胃癌患者外周血及骨髓微转移检测的临床意义

目的:探讨检测胃癌患者外周血和骨髓CK20 mRNA表达的敏感性、特异性及临床意义.方法:采用RTPCR技术,同时对照检测49例胃癌患者、5例胃良性病变患者及5例健康志愿者骨髓与外周血中的CK20 mRNA表达.结果:49例胃癌患者中,骨髓和外周血CK20阳性表达率分别为49.0%(24/49),32.7%(16/49),二者差异有统计学意义(P＜0.05).其中2例外周血CK20表达阳性,骨髓表达阴性.健康志愿者及良性病变患者外周血及骨髓中未检测到CK20表达.本实验中CK20 mRNA RT-PCR技术的灵敏度为10～-5.胃癌的微转移状况与组织分化程度和肿瘤TNM分期有关.结论:应用RT-PCR法以CK20为标志物检测胃癌微转移细胞特异性高.骨髓检测胃癌微转移较单次采血更敏感,但外周血检测仍能提供一些有价值的资料.     

非小细胞肺癌患者淋巴结、外周血及骨髓微转移分子诊断在肺癌外科治疗中的作用

目的 探讨检测肺癌患者区域淋巴结、外周血和骨髓中微转移在肺癌外科治疗中的临床意义,以及区域淋巴结、外周血和骨髓肺癌微转移三者之间的相关性。方法 应用巢式RT－PCR技术,对29例肺癌患者和11例肺良性病变患者的淋巴结、外周血和骨髓中CK19基因mRNA表达进行联合检测。结果 本实验建立的巢式RT－PCR技术的敏感性可达到10^-6。术前10例患者检测到外周血微转移,6例患者检测到骨髓肺癌微转移,101枚纵隔淋巴结中55枚检测到肺癌微转移。肺癌患者淋巴结、外周血和骨髓中微转移阳性检出率分别为54．5％、34．5％和20．7％,三者之间存在显著正相关（P＜0．05）,外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P－TNM分期均存在密切关系（P＜0．05或P＜0．01）。结论 RT－PCR法是一种特异性,敏感性均较高的肿瘤微转移检测方法;检测CK19 mRNA表达应用于肺癌微转移的分子诊断有助于选择外科手术适应证,并具有广阔的临床应用前景。     

检测肺癌患者外周血和骨髓微转移的临床意义

目的探讨检测肺癌患者外周血和骨髓微转移的特异性、敏感性及临床意义。方法应用巢式RT-PCR技术,检测59例肺癌患者、11例肺部良性病变患者和20例健康人外周血、骨髓中CK19 mRNA表达。结果巢式RT-PCR检测技术的敏感性达到10-6。59例肺癌患者中,20例检测出外周血微转移,13例检测出骨髓微转移,其阳性检出率分别为33.9％(20/59)和22.0％(13/59),二者有显著正相关(P<0.05)。肺癌患者外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P-TNM分期均存在密切关系(P<0.05或P<0.01)。肺良性病变患者、健康人外周血和骨髓中均未检测出CK19 mRNA表达。结论肺癌患者外周血和骨髓中均存在用常规方法检测不出的微转移;应用巢式RT-PCR技术检测肺癌患者外周血和骨髓中CK19 mRNA表达,对肺癌微转移的分子诊断具有重要的理论意义和临床应用前景。     

病理无转移胃癌淋巴结CK18与胃癌组织Tiam1 mRNA表达水平的关系

转移是影响胃癌患者预后的最主要因素.有研究表明,Tiam1基因的表达与恶性肿瘤的转移密切相关~([1]).我们应用TaqMan探针实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitive PCR,RTFQ-PCR)方法,检测了24例病理诊断为无淋巴结转移的胃癌患者199枚淋巴结的CK18 mRNA拷贝数,同时检测了患者胃癌组织中Tiam1 mRNA表达水平,以探讨RTFQ-PCR测定CK18表达对胃癌淋巴结微转移的诊断意义,明确胃癌淋巴结CK18 mRNA表达与胃癌组织Tiam1mRNA表达水平的关系.     

检测乳腺癌患者骨髓中CK19的表达及其临床意义

背景与目的:乳腺癌早期即可发生播散和转移,远处转移尤其骨转移是影响患者预后的主要因素之一,而骨髓微转移用常规方法又难以检测出来。本研究旨在探讨检测乳腺癌患者骨髓中CK19mRNA的表达及其临床意义。方法:应用RT鄄PCR技术,同时对照检测65例乳腺癌患者、15例乳腺良性病变患者和8例健康人骨髓中的CK19mRNA表达,并分析CK19mRNA表达与临床病理因素的关系。结果:65例乳腺癌患者中,22例CK19mRNA阳性,阳性率为33.8%;乳腺良性病变患者和健康人骨髓中未检测到CK19mRNA表达。CK19mRNA表达与乳腺癌肿瘤大小和分期有关(P<0.05),与年龄和淋巴结转移状况无显著性相关(P>0.05);与外周血中CEA异常增高呈正相关(r=0.372,P=0.002)。结论:CK19mRNA可作为检测乳腺癌患者骨髓微转移的分子指标之一,可为乳腺癌患者的治疗和预后判断提供帮助。     

荧光定量RT-PCR检测胃癌患者外周血癌细胞及意义

胃癌的转移和复发是影响预后的重要因素,而存在于患者淋巴结,外周血,骨髓和腹腔中的微转移是导致转移和复发的基础[1-3].由于进入血中的肿瘤细胞极其微量,采用传统的病理学、免疫细胞化学等方法难以检测[4].我们采用逆转录-实时荧光定量PCR技术(以下简称荧光定量PCR),用角蛋白片段CK19为标记物,探讨其在胃癌患者外周血中表达的临床意义及与病理临床的关系,以期为临床治疗方案的选择与评价预后提供依据.     

食管癌患者骨髓CK19 mRNA的表达及其临床意义

目的:肿瘤患者骨髓中发现CK19等上皮成分提示发生微转移,本研究旨在探讨检测食管癌患者骨髓CK19mRNA的表达及其临床意义.方法:应用RT-PCR技术检测61例食管癌手术患者和15例肺及食管良性病变患者骨髓CK19mRNA的表达,评价RT-PCR方法的敏感性和特异性,分析食管癌患者骨髓CK19mRNA的表达与临床病理因素和预后的关系.结果:RT-PCR方法的敏感性为10-6,15例肺及食管良性病变患者骨髓中均未检测到CK19mRNA的表达.61例食管癌患者骨髓中,CK19mRNA阳性13例,阳性率为21.3%.骨髓CK19mRNA的表达与患者临床病理因素无关(P＞0.05).骨髓CK19mRNA阳性的食管癌患者术后转移和死亡风险高于CK19mRNA阴性的患者.多因素分析结果表明CK19 mRNA是独立的预后预测因子.结论:RT-PCR方法检测食管癌患者骨髓微转移具有良好的敏感性和特异性.CK19 mRNA可作为检测食管癌患者骨髓微转移的分子标志物,是患者术后的一个独立预后预测因子,有助于预测食管癌患者的预后.     

hMAM mRNA和CK19 mRNA联合检测乳腺癌骨髓微转移

目的：检测乳腺癌患者骨髓中的human mamglobin（hMAM）mRNA和CK19 mRNA表达,探讨乳腺癌患者早期骨髓微转移与临床病理学因素的关系.方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR一步法）法检测骨髓组织中hMAM mRNA和CK19 mRNA的表达.结果：102例乳腺癌患者骨髓hMAM mRNA、CK19 mRNA表达阳性者分别为37.3%和56.9%,均高于良性乳腺疾病患者骨髓组织中的表达（P=0.043,P=0.002）.两者的阳性表达率与肿瘤大小、临床分期和组织学分级呈显著相关,P值分别为0.000、0.001、0.020、0.003、0.031和0.001;与淋巴结转移状况、年龄和月经状况无关,P值分别为0.101、0.255、0.111、0.110、0.492和0.187.结论：乳腺癌微转移与肿瘤大小、临床分期和组织学分级有关,hMAM mRNA和CK19 mRNA均可作为检测乳腺癌骨髓微转移标志,且两者间存在一致性.     

实时荧光定量PCR检测CK18对胃癌淋巴结微转移的诊断价值

[目的]建立细胞角蛋白18（CK18）实时荧光定量PCR（RTFQ-PCR）检测系统,定量检测CK18在胃癌淋巴结中的表达水平．发现淋巴结微转移,从而提高胃癌淋巴结转移诊断的阳性率。[方法]应用TaqMan探针实时荧光定量PCR方法,以CK18作为淋巴结微转移的标志基因,制备CK18表达序列的标准品,并建立标准曲线。定量检测24例病理证实无淋巴结转移的胃癌患者199枚淋巴结的CK18 mRNA拷贝数。[结果]RTFQ—PCR检测CK18 mRNA的95％CV值为2．38％,敏感性达10个拷贝。24例病理无淋巴结转移的胃癌患者,15例CK18 mRNA阳性。阳性率为62．5％（15,24）。RTFQ-PCR检测CK18 mRNA的量值水平,最小值为2．57×10^2,最大值1．08×10^8。[结论]应用RTFQ-PCR方法,以CK18作为淋巴结微转移的标志基因．可提高胃癌淋巴结转移的检出率．能够发现组织病理学检查不能发现的微转移灶,并可能对微转移分级有益。     

胃癌术中腹腔冲洗液CK20mRNA、COX-2 mRNA检测及与腹膜微转移的相关性

目的:运用细胞学及实时荧光定量RT-PCR方法对胃癌术中腹腔冲洗液进行检测,以探讨对预测胃癌腹膜微转移的意义.方法:胃癌50例和胃良性病变10例,收集患者术中腹腔冲洗液,用实时荧光定量RT-PCR方法测定腹腔冲洗液中游离细胞的CK20mRNA、COX-2 mRNA表达,同时作冲洗液细胞学检测(PLC).结果:50例胃癌患者腹腔冲洗液中CK20mRNA阳性表达为62.0%(31/50);COX-2 mRNA阳性表达率60.0%(30/50),CK20mRNA、COX-2 mRNA联合检测阳性率为68.0%(34/50),皆高于腹腔冲洗液细胞学28.2%(11/50),CK20mRNA、COX-2 mRNA的阳性率与肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、浆膜侵犯程度呈正相关.结论:CK20mRNA、COX-2 mRNA实时荧光定量RT-PCR方法检测腹腔微量游离癌细胞较PLC有更高的灵敏度,是一种检测胃癌腹膜微转移的有效方法.     

乳腺癌患者骨髓微转移与其他预后指标相关性的研究

目的:研究乳腺癌患者骨髓微转移与其他预后指标的相关性.方法:采用RT-PCR法检测了69例乳腺癌患者骨髓中CK19 mRNA的表达,并将骨髓微转移与肿瘤细胞DNA含量、细胞周期分布及增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、HER-2和ER等指标和传统预后指标的相关性进行了研究.结果:RT-PCR技术检测乳腺癌患者骨髓微转移的阳性率为34.8%.骨髓微转移与肿瘤大小、患者年龄、月经状态及激素受体状况等指标无相关性,P0.05.骨髓微转移与腋窝淋巴结状态、HER-2过表达、VEGF水平、S期细胞比值(SPF)以及PCNA有相关性,P<0.05.在淋巴结病理学检查阴性的病例中,有17.6%的病例骨髓微转移检查阳性.结论:乳腺癌患者骨髓微转移与患者的一般临床特点无相关性,但与反映肿瘤细胞增殖、侵袭特性的大部分生物学指标具有相关性.在淋巴结病理学检查阴性的病例中,部分病例骨髓微转移阳性.     

胃癌术中腹腔冲洗液CK20mRNA、COX-2 mRNA检测及与腹膜微转移的相关性

目的：运用细胞学及实时荧光定量RT-PCR方法对胃癌术中腹腔冲洗液进行检测,以探讨对预测胃癌腹膜微转移的意义。方法：胃癌50例和胃良性病变10例,收集患者术中腹腔冲洗液,用实时荧光定量RT-PCR方法测定腹腔冲洗液中游离细胞的CK20mRNA、COX-2 mRNA表达,同时作冲洗液细胞学检测（PLC）。结果：50例胃癌患者腹腔冲洗液中CK20mRNA阳性表达为62.0%（31/50）;COX-2 mRNA阳性表达率60.0%（30/50）,CK20mRNA、COX-2 mRNA联合检测阳性率为68.0%（34/50）,皆高于腹腔冲洗液细胞学28.2%（11/50）,CK20mRNA、COX-2 mRNA的阳性率与肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、浆膜侵犯程度呈正相关。结论：CK20mRNA、COX-2 mRNA实时荧光定量RT-PCR方法检测腹腔微量游离癌细胞较PLC有更高的灵敏度,是一种检测胃癌腹膜微转移的有效方法。     

CK19 mRNA,MUC1 mRNA,LUNX mRNA在非小细胞肺癌微转移中的表达及临床意义

目的：检测非小细胞肺癌（NSCLC）和非肿瘤患者骨髓和外周血中肿瘤特异性标志物细胞角蛋白19（CK19）、黏蛋白1（MUC1）和肺特异性蛋白X（LUMX）mRNA表达情况,探讨微转移与肿瘤的病理类型、分期的关系。方法：选取肺癌患者30例,健康对照组15例,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测CK19、MUC1和LUNX三项标志物。结果：患者骨髓和外周血中CK19 mRNA阳性率分别为36.7%和30%,其表达状况与患者的肿瘤病理类型、吸烟史无明显关系,而与肿瘤的病理分期关系密切;MUC1 mRNA阳性率分别为6.7%、6.7%,其表达与肿瘤的分期、病理类型、患者的吸烟史均无显著关系,与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定;LUNX mRNA阳性率分别为16.7%和13.3%,可以作为指示NSCLC微转移的敏感特异的指标。结论：三种检测标志物中CK19 mRNA对微转移的诊断敏感性较高,但存在假阳性的可能;LUNX mRNA作为一个新的检测指标对微转移的诊断有一定的作用,但特异性和敏感性不高;MUC1 mRNA与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定。     

CK19mRNA,MUC1mRNA,LUNX mRNA在非小细胞肺癌微转移中的表达及临床意义

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)和非肿瘤患者骨髓和外周血中肿瘤特异性标志物细胞角蛋白19(CK19)、黏蛋白1(MUC1)和肺特异性蛋白X(LUMX) mRNA表达情况,探讨微转移与肿瘤的病理类型、分期的关系.方法:选取肺癌患者30例,健康对照组15例,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测CK19、MUC1和LUNX三项标志物.结果:患者骨髓和外周血中CK19 mRNA阳性率分别为36.7%和30%,其表达状况与患者的肿瘤病理类型、吸烟史无明显关系,而与肿瘤的病理分期关系密切;MUC1 mRNA 阳性率分别为6.7% 、6.7%,其表达与肿瘤的分期、病理类型、患者的吸烟史均无显著关系,与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定;LUNX mRNA阳性率分别为16.7%和13.3%,可以作为指示NSCLC微转移的敏感特异的指标.结论:三种检测标志物中CK19 mRNA对微转移的诊断敏感性较高,但存在假阳性的可能;LUNX mRNA作为一个新的检测指标对微转移的诊断有一定的作用,但特异性和敏感性不高;MUC1 mRNA与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定.     

RT-PCR扩增细胞角蛋白CK20 mRNA诊断胃癌腹膜微转移的研究

目的:研究逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)扩增细胞角蛋白CK20 mRNA法检测胃癌腹膜微转移的表达.方法:用RT-PCR方法扩增CK20 mRNA,检测胃癌患者胰腺被膜及横结肠系膜前叶,与常规病理切片法及免疫组化法检测腹膜微转移进行比较,并分析与病理组织学类型的关系.结果:受检83例胃癌患者的胰腺被膜及横结肠系膜前叶组织常规病理HE染色均未见癌细胞,而免疫组化检测阳性率为22.9％(19/83),CK20 mRNA阳性率为32.5％ (27/83).4例黏液腺癌患者,免疫组化3例有转移,而无1例CK20mRNA表达.结论:扩增CK20 mRNA的RT-PCR法是检测胃癌病人腹膜微转移敏感而较特异的方法.     

胃癌微转移诊断研究进展

胃癌微转移是胃癌复发的关键因素。应用RT PCR等分子生物学方法可有效诊断患者骨髓、淋巴结、腹腔灌洗液和外周血中微转移情况并能评价预后和治疗     

胃癌微转移诊断研究进展

胃癌微转移是胃癌复发的关键因素。应用RT—PCR等分子生物学方法可有效诊断患者骨髓、淋巴结、腹腔灌洗液和外周血中微转移情况并能评价预后和治疗。     

CK20mRNA和hTERTmRNA表达与胃癌患者外周血微转移的研究

目的:检测胃癌患者外周血中CK20mRNA和hTERTmRNA的表达,探讨其能否作为判断外周血微转移及预后的分子生物学指标.方法:采用RT-PCR技术检测40例胃癌患者、19例胃良性病变患者和20例健康体检者外周血中CK20mRNA和hTERTmRNA定性和半定量表达.结果:1)CK20mRNA和hTERTmRNA在胃癌患者中阳性率分别为52.50%(21/40)和65.00%(26/40),相对系数分别为0.81±0.17和0.78+0.17;在胃良性病变患者阳性率均为5.26%(1/19),相对系数分别为0.12和0.11;在健康体检者中均为0.胃癌患者与胃良性病变患者、健康体检者相比,两项指标均有统计学差异(P＜0.01).2)CK20mRNA、hTERTmRNA阳性率和相对系数与临床分期、淋巴结转移、远处转移均有关(P＜0.05),阳性者生存率低于阴性者(P＜0.05).3)CK20 mRNA、hTERT mRNA与CEA、CA199表达呈正相关(P＜0.05),其阳性率高于CA199(P＜0.05).结论:胃癌患者外周血中存在CK20mRNA和hTERTmRNA表达,与临床分期及患者生存密切相关,提示两项指标能预测外周血微转移和判断预后,其诊断外周血微转移优于CAl99.     

胃肠恶性肿瘤外周血微转移的检测及其临床意义

目的研究胃癌、大肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测47例胃癌患者、58例大肠癌患者和6例非恶性病手术志愿者骨髓、门静脉和外周血CK20 mRNA的表达,并随访1年。结果6例健康志愿者无CK20 mRNA阳性表达;47例胃癌患者骨髓、门静脉血CK20 mRNA阳性表达率分别为87.2％(41/47)和85.1％(40/47);58例大肠癌患者骨髓、门静脉血阳性表达率分别为77.6％(45/58)和74.1％(43/58)。单次外周血采样CK20 mRNA阳性表达率胃癌患者为42.6％(20/47),大肠癌患者为44.8％(26/58);两次采样总阳性率胃癌患者为74.5％(35/47),大肠癌患者为69.0％(40/58)。外周血总阳性率略低于骨髓和门静脉血(P>0.05),外周血重复采样阳性率高于单次采样(P<0.05)。Duke C期患者CK20 mRNA阳性表达率高于DukeA、B期(P<0.05)。1年局部或远处复发率CK20 mRNA外周血阳性表达患者高于阴性者(P<0.05)。结论胃肠癌患者外周血CK20 mRNA RT-PCR检测有与骨髓、门静脉血相似的敏感性和特异性,可以作为检测胃肠癌微转移的指标并指导其治疗和预后。     

乳腺癌骨髓微转移状况与ER PR VEGF 及Cath-D等因子的关系

目的:检测乳腺癌骨髓组织CK19 mRNA的表达,判断骨髓微转移状况,探讨其与各因子的关系.方法:采用RT-PCR法(一步法)检测骨髓组织中CK19 mRNA表达;用免疫组化SP法检测乳腺癌组织中ER、PR、Cath-D、C-erbB-2及VEGF的表达.结果:102例乳腺癌患者骨髓组织CK19 mRNA表达阳性率56.9%.骨髓CK19 mRNA表达随乳腺癌组织中ER及PR蛋白表达增强而降低(P＜0.05,P＜0.01);随Cath-D、VEGF蛋白表达增强而呈增高趋势(P＜0.005,P＜0.05);但与C-erbB-2表达状况无关.结论:乳腺癌骨髓微转移与癌组织中某些生物学因子表达有关;这些因子决定癌细胞的生物学行为.