靶向Cullin-RING E3泛素连接酶的抗肿瘤策略及相关药物研发进展

Cullin-RING E3泛素连接酶（CRL）是泛素-蛋白酶体系统的重要组分，参与催化蛋白质的泛素化，促进随后的蛋白质降解，从而影响细胞周期、细胞凋亡、DNA复制、信号转导等多种细胞生理活动，且在多种肿瘤细胞中异常活化。以MLN4924为代表的拟素化抑制剂的成功研发有力地证实了CRL是可行的抗肿瘤靶点，具有很好的药物研发潜力。近年来，不断有新的研究通过高通量筛选、基于计算机辅助的虚拟筛选或基于结构的药物设计技术寻找特异的CRL抑制剂，但由于CRL复合物具有多种亚单位，呈蛋白-蛋白相互作用和多变的蛋白构象，缺乏典型的小分子药物结合位点等特性，其相关药物研发仍面临巨大挑战。截至目前，CRL小分子抑制剂主要以研究最为透彻的SCF泛素连接酶复合体的底物识别亚基F-box蛋白家族为靶点。此外，也发现数个通过靶向UBE2M-DCN1相互作用，特异性阻断CRL3/CRL1拟素化，从而抑制CRL3/CRL1泛素连接酶活性的小分子化合物。另一方面，也有CRL激动剂的报道，主要见于植物生长素吲哚乙酸和免疫调节性酰亚胺类药物。此外，靶蛋白水解嵌合体（PROTAC）是一项靶向蛋白-蛋白相互作用的新技术，其通过特异性小分子抑制剂链接一个CRL E3泛素连接酶来精确降解特定促癌靶蛋白，已成为近年来利用E3泛素连接酶设计抗肿瘤靶向药物的热点。     

多腺苷二磷酸核糖基化修饰与神经退行性变性疾病

神经退行性疾病的发病率越来越高，但其治疗手段有限。多腺苷二磷酸核糖基化修饰（PARylation）是由多腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）催化的蛋白质翻译后修饰。PARylation通过影响蛋白质在细胞内的移位、聚集、蛋白质活性和细胞死亡，参与脑卒中、帕金森病、阿尔茨海默病、运动神经元病等神经退行性变性疾病的发生和发展。PARP抑制剂通过抑制蛋白PARylation，在药物临床前试验和临床试验Ⅰ期都展现了明显的神经保护作用。然而，寻找作用更特异的、符合神经退行性变性疾病治疗药动学特点的新型PARP抑制剂，将是抗神经退行性药物研发的新方向。本文就PARylation与神经退行性变性疾病的研究进展作一综述。     

选择性免疫蛋白酶体抑制剂研究进展

免疫蛋白酶体与血液肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、中枢神经系统疾病等密切相关，这些疾病均呈现免疫蛋白酶体高表达。免疫蛋白酶体抑制剂可通过抑制相关细胞诱导因子的生成和自身反应性T细胞的活性来阻断免疫蛋白酶体的表达，从而治疗相关疾病。选择性免疫蛋白酶体抑制剂研发的关键是针对免疫型蛋白酶体的高度选择性，兼顾蛋白酶体上三个活性亚基的活性水平，才能在达到良好疗效的同时减少不良反应。本文介绍了免疫蛋白酶体的结构、功能，以及与多种疾病之间的关系，针对目前已报道的环氧酮肽类共价结合、其他短肽类共价结合、短肽类非共价结合选择性免疫蛋白酶体抑制剂的结构、活性及发展现状作一综述。     

甲状腺未分化癌靶向治疗研究进展

甲状腺未分化癌（ATC）是一种恶性程度高、侵袭性强的甲状腺恶性肿瘤，发病迅速，预后差，目前尚缺乏有效治疗手段。分子靶向治疗为ATC治疗提供了一种新思路。酪氨酸激酶抑制剂乐伐替尼在治疗ATC患者临床试验中疗效良好；鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1（ BRAF）基因抑制剂达拉非尼联合曲美替尼治疗 BRAF ^V600E 阳性ATC患者的有效性已在临床试验中得到证实，2021年美国国家综合癌症网络甲状腺癌临床实践指南中提出达拉非尼联合曲美替尼可作为治疗 BRAF ^V600E 阳性ATC患者治疗的首选方式；免疫检查点抑制剂帕博利珠单抗应用于高肿瘤突变负荷甲状腺癌治疗，可作为程序性死亡蛋白1高表达ATC患者的首选方式；哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路抑制剂、过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂、靶向内皮生长因子受体的单克隆抗体西妥昔单抗及新型血管阻断剂康布瑞汀磷酸二钠仍处于临床研究阶段。本文综述了目前ATC靶向药物治疗的研究进展。     

第三代非甾体类芳香化酶抑制剂在儿科内分泌临床应用的再认识

芳香化酶是雌激素生物合成的限速酶，以来曲唑和阿那曲唑为代表的第三代非甾体类芳香化酶抑制剂（AI）与芳香化酶结合，可有效降低雌激素水平，因其具有高效性、选择性及可逆性结合等特点，近20年来在国内外被应用于儿童内分泌疾病如纤维性骨营养不良综合征、家族性男性限制性性早熟、青春期男性乳房发育治疗和改善青春期矮小男童成年终身高等，观察到较好的疗效和安全性。然而，AI药品说明书并无儿童用药适应证，较大样本量的临床研究发现AI存在肝肾功能损害、脂代谢紊乱、高雄激素血症及骨代谢紊乱等药物不良反应的风险，尤其是对男性生殖系统损害和骨代谢的远期影响尚不清楚。因此，儿童使用AI时须权衡利弊、谨慎使用，通过收集AI安全性和有效性的临床证据积累经验，为规范AI在儿科的临床应用奠定基础。     

磷酸二酯酶抑制剂治疗炎性肠病的研究进展

炎性肠病是一种慢性复发性肠道炎性疾病，尚无理想治疗方法。磷酸二酯酶（PDE）通过介导细胞内第二信使环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的水解影响细胞内信号级联反应，从而调控多种病理、生理过程。近年来，一系列研究结果显示，PDE抑制剂如多种PDE4抑制剂、PDE5抑制剂（西地那非、他达拉非及伐地那非）、PDE3抑制剂（西洛他唑）、PDE9抑制剂（PF-04447943）、PDE3/PDE4双抑制剂（pumafentrine）对实验性结肠炎具有改善作用；PDE4抑制剂阿普司特在临床试验中较替托司特的治疗优势更明显。本文就PDE抑制剂在炎性肠病治疗中的研究进展进行综述。     

抑制TAK1可加重甲苯二异氰酸酯诱导的哮喘小鼠气道炎症

目的探讨转化生长因子β激活激酶1（TAK1）对甲苯二异氰酸酯（TDI）哮喘小鼠气道炎症的影响。方法建立TDI哮喘小鼠模型，为探讨TAK1在TDI哮喘模型中的作用，将32只小鼠随机分为4组（8只/组）：AOO组，AOO+5Z-7-Oxozeaenol组，TDI组，TDI+5Z-7-Oxozeaenol组；为进一步探讨RIPK1在体内模型的作用，将另外32只小鼠随机分为4组（8只/组）：AOO组，TDI组，TDI+5Z-7-Oxozeaenol组，TDI+5Z-7-Oxozeaenol+Necrostatin-1组。每次激发前使用TAK1抑制剂（5Z-7-Oxozeaenol，5 mg/kg）和/或RIPK1抑制剂（Necrostatin-1, 5 mg/kg）。检测各组小鼠气道反应性、气道炎症及气道重塑等指标。体外实验：配制TDI-人血清白蛋白（TDI-HSA）复合物联合TAK1抑制剂处理小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7），通过CCK8检测各组细胞活力，通过Western blot检测各组TAK1、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及受体相互作用丝/苏氨酸蛋白酶1（RIPK1）相关信号通路分子表达情况；使用RIPK1抑制剂进一步评估对细胞活力及TDI哮喘模型的影响。结果与单独TDI致敏激发哮喘小鼠相比，TAK1抑制剂加重了小鼠气道炎症、气道高反应性及气道重塑（P < 0.05）。抑制TAK1降低了RAW264.7细胞活力，与TDI-HSA共同处理进一步降低（P < 0.05）。抑制TAK1降低了TDI-HSA诱导的TAK1磷酸化水平及MAPK信号通路的活化（P < 0.05）。TAK1抑制剂与TDI-HSA共同处理后，RIPK1磷酸化水平升高，同时Caspase 8持续活化（P < 0.05）；使用RIPK1抑制剂可以恢复TAK1抑制剂与TDI-HSA共同处理引起的细胞活力的减低（P < 0.05）。体内RIPK1抑制剂亦可以减轻TAK1抑制剂对TDI哮喘小鼠气道炎症的加重（P < 0.05）。结论抑制TAK1可能通过增加RIPK1的活性，引起Caspase 8的持续活化而增加巨噬细胞的死亡，参与促进TDI诱导的哮喘小鼠气道炎症。     

补肾化痰方治疗多囊卵巢综合征的作用机制：基于网络药理学和分子对接方法

目的探究补肾化痰方治疗多囊卵巢综合征的主要活性成分、靶点、通路等药理学作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）筛选出补肾化痰方中药物的主要活性成分，使用PubChem和Swiss Target Prediction预测活性成分相关作用靶点；应用GeneCards、OMIM筛选治疗疾病多囊卵巢综合征的作用靶点；将药物靶点与疾病靶点通过Uniprot校正后，取交集靶点；结合STRING构建蛋白-蛋白互作（PPI）网络，并利用Cytoscape3.7.2中的CytoNCA插件对交集靶点进行PPI分析，筛选出核心靶点；采用DAVID数据库进行基因功能GO富集分析和KEGG通路富集分析；利用AutoDock对补肾化痰方中的核心活性成分和核心靶点进行分子对接验证。以动物实验进行验证，24只SPF级雌性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为3组：对照组[n=8，1 mg/（kg·d）生理盐水灌服35 d]，模型组[n=8，1 mg/（kg·d）来曲唑溶于1%羧甲基纤维素（CMC）中，连续灌服35 d，并予高脂饲料喂养]，治疗组[n=8，造模后予以1 mg/（kg·d）补肾化痰方颗粒剂溶于5%生理盐水中，连续灌服35 d]。小鼠末次给药后，取卵巢组织于-80 ℃保存，Western blot法检测小鼠卵巢组织中核心靶点和核心通路的表达。结果补肾化痰方中14味中药共筛选出125个潜在活性成分，990个药物靶点，4759个PCOS靶点，药物与PCOS交集靶点434个；核心活性成分主要为β-谷甾醇、山奈酚、槲皮素等，核心靶点主要为PIK3CA、PIK3R1、APP、AKT1、MAPK1等；GO功能富集主要包括药物反应、凋亡过程的负调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控等；KEGG富集通路主要包括癌症通路、HIF-1信号通路、Rap1信号通路、PI3K-Akt信号通路等；分子对接结果显示核心活性成分β-谷甾醇、山奈酚、槲皮素与核心靶点PIK3CA、PIK3R1、APP、AKT1、MAPK1均有强烈的结合能力；动物实验结果表明，补肾化痰方能明显改善多囊卵巢综合征相关症状，并下调PI3K，AKT蛋白表达，上调MAPK1蛋白表达，验证了网络药理学的部分预测结果。结论揭示了补肾化痰方多成分、多靶点、多途径的作用特点，预测并通过实验初步验证了补肾化痰方治疗多囊卵巢综合征的可能作用机制。     

天然虾青素治疗肾透明细胞癌的作用机制：基于网络药理学与生物信息学方法

目的基于网络药理学和生物信息学研究天然虾青素（AST）治疗肾透明细胞癌（KIRC）的分子作用机制。方法利用PharmMapper数据库检索AST的作用靶点，TCGA数据库获得并筛选KIRC癌组织和癌旁组织中的差异基因，Cytoscape软件对靶基因进行分析并构建“药物-靶点”网络图，String数据库构建可视化PPI网络，对核心作用靶点进行GO富集分析。接着，对筛选出的核心靶点胎盘生长因子（PGF）进行单基因生物信息学分析，采用CCK-8法验证AST对KIRC细胞活性的影响，分子对接技术验证AST与PGF结合情况，RT-qPCR和Western blot验证AST对靶基因mRNA和蛋白表达的影响。结果分析得到AST作用靶点278个，KIRC相关作用靶点1081个，AST治疗KIRC的核心作用靶点7个，其中核心靶点PGF在KIRC中表达增高（P < 0.001）且与预后不良相关（HR=1.37，P=0.043）；分子对接显示AST与PGF的结合能为-5.43 kcal/mol；CCK-8显示当AST浓度为50 μmol/L时即可以抑制KIRC细胞的增殖且AST浓度越高抑制作用越显著；RT-qPCR结果显示，AST处理KIRC后PGF的mRNA表达水平显著降低；Western blot结果显示，经AST处理后KIRC中PGF的蛋白表达受到了明显抑制。结论AST可以抑制KIRC的增殖并抑制其细胞中PGF的表达。     

DNA折纸在纳米生物医学中的应用

DNA纳米技术是一种人工设计并自组装形成复杂核酸结构的技术，DNA折纸技术的出现使构建具有不同尺度二维和三维复杂纳米结构简便易行，是结构DNA纳米技术发展的一个里程碑。由于DNA折纸具有结构可控、可精确寻址、易于化学修饰和生物相容性好等特点，近年来在纳米生物医学领域获得了广泛关注并取得巨大进展。本文对DNA折纸在以下3个方面的应用做了简述：在生物分子检测方面介绍了癌细胞识别、单分子水平直读检测和抗原抗体相互作用；在靶向给药方面介绍了红霉素体内运输和纳米机器人药物运输；最后，在生物材料方面主要介绍了折纸作为抗凝剂抑制凝血酶的活性产生、折纸金属化以及折纸纳米片药物的合成等方面的应用。     

心脏手术相关急性肾损伤早期生物学标志物研究进展

心脏手术相关急性肾损伤（CSA-AKI）是成人心脏外科术后常见的严重并发症，目前缺乏特异性检查方式，依赖血清肌酐及尿量变化的诊断存在滞后性。近年来早期诊断CSA-AKI的生物学标志物成为研究焦点。临床研究表明，中性粒细胞凝胶酶相关脂质运载蛋白及细胞周期抑制剂诊断价值高；肝脏脂肪酸结合蛋白可用于辅助诊断CSA-AKI；微小核糖核酸有助于评估患者不良预后；生物学标志物的联合应用对CSA-AKI的发生有提示意义。CSA-AKI新型生物学标志物为临床早期诊断和及时干预提供可能，有望成为CSA-AKI诊疗新的突破口。     

神经元树突形态建成分子机制的研究进展

神经元是神经系统的基本结构和功能单元，精确的神经树突形态建成是神经环路形成的重要前提。已有研究鉴定了树突发育调控的相关因子并阐明了其功能与机制。根据其在体内发挥功能的位置分为神经元树突发育的内在调控因子和外在调控因子。内在调控因子主要可分为细胞特异性转录因子、肌动蛋白聚合与解聚调控因子和参与分泌、内吞途径的相关因子，它们由神经细胞产生并对本身的树突发育起到重要调控作用。外在调控因子主要分为分泌型因子和接触依赖型因子，分泌型因子主要通过其他组织分泌到内环境的相关因子来调控相应神经树突发育，而接触依赖型因子则主要通过相邻的组织细胞与神经元的接触作用促进或抑制树突导向与生长。本文综述了近些年来人们利用线虫、果蝇和小鼠等多种动物模型在研究神经元树突发育的内在和外在因子分子机制上的进展。这些研究将有助于理解神经系统疾病中相关的树突发育异常机制。     

皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ通过MMP2抑制三阴性乳腺癌细胞体外血管生成拟态

目的探讨皖南蝮蛇毒抑瘤组分-I(AHVAC-I)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231血管拟态能力的影响及其可能的作用机制。方法采用CCK8实验根据半数抑制浓度（IC₅₀）确定AHVAC-I实验浓度，将MDA-MB-231细胞分为3组：对照组（不含药物的培养基处理）、AHVAC-I实验组、药物对照组（5-Fu处理）。Matrigel实验检测分析不同浓度AHVAC-I作用对MDA-MB-231血管拟态能力的影响。运用定量PCR和Western blot检测基质金属蛋白酶2（MMP2）与MMP9的表达水平。结果相较对照组，5、10、20 μg/mL AHVAC-I可显著抑制MDA-MB-231细胞的血管拟态能力（P < 0.01），且呈剂量依懒性。RT-PCR及Western blot结果显示，AHVAC-I能够抑制MMP2的表达水平，降低三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231分泌生成的MMP2（P < 0.01），而MMP2的补入可恢复因AHVAC-I作用而抑制的MDA-MB-231细胞血管拟态的能力。结论AHVAC-I可通过下调MMP2的表达，抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231血管生成拟态的形成能力。     

叶酸修饰壳聚糖纳米载药胶束的制备及其体外抗肿瘤效果研究

目的设计并合成叶酸修饰酸碱度响应壳聚糖纳米胶束，考察材料及其载药胶束对肿瘤细胞的体外生物活性。方法醛基化的壳聚糖与亲水性的胺类化合物经还原胺化反应得CHI-DMA，进一步与月桂酸（LA）经缩合反应得CHI-DMA-LA；叶酸（FA）修饰后得FA-CHI-DMA-LA；包载阿霉素（DOX）后得载药纳米胶束FA-CHI-DMA-LA/DOX。采用氢核磁共振测定材料结构；透射电子显微镜考察材料形态；动态光散射法测定粒径和表面电位；紫外分光光度法测定材料中叶酸的接入率、载药胶束的载药率和包封率；荧光分光光度法测试不同酸碱度下载药胶束体外释放药物的性能；MTT法检测胶束对KB细胞的毒性；荧光显微镜和流式细胞仪考察载药胶束在KB细胞中的吞噬情况。结果合成了叶酸修饰的壳聚糖胶束材料FA-CHI-DMA-LA，后续用于实验的FA-CHI-DMA-LA-1和FA-CHI-DMA-LA-2胶束的粒径分别为（73±14）nm和（106±15）nm，表面电位分别为（15.59±1.98）mV和（21.20±2.35）mV。其载药胶束FA-CHI-DMA-LA-1/DOX和FA-CHI-DMA-LA-2/DOX的载药率分别为（4.08±1.12）%和（4.12±0.44）%，体外药物在酸碱度5.0下累积释放分别达37%和36%，是酸碱度7.4下的1.5倍左右。FA-CHI-DMA-LA在1.25~125 μg/mL浓度下作用24 h后KB细胞存活率均在70%以上。FA-CHI-DMA-LA/DOX载药胶束的细胞摄取较CHI-DMA-LA/DOX增强，且在无叶酸培养基孵育下细胞摄取比含叶酸培养基孵育下增强。与游离阿霉素和CHI-DMA-LA/DOX比较，FA-CHI-DMA-LA/DOX对KB细胞杀伤力更高，其中FA-CHI-DMA-LA-2/DOX给药孵育24 h后细胞存活率约17%。结论成功制备了作为药物输送载体的叶酸修饰壳聚糖纳米胶束材料，其生物相容性良好，具有适应肿瘤微环境酸碱度的药物释放和肿瘤靶向效果。     

有氧糖酵解在非霍奇金淋巴瘤发病及耐药机制中的作用

近年来肿瘤代谢研究日益得到重视，大量研究显示有氧糖酵解在非霍奇金淋巴瘤发病及耐药机制中扮演了重要角色。有氧糖酵解相关信号通路的异常激活可增加淋巴造血细胞的有氧糖酵解水平，而有氧糖酵解相关酶的活性与非霍奇金淋巴瘤（NHL）的发病和预后相关。抑制有氧糖酵解的药物对体外培养的NHL细胞具有杀伤作用，联合常规化疗药物可增加化疗药物的敏感性和预防耐药。本文综述了有氧糖酵解相关信号通路蛋白和调控基因在NHL发病以及耐药中的作用，揭示了有氧糖酵解的深入研究在NHL临床诊断和治疗中的价值。     

大剂量维生素C通过减少糖酵解和蛋白质合成抑制乳腺癌细胞增殖

目的观察大剂量维生素C对乳腺癌细胞增殖及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响，并探索其中的机制。方法以乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453为体外研究对象，分别给予小（0.01 mmol/L）、中（0.10 mmol/L）、大（2.00 mmol/L）剂量的维生素C。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖；蛋白质印迹法检测葡萄糖转运蛋白1（Glut1）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达；乳酸脱氢酶比色法测定乳酸含量。同时，取10只6周龄雌性BALB/c裸鼠，采用皮下接种乳腺癌Bcap37细胞建立荷瘤小鼠移植瘤模型，取5只小鼠腹腔注射维生素C（4 g/kg），观察肿瘤重量和小鼠体质量的变化。结果体外细胞学实验结果显示，与空白对照组比较，大剂量维生素C作用下Bcap37和MDA-MB-453细胞增殖受到抑制（均 P < 0.01），Glut1转运蛋白表达减少（均 P < 0.05），乳酸分泌量减少（均 P < 0.01），mTOR信号通路相关蛋白表达水平下调（均 P < 0.05）。体内实验结果显示，与对照组比较，大剂量维生素C组肿瘤重量明显减小（ P < 0.05），但体质量增长无明显变化。 结论大剂量维生素C可抑制乳腺癌细胞增殖，这一效果可能与大剂量维生素C抑制乳腺癌细胞能量摄取和下调mTOR信号通路有关。     

隐孔菌倍半萜类成分抗肿瘤的作用机制：基于分子对接方法

目的应用分子对接技术及分子动力学模拟，探讨隐孔菌中倍半萜类成分抗肿瘤作用对应靶基因及可能的作用机制。方法基于该类成分化学结构，利用在线反向找靶网站Pharm Mapper、SEA、Target Hunter及相关文献研究对可能的抗肿瘤靶标进行初步预测。运用Discovery Studio 4.0（Libdock功能）和Maestro12.3将隐孔菌中倍半萜分子与潜在可能靶标进行分子对接，根据打分情况，推测可能结合靶标；通过2D相互作用图对倍半萜分子与靶标相互作用情况进行分析；结合实验测得活性数据，推测不同倍半萜骨架对于活性的影响因素；选取体外细胞毒活性最好的化合物4结合的最佳构象与靶标形成复合物，与纯靶标蛋白序列一起进行分子动力学模拟，分析均方根偏差（RMSD）值和均方根浮动（RMSF）值，探讨化合物与靶标结合的稳定性。结果隐孔菌类倍半萜类化合物与Akt（蛋白激酶B）前端蛋白序列（1UNQ）结合最优。2D相互作用图显示氢键和静电力是两者产生相互作用的最主要方式。通过分析不同倍半萜骨架分子的结合最优3D构象，认为分子骨架的微小改变产生了位阻效应，引起各分子活性差异。通过对化合物4的最佳构象与1UNQ形成复合物进行10 ns的动力学模拟，其RMSD值小于靶标纯蛋白序列的RMSD值，表明化合物4与1UNQ结合稳定。结合文献报道的1UNQ活性位点，推测隐孔菌中倍半萜类分子抗肿瘤的作用机制是该类分子能够引起Lys-14位乙酰化，导致Akt无法与下游PIP3结合，从而影响肿瘤细胞的增殖。结论隐孔菌中倍半萜类化合物潜在作用靶点为蛋白激酶B前端蛋白序列1UNQ，通过对靶标Lys-14位乙酰化的方式影响肿瘤细胞的增殖，该研究为隐孔菌中倍半萜类成分作用机制的研究和进一步开发利用提供了科学依据。     

过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定

目的构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）的HEK293细胞株，为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型。方法通过PCR扩增，连接转化以及Sanger双脱氧测序构建并筛选出TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-PuroTXNRD1，转染HEK293细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株。后续研究分为3组进行：①TrxR1过表达HEK293细胞：pLVX-Puro-TXNRD1载体稳定转染细胞；②对照HEK293细胞：pLVX-Puro空载病毒载体稳定转染细胞；③正常HEK293细胞；通过RT-qPCR、Western blot实验检测上述3组细胞中TrxR1的mRNA以及蛋白表达情况；通过胰岛素终点法以及TRFS-green探针成像检测上述3种细胞内TrxR1的酶活力；通过CCK8实验检测上述3种细胞对TrxR1特异性抑制剂auranofin的敏感性。结果构建载体经DNA测序，成功获得插入TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1。与HEK293以及HEK293-NC细胞相比，HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1的mRNA和蛋白高表达，且酶活力也同样显著上升（P＜0.005）；而与HEK293以及HEK293-NC细胞相比，auranofin对HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1酶活力以及细胞增殖的抑制效率均显著下降（P＜0.005）。结论通过构建pLVX-Puro-TXNRD1慢病毒载体，成功获得过表达TrxR1酶的HEK293细胞株，该细胞对特异性靶向TrxR1的抑制剂的抗增殖作用具有抵抗，因而可用于靶向TrxR1药物的筛选。     

天然药物成分干预铁死亡抑制肿瘤的作用研究进展

铁死亡是一种铁依赖的程序性死亡，不同于传统的细胞死亡方式（如凋亡、焦亡、坏死、自噬），其特征是活性氧诱导脂质过氧化物堆积。铁死亡在肿瘤发生发展中发挥着重要的调控作用。最新研究表明，天然药物成分可通过谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶4途径、铁代谢、脂质代谢等调控机制诱导肿瘤细胞铁死亡。研究发现了30多种天然药物成分具有诱导肿瘤细胞铁死亡的作用，且有多通路、多靶点的特点。本文综述了天然药物成分通过干预铁死亡抑制肿瘤的作用研究进展。     

靶向SF3B1突变型葡萄膜黑色素瘤的药物筛选

目的构建SF3B1突变等位基因敲除的人葡萄膜黑色素瘤细胞模型，筛选靶向抑制SF3B1突变型葡萄膜黑色素瘤的药物。方法通过主成分分析法对来自TCGA数据库的葡萄膜黑色素瘤患者分成SF3B1野生型和突变型两组进行转录组可变剪接分析，研究SF3B1突变对可变剪接的影响。通过CRISPR-Cas9技术敲除Mel202细胞株的SF3B1突变等位基因，Sanger测序明确基因编辑的序列。MTT法和克隆形成实验检测Mel202细胞株和基因敲除mut-KO细胞株的增殖，RT-PCR琼脂糖电泳结合Sanger测序检测Mel202细胞株和基因敲除mut-KO细胞株的可变剪接事件。MTT法从上市药物库和生物活性化合物库筛选对SF3B1突变细胞具有选择性抑制活性的药物。结果选择性敲除Mel202细胞SF3B1突变等位基因促进了细胞的增殖（5.47±0.32 vs 10.17±0.27），改变了ZDHHC16和DYNLL1转录本的可变剪接。化合物库筛选结果显示13个化合物对SF3B1突变的Mel202细胞具有选择性的抑制活性（Fold change≥2），其中上市药物tetrandrine和lapatinib显示了较好的量效曲线。结论本研究为SF3B1突变的葡萄膜黑色素瘤患者提供了细胞筛选模型和潜在的个体化治疗药物。