4’-甲醚-黄芩素诱导人绒毛膜癌细胞凋亡的信号转导机理研究

目的:探讨4’-甲醚-黄芩素(4’-methyl ether-scutellarein,4-MS)诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡的信号传导机制。方法:光镜、电镜观察细胞形态、超微结构,RT-PCR技术检测Survivin、Caspase 9、Caspase 3、p38 MAPK基因的表达,Western blot检测Survivin、Caspase 9、Caspase 3、p38 MAPK、Bax和cytochrome C蛋白水平的表达差异。结果:光镜和电镜下可见凋亡细胞的形态学改变;RT-PCR结果显示,不同质量浓度(20、40μg/ml)的4-MS作用24h后,JAR细胞中Survivin mRNA表达显著下降,而Caspase 9、Caspase 3及p38 MAPK mRNA表达显著上升。Western blot证实,JAR细胞的Survivin蛋白表达量显著下降,Bax、cytochrome C蛋白表达量及p38磷酸化水平升高,Caspase 3与Caspase 9被明显激活。结论:4-MS通过上调Bax、cytochrome C、Caspase 9、Caspase 3表达,激活p38 MAPK信号通路及抑制Survivin表达,对JAR细胞内源性细胞凋亡信号转导通路进行正向调节而诱导细胞凋亡。     

4′-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究

目的 探讨4'-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制.方法 应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响.结果 不同质量浓度(10、20、40 mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72 h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P＜0.01);4-MS作用72 h后细胞内Ca2+浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05).40 mg/L 4-MS作用12、24、36 h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P＜0.01).20、40 mg/L 4-MS作用48 h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P＜0.01).结论 4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2+浓度、降低hTERT mRNA的表达有关.     

4′-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究

目的探讨4′-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响。结果不同质量浓度(10、20、40mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P<0.01);4-MS作用72h后细胞内Ca2 浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。40mg/L4-MS作用12、24、36h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P<0.01)。20、40mg/L4-MS作用48h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P<0.01)。结论4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2 浓度、降低hTERT mRNA的表达有关。     

4＇-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究

目的探讨4’-甲醚-黄芩素（4-MS）对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法，体外观察4-MS对JAR细胞的影响。结果不同质量浓度（10、20、40mg／L）的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用，呈剂量依赖，作用72h后其增殖抑制率分别为（14.14±0.75）％、（34.34±2.99）％、（61.11±2.99）％（P〈0.01）；4-MS作用72h后细胞内Ca^2＋浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0，与对照组相比差异有显著性（P〈0.05）。40mg／L4-MS作用12、24、36h后其早期凋亡率分别为（2.36±0.19）％、（4.22±2.44）％、（7.34±0.56）％，明显高于对照组（P〈0.01）。20、40mg／L4-MS作用48h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01，明显低于对照组（P〈0.01）。结论4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖，诱导凋亡，其机制与提高细胞内Ca^2＋浓度、降低hTERT mRNA的表达有关。     

黄芩素对肿瘤细胞MKN45凋亡与增值的影响

目的探讨黄芩素诱导胃癌细胞株MKN45凋亡的作用机制,为黄芩素在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法采用MTT法检测黄芩素抑制细胞增殖的半数抑制浓度(IC50);采用不同浓度的黄芩素处理细胞,用流式细胞仪检测胃癌细胞株MKN45的凋亡情况;采用免疫组化方法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达情况。结果黄芩素对细胞生长的IC50为126.39umol/L。50、100、200μmol/L黄芩素能够诱导胃癌细胞MKN45凋亡,凋亡率与剂量呈正相关。50、100、200μmol/L黄芩素诱导caspase-3的表达。结论黄芩素能诱导胃癌细胞凋亡,可能与其诱导caspase-3的表达有关;并明显抑制癌细胞增殖,具有抗MKN45细胞作用。     

黄芩素对中波紫外线诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响

目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响。方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT),取对数生长期的细胞,随机分为空白组、模型组和黄芩素组,并用30 mJ·cm~(-2)的UVB照射模型组和黄芩素组,建立光老化模型。噻唑蓝(MTT)比色法筛选黄芩素的有效安全浓度,并测定黄芩素对光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及Caspase-9蛋白表达水平。结果:筛选出1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素为最佳有效安全浓度。与空白组比较,模型组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01)。结论:黄芩素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控Bcl-2家族中抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,降低凋亡相关细胞因子Caspase-3和Caspase-9的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡。     

姜黄素对人绒毛膜癌JAR细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人绒毛膜癌JAR细胞增殖抑制及细胞周期的影响,并探讨cyclin A及CDK2蛋白表达水平的变化。方法用不同浓度的药物作用于JAR细胞,采用MTT检测药物对细胞的增殖抑制能力的影响,采用流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响,Western-blot检测cyclin A、CDK2的蛋白表达水平变化。结果姜黄素能明显抑制JAR细胞增殖,且具有明显的剂量和时间依赖性,流式细胞术检测显示一定浓度药物作用细胞,可将细胞周期阻滞于S期,Westernblot检测发现药物能下调cyclin A及CDK2蛋白的表达。结论姜黄素能显著抑制JAR细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期,其机制可能是通过下调cyclin A及CDK2蛋白表达水平所致。     

5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮通过线粒体途径诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡

目的探讨5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮(5,2’,4’-trihydroxy-6,7,5’-trimethoxyflavone,TTF1)诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的诱导作用及机制。方法 TTF1作用HepG-2细胞后,采用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率,采用Western blot检测bcl-2、bax、cyt-c、caspase-3和caspase-9蛋白表达。结果 TTF1能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖、诱导凋亡。Western blot结果显示,TTF1明显降低bcl-2 mRNA及蛋白表达,增加bax、胞质cyt-c、caspase-3和caspase-9 mRNA及蛋白表达。结论 TTF1可以通过线粒体途径诱导人肝癌HepG-2细胞发生凋亡。     

黄芩素诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是细胞在一定生理和病理条件下,由基因控制、遵循自身程序的细胞自主性死亡,包括内外两种凋亡途径。诱导肿瘤细胞凋亡已成为抗肿瘤的重要方法之一,化疗药物由于不良反应较大应用受到一定限制,中药通过诱导肿瘤细胞凋亡而抗肿瘤受到越来越多的关注。黄芩素是黄芩中的黄酮类化合物,研究表明其具有抗肿瘤作用,其作用机制有多个方面,从其诱导肿瘤细胞凋亡方面探讨其抗肿瘤的机制,以期为肿瘤的实验研究及临床治疗提供借鉴。     

黄芩素对绒毛滋养细胞侵袭的影响

目的:通过研究黄芩素对人类早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo的增殖活力、侵袭能力的影响,探讨中药黄芩作用于滋养细胞侵袭相关疾病的可能作用机制。方法:体外培养早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞,以不同浓度(0.01,0.05,0.1,0.5,1μmol·L~(-1))黄芩素作用于细胞,设黄芩素0μmol·L~(-1)为空白组,采用细胞增殖、毒性活力实验法(cell counting kit-8,CCK-8)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞增殖活力的影响,细胞侵袭实验(Transwell)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞侵袭作用的影响。提取黄芩素处理后的细胞总RNA,蛋白,分别运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滋养细胞侵袭相关的重要因素-基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9的mRNA,蛋白表达水平;收集细胞上清,培养基采用明胶酶谱法检测黄芩素对MMP-2,MMP-9的分泌及酶活性的影响。结果:与空白组比较,0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L~(-1)黄芩素能明显诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力(P0.05),且侵袭率对剂量呈依耐性增长。0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L~(-1)黄芩素可明显上调MMP-9蛋白和mRNA表达水平,增强其酶活性(P0.05)。结论:黄芩素能诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力,可能是通过增强MMP-9 mRNA和蛋白表达及酶活性来发挥作用。     

氧化苦参碱对结肠癌LoVo细胞c-myc,PSMD9,CDK4mRNA表达的影响

目的:探讨氧化苦参碱( oxymatrine,OM)抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡的分子作用机制.方法:采用流式细胞仪检测LoVo细胞凋亡率以及细胞周期分布;采用荧光定量PCR法检测0.25,0.5 g·L-1 OM对LoVo细胞增殖相关基因c -myc,蛋白酶调解因子9(PSMD9),CDK4的基因表达的影响.结果:0.5 g·L-1以下浓度的OM作用结肠癌LoVo细胞48 h,对细胞凋亡无明显影响.0.25 g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制人结肠癌LoVo细胞c-myc基因表达(P＜0.05).0.5g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制LoVo细胞c-myc,CDK4的基因表达(P ＜0.01,P＜0.01,).药物作用时间为96 h时,0.5g·L-1 OM可明显抑制c-myc,PSM D9,CDK4基因表达(P＜0.05,或P＜0.01).结论:较低剂量OM显著抑制人结肠癌LoVo细胞增殖的作用机制,可能与下调LoVo细胞c-myc,PSM D9,CDK4表达有关.     

汉黄芩素对食管癌KYSE150细胞周期和凋亡的影响

目的:观察汉黄芩素对食管癌KYSE150细胞生长的影响及其机制,为汉黄芩素应用于临床抗肿瘤提供理论依据。方法:不同浓度的汉黄芩素作用于KYSE150细胞后,MTS法检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果:KYSE150细胞的生长受汉黄芩素的抑制并且呈浓度依赖性,IC50=(68. 59±3. 43)μM;细胞周期检测结果表明,汉黄芩素可阻滞KYSE150细胞周期进展,将细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞凋亡实验表明汉黄芩素可以诱导细胞凋亡。结论:汉黄芩素具有抗食管癌KYSE150细胞生长的作用,其机制为抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

黄芩素对子宫颈癌Hela细胞表皮生长因子受体表达的影响

目的 研究黄芩素对子宫颈癌Hela细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,探讨黄芩素抗肿瘤的分子机制。方法 采用CCK-8法检测黄芩素对Hela细胞增殖的抑制作用,real-time PCR法和Western blot法检测黄芩素对Hela细胞EGFR表达的影响。结果 黄芩素可在体外抑制Hela细胞的增殖,并对EGFR的表达有显著的抑制作用,呈剂量依赖性。结论 黄芩素可能是通过EGFR通路抑制子宫颈癌Hela细胞的增殖。     

黄芩素对Aβ诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:研究黄芩素对β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein, Aβ)诱导PC12细胞损伤的保护作用,探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测各组细胞活性,筛选黄芩素安全有效浓度;将PC12细胞按随机数字表法分为空白组、Aβ组、黄芩素组、雌二醇组。接种24 h后,黄芩素组给予1×10 -6 mol/L...     

4’-去甲峨参内酯对四种肿瘤细胞凋亡的作用及机理研究

目的:探讨4’-去甲峨参内酯(0号衍生物)作用于Hela、MG-63、Hep G2、A549四种肿瘤细胞后,对Bcl-2、Bax基因表达、细胞周期及凋亡产生的影响。方法以0号衍生物作为观察组,0.1%DMSO作为空白对照组,紫杉醇作为阳性对照组,分别作用48 h后采用ELISA试剂盒检测对四种肿瘤细胞Bcl-2、Bax表达的影响;采用流式细胞仪PI单标法检测细胞周期进程及凋亡的影响。结果 ELISA试剂盒检测表明,观察组及阳性对照组与空白对照组比较Bcl-2/Bax比值均明显降低,具有显著性差异(P0.05);流式细胞仪检测0号衍生物作用四种肿瘤细胞48h后对细胞周期进程及凋亡的影响,结果表明G0/G1期细胞百分数降低,G2/M期细胞百分数基本不变,而S期细胞百分数上升,说明0号衍生物阻滞肿瘤细胞于S期,且sub-G1细胞亚二倍体凋亡峰增加,进一步说明其诱导凋亡的作用。结论 0号衍生物通过上调Bax、下调Bcl-2,促进肿瘤细胞凋亡;阻滞肿瘤细胞于S期,sub-G1峰增加,显示其具有诱导细胞凋亡的作用。     

4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素及鬼臼苦素抑制肿瘤细胞生长作用研究

目的:探讨不同浓度4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素对宫颈癌细胞Hela和黑色素瘤细胞B16增殖的抑制作用;鬼臼苦素对Hela细胞、肝癌Hep G2细胞、肺癌A549细胞及骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用。方法:采用MTT法检测不同浓度的4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素及鬼臼苦素对以上多种癌细胞的抑制作用。结果:不同浓度4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素与对照组(0.1%DMSO)相比,对肿瘤细胞生长抑制率明显升高,均有显著性差异(P<0.05);不同浓度鬼臼苦素与对照组(0.1%DMSO)相比,对肿瘤细胞生长抑制率也明显升高,均有显著性差异(P<0.05)。结论:4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素对Hela细胞和B16细胞增殖具有明显的抑制作用,鬼臼苦素对Hela、MG-63、Hep G2及A549细胞具有明显的抑制作用。     

中药单体汉黄芩素诱导肺癌细胞凋亡及其机制初步研究

目的 考察汉黄芩素对肺癌细胞株A549的增殖、凋亡的影响,并初步探讨其分子机制.方法 MTT法检测汉黄芩素对A549增殖的影响;Hochest染色、流式细胞仪等检测对细胞凋亡的影响;Western-blotting检测汉黄芩素对凋亡相关蛋白的影响.结果 汉黄芩素能抑制A549细胞的生长,其细胞增殖抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖关系.形态学上观察汉黄芩素明显诱导肺癌细胞A549凋亡,同时明显抑制了凋亡相关蛋白BCL-2、survivin蛋白的表达,提升Bax蛋白表达.结论 汉黄芩素可以明显诱导肺癌细胞A549的凋亡,其诱导凋亡分子机制可能与下调BCL-2、survivin蛋白表达有关.     

汉黄芩素对脂多糖诱导一氧化氮和单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的:研究汉黄芩素对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞分泌一氧化氮(NO)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法:采用体外LPS诱导小胶质细胞活化模型,用ELISA法测定细胞外液中NO和MCP-1的含量。结果:LPS能激活小胶质细胞并且能使NO和MCP-1分泌增加,汉黄芩素明显抑制NO和MCP-1的含量。结论:汉黄芩素有抑制NO和MCP-1的分泌作用。     

黄芩主要成分对PDB＋Ion诱导的Jurkat T 细胞CD69表达的影响

目的 :探讨治疗银屑病的临床有效外用药芩柏软膏中黄芩的主要成分黄芩苷(baicalin)、黄芩素(baicalein)和汉黄芩素(wogonic)对T细胞早期活化标志CD69表达的影响。 方法 :以体外培养的Jurkat T细胞为模型,以二丁基佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)和离子霉素(Ionomycin,Ion)为刺激剂,采用单荧光染色流式细胞技术,检测Jurkat T细胞经PDB＋Ion刺激4 h后早期活化表面分子CD69的表达,以观察黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对Jurkat T细胞体外活化的影响。 结果 :在体外培养条件下,黄芩苷(200,100,50 mg ·L^-1)、黄芩素(54,27,13.5 mg ·L^-1)和汉黄芩素(8,4 mg ·L^-1)均能抑制PDB＋Ion刺激时Jurkat T细胞CD69的表达,且有剂量依赖性。 结论 : 黄芩主要成分黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素可明显抑制Jurkat T细胞的体外活化,这可能是黄芩用于治疗银屑病的作用机制之一。     

黄芩素对内毒素诱导的内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的研究黄连解毒汤有效成分黄芩素对细菌脂多糖（LPS）诱导的人血管内皮细胞细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和抑制蛋白KB（I-KB）表达的影响。方法分别用LPS（终浓度1μg／mL）或LPS＋黄芩素（终浓度1umol／L,10μmol／L、50μmol／L）处理生长良好的ECV-304细胞,用RT～PCR和WesternBlot法检测ICAM=1表达情况和I—KB含量变化。结果LPS刺激ECV-304细胞可促进I～KB降解,上调ICAM-1表达水平,与空白对照组比较有统计学意义（P〈O．01）;黄芩素预处理能抑制LPS诱导的I—gB降解,降低IcAM-1l表达水平,与LPS组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论黄芩素可通过抑制I—KB降解,影响NF-KB炎症信号途径,下调IcAM-1的表达,这可能是黄连解毒汤抗动脉粥样硬化的作用机制之一。