经前期综合征肝气郁证大鼠下丘脑ERβ的表达及配体受体结合活性的研究

目的 探讨经前期综合征(PMS)肝气郁证发病的微观分子机理和中药经前舒颗粒对PMS肝气郁证的干预机制。方法 雌性SD大鼠随机分为3组:正常对照组、模型组和经前舒组。慢性束缚应激法复制PMS肝气郁证大鼠模型,以经前舒颗粒进行药物干预。放射性配体受体结合技术测定下丘脑中雌激素受体β亚型(ERβ)的结合活性变化;Western blot技术检测下丘脑中ERβ蛋白的表达。结果 与正常对照组比较,PMS肝气郁证模型组大鼠下丘脑中ERβ的配体受体结合活性、蛋白表达显著升高(P < 0.05),而经前舒组可纠正其异常升高。结论 下丘脑中ERβ表达量、配体受体结合活性的升高可能是导致PMS肝气郁证的重要病因;经前舒颗粒对下丘脑中ERβ表达、配体受体结合活性的异常变化有纠正作用。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠下丘脑和海马雌激素受体α,β mRNA表达的影响

目的:研究中药复方经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠下丘脑和海马中雌激素受体α(ERα)和β(ERβ)mRNA表达的影响.方法:以情志刺激多因素法复制PMS肝气郁证大鼠模型,使用中药复方经前舒颗粒进行干预治疗,采用RT-PCR法检测大鼠下丘脑和海马中ERα和ERβ mRNA表达变化.结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠下丘脑和海马中ERα和ERβmRNA表达量高于正常组(P＜0.05);与模型组大鼠相比,经前舒颗粒给药组大鼠下丘脑和海马中ERα和ERβ mRNA表达量则显著降低(P＜0.05),与正常组无差异.结论:经前舒颗粒可下调下丘脑和海马中ERα和ERβmRNA表达水平,这可能是其治疗PMS肝气郁证的作用机制之一.     

经前期综合征肝气郁证大鼠海马雌激素受体α和β研究

目的研究经前期综合征（premenstrual syndrome,PMS）肝气郁证大鼠海马雌激素受体（estrogenreceptor,ER）α和β分布模式、蛋白表达和功能活性的改变情况以及调肝方药经前舒颗粒的相应作用靶点,为深入探索PMS肝气郁证病机和经前舒颗粒的作用机制提供线索。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组和给药组,每组7只。模型组和给药组采用居住入侵法进行造模。给药组大鼠造模同时给予经前舒颗粒10 mL/kg灌胃;模型组和正常组大鼠给予同等体积灭菌水灌胃,均每天1次,连续5天。运用免疫组织化学法、Western blot和葡聚糖-活性炭单点测定法分别检测各组大鼠海马中ERα和ERβ定位、蛋白水平及与雌激素的结合活性。结果各组大鼠海马中ERα和ERβ分布无明显差异;海马整体及CA1、CA3区内ERα和ERβ蛋白水平以及与雌激素结合活性方面,模型组较正常组均明显升高（P〈0.05）,给药组较模型组则明显下降（P〈0.05）。结论海马高雌激素水平及ERα、ERβ表达和活性增强可能是PMS肝气郁证的重要病机和经前舒颗粒的作用靶点。     

经前舒对大鼠海马神经元细胞ERβ蛋白和基因表达的影响

目的 观察经前舒颗粒对大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达的影响,探讨经前舒颗粒治疗经前期综合征(PMS)肝气郁证的作用机制.方法 以束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,给药组给予调肝方药经前舒颗粒,模型组给予灭菌饮用水,并设不造模正常组,取各处理组血清,对体外培养大鼠海马神经元细胞进行干预;采用蛋白质印迹技术(Western blot,WB)和半定量RT-PCR技术分别对各组细胞ERβ蛋白和基因表达变化进行检测.结果 模型组血清能显著升高大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达水平,western blot 和RT-PCR检测结果均显示经前舒颗粒含药血清能显著改善PMS肝气郁证模型血清干预的大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达水平异常升高的状况.结论 大鼠海马神经元中的ERβ是调肝方药经前舒颗粒的作用靶点之一,经前舒颗粒可能通过降低ERβ蛋白和基因的表达水平而发挥治疗作用.     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠大脑皮层雌激素受体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(Premenstrual Syndrome,PMS)肝气郁证大鼠大脑皮层雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达水平的影响。方法:束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验对模型评价,RT-PCR和Western blot方法分别检测大鼠大脑皮层ERα、ERβ的mRNA及蛋白的表达。结果:经前舒颗粒给药后大鼠旷场实验得分显著升高,大脑皮层中ERα、ERβ的mRNA和蛋白表达均显著降低。结论:大鼠大脑皮层中ER是经前舒颗粒的作用靶点之一,经前舒颗粒可能通过降低大脑皮层中ERα、ERβ的表达而发挥疗效。     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证大鼠下丘脑ERα,ERβ分布与表达的影响

目的:观察经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠下丘脑不同核团雌激素受体(ER)α,ERβ蛋白分布及表达的影响,研究经前舒颗粒治疗该病症的中枢作用机制.方法:将30只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型给药组,每组10只.采用慢性束缚应激造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型.造模同时,模型给药组按10 g·kg-1剂量ig给药.造模结束后,通过免疫组织化学技术ABC法检测各组大鼠雌激素受体α,β在下丘脑中的定位分布并分析其积分吸光度(IA);HPLC检测各组大鼠下丘脑中5-羟色按(5-HT)含量.结果:3组大鼠雌激素受体ERα,ERβ主要分布在下丘脑的腹内侧区(VMH)核团,分布区域无差异.模型组VMH区ERα,ERβIA分别为163605±27284和147318±24924与正常组IA(130156±32579,105430±28641)相比显著升高(P ＜0.05,P＜0.01);给药组ERα,ERβIA为122020±21 287和77482±31112,与模型组相比显著降低(P＜0.01,P＜0.01).模型组大鼠下丘脑5-HT含量(454.51 ±65.18)μg·L-1与正常组(144.47±42.20) μg· L-1相比显著升高(P＜0.01),给药组(234.11±14.38)μg·L-1与模型组相比5-HT含量显著下降(P＜0.01).结论:下丘脑VMH区ERα,ERβ蛋白表达升高可能是PMS肝气郁证发病的中枢机制之一.经前舒颗粒可有效改善这种状态,提示下丘脑ERα,ERβ可能是该药治疗PMS肝气郁证的部分作用靶点.     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠海马和下丘脑5-HT1A受体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证大鼠海马下丘脑5-羟色胺1A受体( serotonin receptor-1A,5-HT1AR)表达水平的影响.方法:束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验评价模型,RTPCR和Western blot方法分别检测大鼠海马和下丘脑5-HT1AR的mRNA及蛋白的表达.结果:经前舒颗粒给药后大鼠旷场实验得分显著升高,海马、下丘脑5-HT1AR mRNA和蛋白表达均显著升高.结论:经前舒颗粒可上调海马和下丘脑中5-HT1AR的表达,这可能是其治疗PMS肝气郁证的作用机制之一.     

经前期综合征肝气逆证模型大鼠脑雌激素α受体蛋白水平的表达

目的研究经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠不同脑区雌激素α受体蛋白水平的表达差异,探讨PMS肝气逆证的发病机制。方法以电刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型,采用免疫荧光标记结合激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测大鼠下丘脑和顶区皮质中雌激素α受体的蛋白表达量及定位分布模式。结果模型组大鼠下丘脑和顶区皮质中雌激素α受体蛋白表达水平与正常组相比有明显降低(P0.01),经前平颗粒干预后大鼠下丘脑和顶区皮质中该受体表达水平较模型组明显升高(P0.01,P0.05)。结论 PMS肝气逆证模型大鼠会出现下丘脑和顶区皮质雌激素α受体蛋白表达下调,经前平颗粒干预后可改变异常下调状态。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证 大鼠海马和下丘脑5-羟色胺转运体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠海马、下丘脑5-羟色胺转运体(5-HTT)表达的影响,从分子水平探讨经前舒颗粒的作用机制。方法:雌性SD大鼠随机分为正常对照组、肝郁模型组、经前舒颗粒给药组(10 g.kg-1)和氟西汀给药组(0.002 5 g.kg-1),束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,给药组大鼠ig给药5 d后,旷场实验、糖水偏好实验对模型进行评价,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术分别检测大鼠海马和下丘脑5-HTT的mRNA及蛋白的表达。结果:与肝郁模型组相比经前舒和氟西汀给药组大鼠糖水偏好指数及旷场实验得分均显著升高(P<0.05,P<0.01);经前舒和氟西汀给药均能显著上调海马和下丘脑中5-HTT的mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),两给药组间无显著性差异。结论:经前舒颗粒的作用机制可能是通过调节海马、下丘脑中5-HTT的表达而发挥作用。     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB表达水平的影响

目的 通过研究PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB基因的表达,探讨PMS肝气郁证的微观发病机制及中药经前舒颗粒的作用靶点.方法 束缚法制备PMS肝气郁证模型大鼠,用经前舒颗粒干预治疗,运用半定量RT-PCR和Western Blotting方法检测正常组、模型组、给药组大鼠下丘脑区MAOA、MAOB mRNA及其蛋白表达水平;通过单因素方差分析及LSD法统计数据.结果 与正常组相比,PMS肝气郁证模型组大鼠MAOA mRNA在下丘脑表达显著升高(P<0.05),蛋白表达极显著升高(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与模型组相比,MAOA mRNA在下丘脑表达降低(P<0.05),蛋白表达显著降低(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与正常组相比,MAOA、MAOB mRNA及蛋白在大鼠下丘脑中表达均无统计学差异(P>0.05).结论 模型组大鼠与正常组大鼠相比,下丘脑MAOA基因表达升高,通过经前舒颗粒干预后,恢复正常.说明MAOA基因与PMS肝气郁证相关,并且可能是经前舒颗粒治疗该证的作用机制之一.     

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证大鼠脑μ阿片受体mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察经前平颗粒对经前期综合征(premenstrual syndrome, PMS)肝气逆证大鼠脑顶区皮质、额区皮质、下丘脑、海马μ阿片受体(μ opioid receptor, MOR) mRNA及蛋白的表达的影响。方法 取20只大鼠制备PMS肝气逆证大鼠模型。造模后大鼠分为模型组、中药组,每组10只。另选取10只大鼠作为正常对照组(正常组)。造模同时,中药组大鼠给予经前平颗粒 (1.6 g/kg) 灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水(1 mL/100 g)灌胃,每天1次,连续5天。采用RT-PCR和Western blot法分别检测大鼠顶区皮质、额区皮质、下丘脑和海马MOR mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白扩增产物电泳条带相对较弱,光密度值降低,顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白相对表达降低;下丘脑、海马MOR mRNA及蛋白电泳条带相对较强,光密度值升高;下丘脑、海马MOR mRNA及蛋白相对表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01, P<0.05)。与模型组比较,中药组大鼠顶区皮质、额区皮质MOR mRNA及蛋白扩增产物电泳条带增强,顶区皮质MOR mRNA表达升高,顶区皮质和额区皮质MOR蛋白相对表达升高;下丘脑和海马MOR mRNA及蛋白电泳条带亮度减弱,下丘脑和海马MOR mRNA相对表达降低,海马MOR蛋白相对表达降低,差异均有统计学意义(P<0.01, P<0.05)。结论 MOR在PMS肝气逆证大鼠不同脑区呈现特异性表达,经前平颗粒表现出相应调节作用。     

疏肝法对围绝经期综合征肝郁证模型大鼠雌激素受体mRNA表达的影响

目的：观察疏肝法对围绝经期综合征(perimenopausal syndrome, PMS)肝郁证模型大鼠行为学及其卵巢雌激素受体(Estrogen receptor, ER)mRNA表达的影响,探讨其作用机制。方法将围绝经期大鼠按随机数字表法分为模型组、柴胡疏肝散组、丹栀逍遥散组,每组8只。采用孤养法联合慢性束缚法制备PMS肝郁证大鼠模型。另将8只3月龄SD健康大鼠作为正常对照组。柴胡疏肝散组大鼠灌胃柴胡疏肝散水煎剂4.0 g/kg,丹栀逍遥散组灌胃丹栀逍遥散水煎剂4.9 g/kg,模型组及正常对照组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续给药21 d。采用旷场实验观察各组大鼠行为学变化;采用放射性免疫技术检测大鼠血清雌二醇、卵泡刺激素及促黄体生成素水平;采用实时荧光定量PCR法检测大鼠卵巢组织ERα、ERβ mRNA表达变化。结果给药后21 d,与模型组比较,柴胡疏肝散组、丹栀逍遥散组大鼠水平运动得分[(49.6±6.0)分、(51.6±5.8)分比(40.0±4.6)分]、垂直运动得分[(14.1±0.7)分、(14.6±2.3)分比(10.9±1.8)分]提高(P＜0.05及P＜0.01);柴胡疏肝散组大鼠卵巢ERα mRNA[(7.42±2.54)比(3.80±1.36)]表达水平升高(P＜0.01),血清卵泡刺激素[(3.96±0.48)mIU/ml比(5.31±0.41)mIU/ml]水平降低(P＜0.01);丹栀逍遥散组大鼠血清促黄体生成素[(6.65±0.46)mIU/ml 比(8.10±0.62)mIU/ml]水平降低(P＜0.01)。结论疏肝法可改善 PMS 肝郁证大鼠的行为学,其治疗机制可能与调节内分泌及提高卵巢雌激素受体基因表达相关。     

白芍提取物对经前期综合征肝气郁证模型大鼠额叶5-HT3A/3BR分布与蛋白表达的影响

目的：本研究就5-羟色胺3受体（5-HT₃R）水平探讨白芍提取物（Radix Paeoniae Alba Extract,RPAE）干预经前期综合征（Premenstrual Syndrome,PMS）肝气郁证抑郁情绪的分子作用机制。方法：复制PMS肝气郁证大鼠模型,用白芍提取物进行药物干预,采用免疫荧光技术和蛋白印迹技术（western blot）分别检测5-HT_3AR和5-HT_3BR在大鼠脑内的分布和蛋白表达情况。结果: 5-HT_3AR和5-HT_3BR在各组大鼠额叶均有阳性表达;与正常组大鼠相比,模型组大鼠额叶5-HT_3AR、5-HT_3BR蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）;与模型组大鼠相比,白芍提取物组大鼠额叶5-HT_3AR蛋白表达水平均显著下降（P<0.05）。结论：白芍提取物能够调控PMS 抑郁症大鼠额叶5-HT_3AR和5-HT_3BR蛋白表达,这可能是其干预PMS肝气郁证抑郁情绪的作用机制之一。     

应用fMRI技术探查静息态经前期综合征肝气郁证患者中枢脑区定位

目的：探寻与经前期综合征肝气郁证发病密切相关的脑区。方法：采用BOLD-功能磁共振成像技术,影像学数据基于matlab平台的SPM 8软件以及rest软件进行图片处理,每个簇块体积阈值（Cluster）大于389个连续体素,单体素阈值P<0.05（校正后）的脑区定义为差异有统计学意义的区域,病例组和对照组采用双样本t检验。结果：PMS肝气郁证患者与正常对照相比,额叶、枕叶、岛叶、边缘叶、基底核、扣带回等脑区激活增强。结论：PMS肝气郁证患者发病与额叶、枕叶、岛叶、边缘叶、基底核、扣带回等脑区有关。     

经前期综合征肝气逆、郁病证结合模型大鼠外周血和不同脑区性激素及其调节激素含量变化的实验研究

目的:借助前期研制成功的PMS肝气逆、郁两证大鼠模型检测其血清与不同脑区中E2、P、PRL含量,探索"肝失疏泄"的微观机制.方法:挑出动情周期非接受期大鼠40只,随机分为5组:正常对照组、PMS肝气逆证造模组、PMS肝气郁证造模组、PMS肝气逆证造模给药组、PMS肝气郁证造模给药组.肝气逆证大鼠模型以情志刺激为主多因素复合造模法制备,肝气郁证大鼠模型以慢性束缚应激法制备,模型复制成功后肝气逆大鼠模型用经前平颗粒干预,肝气郁证大鼠模型用经前舒颗粒干预.放射免疫法测定血清及中枢中E2、P、PRL含量,比较各组差异并进行分析.结果:旷场实验中,与正常对照组比较,大鼠造模后逆模组水平得分、垂直得分及可旷场实验总分均显著增加(P＜0.05),而郁模组大鼠则显著减少(P＜0.05),用药后这一趋势得到明显纠正(P＜0.05).肝气逆证模型大鼠症状呈现其血清中E2和P含量均呈下降趋势,肝气郁证模型大鼠血清中E2和P含量亦较正常对照组明显降低.中枢内激素变化与血清中相反.结论:PMS两证症状产生可能与体内性激素及其调节激素异常波动有关,经前平、经前舒颗粒可分别对外周血及中枢上述指标的异常变化起到调节作用.     

白香丹对PMS肝气逆证模型大鼠GABA_BR亚基分布及表达的影响

目的观察白香丹对经前期综合征(PMS)肝气逆证模型大鼠额区和下丘脑中γ-氨基丁酸(GABA)B1受体(GBR1)、γ-氨基丁酸B2受体(GBR2)分布及表达的影响,探讨白香丹对PMS肝气逆证的干预机制。方法通过旷场实验和阴道涂片法筛选健康雌性Wistar大鼠进入实验,采用电刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型,用免疫荧光双标记技术检测GBR1和GBR2在额区和下丘脑中的表达。结果与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠垂直得分、水平得分和总分均显著增加(P<0.01),GBR1和GBR2蛋白在额区和下丘脑中的表达水平降低(P<0.01);与模型组大鼠比较,白香丹组和巴氯芬组大鼠旷场得分显著降低(P<0.01,P<0.05),GBR1和GBR2蛋白在额区和下丘脑中的表达水平明显上升(P<0.01,P<0.05),但两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GABABR亚基(GBR1和GBR2)表达的下调可能与PMS肝气逆证的发生密切相关;白香丹可对GBR1、GBR2的表达起到调节作用。