS增加等因素有关.     

癫痫大鼠海马线粒体融合分裂相关基因的表达变化

目的:观察大鼠癫痫持续状态后线粒体融合分裂相关基因Mfn2和Drp1在海马中的动态变化,探讨线粒体融合分裂在癫痫发生中的作用。方法:随机将成年雄性Wistar大鼠48只分为对照组、癫痫持续状态(status epilepticus,SE)后2 h、8 h及24 h组,后3组建立氯化锂-匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫持续状态模型。观察各组大鼠行为学变化;采用Nissl染色检测海马神经元损伤;采用实时定量PCR(real time quantitative PCR,QT-PCR)方法观察大鼠海马Mfn2及Drp1 mRNA表达变化。结果:①与对照组相比,SE组可见大鼠海马CA1和CA3区细胞正常结构破坏、神经元脱失等改变,以癫痫发作后24 h最显著。②与对照组相比,SE后Mfn2 mRNA表达均较对照组显著降低(F=5.362,P=0.006),而Drp1 mRNA表达均较对照组显著升高(F=6.655,P=0.002)。结论:线粒体融合分裂失平衡可能是造成癫痫神经损伤的重要原因。     

异丙酚对全身高温所致大鼠海马神经元Caspase-3表达及超微结构改变的影响

目的观察异丙酚对全身高温（whole body hyperthermia，WBH）导致的大鼠海马神经元超微结构及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达的影响。方法300～350g的健康雄性Wister大鼠63只，随机分为3组，每组21只：空白对照组（A组）、WBH异丙酚麻醉组（B组）和WBH水合氯醛麻醉组（C组）。采用热辐射法建立大鼠WBH模型，6h后处死大鼠，其中每组20只大鼠用免疫组织化学法检测其海马神经元Caspase-3的表达并计算其灰度值，每组1只大鼠用电镜观察其海马CA1区神经元的超微结构。结果A组大鼠海马区神经元无Caspase-3表达，B、C两组大鼠海马区神经元有Caspase-3表达，B组较C组Caspase-3表达平均灰度值减小。B、C两组大鼠海马神经元超微结构发生改变、细胞器水肿，部分线粒体空化，内质网稀疏，突触前膜、后膜结构不完整，可见自噬体结构；B组大鼠的神经元超微结构损害较C组轻。结论异丙酚能减轻WBH引起的大鼠海马神经元Caspase-3的表达和超微结构的损害。     

海人藻酸诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化机制的研究

目的：探讨海人藻酸（Kainic acid, KA）注射诱导大鼠海马CA1区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原（cysteine aspartate-specific proteasezymogen,Procaspase3）巯基去亚硝基化的机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组（sham组）、KA注射组（KA组）、给药组（NS102组,DNCB组,GSNO组）及溶剂对照组（生理盐水组,DMSO组）。采用KA侧脑室注射构建大鼠癫痫模型。运用生物素转化法检测蛋白质巯基亚硝基化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹方法对Procaspase3巯基去亚硝基化进行分析,焦油紫染色法观察大鼠成活海马神经元的数量。结果：与sham组相比,KA组Procaspase3巯基亚硝基化水平明显降低,与KA组相比,NS102组、DNCB组和GSNO组Procaspase3巯基亚硝基化水平显著上升,差异均有统计学意义（P<0.05）,但DMSO组和生理盐水组差异无统计学意义。说明注射浓度为0.6 μg/10μL的KA能够诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化;KA通过激活KA受体导致大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化,KA受体抑制剂NS102能够抑制Procaspase3巯基去亚硝基化;TrxR参与调节KA诱导的大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化;外源性NO供体能够抑制Procaspase3巯基去亚硝基化。焦油紫染色结果显示,与KA组相比,NS102组、DNCB组和GSNO组神经元损伤降低。结论：KA注射通过激活KA受体诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化,Procaspase3巯基去亚硝基化受TrxR和外源性NO调节,抑制Procaspase3巯基去亚硝基化对海马神经元具有保护作用。     

癫持续状态大鼠海马组织中肿瘤坏死因子α和核因子κB的变化及其相关性

目的探讨癫持续状态（SE）大鼠海马组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和核因子κB（NF-κB）的表达。方法对Wistar大鼠用10%匹罗卡品300 mg/kg腹腔注射（SE组,n=20）,产生SE后60 min终止发作;另设注射等量生理盐水的对照组（n=6）。饲养24 h后取大鼠海马组织,苏木精-伊红染色观察海马CA3区神经元数量,Western blotting测定海马组织NF-κB表达,双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定海马组织TNF-α表达。采用Pearson相关性分析法分析TNF-α和NF-κB表达的相关性。结果 SE组海马CA3区神经元数量（53.26±2.67）明显小于对照组（103.22±0.83）,差异具有统计学意义（P〈0.001）。SE组大鼠海马组织TNF-α和NF-κB表达水平均显著高于对照组（P〈0.001和P〈0.05）,且两者表达水平呈正相关（r=0.457,P=0.02）。结论 SE后24 h,TNF-α和NF-κB在大鼠海马组织中表达活性增强,且两者表达水平呈正相关。     

匹罗卡品诱导大鼠海马神经元损伤与氧化应激机制的研究

目的 探讨癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元损伤与氧化应激的关系.方法 采用匹罗卡品(pilocarpine,PILO)诱导大鼠SE模型,用Nissl染色和TUNEL染色观察海马神经元损伤;用比色法检测海马丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷光甘肽(glutathione,GSH)的水平以及谷光甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)的活力.结果 SE后6 h,大鼠海马可见少量TUNEL标记细胞;SE后48 h,TUNEL阳性细胞明显增多,至SE后72h达到高峰;SE后7 d,TUNEL阳性细胞数量明显减少.大鼠海马MDA含量在SE后6 h迅速升高,并达到高峰;SE后48～72 h,海马MDA含量虽比SE后6 h有所降低,但仍明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.01);SE后7 d,海马MDA含量基本恢复正常.GSH含量和GR活力在SE后6 h迅速降低;SE后48 h降至最低点;SE后72 h～7 d,海马GSH含量虽较SE后48 h有所升高,但仍显著低于对照组(P＜0.01);海马GR活力于SE后72 h开始升高,至SE后7 d基本恢复正常.结论 PILO诱导的海马神经元死亡包括坏死和凋亡两种形式,氧化应激机制参与了PILO诱导的海马神经元损伤.     

锂-匹鲁卡品致痫大鼠杏仁核神经元损伤及Mg2+的脑保护作用

目的:观察锂-匹鲁卡品(LPC)致痫大鼠杏仁核神经元的形态学改变,并观察Mg2 的脑保护作用。方法:选用成年雄性Wistar大鼠75只,并随机分为LPC组、Mg2 组和生理盐水对照组。用LPC诱发癫痫持续状态(SE)3h,在痫性发作终止后第72h将动物处死。将大鼠脑组织制成切片,分别用光镜和电镜观察杏仁核神经元形态学改变。而Mg2 组大鼠在注射匹鲁卡品前腹腔内注射硫酸镁100mg/kg,其余处理同LPC组。结果:两组大鼠在第72h时杏仁核区均出现了嗜酸性神经元,但Mg2 组神经元损伤程度明显低于LPC组。结论:LPC诱导的SE激活了促进程序性细胞死亡的机制,导致杏仁核神经元坏死,而Mg2 对杏仁核神经元具有保护作用。     

癫痫持续状态大鼠海马线粒体分裂、融合的变化

目的 探讨癫痫持续状态大鼠海马线粒体分裂、融合的变化。方法 将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组和癫痫组,癫痫组分为癫痫持续状态后4、8、24和72h组,观察癫痫持续状态后不同时间点大鼠海马线粒体分裂、融合的变化。Western blotting、PCR分析海马线粒体中Drp1、hFis1、 Mfn1、Opa1的表达;免疫组化分析海马CA3区神经细胞Drp1、Opa1的表达。结果 Drp1、 hFis1在癫痫持续状态后4h时开始升高,24h达高峰,72h仍处于较高水平;Mfn1、Opa1在癫痫持续状态后4h时出现短暂的升高,随即表达下降,并于24h时达最低水平。癫痫持续状态后24h时,大鼠海马CA3区Drp1阳性神经元数目显著高于对照组(P＜0.05),Opa1阳性神经元数目显著低于对照组(P＜0.05)。结论 癫痫持续状态大鼠海马线粒体分裂、融合失衡,主要表现为线粒体分裂增强、线粒体融合抑制。     

锂-匹鲁卡品致痫大鼠杏仁核神经元损伤机制的实验研究

目的观察锂-匹鲁卡品(LPC)致痫大鼠杏仁核神经元损伤的形态学改变,并检测细胞凋亡相关的DNA碎片标志物.方法用LPC诱发大鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE)3 h,于癫痫中止后第24小时和第48小时处死动物.一组鼠用于制作脑切片,分别用光镜和电镜观察;另一组从相同的脑区提取DNA,在含有溴乙锭的琼脂糖凝胶上电泳.注射了生理盐水的大鼠被用作阴性对照.结果在第24小时和第48小时两个时点,SE 大鼠杏仁核神经元出现了形态学上的坏死和梯状DNA电泳带,对照组未见到坏死及凋亡细胞.结论癫痫持续状态后,形态学上表现为坏死的神经元出现梯状DNA电泳带,提示在此模型中可能存在程序性细胞死亡的机制.     

大鼠癫癎持续状态后海马神经元凋亡的研究

目的：通过美解眠诱导鼠癫癎持续状态后观察海马神经元的细胞凋亡现象。　材料和方法：给ＳＤ大鼠腹腔注射美解眠（２０ ｍ ｇ／ｋｇ）,２４ ｈ 后在光镜和电镜下观察大鼠海马神经元的形态学改变,并以ＤＮＡ 末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测海马神经元的凋亡。　结果：ＳＤ大鼠注射美解眠后出现典型的癫癎发作,光镜和电镜下可观察到海马神经元有典型的细胞凋亡现象,包括细胞体皱缩、胞质浓缩、染色质凝聚成块状、有边集现象, 同时有少量凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ检测发现海马结构内可见ＴＵＮＥＬ染色阳性细胞,其分布不均匀,有区域性差异,以ＣＡ３ 区最为多见。致癎组海马ＣＡ３ 区ＴＵＮＥＬ阳性细胞数的平均百分率（７５．１４％ ）与对照组（９．４％ ）相比有极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）。　结论：癫癎发作可诱导大鼠海马神经元发生凋亡。     

Effects of magnesium sulfate in kainic acid-induced status epilepticus

Because magnesium has antiseizure effects in some animal models of epilepsy, and possible neuroprotective effects in some models of neuronal injury, we aimed to investigate its effects in the kainic acid (KA) model of status epilepticus (SE) in prepubescent rats. This age was chosen because it is a common age for onset of epilepsy and of SE in humans. Three groups of P35 rats were studied: Group I (MgKA) received magnesium sulfate MgSO4 (270 mg/kg then 27 mg/kg every 20 minutes for 5 hours) and 10 mg/kg KA. Group II (KA) received saline instead of MgSO4 and 10 mg/kg KA. Group III (control) received saline injections only. The dose we used has been shown previously to have anticonvulsant activity in another seizure model. Rats were recorded for their acute behavioral seizures directly after KA, and underwent the handling and Morris Water Maze (MWM) tests on P96-97 and P102-106 respectively. The MgKA and the KA groups did not differ in their acute seizures and both showed similar histologic lesions in CA3/CA4 and CA1 hippocampal subfields, and were more aggressive on the handling test than control rats. The MgKA group took more time to reach the platform in MWM than controls, while the KA group scores were intermediate between the two groups. Using the dose of 540 mg/kg MgSO4 and 54 mg/kg every 20 min showed the similar result of lack of protection against impairment in long-term memory. We conclude that (1) Magnesium did not manifest acute behavioral antiseizure effects in the KA P35 model of SE. (2) Magnesium did not prevent the tested long-term behavioral and histological consequences of SE in this model.     

穴位埋线对大鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

[目的]观察穴位埋线对大鼠癫痫持续状态(SE)后海马神经元凋亡及凋亡相关基因的影响。[方法]将40只SD大鼠随机分成正常组、造模组、埋线组、针刺组、西药组。用贝美格注射液腹腔注射法诱导大鼠癫痫持续状态。造模成功后48h,采用Tunel法和免疫组化法检测各组神经元凋亡及凋亡相关基因P53和B淋巴细胞-2(Bcl-2)的表达。[结果]与模型组相比,埋线组、针刺组、西药组的细胞凋亡指数及P53降低、Bcl-2增高。[结论]穴位埋线可能通过抑制P53蛋白,提高Bcl-2蛋白的表达,阻止海马神经元细胞凋亡的发生发展,减轻SE发生后对大脑的损害。