凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌化疗抵抗中的作用

目的探讨x-相关凋亡抑制蛋白（XIAP）和促凋亡因子Smac在胰腺癌细胞化疗抵抗中的作用，以及转染胞浆表达型Smac基因靶向下凋XIAP对化疗药物诱导的胰腺癌细胞凋亡的影响。方法应用流式细胞术检测顺铂、5-FU介导的Panc-1、BXPC-3的凋亡率及胞浆染色分析细胞XIAP表达变化，Western blot分析XIAP、Smac、Caspase-3表达水平；构建pEGFP-NI／Smac真核表达载体并转染胰腺癌Panc-1细胞，流式细胞术检测转染Smac基因前后Panc-1细胞的凋亡敏感性。结果与BXPC-3细胞相比，Panc-1对顺铂或5-FU介导的凋亡具有较强抵抗性，Western blot分析显示Panc-1细胞高表达XIAP，在化疗药物作用下化疗敏感细胞BXPC-3胞浆内XIAP水平下降明显多于Panc-1细胞，而且凋亡的BXPC-3细胞释放入胞浆内的成熟Smac蛋白水平明显高于Panc-1细胞。转染胞浆表达型Smac基因至化疗抵抗Panc-1细胞，可明显下调其XIAP表达水平，促进效应Caspase-3分子活化，显著提高顺铂、5-FU诱导的细胞凋亡率。结论胰腺癌细胞XIAP的表达水平下调与其化疗敏感性有关，XIAP是克服化疗抵抗的重要靶分子，而上调Smac活性蛋白的胞浆表达作为一种有效调节信号，通过拮抗XIAP的凋亡抑制作用协同化疗药物促进胰腺癌细胞凋亡。     

Smac蛋白干扰胰腺癌Bx-PC3细胞系survivin蛋白增敏顺铂化疗

目的: 观察Smac蛋白对细胞凋亡抑制蛋白survivin的下调作用, 进一步分析Smac蛋白转染增敏survivin过表达胰腺癌Bx-PC3细胞系顺铂化疗敏感性的效应.方法: 建立稳定传代、均一表达survivin的Bx-PC3细胞系.制备Smac-GFP重组质粒, 将其转染入Bx-PC3细胞, 以Western blot法半定量测定survivin表达水平.联合10 mg/L顺铂孵育48 h和72 h, 按照MTT法测定细胞抑制率(%).结果: Bx-PC3细胞转染24 h开始出现微弱阳性转染表现(GFP绿色荧光阳性), 于48 h出现大量细胞转染, 于72 h转染水平达到峰值.Western blot检测表明, 与对照组相比, 转染组的survivin蛋白表达水平仅为对照组的28.6%(P<0.01).MTT检测发现, 随着顺铂作用时间的延长, 对照组和转染组的顺铂抑制率均升高(48 h vs 72 h, P<0.05).而且, 转染组的抑制率在两时点上均高于对照组(P<0.01).结论: Survivin蛋白在胰腺癌中具有重要的增殖调控作用, 并且与胰腺癌化疗抵抗密切相关.Smac蛋白拮抗可以在蛋白水平上下调survivin的表达, 提高胰腺癌细胞对化疗的敏感性, 这一治疗策略有望成为一种治疗胰腺癌的新型有效治疗方法.     

抗体模拟物及多肽的研究进展及应用前景

抗体是一类重要的生物药物,由于单克隆抗体技术的不断发展,在临床治疗和诊断方面起着举足轻重的作用,但也存在许多局限性,如药代动力学不足,组织可及性差、免疫原性不良和生产成本高,限制了其重复使用.目前,针对目标抗原的合成多肽及多肽的模拟物是抗体的重要替代品.本文主要通过对抗体的结构、抗原与抗体结合的特点及针对抗原特异性靶位...     

抗菌肽及其模拟物的临床应用研究进展

抗菌肽,作为一种新型的抗生素替代药物,近年来得到了极大关注。本文概述了抗菌肽及其模拟物的抗菌特性及优势特点,着重阐述了其临床研究进展和临床应用面临的挑战。抗菌肽具有不同于传统抗生素的独特抗菌机制,能够杀灭多重耐药菌且不易诱导产生抗药性,数十种抗菌肽已进入了临床试验阶段,但是毒性作用、不稳定性及成本昂贵使其临床应用受到限制。针对上述缺陷,研究者尝试合理改造抗菌肽的结构,并着手研发抗菌肽模拟物。相信在未来,抗菌肽及其模拟物会在对抗耐药菌方面发挥重要的作用。     

青蒿素抗肿瘤作用的研究进展

青蒿素是一种高效、低毒的抗疟药物。近年来的研究表明,青蒿素对多种肿瘤细胞均有抑制作用,且对正常组织细胞的毒性很低。进一步的研究揭示了其作用机制,发现青蒿素通过多种途径抑制癌细胞的生长、增殖与转移,最终诱导其凋亡。本文就近年来有关青蒿素抗肿瘤机制的研究进展作一综述。     

Smac、Caspase-9在食管癌中的表达及与细胞凋亡的关系

目的　探讨caspase-9、Smac蛋白在食管鳞癌中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。 方法　采用免疫组化SP法对80例经病理确诊为食管鳞癌病例的癌组织、正常组织及癌旁组织进行caspase-9和Smac蛋白半定量免疫组化分析,用TUNEL法检测石蜡切片中肿瘤细胞凋亡情况。 结果　（1）Smac 、caspase-9在食管正常组织、鳞癌组织、癌旁组织的阳性表达率分别为92.50%,63.75%,77.50%和85.00%,58.75%,72.5%,差异均有统计学意义。（2）Smac表达阳性的51例中,Caspase-9蛋白阳性表达47例,占92.16%（47/51）,两者表达有极强的关联性。(3)在Smac蛋白表达阳性组平均癌细胞凋亡率(19.186±1.331),明显高于Smac蛋白表达阴性组(10.316±1.661);与Caspase-9蛋白表达阳性组比较无差异。47例　Smac 与Caspase-9蛋白共表达阳性组平均细胞凋亡率（26.819±1.273）明显高于Smac 与Caspase-9蛋白共表达阴性组（6.154±1.631）。 结论　Smac、caspase-9在食管癌中的表达呈明显的正相关,二者共同参与了食管鳞癌的发生、发展,在食管癌细胞的凋亡中发挥正反馈调节作用。     

大黄素抗肿瘤作用及相关机制

大黄素(emodin)分子式C15H10O5,化学名为:1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌。临床上用作抗菌、抗肿瘤以及治疗便秘等。文献报道大黄素能够抑制肿瘤细胞增生、诱导凋亡、防止肿瘤细胞向远处转移,而且还能有效地抑制肿瘤细胞摄取葡萄糖,导致细胞膜相关功能的改变,最终导致细胞死亡。其抗肿瘤机制的研究受到众多学者的重视,本综述旨在综述最新的研究报道,重点放在大黄素作用的分子机制上。1体外研究1.1抑制肿瘤细胞的生长和增殖大量的研究表明,大黄素可以抑制多种肿瘤细胞的生长与增殖,研究发现大黄素的C1和C3位点是抗肿瘤的重要功能位置[1]。而大黄…     

白藜芦醇抗肿瘤作用机制的研究进展

白藜芦醇是一种天然存在的植物抗毒素, 广泛存在于多种植物中,是防治肿瘤的绿色抗癌药物。体内外实验表明,白藜芦醇对大多数肿瘤的起始、增殖、发展3个主要阶段均有抑制乃至逆转作用。其抗肿瘤机制可以通过抗氧化、阻滞细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化、抑制环氧化物酶和细胞色素酶P450的活性、干扰相关信号转导通路、抑制肿瘤血管生成等发挥作用。     

hTERT干扰对HepG2肝癌细胞Smac表达的影响

目的检测RNAi靶向抑制hTERT基因表达促HepG2肝癌细胞凋亡与Smac的关系,探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制。方法收集hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染第20代的HepG2肝癌转染细胞、对照细胞（转染空载体质粒）及未转染细胞,通过Westernblot检测胞内XIAP和caspase-3,以及线粒体和胞浆Smac的表达;采用共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化。结果与未转染细胞和对照细胞相比,转染细胞内XIAP表达明显减少（P〈0．05）,caspase-3表达明显增加（P〈0．05）,线粒体Smac表达明显减少（P〈0．05）,而胞浆Smac表达明显增加（P〈0．05）;转染细胞线粒体膜电位明显降低。结论RNAi靶向抑制hTERT基因表达可能通过降低HepG2肝癌细胞线粒体膜电位,引起Smac从线粒体释放入胞浆,进而抑制XIAP表达,促进caspase-3表达增加诱导细胞凋亡。     

Survivin研究进展

Survivin是新近发现的一种新的凋亡抑制蛋白(Inhibition Apoptosis Protein,IAP),由142个氨基酸组成,N端有一个杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列(Baculovirus IAP Repeat,BIR),通过抑制半胱天冬蛋白酶3和半胱天冬蛋白酶7(Caspalse 3,Caspase 7)活性而抑制细胞凋亡.gurvivin选择性地在肿瘤组织中表达而在正常成熟组织中不表达,其与肿瘤发生、发展有关.此外,Survivin还参与细胞周期调控.     

Immunohistochemical analysis of Smac/DIABLO expression in human carcinomas and sarcomas

Second mitochondria-derived activator of caspases (Smac/DIABLO) is released from mitochondria into the cytosol during apoptosis, promoting caspase activation by neutralizing the inhibition of inhibitor of apoptosis proteins (IAPs) on caspases. Alteration of apoptosis is essential for cancer development, and cancer cell death by radiation and chemotherapy is largely dependent upon apoptosis. In this study, archival tissues of 100 carcinomas and 50 sarcomas from various origins were analyzed by immunohistochemistry for the expression of Smac/DIABLO. Smac/DIABLO immunoreactivity was seen in 62 of 100 (62%) carcinomas, including 42 of 60 stomach carcinomas, 7 of 10 colorectal carcinomas, 4 of 10 lung carcinomas, 7 of 10 ovarian carcinomas, and 2 of 10 prostate carcinomas. Smac/DIABLO is expressed in 11 of 50 (22%) sarcomas, including 2 of 8 malignant schwannomas, 5 of 11 rhabdomyosarcomas, 2 of 7 malignant fibrous histiocytomas, 1 of 6 leiomyosarcomas, 0 of 8 angiosarcomas, 0 of 8 liposarcomas, and 1 of 2 Ewing's sarcomas. These data demonstrated that Smac/DIABLO expression levels vary depending on the individual cancer types. Furthermore, the present study showed that many human cancers do not express Smac/DIABLO, and suggest that lack of Smac/DIABLO expression in the cancer cells may inhibit apoptosis, thereby promoting their survival.     

卵巢黏液性肿瘤caspase-3、caspase-9和Smac的表达及其意义

目的 探讨凋亡调控因子caspase-3、caspase-9和Smac在卵巢黏液性肿瘤中发生、发展过程中的作用。方法 采用免疫组化（SP法）和图像分析技术检测41例卵巢黏液性囊腺瘤、10例卵巢交界性黏液性囊腺瘤、14例卵巢黏液性囊腺癌和24例正常卵巢组织中Smac、caspase-9和caspase-3的表达水平。结果 caspase-3、caspase-9和Smac在41例黏液性囊腺瘤中的表达率分别为93%、93%和73.3%;在10例交界性黏液性囊腺瘤中的表达率分别为70%、80%和80%;在14例黏液性囊腺癌中的表达率分别为96%、96%和84%。阳性信号主要定位于细胞质,呈弥漫分布。而在正常卵巢中24例中的表达率分别为83.3%、80.9%和58.3%。caspase-3、caspase-9和Smac在黏液性卵巢肿瘤中的表达增加（P〈0.05）。结论 caspase-3、caspase-9和Smac可能会成为卵巢黏液性肿瘤治疗的新靶点。     

The role of NF-κB and Smac/DIABLO proteins in the treatment response and survival of acute myeloid leukemia patients

IntroductionThe misbalance between a family of inhibitor of apoptosis proteins (IAP), regulated by the nuclear factor kappa B (NF-κB) and their natural antagonist second mitochondrial-derived activator of caspases/direct IAP binding protein with low pI (Smac/DIABLO) are important to biology of acute myeloid leukemia (AML).Material and methodsThe aim of the study was to assess NF-κB and Smac/DIABLO proteins expression in blasts of 109 newly diagnosed AML patients using the multicolor flow cytometry and evaluate their influence on AML patients outcome.ResultsExpression of NF-κB and of Smac/DIABLO proteins were found in 95% and 98% of the patients, respectively. A negative correlation between Smac/DIABLO and NF-κB was observed. Age < 60 years old as well as higher Smac/DIABLO expression were associated with a higher probability of complete response achievement in the multivariate analysis. Longer overall survival (OS) in the univariate and multivariate analyses was influenced by age < 60 years old, a favorable or intermediate-risk karyotype and high Smac/DIABLO expression. Additionally, in the survival analysis of the subgroups, the patients aged < 60 years old, with high Smac/DIABLO expression, lower NF-κB expression and < 50% of bone marrow blasts who were treated with standard treatment had better OS.ConclusionsLower NF-κB and higher Smac/DIABLO expression may influence AML patients outcome.     

抗死亡受体DR5抗体对大鼠佐剂型关节炎的作用机理探讨

目的研究抗．DR5McAb对大鼠佐剂型关节炎（AA）的作用及其免疫机理。方法注射弗式完全佐剂建立AA大鼠模型，尾静脉注射抗．DR5McAb，观察大鼠关节肿胀度、血清和滑膜液中炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平的变化。RT-PCR检测各组织器官、滑膜和淋巴细胞中DR5 mnNA水平的表达，Western blot分析各组织器官中凋亡相关因子caspase-8、Bcl-2蛋白的表达。结果抗．DR5McAb能缓解AA病情，使关节肿胀度降低；血液和滑膜组织细胞产生IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平下降，抑制滑膜细胞和淋巴细胞的过度增殖。各组织器官中caspase-8蛋白水平上升，Bcl-2蛋白水平下调。结论抗-DR5McAb能用于大鼠从的治疗，其治疗机制与细胞表面DR5mRNA的表达、细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平和caspase-8、Bcl-2蛋白表达相关。     

瑞香狼毒甲醇提取物抗瘤机理研究

目的 研究瑞香狼毒甲醇提取物的抗瘤机理。方法 用不同剂量的瑞香狼毒甲醇提取物(简称醇提物)，观察其体内对荷瘤鼠和所荷肿瘤生长的作用；MTT法研究其体内对荷瘤鼠脾细胞转化及NK活性，体外对正常鼠脾细胞生长、转化和NK活性以及对3株肿瘤细胞增殖的影响；流式细胞术和透射电镜检测其体外对K562的细胞周期和凋亡及p53、bcl-2和c-myc基因表达的影响；台盼蓝拒染法检测其体外对K562增殖曲线的影响。结果 体内，每天5μg/kg醇提物可抑制肿瘤生长，提高荷瘤鼠免疫功能。体外，0．1～l0μg/ml醇提物可刺激脾细胞增殖和协同最适量和亚适量ConA刺激脾细胞转化，0．1～10μg/ml醇提物可提高脾细胞NK杀伤活性，0．1～l0μg/ml醇提物对K562、S180和YAC-1的增殖均有抑制作用，K562最为敏感。0．5μg/ml醇提物作用的K562，处于G0/G1期的细胞和凋亡细胞显著增加，p53基因表达显著增加，bcl-2和c-myc基因表达显著下降。K562在0．5μg/ml醇提物作用24h后洗去或不洗去培养9d，细胞虽仍存活，但密度却不增加。结论 醇提物在一定剂量范围内可抑制肿瘤细胞生长，提高荷瘤鼠免疫功能。抗瘤机理与其可刺激脾细胞增殖，协同ConA刺激脾细胞转化和提高脾细胞NK杀伤活性及阻滞肿瘤细胞周期，抑制其分裂增殖，促进其凋亡有关。     

抗肿瘤多肽类药物的来源及其机制的研究进展

恶性肿瘤已成为严重影响人类健康的一种疾病,其治疗手段一直是人们所探索的内容,药物治疗就是其中一种治疗方法。与传统化疗药物相比,抗肿瘤多肽类药物以其分子量小、特异性强、毒性低等特点作为新的治疗肿瘤药物一直广受人们关注。多肽的来源广泛,有存在于天然动植物及微生物体内,也可以通过蛋白质酶解或人工合成得到。近年来,越来越多的多肽类药物被发现除抗菌外还具有抗肿瘤的作用,其抗肿瘤的机制多种多样但尚未完全清楚,是许多研究者研究的重点。本文从多肽类药物的来源与特点及它们的抗肿瘤机制等方面对多肽类药物的研究进展进行综述。     

创面愈合相关机制的研究进展

创面是一种以皮肤缺损或功能受限为主要特征的常见外科病症.感染、异物、局部血液循环障碍及某些基础疾病等因素不仅会影响创面的愈合,持续发展甚至还会出现全身皮肤感染,代谢紊乱,创周血管硬化,周围神经损伤及肢体功能障碍等一系列并发症.创面愈合问题一直是烧伤整形科面临的最具挑战的问题.本文阐述了国内外对相关炎症因子、生长因子、免...     

Cytotoxic mechanisms of immunotherapy: Harnessing complement in the action of anti-tumor monoclonal antibodies

Several mAbs that have been approved for the treatment of cancer make use of complement-dependent cytotoxicity (CDC) to eliminate tumor cells. Comprehensive investigations, based on in vitro studies, mouse models and analyses of patient blood samples after mAb treatment have provided key insights into the details of individual steps in the CDC reaction. Based on the lessons learned from these studies, new and innovative approaches are now being developed to increase the clinical efficacy of next generation mAbs with respect to CDC. These improvements include engineering changes in the mAbs to enhance their ability to activate complement. In addition, mAb dosing paradigms are being developed that take into account the capacity as well as the limitations of the complement system to eliminate a substantial burden of mAb-opsonized cells. Over the next few years it is likely these approaches will lead to mAbs that are far more effective in the treatment of cancer.     

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。     

洛伐他汀影响HL-60细胞凋亡及其机制的研究

目的　探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (Lovastatin ,LOV)对HL 6 0细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法　采用光镜、透射电镜、DNA梯形带检测以及流式细胞仪分析等技术方法 ,观察LOV对HL 6 0细胞形态、超微结构和凋亡的影响 ,以及Fas抗原表达的改变。结果　LOV处理HL 6 0细胞 2d后 ,光镜下细胞数量明显减少 ,细胞形态发生不同程度的改变 ;透射电镜下 ,HL 6 0细胞呈现凋亡性变 ;有凋亡特征性的DNA梯形带出现 ;Fas抗原的平均荧光强度增加。结论　LOV不仅能抑制HL 6 0细胞增殖 ,而且可诱导HL 6 0细胞凋亡 ;LOV能上调HL 6 0细胞Fas抗原表达 ,可能是LOV抑制HL 6 0细胞增殖并诱导其凋亡的重要分子机制。