白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株的易感性分析

摘要：目的了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。方法通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和
致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及
致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、
致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致
倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠
乙脑病毒分离株。
     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株的易感性分析

目的了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。方法通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株。     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株易感性的初步观察

了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。 方法 通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。 结果 两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论 白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株。     

白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析

目的：PCRI地扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌Wolbachia 16S rRNA序列，分析其种系发生关系及传播方式。方法：从单只雌蚊中提取DNA，PCR法扩增16S rRNA序列，扩增产物进行克隆及测序。结果：从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16S rRNA序列，并克隆入pGEM-T载体，测序证明两序列长度分别为897bp.结论：成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列，测序和同源性分析表明，它们之间的同源性为99．9％，提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式。     

三种植物挥发油的驱蚊效果研究

目的:了解八角茴香、樟树叶、花椒3种不同植物挥发油对白纹伊蚊、致倦库蚊的驱避效果.方法:水蒸气蒸馏法提取的3种植物挥发油稀释为2％、5％及10％3种浓度,分别喷洒小鼠全身,记录3h内白纹伊蚊、致倦库蚊在小鼠身上的停留数量,观察不同浓度和不同植物油的驱蚊效果;选取3种驱蚊效果最佳浓度挥发油两两复方混配(2∶1、1∶2),观察混配复方植物挥发油的驱蚊效果.结果:对白蚊伊蚊及致倦库蚊有效驱避率的3种植物挥发油的浓度依次为10％＞5％＞2％,两两比较差异有统计学意义(P＜0.05),在10％浓度对两种蚊虫驱避效果最佳的是樟树叶和花椒;不同混配复方对白纹伊蚊和致倦库蚊均有明显的有效驱避效果,不同混配复方驱避效果相当(P＞0.05),但白纹伊蚊驱蚊和致倦库蚊驱避作用最佳的混配复方植物挥发油是1∶2的樟树叶与八角茴香复方,有效驱避率高于单方.结论:复方混配植物挥发油对白纹伊蚊及致倦库蚊的驱避效果好.     

从白纹伊蚊与致倦库蚊分离和鉴定可结合登革Ⅱ病毒的蛋白分子

目的筛选登革Ⅱ病毒（DENV-2）识别白纹伊蚊、致倦库蚊的连接分子。方法提取不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊的总
蛋白,用SDS-12% PAGE进行分析,用病毒覆盖蛋白结合试验（VOPBA）筛选不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊表达连接
DENV-2分子。结果VOPBA检测不同发育时期白纹伊蚊显示：幼虫样品的泳道可见到25 000、35 000、50 000的DEN-2结合分
子,蛹样品的泳道可见到35 000、50 000分子,雄蚊样品可见到50 000分子,雌蚊样品中可见到35 000、50 000分子。DEN-2结
合蚊35 000分子在白纹伊蚊幼虫、蛹及成蚊的雌蚊的三个阶段均存在,而雄蚊的成蚊则缺少这一分子。VOPBA检测不同发育
时期致倦库蚊：幼虫样品可见100 000分子,蛹样品可见40、100 000分子,另外在50 000位置上下亦可见48 000、60 000左右的
多个条带,雄蚊与雌蚊样品均见40 000、100 000分子。结论35 000大小的蛋白分子分布与白纹伊蚊感染组织向性相关。
     

白纹伊蚊贵州地方株垂直传播登革1型病毒的研究

目的：研究白纹伊蚊贵州地方株对1型登革病毒(DEN-1)的垂直传播能力。方法：用DEN-1感染白纹伊蚊贵州3个地方株(贵阳、毕节、兴义)，收集亲代及子1～3代蚊虫标本，提取蚊体总RNA，通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒核酸。并以白纹伊蚊海南株作为对照。结果：感染DEN-1后的白纹伊蚊贵阳株亲代、子1代；白纹伊蚊毕节株亲代、子1代；白纹伊蚊兴义株及海南株亲代、子1～3代的蚊体内均可检测到病毒核酸。结论：DEN-1均能通过白纹伊蚊贵州3个地方株垂直传播。白纹伊蚊贵州不同地方株对DEN-1的垂直传播能力有差别。     

大链壶菌对三属蚊幼虫的比较灭蚊实验

目的：观察并比较大链壶菌对致倦库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊幼虫的实验感染和杀灭情况。方法：在相同实验条件下用生物测定的方法分别观察、比较三属蚊幼虫实验组及对照组的死亡率和校正死亡率，同时比较蚊幼虫被大链壶菌感染后6、24、48、72h各时段的死亡率。结果：平均死亡率致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫实验组明显高于对照组，而中华按蚊幼虫两组无明显差别。三属蚊幼虫的平均校正死亡率两两有差别。平均死亡率致倦库蚊幼虫以感染后6、24、48h较高，白纹伊蚊幼虫以感染后48h较高。未观察到中华按蚊幼虫被大链壶菌感染的征象。结论：致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫对大链壶菌易感染，中华按蚊幼虫不易感染。     

不同水质及饲料对3种蚊虫幼虫生长影响的观察

目的探讨不同水质及饲料对3种实验室饲养蚊种幼虫生长情况的影响。方法实验蚊种为白纹伊蚊、致倦库蚊和三带喙库蚊;3种水质为脱氯48h自来水、烧开并放置48h自来水和单蒸水;饲料为羊肝馒头粉或食母生片。在室温26～28~C,湿度70％～80％及人工光照12～14h条件下,观察蚊虫幼虫在不同水质环境、不同饲料条件下的生长和化蛹情况。结果食母生片饲养较羊肝馒头粉更易产生生物膜。白纹伊蚊幼虫在3种水质饲养下．死亡率等级为2级,从1龄幼虫孵化至化蛹的时间（简称化蛹时间）均为（7．3~0．6）d;致倦库蚊幼虫在3种水质饲养下,死亡率等级为3级,化蛹时间分别为（7．0~0．0）、（7．7~0．6）和（11．3＋0．6）d。三带喙库蚊幼虫在脱氯48h自来水中全部死亡,在其它两种水质中的死亡率等级与致倦库蚊相同,化蛹时间分别为（7．3＋0．6）和（7．0＋0．0）d。在脱氯48h自来水或单蒸水条件下,用羊肝馒头粉或食母生片饲养,白蚊伊蚊的化蛹时间均为（7．3-0．6）d;两种水质条件下,致倦库蚊幼虫的化蛹时间均是用羊肝馒头粉饲养的时间较食母生片短。在单蒸水条件下,三带喙库蚊幼虫的化蛹时间也是羊肝馒头粉的时间较短。结论不同水质对白纹伊蚊幼虫的生长无影响,对致倦库蚊化蛹时间有影响。三带喙库蚊对水质的要求较高。单纯食母生片饲养,库蚊幼虫发育缓慢。     

3株白纹伊蚊生物学特性及对寨卡病毒易感性的比较

目的探究3个地理株白纹伊蚊的生物学特性及其对寨卡病毒(ZIKV)的易感性差异。方法建立广州株(GZ株)、深圳株(SZ株)和恩平株(EP株)白纹伊蚊,观察记录3株蚊株的生长发育周期;检测3个蚊株Wolbachia携带率和其组织分布;经口感染ZIKV后,检测不同地理株白纹伊蚊对ZIKV的易感性。结果 3个地理株白纹伊蚊生长发育周期无显著差异且均携带Wolbachia,但SZ株和GZ株白纹伊蚊组织内Wolbachia含量高于EP株,差异有统计学意义(P0.05)。经口感染ZIKV后,3个地理株的白纹伊蚊均可有效传播ZIKV,GZ株白纹伊蚊对ZIKV的感染率最高为91.7%,传播率为66.7%;EP株白纹伊蚊对ZIKV的传播能力最弱,传播率为54.5%。结论不同地理株白纹伊蚊对ZIKV的易感性不同,可能与其组织内Wolbachia含量有关。     

Cloning and sequence analysis of β-actin gene from Aedes albopictus （Diptera： Culicidae）

Objective: To obtain the complete β-actin gene from Aedes albopictus. Methods: Total RNA was extracted from C6/36 cells. Degenerate primers were designed based on the β-actin sequences of An. gambiae, Ae. aegypti, Cx. pipiens pallens and D.melanogaster. By RT-PCR, the product was amplified, purified, cloned into the pGT vector and sequenced. The β-actin sequence was aligned and phylogenetically analyzed by the BLAST program and the CLUSTAL W program. Results: A sequence of 1132 bp including an open reading frame of 1131 bp was obtained (GenBank DQ657949). The deduced protein had 376 amino acids.Aligned to SWISS-PROT, it exhibited a high level of identity with β-actins from Anopheles, Drosophila and Culex at the amino acid sequence level. Phylogenetic analysis indicated that Ae. albopictus β-actin was much more homologous with invertebrate β-actin than with vertebrate β-actin. Conclusion: The gene may be used as the internal control in the experiments of Ae. albopictus.     

白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因分子进化机制初探

为了初步探讨白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6家族新基因分子进化机理,根据已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P450CYP6基因cDNA片段,设计反向引物,进行5’-cDNA末端快速扩增（rapid　amplification　of　cDNA　ends,RACE）;以正向引物进行3’-RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定。根据获得白纹伊蚊CYP6家族新成员全长cDNA序列,运用PC/GENE软件分析其5’-UTP区DNA序列相似性及编码区氨基酸残基相似性、构建系谱树。结果获得的3个全长序列中5’-UTP区DNA序列完全相同;编码区氨基酸残基相似性为3/497或4/497个氨基酸差异,而且此种差异均位于蛋白质功能非保守的基因区域;构建的系谱树显示CYP6N3基因与冈比亚按蚊CYP6N1-2亲缘关系最近,而与致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1亲缘关系较远。说明白纹伊蚊CYP6N3基因较致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1基因更为古老;白纹伊蚊CYP6N3各等位基因变异体是通过整个CYP6N3基因座的新近复制而产生。     

武汉地区尖音库蚊复组越冬期前构成比变化的观察

以阳茎侧板的形态特征为依据,于1984年10～12月检查了武汉地区尖音库蚊复组雄性外生殖器玻片标本217个,结果淡色库蚊、致倦库蚊及其中间型的总构成比分别为28.11％、43.78％及18.11％。在越冬期前,三者之间构成比变化的差别有高度显著性(X~2=-20.96,P<0.005)。12月底以后,未再发现上述雄蚊。提示它们的耐寒性不同;雄性似不能越冬。     

Cloning and sequence analysis of β-actin gene from Aedes albopictus （Diptera. Culicidae）

Objective： To obtain the complete β-actin gene from Aedes albopictus. Methods： Total RNA was extracted from C6/36 cells. Degenerate primers were designed based on the β-actin sequences of An. gambiae, Ae. aegypti, Cx. pipiens pallens and D. melanogaster. By RT-PCR, the product was amplified, purified, cloned into the pGT vector and sequenced. The β-actin sequence was aligned and phylogenetically analyzed by the BLAST program and the CLUSTAL W program. Results： A sequence of 1132 bp including an open reading frame of 1131 bp was obtained （GenBank DQ657949）. The deduced protein had 376 amino acids. Aligned to SWISS-PROT, it exhibited a high level of identity with β-actins from Anopheles, Drosophila and Culex at the amino acid sequence level. Phylogenetic analysis indicated that Ae. albopictus β-acfin was much more homologous with invertebrate β- actin than with vertebrate β-actin. Conclusion： The gene may be used as the internal control in the experiments of Ae. albopictus.     

贵州省幽门螺杆菌CagA基因表达与甲硝唑耐药性

目的:探讨贵州地区上消化道疾病患者幽门螺杆菌(H pylori)细胞毒素相关蛋白(CagA)基因的表达及其与甲硝唑(MTZ)耐药的相关性。方法:从上消化道疾病患者胃黏膜分离50株H pylori,经聚合酶链反应(PCR)检测CagA基因,E-test法检测MTZ耐药情况,测序并应用BLAST分析MTZ敏感株(MTZS)与耐药株(MTZR)CagA基因的分子差异。结果:50株H pylori中有92%的菌株表达CagA,其阳性表达率在消化性溃疡患者与慢性胃炎患者无差异;50株H pylori对MTZ总耐药率为54%,CagA阳性及阴性菌株耐药率分别为54.3%及50.0%(P>0.05);基因测序结果显示MTZS及MTZR两组间CagA基因突变无统计学差异。结论:贵州地区CagA阳性菌株与上消化道疾病密切相关,但与疾病的严重程度无明显关系,CagA基因表达及基因变异与MTZ耐药性之间无明显关系。     

四川省自贡市主要媒介蚊虫密度及其对杀虫剂抗药性监测

目的 了解自贡市媒介蚊虫的种群构成、密度及季节变化规律,并对自贡市致倦库蚊和白纹伊蚊对常见杀虫剂的抗药性测定,为科学选择和使用杀虫剂,防控蚊媒传染病提供科学依据。方法 在全市范围内采集致倦库蚊和白纹伊蚊,经实验室饲养后,采用成蚊接触筒法分别测定试虫对几种常用杀虫剂的抗药性,利用Excel 2010软件对2018—2020年自贡市媒介蚊虫监测数据进行统计分析。结果 2018—2020年自贡市监测点年均蚊密度分别为1.11、10.71、4.81只/（灯·h）,2018—2020年自贡市全年蚊密度季节消长趋势均呈现单峰型,7月最高,不同生境间蚊密度差异明显,牲畜棚蚊密度最高。白纹伊蚊和致倦库蚊对高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯、马拉硫磷、杀螟硫磷、毒死蜱、残杀威、噁虫威24 h致死率分别为70.71%和3.85%、26.53%和1.68%、19.79%和1.94%、40.80%和0.81%、97.98%和3.85%、100.00%和7.52%、100.00%和66.34%、96.15%和33.60%、100.00%和71.43%。白纹伊蚊对高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯产生抗药性,对马拉硫磷、残杀威产生可疑抗性,对毒死蜱、杀螟硫磷、噁虫威敏感;致倦库蚊对所有杀虫剂均产生不同程度的抗药性。结论 白纹伊蚊、致倦库蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂均产生较高抗药性。应加强爱国卫生运动,减少拟除虫菊酯类杀虫剂的使用,轮换使用不同类型的杀虫剂,以延缓抗药性的产生,提高蚊密度控制效果。     

转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻实验室杀蚊幼毒效的观察

目的 观察转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻实验室对淡色库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊不同龄期幼虫杀灭效果. 方法 利用不同浓度的工程藻,分别作用于淡色库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊敏感品系Ⅲ龄幼虫,以及它们不同龄期的幼虫,并设计阴性及空白对照,分别于24H、48H计数死亡率,从而分析基因蓝藻的杀蚊幼毒效.结果 工程藻对三种蚊种Ⅲ龄幼虫均具有杀灭作用,对淡色库蚊、白纹伊蚊幼虫杀灭效果较高,对中华按蚊幼虫效果较差.48H对以上三种蚊虫Ⅲ龄幼虫的杀灭率分别为100％、100％和42％;工程藻对低龄幼虫的杀灭效果高于高龄幼虫,即龄期越低对工程藻的敏感性越高,杀蚊毒效与龄期呈负相关. 结论 转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻具有明显杀蚊幼效果,为今后蚊虫防治提供了新的方法.     

淡色库蚊抗药性相关基因--NYD-MLC2基因的克隆与分析

目的:获取淡色库蚊抗药性相关基因NYD-MLC2的cDNA全长序列并鉴定其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因片段序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增NYD-MLC2基因3′、5′端,经对位拼接获得全长序列,并进行生物信息学分析;荧光定量PCR验证此基因在抗性和敏感品系的表达差异。结果:获得淡色库蚊NYD-MLC2cDNA全长序列,开放阅读框为630bp(GenBank/NCBIDQ140391),编码210个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-MLC2与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)一个未知功能的蛋白同源性最高,为91%;实时荧光定量PCR结果显示,NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的4.08倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因cDNA全长序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-MLC2与淡色库蚊溴氰菊酯抗药性相关,值得进一步研究。     

二氧化碳与BG-lure引诱剂诱蚊效果比较研究

目的 比较BG-trap捕蚊器在现场使用CO₂和BG-lure引诱剂（BG）的诱蚊效果。方法 2020年8—9月,设置2处现场,间隔100 m,每个现场设置2个点位,分别布放1个BG-trap捕蚊器,彼此间隔 5 m。每个点位设置不同流量CO₂及不同数量BG,次日同一现场2个捕蚊装置交换位置。收集各捕蚊器所捕捉的蚊虫,分类和记录捕获的蚊虫种类、性别和捕获数,并进行统计。结果 BG +/ CO₂ -和BG -/ CO₂ +捕获白纹伊蚊密度分别为14只和31只,淡色库蚊分别 2只和16只,差异均有统计学意义（t=-2.675,-4.873,P<0.05）。在BG +条件下,CO₂ +组白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊密度分别是CO₂ -组的2.6（25/9.5）、12.0（12/1）和3.0（12/4）倍,差异均有统计学意义（t=-4.119,-4.592, -3.284,P<0.01）,提示吸引白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊CO₂更有效;在BG -条件下,CO₂ +组白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊密度分别是CO₂-组的1.8（18/10）、15.5（15.5/1.0）和2.0（9.0/4.5）倍,差异均有统计学意义（t=-2.868,-5.259,-2.508,P<0.05）;在CO₂ +条件下,BG +组白纹伊蚊和淡色库蚊密度分别是BG -组的1.4 （43.5/31）和0.78（12.5/16.0）倍,差异无统计学意义（t=-0.943,0.709,P>0.05）;在CO₂ -条件下,BG +组白纹伊蚊和淡色库蚊是BG-组的1.0（14/14）和2.0（2.0/1.0）倍,差异无统计学意义（t=-0.500,-1.000,P>0.05）;在BG -条件下,添加0、 1和2份干冰捕获白纹伊蚊雌蚊密度分别为10只、17.5只和18只,三组差异有统计学意义（F=3.942,P<0.05）,捕获淡色库蚊雌蚊分别为1只、13只和18只,三组差异有统计学意义（F=13.881,P<0.05）,但添加1份和2份干冰捕获白纹伊蚊雌蚊和淡色库蚊雌蚊,差异无统计学意义（t=0.112,-0.540,P>0.05）;在CO₂ -条件下,添加0、1和2份BG捕获白纹伊蚊和淡色库蚊雌蚊分别为10只、10只、9.5只和1只、1只、1.5只,三组差异无统计学意义（F=0.120,0.477,P>0.05）。 结论 使用BG-trap捕蚊器监测中,CO₂诱蚊效果优于BG引诱剂,且用100 mL/min流量CO₂能更节省使用成本。