雷帕霉素通过活化MAPK促进神经胶质瘤U87-MG细胞自噬

目的:探讨雷帕霉素(Rapa)对神经胶质瘤U87-MG细胞自噬的相关作用和机制。方法:用Rapa处理U87-MG细胞,分为正常对照(NC)组(0μmol/L Rapa)及Rapa各浓度组(1、2.5、5、10、20和40μmol/L Rapa),MTT实验检测细胞活性,软琼脂集落形成实验和平板集落形成实验检测细胞集落形成能力,Western blot法检测mTOR、p-mTOR、LC3-Ⅱ、beclin-1、p-S6、p70S6K、p-MAPK及GFAP蛋白水平的变化。结果:MTT实验结果显示,Rapa显著抑制U87-MG细胞的活力,并呈现剂量依赖性(P0.05)。软琼脂和平板集落形成实验结果显示,Rapa显著抑制U87-MG细胞集落形成数(P0.05)。Western blot结果显示,Rapa处理后mTOR及p-mTOR蛋白水平降低;自噬标志蛋白LC3-Ⅱ和beclin-1水平显著升高(P0.05);自噬相关信号通路分子p70S6K表达趋势呈抛物线轨迹,差异无统计学意义(P0.05);p-S6表达趋势与p70S6K相反,Rapa干预后p-S6表达显著降低,在40μmol/L Rapa干预后上升至NC组的水平;p-MAPK和GFAP水平显著增高(P0.05)。结论:Rapa通过激活MAPK促进细胞自噬,从而抑制U87-MG细胞增殖。     

雷帕霉素减轻碘佛醇诱导的模型大鼠急性肾损伤

目的 探讨自噬在造影剂诱导的大鼠急性肾损伤(CI-AKI)中的作用,并探讨其可能机制。方法 将SD大鼠随机分为对照(control)组、CI-AKI模型(尾静脉注射造影剂碘佛醇;model)组、雷帕霉素(RAPA)组和羟基氯喹(HCQ)组。测定血清中尿素氮(BUN)及肌酐(Scr)含量;HE染色检测肾脏组织病理学;透射电镜观察自噬超微结构;Western blot观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、泛素结合蛋白p62及组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)蛋白表达;RT-qPCR观察HDAC4 mRNA表达。结果 与对照组相比,模型组、HCQ组中BUN、Scr含量及HDAC4表达升高(P<0.01),肾脏近端小管出现明显损伤,其中模型组中自噬小体和自噬溶酶体增加,伴随着LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,p62水平降低(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,RAPA组出现较多自噬小体和自噬溶酶体,伴随着LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高和p62、HDAC4表达下降(P<0.05,P<0.01)。而HCQ组自噬相关结构明显减少,伴随着LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p62表...     

自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏后大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏(CA/CPR)后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组(sham)、CA/CPR模型组(model)、雷帕霉素(Rapa)组(CA/CPR+Rapa)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(CA/CPR+3-MA)。采用呼气末夹闭气管窒息法复制大鼠CA/CPR动物模型,分别给予自噬激动剂Rapa 0.2 mg/kg及自噬抑制剂3-MA 10 mg/kg进行干预。采用神经功能缺陷评分(NDS)评价CA/CPR大鼠神经功能;用TUNEL染色法检测大鼠海马神经元的凋亡变化;用RT-PCR和Western blotting法检测大鼠海马内微管蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1、Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,CA/CPR模型组大鼠NDS评分明显降低;海马神经元TUNEL染色阳性细胞数明显增多,凋亡率显著升高;海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,CA/CPR+Rapa大鼠NDS评分明显降低,而海马神经元凋亡率明显有所增加,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显上调,而Bcl-2表达则明显有所下降;CA/CPR+3-MA大鼠NDS评分明显升高,而海马神经元凋亡率下降,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显下调,而Bcl-2表达则有所升高(P<0.05,P<0.01)。结论 CA/CPR后自噬水平升高促进海马神经元凋亡,自噬水平降低抑制海马神经凋亡,两者相互作用共同参与CA/CPR的病理过程。     

c-Jun氨基末端激酶对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬的调节及依达拉奉的影响

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马区神经细胞自噬的调节及依达拉奉的影响。方法:雄性SD大鼠随机分成假手术(Sham)组、SAH组、JNK抑制剂SP600125(SP600125)组和依达拉奉组。采用枕大池2次注血法制作SAH大鼠模型;SP600125组于造模前30min行侧脑室注射SP600125溶液(3μg/μl);依达拉奉组在建模成功后经尾静脉给与依达拉奉(10mg/kg,1次/24小时)。光镜观察海马区神经细胞形态结构;采用硫代巴比妥酸法检测大脑组织丙二醛(MDA)水平;免疫印迹和实时荧光定量PCR法检测海马区磷酸化JNK和自噬标志蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ)表达水平。结果:SAH组死亡神经细胞数量、MDA水平、磷酸化JNK、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平高于Sham组;SP600125组死亡神经细胞数量、MDA水平、磷酸化JNK表达低于SAH组,Beclin-1和LC3-Ⅱ表达高于SAH组;依达拉奉组死亡神经细胞数量、MDA水平、磷酸化JNK表达低于SAH组,Beclin-1和LC3-Ⅱ表达高于SAH组;依达拉奉组死亡神经细胞数量、MDA水平低于SP600125组,两组间磷酸化JNK、Beclin-1和LC3-Ⅱ表达,差异无统计学意义。结论:JNK的活化可降低SAH大鼠海马区神经细胞自噬水平,依达拉奉可抑制JNK活化,提高SAH大鼠海马区神经细胞自噬水平,减轻SAH大鼠海马区神经细胞损伤。     

ERK1/2和PI3-K通路在蛛网膜下腔出血大鼠海马区对神经细胞自噬的调控作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)通路对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经细胞自噬的调控作用。方法:雄性SD大鼠160只,分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、ERK1/2抑制剂U0126组和PI3-K抑制剂LY294002组。采用二次注血法制作SAH大鼠模型,HE染色观察海马区神经细胞的形态变化;免疫组织化学染色法检测海马区磷酸化ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)-II的表达实时荧光定量PCR检测海马区ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白LC3的表达。结果:SAH组海马区神经细胞存活率低于Sham组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3的表达水平高于Sham组(P0.05);U0126组和LY294002组海马区神经细胞存活率均高于SAH组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3表达均低于SAH组(P0.05);U0126组和LY294002组两组间海马区神经细胞存活率差异无统计学意义(P0.05),U0126组ERK1/2、Beclin-1和LC3表达水平低于LY294002组(P0.05),PI3-K表达水平高于LY294002组(P0.05)。结论:ERK1/2和PI3-K通路激活共同参与SAH后神经细胞自噬的调节,且以PI3-K通路更为主要。     

自噬对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的：观察大鼠肾脏缺血再灌注( ischemia reperfusion, I/R)损伤中肾小管上皮细胞的自噬激活情况,探讨其对肾脏I/R损伤发挥保护性作用的分子机制。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为4组：假手术组( Sham)、I/R组、氯喹干预组( I/R+CQ)和雷帕霉素干预组( I/R+Rap)。常规方法建立大鼠肾脏I/R损伤模型,再灌注24 h后留取各组大鼠血和肾脏标本。血标本用于尿素氮( BUN)和血肌酐( Scre)含量检测;肾组织标本行HE染色,观察病理学损伤情况;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡的改变;采用免疫组化法检测Beclin-1和Caspase-3蛋白表达,透射电镜观察大鼠肾脏自噬泡的形成情况。结果与I/R组相比,I/R+CQ组BUN和Scre明显升高(P<0．05,P<0．01),肾组织损伤积分增加(P<0．01),TUNEL阳性细胞数增多(P<0．05),Beclin-1蛋白表达减弱(P<0．01),Caspase-3蛋白表达增强(P<0．01),电镜下自噬泡数量较少(P<0．05);I/R+Rap组BUN和Scre显著降低(P<0．01),肾组织损伤积分减低(P<0．05),TUNEL阳性细胞数减少(P<0．05),Beclin-1蛋白表达增强(P<0．01),Caspase-3蛋白表达减弱(P<0．01),自噬泡数量明显增多(P<0．01)。结论自噬激活在肾脏I/R损伤过程中可通过抑制凋亡而发挥的保护作用,其机制可能涉及Beclin-1及Caspase-3等蛋白的表达调控。     

辛伐他汀对实验性脑出血大鼠海马神经细胞自噬的影响

目的:观察辛伐他汀治疗对实验性脑出血大鼠海马区神经细胞自噬激活的调控作用。方法:将72只健康成年SD大鼠随机分三组(n=24):假手术组(Sham组)、脑出血组(ICH组)、辛伐他汀组(SIM组)。应用胶原酶诱导法建立脑出血大鼠模型,术后动物完全苏醒后给予辛伐他汀灌胃(3 mg/kg)。采用Garcia法对各组大鼠进行神经功能行为学评分,干湿比重法测定脑组织的水含量;免疫组织化染色学方法检测各组大鼠海马自噬微管相关蛋白1轻链3(Microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达及分布;Westem blot法检测各组大鼠海马自噬基因Beclin-1表达。结果:与脑出血组相比,辛伐他汀治疗明显提高神经功能学评分(P0.05),减少脑组织含水量(P0.05),下调自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达(P0.05),抑制海马神经元自噬的激活。结论:辛伐他汀能够降低脑出血大鼠海马区神经细胞自噬的激活,进而减轻脑水肿,促进神经功能的恢复。     

电针联合跑轮训练对 MCAO 模型大鼠自噬、 神经细胞凋亡和神经发生的影响

目的 探究电针联合跑轮训练对大脑中动脉栓塞 (middle cerebral artery embolism, MCAO) 模型 大鼠自噬、 神经细胞凋亡和发生的影响。 方法 30 只 SD 大鼠随机分为 MCAO 模型组、 联合干预组和假手术 组, 每组10 只。 测量神经系统评分和脑梗塞体积。 检测自噬效应蛋白 (Beclin1) 和膜型微管相关蛋白 1A/ 1B-轻 链3 (LC3) (LC3B-Ⅱ) / 胞浆型微管相关蛋白1A/ 1B-轻链3 (LC3) (LC3B-Ⅰ) 表达以及凋亡相关蛋白 B 淋巴细胞 瘤-2 基因 (bcl-2)、 BCL2 关联 X 蛋白 (BAX) 和半胱氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3) 表达。 检测神经细胞凋亡和超 氧化物歧化酶 (SOD) 和过氧化氢酶 (CAT) 的活性以及丙二醛 (MDA)、 p-AMPK 和 p-mTOR 的表达。 结果 MCAO 模型组 Tunel 阳性细胞、 神经系统评分、 脑梗塞体积、 BAX、 Caspase-3、 Beclin-1、 LC3B-Ⅱ/ LC3B-I、 p-AMPK 表达、 MDA 含量增加, SOD 和 CAT 活性、 p-mTOR、 Bcl-2 表达降低 (P<0. 05)。 联合干预组 Tunel 阳性细 胞、 神经系统评分、 脑梗塞体积、 BAX、 Caspase-3、 Beclin-1 和 LC3B-Ⅱ/ LC3B-I、 p-AMPK 表达、 MDA 含量降低, SOD 和 CAT 活性、 Bcl-2、 p-mTOR 表达增加 (P<0. 05)。 结论 联合干预抑制氧化应激、 自噬相关蛋白 Beclin-1 和 LC3B-Ⅱ/ LC3B-I 以及 BAX 和 Caspase-3 表达并促进 Bcl-2 表达。     

雷帕霉素减轻氧糖剥夺对SH-SY5Y细胞的损伤

目的:观察雷帕霉素(Rapa)对氧糖剥夺(OGD)的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法:SH-SY5Y细胞随机分为4组:正常对照组(常规培养,不进行OGD处理)、Rapa组、OGD组(无糖培养基、1%O_2的三气培养箱内孵育细胞12 h)和Rapa+OGD组。进行形态学观察;MTT法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)漏出率判断细胞损伤的程度;caspase-3活性检测试剂盒检测酶活性;原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ及自噬调控蛋白beclin-1的表达。结果:与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞存活率明显升高(P0.05),LDH漏出率及caspase-3酶活性明显降低(P0.05)。TUNEL染色观察结果显示,与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞凋亡明显减少(P0.05);Western blot实验结果显示Rapa+OGD组的Bcl-2、beclin-1及LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平显著高于OGD组(P0.05),而Bax蛋白水平明显低于OGD组(P0.05)。结论:Rapa对OGD损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用,其机制可能与上调beclin-1蛋白、激活自噬有关。     

维生素D诱导自噬对巨噬细胞清除结核分枝杆菌的作用

目的:探讨维生素D诱导巨噬细胞产生自噬并清除巨噬细胞内结核分枝杆菌(Mtb)的作用。方法:使用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)诱导U937细胞分化使之具有吞噬能力,分化后的U937细胞随机分为阴性对照组、维生素D组、自噬抑制剂(3-MA)+维生素D组、阳性对照(雷帕霉素)组,以Mtb感染U937细胞6 h。感染后第4天,利用半定量RT-PCR检测自噬相关基因ATG5、Beclin-1及LL-37、LC3B mRNA的表达,流式细胞术检测LC3B-Ⅱ+和/或结核分枝杆菌抗原85A+(Ag85A+)的细胞。结果:与对照组相比,维生素D组ATG5、Beclin-1、LL-37、LC3B mRNA的表达增强(P<0.01),LC3B-Ⅱ+-细胞增多,Ag85A+-细胞减少,且LC3B-Ⅱ+-Ag85A--细胞增加(维生素D组38.0%比阴性对照组1.08%)。与维生素D组相比,在自噬抑制剂3-MA+维生素D组中,不但ATG5、Beclin-1、LC3B的mRNA表达受到抑制,LL-37的mRNA表达较维生素D组减少,而且3-MA抑制了细胞LC3B-Ⅱ的表达,同时抑制了1,25(OH)2D3对LC3B-Ⅱ+-Ag85A--细胞增加的作用。结论:维生素D能够诱导巨噬细胞产生自噬作用,并进一步有助于巨噬细胞清除结核分枝杆菌。     

miR-144在SKOV-3细胞中的表达及对Beclin-1的调控作用

目的检测雷帕霉素诱导细胞后4种miRNAs的表达情况,并进一步研究miR-144与Beclin-1基因的靶向调控作用。方法对SKOV-3细胞分别进行雷帕霉素(50μg/L,反应2 h)及3-甲基腺嘌呤(10 nmol/L、反应12 h)处理,RT-q PCR检测各组细胞miR-17、miR-20a、miR-144及miR-155的表达;Western blot检测雷帕霉素组Beclin-1蛋白的表达;双荧光素酶报告系统、Western blot及RT-q PCR,验证miR-144与Beclin-1之间的靶向调控关系。结果与正常对照组相比,雷帕霉素组SKOV-3细胞的miR-17、miR-144及miR-155的表达水平显著上调(P0.05);3-MA组SKOV-3细胞的miR-17、miR-20a及miR-144的表达水平显著下调(P0.05);雷帕霉素组Beclin-1的蛋白表达明显低于正常细胞组(P0.05)。miR-144可靶向作用Beclin-1的3'非翻译区(3'UTR),且抑制其表达;miR-144能明显抑制Beclin-1蛋白及mRNA的表达。结论 miR-144可靶向抑制Beclin-1基因的表达,并参与调控SKOV-3细胞自噬的过程。     

β-淀粉样蛋白对原代培养大鼠海马神经细胞钙稳态和线粒体线粒体通透性转运孔道的影响

目的 研究β-淀粉样蛋白(β-amyloid)对原代培养的大鼠脑海马神经细胞内钙稳态和线粒体通透性转运孔(mitochortrial permebility transition pore,MPTP)的影响,探讨其神经毒性作用的机制.方法 原代培养8d后的Wistar大鼠脑海马神经细胞,用老化的Aβ25-35对其进行1,10和20 μmol/L剂量的染毒,培养24和48h后观察海马神经细胞形态、游离钙浓度、Ca2+-ATP酶活性、线粒体膜电位,应用Western blot方法分析MPTP组成蛋白表达情况.结果 随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,可以观察到原代培养的海马神经细胞呈现出弥漫性肿胀、开始变形、出现空泡、胞体边缘模糊的形态变化;原代培养海马神经细胞内的游离钙离子的浓度也呈逐渐上升趋势,其中Aβ25-35 20 μmol/L组在24h和48 h时,细胞内钙离子浓度分别为(31.04±4.16)和(32.80 ±0.43),均显著高于对照组(20.95±4.04)和(22.23 ±0.49)(P ＜0.05);Ca2+-ATP酶活性随着染毒剂量和染毒时间增加明显降低(P＜0.05),其中Aβ25-3520 μmoL/L组在24h和48h时,细胞内Ca2+-ATP酶活性为(2.14±0.01)和(1.10±0.05) U/mgprol,均显著低于对照组(5.17±0.08)和(4.57±0.06)(P＜0.05);线粒体膜电位Aβ25-35 20μmol/L组在24h和48 h时,细胞内线粒体膜电位分别为(20.34 ±7.05)和(19.05±6.15),均显著低于对照组(38.47 ±0.72)和(40.07±1.26)(P＜0.05);有明显剂量反应关系;MPTP孔道蛋白的WB结果显示蛋白表达量随着染毒剂量增加而增加.结论 Aβ25-35通过破坏细胞的钙稳态激活MPTP孔道影响线粒体功能从而发挥神经毒性作用.     

脓毒症后leptin对肠道功能的影响及对肝肾功能的保护作用

目的： 研究脓毒症对肝、肾功能及肠道相关酶活性的影响，探讨瘦素（leptin）在急性炎症反应中的作用。方法： 建立小鼠盲肠结扎致脓毒症模型，采用96孔分光光度法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、尿酸（UA）和肠组织匀浆液中髓过氧化物酶（MPO）、谷胱甘肽-S转移酶（GST）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、超氧化物歧化酶（SOD）等，同时以HE染色方法观察肠道组织病理学改变。结果： 脓毒症后6 h，血清UA水平［（521.92±91.86） μmol/L］明显高于假手术组［（330.12±94.15） μmol/L］，而12 h ALT［（83.55±40.44） U/L］和UA［（474.03±75.22）　μmol/L］均高于假手术组［（66.23±16.80） U/L］和［（320.95±99.14） μmol/L］。采用腹腔内注射leptin（0.1 mg/kg）和吲哚美辛（2 mg/kg），12 h时ALT和UA水平均明显低于脓毒症组（P<0.05）。此外，伴有肠道组织MPO、GST、XOD和SOD活性的改变。结论： 在脓毒症过程中，微量leptin体外注射可以发挥改善和稳定肝肾功能的明显作用，其机制可能同其影响肠道多种与自由基、巯基和嘌呤代谢相关酶的功能有关，而且吲哚美辛在一定程度上有类似的效应，但所用剂量明显高于leptin水平。     

2型糖尿病合并阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者肾脏并发症患病情况及相关因素分析

目的 研究住院2型糖尿病合并阻塞性睡眠呼吸暂停征(OSAS)患者肾脏合并症情况.方法 收集符合条件的2型糖尿病患者,记录年龄、病程、体重指数、腰围、血压等指标,使用便携式睡眠呼吸监测仪进行睡眠呼吸监测,同时完善糖化血红蛋白、空腹血糖、餐后2小时血糖、肌酐、尿素氮、24小时尿微量白蛋白及尿蛋白检验,并计算肾小球滤过率.结果完成研究106例,71例合并OSAS.合并OSAS的患者肌酐(64.49±15.72μmol/L vs 57.28±8.69μmol/L,P<0.05)、尿素氮(5.04±0.61mmol/L vs 4.71±0.64mmol/L,P<0.05)、24小时尿微量白蛋白[25.30(12.64,68.70)mg vs 8.74(4.8,16.24)mg,P<0.05]及24小时尿蛋白[0.24(0.1,1.45)g vs 0.15(0.06,0.26)g,P<0.05]高于未合并OSAS患者,合并OSAS患者肾小球滤过率(89.83±13.97mL·min-1·1.73m-2 vs 102.88±8.02mL·min-1·1.73m-2,P<0.05)偏低.合并OSAS的患者中,出现Ⅲ期以上糖尿病肾病比未合并OSAS的患者更多见(53.5%vs46.5%,P<0.05).采用多因素logistics回归分析后发现,糖化血红蛋白(OR1.36,95% CI 1.01~1.07,P<0.05),空腹血糖(OR 1.01,95%CI 0.73~1.16,P<0.05)及每小时睡眠呼吸暂停次数(AHI)(OR 1.11,95%CI 1.00~1.23,P<0.05)与Ⅲ期以上糖尿病肾病患病独立相关.结论 合并OSAS的2型糖尿病患者肾脏功能下降更明显,更容易出现肾脏并发症,OSAS是糖尿病肾脏病变的独立危险因素.     

Acute effect of ionic high osmolar contrast medium on renal antioxidant enzyme activity in streptozotocin-induced diabetic rats

Abstract Acute contrast medium-induced nephrotoxicity was estimated in 3%–12% of patients receiving cardiac angiography, especially in advanced age, renal insufficiency and diabetic patients. As intrinsic renal antioxidant enzyme activities may play a crucial role in defence against renal oxidant injury, this study was designed to investigate the acute effect of ionic high osmolar diatrizoate meglumine/diatrizoate sodium on renal antioxidant activities in normal or streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats at two time points (1 h and 24 h). A total of 40 Wistar rats were separated to normal and STZ-induced diabetic groups. Ten of each group were injected with diatrizoate (10 ml/kg) via tail vein and 10 with 10 ml/kg of 0.9% NaCl as control. This study shows that diabetic rats had higher renal glutathione peroxidase (GPx) activities than those of normal rats. GPx activities decreased significantly after diatrizoate injection at the first hour (717.4±104.0 to 578.6±92.1 mU/mg in the diabetic group, 466.4±30.6 to 371.4±75.5 mU/mg in the normal group, all P=0.032) but the difference faded 24 h later. The increase of superoxide dismutase (SOD) activities was enhanced (673.5±100.2 to 750.4±129.8 U/mg, P=0.04) in the normal group, but not in the diabetic group (624.1±156.6 to 671.1±136.7 U/mg, P=0.15) after diatrizoate injection at the first hour. At 24 h, renal SOD activities were still significantly higher in the diatrizoate injection group. In summary, intrinsic renal antioxidant activities are adapted in STZ-induced diabetes and ionic high osmolar diatrizoate could modify their activities. Furthermore, diabetics have abnormal response of renal antioxidant activities by contrast media and are at risk for contrast-mediated nephrotoxicity.     

CHOP/GADD153在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞凋亡中的表达及作用

目的： 离体观察CHOP/GADD 153蛋白表达变化与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡的关系，并探讨CHOP/GADD 153反义寡核苷酸抗凋亡作用。方法: 对体外培养的乳鼠心肌细胞，单用AngⅡ刺激或预加不同浓度CHOP/GADD 153反义寡核苷酸干预后，再加入AngⅡ刺激。用MTT法检测细胞活力，乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定培养上清液中LDH含量，Annexin V流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blotting法检测CHOP/GADD 153、Bcl-2及Bax表达变化。结果: AngⅡ组,心肌细胞CHOP/GADD 153表达(0.75±0.06)显著高于对照组(0.20±0.02)，P<0.01；心肌细胞活性(66.32±2.09)%显著低于对照组(100.00±0.00)%，P<0.05；培养上清液中LDH含量(79.36±5.69)U/L显著高于对照组(20.23±2.83)U/L；细胞凋亡率(16.62±2.09)%显著高于对照组(3.33±0.28)%，P<0.05；Bcl-2表达(0.44±0.05) 显著低于对照组(0.73±0.05),P<0.01；Bax表达(0.90±0.10) 显著高于对照组(0.69±0.08),P<0.01；Bax/Bcl-2比值(2.00±0.22)显著高于对照组 (0.93±0.09),P<0.01。预加CHOP/GADD153反义寡核苷酸干预，可显著逆转AngⅡ的以上作用，虽对Bax 蛋白表达无显著影响，但对照组Bax/Bcl-2的比值显著低于AngⅡ组 (P<0.01)，而错义寡核苷酸无此效应。脂质体组与对照组无显著差异。结论: CHOP/GADD153表达升高可能是AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡机制之一，CHOP/GADD153反义寡核苷酸能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡。     

自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病发生中的表达及意义

目的 观察自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病模型中的表达及意义,并探讨其机制;从细胞自噬角度研究硅沉着病形成的分
子机制。方法 将90只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组,每组30只。采用非暴露式气管插管一次
性灌注二氧化硅粉尘混悬液法建立大鼠硅沉着病模型,并给予3-MA干预,各组分别于造模后第1、3、7、14及28 天分批处死6只大鼠。留取肺组织,
HE和Masson染色观察肺组织形态变化; 免疫组织化学染色检测LC-3、Beclin-1的表达及分布;免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果
与对照组相比,模型组有显著的肺泡炎改变、明显的矽结节形成及大量胶原沉积。LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均上调（P＜0.05）,并随
时间呈现动态变化趋势,SiO2 注入后1 d表达有升高趋势,14d达高峰（P＜0.05）,28 d回落,但仍高于基础表达。与模型组相比,3-MA组肺泡
炎减轻,矽结节减小,胶原沉积减少,LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均下调（P＜0.05）,各时间点的变化趋势无显著性改变。结论 细胞自
噬参与大鼠硅沉着病的病理进程,并在硅沉着病的发生与发展过程中起重要作用。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达及细胞凋亡的影响

目的:应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测Bcl-2、Bax、Beclin-1阳性细胞的表达,探讨自噬蛋白Beclin-1与凋亡之间的关系。方法:成年雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),Cys C低、中、高浓度组。用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h再灌注24 h。采用免疫印迹半定量检测损伤中心脑皮质组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达;免疫组织化学检测Bcl-2、Bax和Beclin-1阳性细胞数;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡。结果:与I/R组相比,Cys C低、中浓度组Bcl-2的表达有不同程度的升高,Bax的表达降低,细胞凋亡减少;而Cys C高浓度组Bcl-2的表达明显降低,Bax的表达显著上升,细胞凋亡增加;Cys C各浓度组Beclin-1的表达都有不同程度的升高。凋亡细胞与Beclin-1表达的相关性分析显示,Cys低、中浓度组细胞的自噬和凋亡呈负相关;Cys C高浓度组细胞的自噬和凋亡呈正相关。结论:Cys C在一定浓度范围内,随自噬蛋白Beclin-1表达的升高可抑制细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用。其作用机制和Bcl-2的表达上调,Bax的表达下调有关;而Cys C较高浓度则无上述作用。