异体脱细胞真皮基质的研究进展

异体脱细胞真皮基质是天然真皮的脱细胞基质，经过冷冻干燥形成的三维支架结构。作为一种新兴的生物工程支架，它通过空间诱导和组织替代作用修复组织缺损。由于其源于人体正常组织，经临床应用证实，异体脱细胞真皮基质拥有优秀的组织相容性，现已广泛地应用于临床各科的创伤修复。     

异体脱细胞真皮基质的研究进展

异体脱细胞真皮基质是天然真皮的脱细胞基质,经过冷冻干燥形成的三维支架结构。作为一种新兴的生物工程支架,它通过空间诱导和组织替代作用修复组织缺损。由于其源于人体正常组织,经临床应用证实,异体脱细胞真皮基质拥有优秀的组织相容性,现已广泛地应用于临床各科的创伤修复。     

异体脱细胞真皮基质在硬脑膜修复中的应用

硬膜结构的缺损常常造成脑脊液漏、出血以及颅内感染等并发症,因此寻找一种合适的材料用于硬膜修补非常重要.就异体脱细胞真皮基质（allograft dermal matrix,ADM）研究现状及其在硬膜修补中的应用作一回顾.     

异种脱细胞真皮基质在口腔颌面部软组织缺损修复的应用

目的 评价异种脱细胞真皮基质在口腔颌面部软组织缺损修复手术中的应用价值.方法 选择48例口腔颌面部软组织缺损患者,其中男性20例,女性28例;年龄32～82岁,中位年龄65岁;颌面部撕裂伤伴软组织缺损9例,腭部肿瘤5例,磨牙后区肿瘤5例,口腔黏膜白斑2例,颧面部皮肤肿瘤3例,口底癌4例,舌癌7例,颊癌4例,牙龈癌6例,...     

异体脱细胞真皮基质在硬脑膜修复中的应用

硬膜结构的缺损常常造成脑脊液漏、出血以及颅内感染等并发症,因此寻找一种合适的材料用于硬膜修补非常重要。就异体脱细胞真皮基质(allograftdermalmatrix,ADM)研究现状及其在硬膜修补中的应用作一回顾。     

异种脱细胞真皮基质修复膜在喉肿瘤切除术后黏膜缺损修复中的临床研究

目的探讨应用异种（牛）脱细胞真皮基质修复膜修复喉部手术后黏膜缺损的I临床使用价值。方法对20例喉癌术后的黏膜缺损应用异种脱细胞真皮基质修复膜1期修复，其中声门区癌18例，其中T2NoMo8例，T3N1MO5例，T3N2MO4例，T4N2MO1例。声门上区癌2例，T3N1MO1例，T3N2MO1例。结果20例患者黏膜缺损修复均1期愈合。患者术后3-6个月应用电子喉镜复查，修复膜均已替代缺损黏膜组织，局部功能恢复；20例喉癌中6月生存率100％（11／11）；一年生存率100％（3／3），其余9例术后不足6月，正在观察之中。讨论异种脱细胞基质修复膜为修复喉肿瘤术后的黏膜缺损提供了一种新的方法，手术操作简便，有很好的临床应用价值。     

骨髓间充质干细胞-脱细胞真皮基质对大鼠表皮缺损的修复

目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)-脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)对SD大鼠皮肤表皮缺损的修复。方法培养SD大鼠骨髓细胞,增殖提纯传代至4代时,成骨成脂,流式细胞仪检测鉴定BMSC,然后将其接种到ADM,2d后移植到皮肤表皮缺损的SD大鼠体内,连续5周观察其修复效果。结果 BMSC-ADM修复SD大鼠皮肤表皮缺损效果良好,5周后,肉眼可见材料与组织结合紧密,有弹性,颜色接近皮肤。结论 BMSC-ADM可以作为修复SD大鼠皮肤表皮缺损的组织工程材料。     

NaOH消蚀法制备胎儿脱细胞真皮基质的研究

目的：探索NaOH消蚀法对胎儿真皮基质的成分及其形态结构的影响。方法：使用NaOH消蚀法制备胎儿皮肤的脱细胞真皮基质(ADM)，应用组织化学和免疫组织化学染色方法检测细胞的余留及细胞外基质成分的破坏情况，应用扫描电镜观察ADM的构筑。结果：NaOH消蚀处理16h即可去除真皮细胞成分。制备的ADM韧性好，勿需戊二醛交联。弹性纤维的含量有所减少而胶原纤维形态完整，排列正常，保留了基本的真皮构筑。HLA—DR呈阴性，Fibronectin(FN)呈弱阳性，Laminin(LN)和Ⅳ型胶原均呈阴性。结论：NaOH消蚀法简易经济，去除细胞成分较彻底，所制备的ADM韧性好，胶原纤维形态完整，排列正常，但对基膜的成分及结构破坏较重。     

脱细胞真皮基质在烧伤及整形创面修复中的应用

【内容介绍】脱细胞真皮基质(acellular dermal matrices,ADM)是一类经过特殊处理从而去除真皮组织内的细胞以及抗原成分而保留细胞外基质的生物材料;具有无毒性、无刺激性、无免疫原性的特点;是大面积深度烧伤患者及软组织缺损患者功能和外观修复需要的一种新选择。1995年Wainwright最早开展ADM的临床应用研究,在Ⅲ度烧伤切痂创面上应用ADM作为网状刃厚自体皮片移植的载体,获得较高的成活率,相当于薄中厚自体皮片的移植效果,作为刃厚皮片供皮区,供皮区愈合快、不留明显瘢痕。     

异种脱细胞真皮基质修复口腔黏膜组织缺损105例的临床观察

评价异种脱细胞真皮基质在修复口腔黏膜组织缺损修复中的临床效果。方法收集应用异种脱细胞真皮基质口腔修复膜修复口腔黏膜组织缺损105例患者资料,进行术后口腔感觉、张口度、咀嚼功能、术区瘢痕情况方面的功能评价和追踪随访。结果术后分别于14d、1个月、3个月随访,105例患者黏膜组织修复创面无明显瘢痕、挛缩少,无排斥反应,口腔无异常感觉,张闭口、咀嚼功能正常。结论异种脱细胞真皮基质口腔修复膜能早期覆盖创面,减轻手术创伤,是修复口腔内较大软组织浅层缺损的有效的方法。     

Characterization and tissue incorporation of cross-linked human acellular dermal matrix

Here, we describe a novel human acellular dermal matrix (ADM) cross-linked using electron beam irradiation. Structural and biomechanical characteristics of the human ADM were assessed by infrared spectrometry and uni-axial tensile testing. Electron beam irradiation affects collagen secondary structure, which can be detected in the amide I spectral region (1660 cm⁻¹ and 1690 cm⁻¹). At doses exceeding 25 kGy, cross-linking of the collagen matrix results in a denser, more stratified appearance and parallel arrangement, with significantly increased tensile strength and elastic modulus. In a micropig model, the implanted ADM elicits rapid host cell infiltration and extracellular matrix deposition; however, the delayed remodeling resulted in long-term structural integrity. Furthermore, mean densities of collagen and elastin, expression of extracellular matrix proteins, and microvessel formation within the implanted ADM increased significantly, whereas the thickness of the implanted ADM did not decrease during the course of the study. Compared with normal adjacent tissue, type I collagen mRNA levels in the ADM increased 12-fold at 3 months after implantation, and transforming growth factor-β mRNA levels increased 3.3-fold at 2 months. Matrix metalloproteinase (MMP)-1 and MMP-9 mRNA levels were also elevated. Collectively, these results demonstrate that the structural and biomechanical properties of this novel cross-linked human ADM are adequate for use as a biologic tissue substitute.     

优选人脱细胞真皮基质及荧光标记示踪与其复合培养的成纤维细胞

目的 优选人脱细胞真皮基质(ADM)并评价其生物学特性. 方法 通过高渗盐-NaOH消蚀法(A组)、高渗盐-十二烷基硫酸钠(SDS)法(B组)和DispaseⅡ-Triton X-100法(C组)制作人脱细胞真皮基质,以特殊染色、免疫组织化学观察3种方法 制作ADM的组成成分;四甲基偶氮唑盐(MTT)细胞毒性实验评价3种方法 制作ADM的细胞毒性反应;细胞培养法评价其细胞相容性,优选ADM .重组腺病毒绿色荧光表达载体(Ad-GFP)转染的人成纤维细胞(FB)接种在优选ADM上,荧光显微镜观察 FB的生长情况. 结果 3种方法 均能够保留胶原纤维、弹性纤维, A组和C组能够完全脱去细胞,B组未能完全脱去细胞;A组和B组制备ADM细胞毒性反应小于1级;C组制备ADM细胞毒性反应大于1级.A组与B组24h 3T3细胞贴壁数有统计学意义( P <0.05),3T3细胞能够在A组ADM表面贴附;优选A组ADM.转染Ad-GFP的FB在优选ADM上生长和增殖良好. 结论 高渗盐-NaOH消蚀法制备的ADM蕴涵丰富的生物信息,细胞毒性小,生物相容性好,是一种很好的生物支架材料.     

异种(猪)脱细胞真皮基质在糖尿病足溃疡修复中的应用效果

目的探讨异种(猪)脱细胞真皮基质(ADM)在糖尿病足溃疡修复中的应用效果。 方法选取宁夏回族自治区石嘴山市第一人民医院烧伤整形外科2015年3月至2017年6月收治的76例糖尿病足溃疡患者,采用电脑随机分组法将患者随机分为两组,每组38例,实验组患者应用异种(猪)ADM覆盖治疗,对照组应用磺胺嘧啶银乳膏包扎治疗,观察创面的愈合疗效、愈合时间、换药次数、换药2 h后疼痛视觉模拟评分、愈后患者满意度评分和创面病原菌检出率。对数据行χ²检验、t检验。 结果治疗2周后实验组治疗总有效率(94.74%)高于对照组(78.95%),差异有统计学意义(χ²＝4.145,P<0.05);实验组创面愈合时间[(24.21±3.21)d]短于对照组[(31.89±4.64)d],实验组创面换药次数[(8.34±1.12)次]少于对照组[(15.11±1.69)次],实验组疼痛视觉模拟评分[(3.29±0.25)分]低于对照组[(4.79±0.74)分],实验组愈后患者满意度评分[(9.08±0.49)分]高于对照组[(8.16±0.72)分],差异均有统计学意义(t＝8.359、20.560、10.364、6.548,P值均小于0.05);治疗1周后,两组创面分泌物病原菌检出率比较差异无统计学意义(χ²＝2.657,P>0.05)。 结论异种(猪)ADM作为糖尿病足创面覆盖物,改善局部微环境,促进创面肉芽组织生长,缩短创面愈合时间,减少细菌侵入,减轻患者心理和经济负担。     

戊二醛交联优化脱细胞真皮基质的生物相容性

目的 通过体内包埋实验将优化的脱细胞真皮基质(ADM)与成纤维细胞(FB)体外培养,探讨是否具有生物相容性. 方法 用高渗盐-NaOH消蚀法制备得到大鼠ADM,用低浓度戊二醛交联ADM,未交联A组(0min)作为对照,根据交联时间不同分成B组(10min)、C组(15min)和D组(30min).通过大鼠体内包埋实验对比各组ADM 物理性状、包埋后面积、炎性反应、浸润生长的FB和毛细血管数目,选择出最佳交联时间.制备优化的人ADM,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测ADM的细胞毒性;人FB与ADM复合培养检测其细胞相容性,用免疫组织化学和透射电镜观察FB的生长和增殖情况;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达. 结果 大鼠体内包埋实验显示,4周取材,未交联组不易触及移植物,植入物和周围的软组织基本融合难以分开;未交联组ADM的面积较包埋前缩小;未交联组ADM内有少量炎性细胞,胶原纤维嗜酸性弱;交联组ADM内未见炎性细胞,浸润生长的FB数目、血管数目与戊二醛交联时间的单因素相关性分析呈负相关;最佳的交联时间为10min.体外培养显示,优化ADM的细胞毒性反应0～1级;人FB能够很好地在优化的ADM表面贴附、生长和增殖;ADM内FBⅠ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低. 结论 高渗盐-NaOH消蚀法制备ADM,工艺简单、成本低、生物相容性好,可以提供细胞生长的空间,并可在细胞间转导通讯和信号,下调细胞外基质代谢系统.     

猪脱细胞真皮基质暂时闭合联合皮瓣蒂部回植修复腹部供瓣区的效果观察

目的观察猪脱细胞真皮基质暂时闭合联合皮瓣蒂部回植对腹部供瓣区的影响。 方法选取2010年1月至2016年12月北京积水潭医院收治的肘、前臂、手深度电烧伤、热压伤、外伤后软组织缺损伴内固定外露患者21例。清创后软组织缺损范围为7 cm×6 cm～11 cm×9 cm。创面采用腹部皮瓣修复,皮瓣蒂部及供瓣区部分创面以猪脱细胞真皮基质暂时闭合,断蒂时将皮瓣蒂部修整后回植修复腹部供瓣区。术后进行门诊随访,观察皮瓣存活情况、皮瓣下组织感染、液化、坏死情况及供瓣区并发症发生情况。 结果21例患者共22个创面均以皮瓣覆盖,皮瓣切取范围为10 cm×7 cm～18 cm×11 cm, 20个皮瓣切取宽度为8～10 cm,其余2个皮瓣宽度分别为7、11 cm。随意腹部皮瓣4个,髂腹股沟皮瓣16个,胸脐皮瓣2个,所有皮瓣均存活良好,无皮瓣下组织感染、液化及坏死现象出现。供瓣区术后无感染、出血、血清肿、缝合口裂开并发症。随访6～24个月,腹部供瓣区仅有较轻的线状瘢痕,外观较满意。 结论当采用腹部皮瓣修复肘关节至手部创面时,中小面积的供瓣区及皮瓣蒂部以猪脱细胞真皮基质暂时闭合,皮瓣断蒂时将蒂部回植至供瓣区,能预防术后供瓣区并发症,避免供瓣区植皮,改善局部外观。方法简单、易行、安全、可靠。     

异种羊脱细胞真皮基质与白体微粒皮复合移植后创面愈合及COX-2、VEGF的表达研究

目的制备异种羊脱细胞真皮基质（ADM）,观察异种羊ADM与白体微粒皮复合移植的组织学变化,以及免疫组化法检测环氧化酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）在复合移植过程中的表达。方法用0．25％胰蛋白酶和O．5％曲拉通（TritonX-100）溶液联合脱细胞法制备异种羊ADM。以48只Wistar大鼠为动物模型随机分为2组,每组各24只,背部做4cm×3cm全层皮肤缺损,分组采用羊ADM＋自体微粒皮＋异体皮（实验组）及自体微粒皮＋异体皮（对照组）覆盖,术后2、4、6周观察植皮区愈合情况,检测创面收缩率;同时,在以上不同时间段处死大鼠做组织病理学观察及免疫组化检查。结果（1）通过实验可成功制备出合格的异种羊ADM,脱细胞异种皮的镜下观察可见基质中的表皮已经完全除去,胶原纤维粗细均匀,排列规则,没有细胞成份存在。（2）进行移植术后,观察6周,两组皮片创面基本愈合,两组创面收缩率差异具有统计学意义（P〈0．05）,实验组术区收缩程度低,组织学检查可见成纤维细胞和血管长入,胶原纤维、弹力纤维结构排列规则;对照组创面收缩明显,组织学检查见成纤维细胞和血管无规则生长,胶原纤维、弹力纤维结构排列紊乱。两组大鼠创面COX-2、VEGF表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论异种羊ADM在彻底脱除了基质中有免疫原性的细胞成分的同时,义保留了组织的基本结构,成为极低抗原性的真皮支架,是一种良好的真皮替代物;异种羊ADM与自体微粒皮复合移植后外观和功能优于白体微粒皮移植;COX-2,VEGF可能参与了创面的修复。     

脱细胞（猪）基质早期封闭浅度大面积烧伤创面的临床研究

目的探讨异种（猪）脱细胞真皮基质敷料早期覆盖封闭大面积浅度烧伤创面的可行性。方法收集2000年至2005年入院的大面积浅Ⅱ度、深Ⅱ度偏浅烧伤患者60例，其中实验组30例，对照组30例。实验组在受伤后6h内在静脉全麻下行创面清创＋脱细胞（猪）真皮基质敷料一次覆盖封闭创面，一次包扎治疗。对照组采用常规清创后，聚维酮碘软膏外敷包扎治疗。对实验组和对照组进行一般情况观察、不同烧伤深度的愈合时间比较以及创面愈合质量比较；数据采用SPSS11．0统计软件进行统计学处理。结果实验组30例创面全部顺利愈合，浅Ⅱ度烧伤创面（6．0±1．2）d愈合，深Ⅱ度偏浅创面（12．0±2．7）d愈合，创面愈合后色素沉着，瘢痕少，仅有1例有轻微瘢痕增生。患者病情平稳，疼痛少，生活质量提高，取得满意的临床效果。对照组30例创面浅Ⅱ度（10．0±2．3）d愈合，深Ⅱ度偏浅创面（17．0±3．6）d愈合，其中深Ⅱ度偏浅创面愈合后有1例轻微瘢痕增生，4例严重瘢痕增生。结论脱细胞（猪）真皮基质敷料早期一次包扎治疗大面积浅度烧伤创面，方法可行，创面愈合快，最大限度保留创面再生能力，给创面愈合提供了良好的内环境。同时患者病情平稳，疼痛轻，瘢痕少，提高了生活质量，这一方法值得临床推广应用。     

一种新型无细胞真皮基质的研制

目的：研制一种新型的无细胞真皮基质。方法：用高渗盐除去异体皮肤的表皮细胞，经戊二醛交联后以低浓度NaOH消蚀以除去真皮中的细胞成分，得到无细胞真皮基质。结果：皮肤中所有细胞成分都被消除，胶原纤维稍松散，结构完整，排列正常。结论：经高渗盐—NaOH消蚀法能完全去除皮肤中的细胞成分而不损伤胶原纤维的三维结构，制备过程简单，具有很大的临床应用价值。     

异种(猪)脱细胞真皮基质粉对表皮细胞和成纤维细胞的促进作用

目的观察冷冻研磨获得的脱细胞真皮基质粉(ADMP)生物学性状,探索高纯度且保留生物活性的异种(猪)ADMP对表皮细胞和成纤维细胞生长的支持及在皮肤创伤修复中的应用。 方法选取幼龄长白猪背部皮肤,经生物酶法脱细胞、冷冻干燥后经过不同冷冻研磨程序得到异种(猪)ADMP,再由⁶⁰钴辐照获得无菌异种(猪)ADMP;通过扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察异种(猪)ADMP颗粒大小及胶原形态,确定适合应用的研磨程序;通过MTT法检测HaCaT细胞和BJ人皮肤成纤维细胞在不同浓度异种(猪)ADMP包被下的黏附作用,确定异种(猪)ADMP实现细胞最大黏附的浓度范围;DMEM培养液基添加异种(猪)ADMP为实验组,单纯DMEM培养液基为对照组,使用实时细胞分析技术分析BJ人皮肤成纤维细胞迁移指数,验证异种(猪)ADMP对成纤维细胞的促迁移作用;原代表皮细胞接种在异种(猪)ADMP培养液8 d,绘制增殖曲线,检测异种(猪)ADMP对原代表皮细胞的促增殖作用,同时免疫荧光检测原代表皮细胞表面成熟与分化蛋白的表达。对数据进行Student′s t－检验。 结果1、2、3、5、7、10次循环研磨获得异种(猪)ADMP,肉眼可见全部为白色、无块状,其中1、2、3次循环呈较粗颗粒;5、7、10次循环呈现集中均匀趋势,粒径分布在0～12 μm之间。其中5次循环粒径(13.00±2.10) μm与7次循环[(6.00±0.96) μm比较,差异有统计学意义(t＝6.093,P＝0.0002)。异种(猪)ADMP透射电子显微镜下发现,不同循环次数获得的异种(猪)ADMP均能保留大量胶原分子。BJ人成纤维细胞和HaCaT细胞随包被浓度的增加,细胞黏附作用不断增强,浓度高于750 μg/cm²,无明显变化。实时细胞分析技术检测BJ人皮肤成纤维细胞在DMEM培养液基对照组培养液72 h后的迁移指数为1.21±0.10,而异种(猪)ADMP培养液基试验组的迁移指数为3.66±0.11,两组比较差异有统计学意义(t＝22.24,P＝0.002)。在异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞形态统一增殖迅速,对照组出现一定比例的分化细胞,试验组与对照组第5天细胞数分别为(4.11±0.28)×10⁵、(1.10±0.12)×10⁵个,两组比较差异有统计学意义(t＝13.51,P＝0.005);第8天细胞数分别为(5.00±0.48)×10⁵、(3.05±0.30)×10⁵个,两组比较差异有统计学意义(t＝4.87,P＝0.039),增殖曲线显示试验组在接种即日培养液至第5天,一直处于指数增长期。荧光染色中异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞E-cad全部表达,少量表达角蛋白10,整合素α6几乎全部强阳性,角蛋白14全部表达并有部分强阳性,Ki-67抗原表达率高。 结论通过生物酶解和冷冻研磨获得的异种(猪)ADMP对参与皮肤创伤修复最重要的表皮细胞和成纤维细胞,具有促进其增殖和迁移的作用,未来可进一步应用于皮肤创伤修复。