液相色谱-串联质谱法研究四物汤中芍药苷和芍药内酯苷在大鼠体内药代动力学

目的 建立LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中芍药苷和芍药内酯苷的含量,并研究灌胃给药四物汤后芍药苷和芍药内酯苷在大鼠体内的药代动力学性质。方法 大鼠血浆样品用乙腈沉淀蛋白;以甲醇和0.1%甲酸-水溶液为流动相梯度洗脱,用色谱柱Thermo Syncronis C18（2.1 mm×100 mm, 5 μm）进行分离;定量分析采用API 4000质谱仪的多反应监测扫描方式、负离子模式检测。将建立的方法应用于大鼠口服四物汤后芍药苷和芍药内酯苷的药代动力学研究。药代动力学参数由WinNonlin 5.2统计软件进行计算。结果 芍药苷和芍药内酯苷分别在2～1000 μg/L和1～1000 μg/L范围内线性关系良好,批内和批间精密度和准确度结果显示,批内、批间变异均小于15%,相对误差分别为-1.10%～2.74%和-4.02%～4.00%,方法学考察均符合要求。结论 所建方法专属性强,灵敏度高,可用于芍药苷和芍药内酯苷的药动学研究。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中芍药苷及其药物动力学特征

目的 建立大鼠血浆中芍药苷的LC-MS/MS定量分析方法 ,并用于大鼠体内芍药苷的药物动力学研究.方法 色谱柱为岛津ODS(250 mm×2.0 mm),流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液(70:30).采用四级杆质谱仪进行选择反应检测(SRM),电喷雾离子源.生物样品预处理采用乙酸乙酯液-液萃取法.考察3个剂量芍药苷灌胃给药后,大鼠体内的药物动力学特征.结果通过该测定方法 ,芍药苷峰与内标峰可完全分离,生物样品中杂质不干扰样品测定,具有较高的专属性.血浆中芍药苷最低检测限为5μg/L,线性范围:5～5 000μg/L;相对回收率>90%,绝对回收率>70%.13内和日间RSD均<15.0%,样品在室温放置、冷冻储存、反复冻融条件下基本稳定.灌胃给予芍药苷后,其血药浓度-时间过程符合W=1的二室模型特征,由药动学参数可知,按3个不同剂量(25、50、100 mg/kg)分别灌胃给予大鼠芍药苷后,血浆中的芍药苷浓度在3.8 h左右达峰,t1/2α分别为0.926、1.106、1.601 h,t1/2β分别为1.96、1.654、2.001 h.结论 灌胃给予芍药苷后,芍药苷在大鼠体内吸收、消除较快,具有线性动力学特征.所建立方法 可用于芍药苷的药物动力学研究.     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中芹黄春浓度及其在药代动力学研究中的应用

目的：研究大鼠分别灌胃和静脉给药芹黄春（芹菜素-7-O-β-D吡喃葡萄糖苷）溶液后,血浆中的芹黄春药物浓度及其药代动力学性质。方法6只雌性Sprague Dawley大鼠随机分为两组,每组3只,分别经灌胃(10 mg/kg)和静脉注射(2 mg/kg)给予芹黄春溶液后,按设计的时间点从大鼠眼内眦静脉丛采集血液样品,置于肝素化的离心管中,低温离心得血浆。采用甲醇沉淀法处理血浆生物样品,利用LC-MS/MS方法对血浆生物样品进行分析。药代动力学参数由Kinetica 2000软件进行计算。结果芹黄春浓度在1~2000 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.9974),定量下限为1 ng/mL,低(8 ng/mL)、中(100 ng/mL)、高(1200 ng/mL)3个浓度的提取回收率均大于90%,日内日间精密度和稳定性的RSD均小于12.8%,日内日间准确度在91.5%~107%,方法学考察均符合要求。大鼠经静脉注射和灌胃芹黄春后,Cmax分别为(2363±96) ng/mL和(13.3±5.8) ng/mL,AUC0~∞分别为(796±201) h· ng/mL和(28.9±9.2) h· ng/mL,大鼠经静脉注射和后t1/2为(1.20±0.17) h,芹黄春的口服生物利用度约为0.6%。结论所建立的LC-MS/MS分析方法方便、快速,灵敏度高,准确度好,可用于大鼠血浆芹黄春浓度测定及其药代动力学的研究。     

LC-MS/MS法同时测定人血浆中盐酸二甲双胍和罗格列酮浓度及其药代动力学

目的:建立LC-MS/MS同时测定人血浆中盐酸二甲双胍及罗格列酮浓度的方法,测定志愿者单次和多次顿服二甲双胍罗格列酮胶囊后盐酸二甲双胍和罗格列酮的血药浓度,估算其药代动力学参数。方法:血浆中加入盐酸苯乙双胍为内标,经乙腈沉淀蛋白,取上清直接进行LC-MS/MS测定。色谱柱为Phenomenex Luna CN 100A(150 mm×2.0 mm ID),流动相为CH3OH-30 mmol/L NH4Ac,pH 5.0(80∶20),流速为0.2 mL/min;ESI-MS/MS选择性反应正离子检测。临床试验方案采用拉丁方试验设计。结果:盐酸二甲双胍和罗格列酮的血浆线性范围分别为5~3 000 ng/mL和1.5~500 ng/mL,检测限均为1ng/mL。测定了12名志愿者单次和多次顿服二甲双胍罗格列酮胶囊后的血药浓度经时过程。结论:本方法操作简单,专属性强,灵敏度高,准确性好。盐酸二甲双胍和罗格列酮体内动力学行为符合线性药物动力学特征。     

UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中雷公藤内酯醇及其药代动力学

目的建立大鼠血浆中雷公藤内酯醇的超高效液相色谱质谱联用(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometer/mass spectrometer,UPLC-MS/MS)法测定大鼠灌胃给药与静脉注射给药后的血浆药物浓度,并进行药代动力学参数评价。方法 Sprague Dawley大鼠分别经灌胃与尾静脉注射给药,经颈静脉取血,测定不同时间的大鼠血浆药物浓度,并计算其主要药代动力学参数。结果在0.1~200.0 ng/m L质量浓度范围内,血浆雷公藤内酯醇线性关系良好,血浆中雷公藤内酯醇的定量限为0.1 ng/m L,该药稳定性良好,回收率均在95%以上,日内与日间差异均小于15%。口服与静脉给药后,雷公藤内酯醇在大鼠体内的消除均较快,口服生物利用度为9.5%。结论本实验操作简便、稳定可靠、检测限低、效率高、重现性好,可以可靠地用于雷公藤内酯醇血药浓度测定及其药代动力学研究,本研究结果为雷公藤内酯醇的结构优化、剂型改进以及临床应用提供了实验依据。     

LC-MS/MS鉴定大鼠血浆中桃红四物汤有效成分

目的 研究桃红四物汤有效成分体内作用的物质基础。方法 利用液相色谱-串联质谱（liquid chromatography technique coupled with tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）提供的色谱及离子碎片信息,对大鼠灌胃桃红四物汤中入血成分进行分析鉴定。结果 通过保留时间比对、离子碎片解析等综合分析,鉴定桃红四物汤中6个入血成分（梓醇、藁本内酯、阿魏酸、芍药苷、芍药内酯苷和苦杏仁苷）均为原形成分,入血成分可能为桃红四物汤体内直接作用的有效成分。结论 本实验确定了桃红四物汤经口服后可被胃肠道吸收入血的6个有效成分,为后期桃红四物汤的药物代谢动力学研究提供了参考依据。     

液相色谱-串联质谱测定大鼠血浆中紫云英苷的浓度及其药代动力学研究

目的建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠血浆中紫云英苷的浓度,并研究其灌胃给药后在大鼠体内的药代动力学特征。方法以槲皮素为内标,采用HPLC-MS/MS方法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,流动相为甲醇-10 mmol/L醋酸铵水溶液-甲酸(80∶20∶0.15,v/v/v),采用多反应监测(MRM)模式,监测离子分别为:m/z 449.1→m/z287.1(紫云英苷),m/z301.1→m/z151.1(槲皮素);DAS2.0药动学软件计算药动学参数。结果紫云英苷在1.00～1000 ng/ml浓度范围内线性关系良好(r2=0.9929);定量下限为1.00 ng/ml;低、中、高浓度的提取回收率均大于93%。大鼠灌胃给药后在0.5±0.1 h达到231.1±67.3 ng/ml的峰值浓度,血浆半衰期为3.9±1.3 h,AUC0-∞为782.6±152.8(ng.h/ml)。结论本方法灵敏度高、选择性强、分析时间短,适用于血浆中紫云英苷的浓度测定及其药代动力学研究。     

UHPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中环磷酰胺及其代谢物的浓度

目的 建立利用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定大鼠血浆中环磷酰胺及其代谢产物(羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺和脱氯乙基环磷酰胺)浓度的方法.方法 以Agilent poroshell SB-C18柱(75 mm×2.1mm,2.7μm)为色谱柱,甲醇-10 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 mL/min,柱温25℃,进样量5 μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI),选择多重反应离子监测(MRM)正离子模式.取8只成年雄性SD大鼠分离获得血浆样品,测定血浆样品中环磷酰胺及其代谢产物的血药浓度和药代动力学参数.结果 方法学验证表明,环磷酰胺、羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺在浓度为20～4 000 ng/mL范围内线性关系良好(r分别为0.998 0、0.995 3和0.998 6),脱氯乙基环磷酰胺在浓度为5～1 000 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.996 8).日内、日间相对标准差(RSD)对于质控(QC)样品和最低定量限(LLOQ)样品分别小于8.73％和15.38％,基质因子的RSD均在-15％～15％之间,提取回收率均在(66.44±5.53)％～(96.66±1.73)％之间;所有待测化合物的稳定性均表现良好.大鼠血浆中各化合物药代动力学参数如下:环磷酰胺、羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺和脱氯乙基环磷酰胺的Ckx分别为(207.52±13.20)、(18.47±2.66)、(6.59±1.33)和(8.27±1.44) μg/mL,T1/2分别为(1.28±0.09)、(5.03±0.48)、(6.72±0.47)和(7.47±0.68)h,AUGo(-)t分别为(372.52±32.79)、(65.70±5.04)、(33.26±11.76)和(45.03±8.93) μg·h·mL-1.结论 该方法操作简单、灵敏、准确、专属性强,适用于高剂量环磷酸铵在大鼠血浆中药代动力学研究.     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中forsklin的浓度及其药代动力学

建立了测定大鼠血浆中forsklin的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)。方法 血浆样品经叔丁基甲醚萃取后,以水(0.1%甲酸)-乙腈为流动相梯度洗脱, BetaBasic-C₁₈柱分离。通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对分别为m/z 411→375.3(forsklin)和285→193(地西泮)。结果 在本实验条件下,forsklin血浆浓度测定方法的线性范围为0.5~1000 ng/ml,定量下限为0.5 ng/ml。日内、日间精密度(相对标准差 RSD)均小于14.4 %;准确度(相对误差 RE)在-3.5 %和3.8%之间。方法的专属性,绝对回收率,稳定性和基质效应均符合要求。结论 该法快速、灵敏、准确,可用于forsklin的药代动力学研究。     

LC/MS法测定兔血浆中妥洛特罗浓度及其药代动力学

目的:建立兔血浆中妥洛特罗的LC MS定量方法,比较受试制剂和参比制剂中妥洛特罗主要药代动力学参数。方法:血浆中加入内标盐酸克伦特罗,碱化后经正己烷∶异丙醇(95∶5 )混合溶剂提取,进行LC MS测定。色谱柱为LichrospherCN(5 μm ,15 0mm×2 .0mm) ,流动相为甲醇- 0 0 .1mol/L醋酸铵溶液(70∶30 ) ,流速为0 2mL/min ;ESI选择性正离子检测。试验方案采用随机平行试验设计。结果:妥洛特罗血浆线性范围为0 . 5～4 0ng/mL ,检测限为0 .1ng/mL。测得受试贴剂与参比贴剂的主要药代动力学参数无显著性差异,受试贴剂的相对生物利用度为114 . 78%。结论:本方法专属性强,灵敏度高,准确性好。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中的野漆树苷及其药代动力学研究

目的：建立大鼠血浆中野漆树苷的LC-MS/MS测定方法,并研究静脉注射后野漆树苷在大鼠体内的药代动力学特征。方法大鼠血浆样品经乙酸乙酯萃取处理,用色谱柱Phenomenex C8（30 mm×2.00 mm,3μm）进行分离,以甲醇-水为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源（ESI）,负离子模式,多反应监测（MRM）,选择离子分别为野漆树苷（m/z 577.6→269.1）,内标柚皮素（m/z 271.0→151.0）,将建立的方法应用于测定大鼠静脉注射野漆树苷后血浆的药物浓度,并采用DAS 2.0计算得主要药代动力学参数。结果大鼠血浆中野漆树苷在1～2000μg/L浓度范围内线性关系良好,日内、日间精密度（RSD）均＜10%,准确度（RE）在±7%之间,低、中、高3个浓度下提取回收率为86.8%～91.0%,无明显基质效应且稳定性良好。大鼠静注该药（5 mg/kg）后AUC0-t为（72627.8±18067.9）μg·min/L,t1/2为（52.1±14.3）min,CLz为（0.07±0.02）L/（min·kg）。结论该检测方法简单、快速、灵敏、准确,适用于野漆树苷血药浓度监测及其药动学研究。药代动力学参数表明大鼠静注该药后体内消除较快。     

LC-MS/MS测定人血浆中替米沙坦的浓度

目的:建立测定人血浆中替米沙坦浓度的LC-MS/MS方法,并用该法研究替米沙坦片在健康人体内的药代动力学。 方法:采用LC-MS/MS测定人血浆中不同时间点替米沙坦的浓度,以地西泮为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18 (100 mm×2.1 mm,3.5 μm),流动相为乙腈-0.3%甲酸水溶液(55∶45),流速0.3 ml/min,柱温30℃。 结果:替米沙坦的线性范围为2.5～500 ng/ml (r=0.995 7),最低定量限为2.5 ng/ml(S/N>10),日内和日间RSD<8%。 结论:本法操作简单,选择性好,灵敏度高,适用于替米沙坦的人体药代动力学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中福辛普利及其活性代谢物福辛普利拉

目的:建立人血浆中福辛普利及其代谢物福辛普利拉的LC-MS/MS测定方法,研究健康志愿者口服福辛普利片后的药代动力学。方法:血浆样品加入内标扎来普隆,血浆样品酸化后用乙醚-二氯甲烷(3∶1)混合溶剂提取处理,LC-MS/MS分析。流动相为甲醇-10mmol/L醋酸胺水溶液,色谱柱为LichrospherC8,梯度洗脱,流速1.0mL/min,柱温25℃。质谱检测方式:选择性反应检测(SRM),20名健康受试者口服20mg福辛普利钠片,计算主要药代动力学参数。结果:福辛普利在0.1～15.0ng/mL,福辛普利拉1.0～700ng/mL范围内线性关系良好。福辛普利的日内RSD小于3.7%,日间RSD小于6.9%;福辛普利拉的日内RSD小于2.4%,日间RSD小于5.2%。福辛普利与福辛普利拉的t1/2分别为(2.72±1.75)h和(7.25±0.81)h,cmax分别为(4.61±2.34)ng/mL和(409.43±136.28)ng/mL,tmax分别为(1.21±0.42)h和(3.74±0.87)h。结论:本方法灵敏度高,测定结果准确,可用于人体药代动力学及相对生物利用度研究。     

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中黄芩素及黄芩苷浓度

目的:建立LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中黄芩素及其代谢物黄芩苷浓度。方法:色谱分离采用C18色谱柱,流动相为甲醇-0.2%甲酸(74∶26),流速1 mL/min。血浆中加入内标木犀草素,甲醇沉淀蛋白,离心后上清液进行LC-MS/MS分析。检测离子:黄芩素[M+H]+270.9→122.8,黄芩苷[M+H]+447.0→271.3,内标[M+H]+286.9→153.0。结果:黄芩苷、黄芩素在10-2 000 ng/mL范围内,线性关系良好,平均回收率大于75%,日内和日间的RSD小于15%。结论:建立的LC-MS/MS法符合生物样品分析的要求,可用于研究大鼠静注黄芩素后,血浆中黄芩素、黄芩苷的同时测定。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中阿霉素的药物浓度及应用

目的：建立液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定大鼠血浆中阿霉素的血药浓度,并用于阿霉素载药纳米粒的体内药动学研究。方法色谱柱采用Shim-pack XR-ODS柱（2.0 mm＆#215;100 mm,2.2μm）,仪器采用API 4000三重四极杆串联质谱仪,采用多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）定量离子对为m/z544.2→m/z396.9（阿霉素）和m/z357.3→m/z133.8（吡格列酮,内标）;甲醇沉淀蛋白法处理样品。结果阿霉素在2.0-2000μg/L范围内线性关系良好,定量下限为2.0μg/L,血浆中的内源性物质不干扰阿霉素的测定;日内和日间精密度RSD均小于±15.0%;阿霉素低、中、高3个QC浓度的提取回收率分别为（92.1±5.9）%、（82.8±2.9）%和（80.1±9.7）%,基质效应分别为（91.1±2.4）%、（82.1±1.7）%和（81.2±2.5）%。结论该方法适用于阿霉素纳米粒在大鼠体内的药物动力学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中黄体酮的浓度

目的建立测定大鼠血浆中黄体酮的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法。方法血浆样品采用液-液萃取法,经正己烷-二氯甲烷-异丙醇(100∶50∶5,V/V/V)提取后,以甲醇-水(75∶25,V/V)为流动相,以Hypersil ODS柱(50 mm×2.1 mm,5μm)为分析柱,采用ESI源以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测。用于定量分析的离子反应为m/z 315.4→m/z(97.0+109.2)(黄体酮)和m/z 385.4→m/z 267.4(醋酸甲地孕酮,内标)。结果黄体酮血浆浓度测定方法的线性范围为0.5~200 ng/ml,日内、内间精密度(RSD)均<6.7%,准确度(RE)在±6.2%之间。结论该方法分析时间短、操作简便、灵敏度高、专属性强,适用于黄体酮的药动学研究。     

高效液相色谱一质谱联用法测定人血浆中非索非那定的浓度

目的：建立以高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中非索非那定浓度的方法。方法：以苯乙双胍为内标物,采用C18柱,流动相由乙腈及30 mmol/ml NH4Ac（含0.1%甲酸,0.01%三氟乙酸）组成,采用梯度洗脱程序,测定血浆中非索非那定浓度。结果：非索非那定在2.26～676.46 ng/ml线性关系良好（r=0.999 6,n=7）,定量下限浓度为2.26 ng/ml,RSD为0.7%,高、中、低浓度测定的相对回收率分别为（109.9±1.7）%、（103.1±7.2）%和（101.5±13.4）%,日内RSD分别为2.1%、2.5%和9.8%,日间RSD分别为1.3%、5.7%和7.1%。结论：所建方法预处理简单﹑专属性强、灵敏度高,适合测定非索非那定的血药浓度。