熏洗方对大鼠骨折后期僵硬关节滑膜Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1表达的影响

为探讨熏洗方治疗大鼠骨折后期关节僵硬的作用机理.以Wistar大鼠制作骨折后期关节僵硬模型,用dot blot杂交法和ELISA法分别测定踝关节滑膜Ⅲ型胶原mRNA表达水平及TGF-β1含量.结果显示模型组Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平明显升高,与正常对照组比较差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05);功能组和中药组Ⅲ型胶原mRNA、TGFβ1水平明显降低,与模型组比较差异有显著性(P＜0.01);中药组Ⅲ型胶原mRNA、TGFβ1水平显著低于功能组(P＜0.05).表明大鼠骨折后期关节僵硬滑膜Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平异常改变;降低Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平可能是熏洗方治疗骨折后期关节僵硬的重要机制之一.     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGF-β1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA表达的影响

目的:研究中药壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGFβ1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制.方法:采用四氯化碳(CCl4)复合因素大鼠肝纤维化模型,给予壮肝逐瘀煎灌胃,取血清及肝组织做检测,双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清TGF-β1含量,实时荧光定量PCR技术对肝组织TβR Ⅰ/ⅡmRNA进行定量分析.结果:治疗6周后,与病理模型组大鼠比较,壮肝逐瘀煎治疗组肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄,TGF-β1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA明显降低(P＜0.01).结论:壮肝逐瘀煎能够显著改善肝纤维化大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎抑制TGF-β1及TβRⅠ/Ⅱ mRNA表达有关.     

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的干预作用

目的探讨补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的影响。方法将53只Wistar大鼠随机分成空白组8只、模型组15只、补肾柔肝方组15只和秋水仙碱组15只。除空白组外,其余组均首次在背部皮下注射纯四氯化碳5 m L/kg,3 d后注射40%CCl4花生油3 m L/kg,每周注射2次,连续8周。第9周开始,补肾柔肝方组和秋水仙碱组分别给予补肾柔肝方流浸膏5 m L/(kg·d)、秋水仙碱溶液5 m L/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,共8周。然后取各组大鼠肝组织,分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应检测肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白,Smad2和Smad3磷酸化水平及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA的表达情况。结果与空白组比较,模型组肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白及TGF-β_1、TβRI、TβRⅡmRNA表达水平均显著升高(P均0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均0.05);与模型组比较,补肾柔肝方组和秋水仙碱组TβRⅠ、TβRⅡ蛋白以及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA表达水平均显著降低(P均0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均0.05)。结论在TGF-β_1-Smads信号通路中,补肾柔肝方主要是通过抑制TβRⅠ、TβRⅡ表达,无法磷酸化的Smad2和Smad3失去活性,从而阻断信号通路传导发挥抗纤维化的作用。     

左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肾脏TGFβ1/Smad1表达的影响

目的:观察左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肾脏TGFβ1/Smad1基因与蛋白表达的影响,并探讨补肾法对去卵巢模型大鼠肾脏TGFβ1/Smad1通路的影响。方法:将90只SD雌性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、补佳乐组、左归丸组、右归丸组、共同药组、滋阴药组、补阳药组。除假手术、空白组外均进行双侧卵巢切除。经12周治疗分别以Q-PCR法、Western blot法检测TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad1在肾脏中基因和蛋白的表达。结果:与空白组相比,除假手术组外,TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad1 mRNA及蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,各用药组TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad1 mRNA及蛋白表达升高(P0.01);与补佳乐组比较,各用药组TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad1表达低,其中左归丸组表达较高。结论:左、右归丸及其拆方可影响肾脏中TGFβ1/Smad1基因与蛋白的表达,其中以左归丸改变最为显著。     

补肾调经方对雄激素致不孕大鼠子宫转化生长因子β1及其受体的影响

目的:探讨补肾调经方对雄激素致不孕大鼠(androgen-induced sterile rats,ASR)子宫转化生长因子β1及其受体(TGFβ1/TGFβRⅠ)表达的影响。方法:给出生9日龄SD雌性大鼠一次性皮下注射丙酸睾丸酮(T),建立ASR模型。设乌鸡白凤口服液为阳性对照药。分为正常组、模型组、阳性药对照组和中药治疗组。ASR模型81日龄始灌服乌鸡白凤口服液、补肾调经方,连续7周,130、131日龄麻醉处死,采用UE染色及免疫组化技术分别观察子宫组织形态学及TGFβ1、TGFβRⅠ表达的变化。结果:补肾调经方可改善病理状态下子宫的形态结构,使模型大鼠子宫内膜、肌层TGFβ1以及肌层TGFβRⅠ的表达增强。结论:补肾调经方可通过提高ASR模型子宫内膜、肌层TGFβ1及肌层TGFβRⅠ的表达,促进子宫的发育,改善子宫内膜的分泌功能,有利于胚泡的植入。     

宣肺健脾中药对哮喘大鼠肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ、TβRⅡ表达的影响

目的:观察宣肺健脾方对哮喘大鼠的治疗作用,探讨其可能的作用机制.方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组和宣肺健脾方组.除正常对照组外,其余各组动物建立哮喘模型.观察支气管一肺组织病理学改变,测量支气管基底膜周径、支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度( Wam),支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数.免疫组化PV二步法检测TGF-β/Smads信号通路中配体(TGF-β)及其受体Ⅰ(TβR Ⅰ)、受体Ⅱ(TβRⅡ)水平.结果:模型对照组大鼠支气管肺组织有大量炎性细胞浸润,支气管腔内可见黏液栓和炎性细胞,支气管平滑肌层明显增厚;地塞米松组炎性细胞浸润减少,气管壁和平滑肌增厚明显减轻,黏膜结构较完整;宣肺健脾方组支气管黏膜上皮无明显增厚,管壁及其周围少量炎性细胞浸润.地塞米松组和宣肺健脾方组的Wat、Wam减少,宣肺健脾方组Wat、Wam较模型对照组低,差别有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),但与正常对照组对比,差别无统计学意义(P＞0.05).与模型对照组对比,两药物组BALF中的嗜酸性粒细胞(EOS)、中性粒细胞(WEU)降低,巨噬细胞(MAC)升高,差别有统计学意义(P＜0.01).与正常对照组相比,模型对照组支气管一肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ表达增加,差别有统计学意义(P＜0.01);2药物组TGF-β1、TβR Ⅰ表达降低,与模型对照组对比,差别有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);宣肺健脾方组TGF-1β1、TβRⅠ表达较地塞米松组低,差别有统计学意义(P＜0.01).结论:宣肺健脾法可能通过抑制哮喘大鼠TGF-β1及其受体的过度表达而干预气道重塑.     

金三莪对肝纤维化大鼠TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体mRNA与Smad3、Smad7表达的影响

目的:观察中药金三莪抗大鼠肝纤维化的疗效及作用机制.方法:采用金三莪治疗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型.RT-PCR检测肝组织TGEβ1、TGFRⅠ与TGFRⅡ mRNA;免疫组化技术检测Smad3及Smad7在肝内的表达及定位,肝组织HE染色检测病理改变.结果:与模型组大鼠比较,RT-PCR显示经该中药组方治疗,大鼠肝内TGFβ1、TGFRⅠ与TGFRⅡ mRNA(P＜0.05,P＜0.01),以及Smad3表达明显降低;而Srmad7的表达增加.Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆,Smad7则主要在肝细胞浆表达.肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄.结论:金三莪组方能有效地减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度,其机理与抑制肝内TGFβ1、TGFR Ⅰ与TGFRⅡmRNA及Smad3表达,并促进Smad7表达有关.     

补肾解毒通络方对慢性肾衰大鼠的实验研究

目的:观察补肾解毒通络方对腺嘌呤所致大鼠慢性肾衰的影响。方法:通过腺嘌呤灌胃建立大鼠慢性肾衰模型,观察补肾解毒通络方对大鼠血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其mRNA的影响。结果:经补肾解毒通络方治疗的大鼠,血清BUN、Scr降低,TGFβ-1和TGFβ-1mRNA的表达下调,与模型组比较有统计学差异(P0.01或P0.05)。结论:补肾解毒通络方能有效延缓慢性肾功能衰竭的进展,可能与其抑制TGFβ-1和TGF-β1mRNA的表达来减轻肾间质纤维化有关。     

虫草菌粉对肺纤维化大鼠肺TGFβ1及其信号通路分子mRNA表达的影响

目的观察虫草菌粉对肺纤维化大鼠肺转化生长因子beta1(TGFβ1,)及其信号通路分子mRNA表达的影响,以探讨虫草菌粉调控肺纤维化胶原代谢失衡的机制及作用靶点.方法取健康SD大鼠60只,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及虫草组(CSP),每组再分成两亚组,每亚组10只,通过复制肺纤维化大鼠模型,并予虫草菌粉灌胃干预,于14天及28天取大鼠肺组织,运用组织芯片结合图像分析技术,通过苏木素-伊红(HE)及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量,以免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白含量及原位杂交技术对转化生长因子βⅡ型受体(TGFβR Ⅱ)及smad4的mRNA表达进行定位定量分析,用实时荧光定量RT-PCR技术检测TGFβ1mRNA的表达.结果虫革菌粉在两时相皆有抑制TGFβ1 mRNA表达上调之作用(与内参校正值分别从0.0219±0.0110和0.0170±0.0157降至0.0083±0.0024和0.0062±0.0051,P＜0.05),而对TGFβⅡR及smad4mRNA的表达上调无明显影响(P＞0.05).结论虫草菌粉具有抑制胶原纤维过度沉积的作用,其机制可能为抑制TGF-β1mRNA表达的上调,从而干扰TGF-β-smad,信号通路对靶基因的激活而实现的.     

抗纤Ⅰ号对实验性肝纤维化大鼠组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及转移生长因子β1 mRNA表达的影响

目的:从分子水平研究抗纤Ⅰ号方剂治疗肝纤维化作用机理.方法:利用CCl4制造大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组、肝纤维化模型组及中药治疗组,中药灌胃治疗42d,检测病理学指标、肝纤维化血清学指标、肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化,以及肝组织TGF β1mRNA表达量的变化.结果:肝组织病理学以及血清学指标同对照组统计学尚有显著差异,同时实验也表明治疗组能够明显减少肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原以及TGF β1mRNA的表达量.结论:抗纤Ⅰ号具有逆转肝纤维化的作用,其作用机理可能是通过下调TGF β1mRNA,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成而减轻肝纤维化.     

金钗石斛多糖对肝纤维化大鼠转化生长因子及基质金属蛋白酶的影响

目的:探讨金钗石斛多糖对肝纤维化大鼠转化生长因子β1(TGFβ1)、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)及基质金属蛋白酶(MMP13)的影响。方法:SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组,模型组,秋水仙碱组,扶正化瘀组,石斛多糖低、中、高剂量组,采用四氯化碳(CCL4)复合乙醇诱导大鼠肝纤维化模型,造模8周成功后,分别给予相应的干预药物,正常组、模型组给予生理盐水,每日1次,连续4周。采用荧光定量PCR技术检测大鼠肝脏TGFβ1、TIMP-1、MMP13 mRNA的表达差异。结果:与模型组相比,各治疗组肝组织内纤维化程度均有不同程度减轻;与正常对照组比较,模型组TGFβ1、TIMP-1 mRNA的表达上调(P<0.05),MMP13 mRNA的表达下调(P<0.05);与模型组比较,各药物干预组均能降低大鼠肝组织TGFβ1、TIMP-1 mRNA的表达,其中扶正化瘀组、石斛多糖中、大剂量表达有显著性差异(P<0.05);与模型组比较,各药物干预组提高MMP13 mRNA的表达,其中以扶正化瘀组、石斛多糖大剂量为甚(P<0.05)。结论:石斛多糖具有下调TGFβ1、TIMP-1 mRNA表达,上调MMP13 mRNA表达,可能是其抗肝纤维化的作用机理之一。     

补肾调肝化瘀法对再障大鼠造血系统细胞因子的影响

目的:建立白消安诱发造血功能障碍大鼠模型,胃饲补肾调肝化瘀中药,观察细胞因子IL-2、TNF-a、IL-1β分泌水平的变化.结果:白消安诱发造血功能障碍大鼠IL-2、TNF-a显著高于正常对照组(P＜0.05),IL-1β低于正常对照组(P＜0.05).补肾调肝化瘀中药组IL-2、TNF-a显著低于模型组(P＜0.05),IL-1β显著高于模型组(P＜0.05).结论:补肾调肝化瘀治疗可改善造血系统细胞因子分泌异常,减轻免疫因素对机体的损害,促进骨髓造血功能的恢复.     

抗纤软坚冲剂对实验性肝纤维化大鼠TGFβ_1及其受体的影响

既往的临床与动物实验证实了抗纤软坚冲剂有抗肝纤维化作用,为进一步探讨抗纤软坚冲剂抗肝纤维化的机制,本实验从其对促肝纤维化关键细胞因子之一——转化生长因子TGFβ1及其受体含量、mRNA表达的影响这一角度进行观察,以探讨抗纤软坚冲剂对肝纤维化这一环节的作用。选择复合性损伤大鼠为模型,秋水仙碱为对照,应用免疫组织化学、原位杂交技术检测TGFβ1及其受体的阳染面积,并用图像分析系统计算出阳性表达率,结果得出抗纤软坚冲剂可抑制TGFβ1分泌及其传导,与正常组、模型组比较,有显著性差异(P<0.05);与秋水仙碱组比较,无显著差异(P>0.05)。证明抗纤软坚冲剂能抑制肝纤维化大鼠TGFβ1及其受体的表达。其机理可能是通过抑制HSC的活化进而减少了TGFβ1及其受体的表达。     

川芎嗪对肝星状细胞TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体mRNA与NF-кβ表达的影响

目的:探讨中药单体川芎嗪(TMP)对肝星状细胞(HSC)核因子-кβ(NF-кβ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达的影响.方法:体外培养人肝星状细胞,免疫细胞化学法检测HSC中NF-кβ表达以及核迁移情况,RT-PCR法检测HSC中TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体mRNA表达.结果:TMP组NF- кβ表达量较少并且主要位于细胞质,很少发生核迁移.RT-PCR显示,与阴性对照组相比,TMP组 TGF-β1mRNA相对表达量均有显著性差异(P<0.01);TMP 200 mg/L、800mg/L组TβRImRNA相对表达量降低,其差异有显著性(P<0.05或P<0.01); TMP 200 mg/L、800 mg/L组TβRⅡmRNA相对表达量均有显著性差异(P<0.01).结论:川芎嗪可降低HSC中NF-ic B表达并抑制其核转移,降低TGF- 0:及其I、Q型受体mRNA表达,表明川芍嚼可抑制HSC活化,这可能与阻断NF- кβ信号通路、阻断TGF-β/Smad通路的信号传导有关.     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏TGF-β1及其受体表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝组织TGF-β1及其受体表达的影响。方法:采用CCl4诱导大鼠肝纤维化,同时分别以200、100、50mg/kg.d的GbE进行干预,6周后取肝组织,采用免疫组化法测定肝组织TGF-β1及其受体TβRⅠ、Ⅱ、Ⅲ蛋白的表达。结果:模型大鼠肝组织TGF-β1及其受体TβRⅠ、Ⅱ、Ⅲ蛋白表达较正常组明显增高,GbE各剂量组肝组织TGF-β1及其受体表达也较模型组显著下降。结论:GbE可能通过降低TGF-β1及其受体的表达,抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生及发展。     

补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达的影响

目的研究补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织TGF—β1表达的影响，探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法建立wistar大鼠CCL4损伤性肝纤维化模型，通过免疫组化及图像分析等方法，观察补肾化瘀方对肝脏病理组织学、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及TGF—β1表达的影响。结果经补肾化瘀方治疗后，用药组肝组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原及TGF—β1表达显著降低（p〈0.05），与模型组比较有显著性差异。结论补肾化瘀方可能通过抑制肝组织TGF—β1的表达，使HSC的增殖活化受到抑制，胶原合成减少，而起到抗纤维化的作用。     

肝癌患者肝癥口服液含药血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ受体表达的影响

目的:观察肝癥口服液含药人血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ1/Sm ads信号转导通路中TGFβ受体(TGFβR)的影响。方法:以健康志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人SMMC-7721肝癌细胞,应用RT-PCR和W estern B lotting技术观察含药血清对肝癌细胞TGFβRⅠ和TGFβRⅡmRNA和蛋白表达的影响。结果:健康志愿者服用肝癥口服液前后血清对SMMC-7721细胞的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ蛋白和mRNA表达无显著影响;肝癌患者肝癥口服液的含药血清可使明显受到抑制的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ表达恢复,尤其以TGFβRⅡ表达显著上调。结论:肝癌患者肝癥口服液含药血清可增加肝癌细胞TGFβR的表达,使受到抑制的TGFβ1/Sm ads信号转导通路功能恢复。     

老鼠簕乙醇提取物对肝纤维化大鼠COX-2和TGFβ1表达的影响

目的研究老鼠簕对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织COX-2和TGFβ1表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分成5组:空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组、老鼠簕乙醇提取物低剂量组和老鼠簕乙醇提取物高剂量组。除空白对照组外,其余4组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型。秋水仙碱组、老鼠簕乙醇提取物低剂量组和老鼠簕乙醇提取物高剂量组分别于4周后给予相应的药物,空白对照组给予等容量的生理盐水,每天1次。8周后处死大鼠,RT-PCR检测肝组织中COX-2和TGFβ1mRNA的表达,用免疫组化方法观察肝组织COX-2和TGFβ1蛋白质的表达。结果①大鼠出现肝纤维化改变;②RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,模型对照组COX-2和TGFβ1mRNA表达增强(P<0.01);老鼠簕乙醇提取物干预组(1.0,2.0 g.kg-1)较模型对照组COX-2和TGFβ1mRNA表达减弱(P<0.05);③免疫组化结果显示,模型对照组大鼠肝组织的COX-2和TGFβ1蛋白表达明显增加(P<0.01);老鼠簕乙醇提取物干预组(1.0,2.0 g.kg-1)大鼠肝组织的COX-2和TGFβ1蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论老鼠簕能够抑制肝纤维化大鼠肝组织COX-2和TGFβ1的表达。     

肝癌患者肝癥口服液含药血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ受体表达的影响

目的：观察肝癥口服液含药人血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ1／Smads信号转导通路中TGFβ受体（TGFβR）的影响。方法：以健康志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人SMMC-7721肝癌细胞，应用RT-PCR和Western Blotting技术观察含药血清对肝癌细胞TGFβRⅠ和TGFβRⅡ mRNA和蛋白表达的影响。结果：健康志愿者服用肝癥口服液前后血清对SMMC-7721细胞的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ蛋白和mRNA表达无显著影响；肝癌患者肝癥口服液的含药血清可使明显受到抑制的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ表达恢复，尤其以TGFβRⅡ表达显著上调。结论：肝癌患者肝癥口服液含药血清可增加肝癌细胞TGFβR的表达，使受到抑制的TGFβ1／Smads信号转导通路功能恢复。     

芪蚣抗纤方及拆方药物血清对HSC-T6增殖及TGF-β1 mRNA蛋白表达的影响

目的:探讨芪蚣抗纤方(QKD)及拆方抗免疫损伤性大鼠肝纤维化作用机制及配伍意义.方法:采用改良型血清药理学对比方法,观察各组血清对肝星状细胞(HSC-T6)增殖及转化生长因子(TGF-β1)mRNA受体蛋白表达的影响.结果:与正常大鼠血清组比较,模型组大鼠血清组HSC-T6增殖明显增强(P＜0.01);与模型组比较,药物血清各组能抑制HSC-T6增殖(P＜0.01或P＜0.05).与正常对照组比较,模型组大鼠HSC-T6细胞上清液中TGF-β1mRNA含量明显升高(P＜0.01).药物血清各组TGF-β1 mRNA含量均明显下调(P＜0.01).结论:芪蚣抗纤方及拆方抗肝纤维化的主要机制之一是抑制HSC-T6增殖,使TGF-β1mRNA受体蛋白表达下调,芪蚣抗纤方全方较活血方和软坚方更具配伍意义,且呈剂量依赖性.