香烟烟雾提取物对CD4^＋T细胞向Th17细胞和调节性T细胞分化的影响

目的观察香烟烟雾提取物（CSE）对CD4^＋T细胞向Th17细胞和调节性T细胞分化的影响,为探索香烟烟雾暴露导致气道慢性炎症的机制提供实验依据。方法采用免疫磁珠法分离纯化健康志愿者外周血CD4^＋T细胞,以1×10^6／ml细胞密度接种于96孔培养板,分为以下8个组①空白对照组;②T细胞刺激剂组：加入T细胞刺激剂抗人CD3／28抗体微磁珠;③T细胞刺激剂CSE干预组：CD3／28＋2%CSE;④细胞因子组：CD3／28＋细胞因子;⑤细胞因子CSE干预组：CD3／28＋细胞因子＋2％CSE;⑥芳香烃受体（AHR）激动剂6-甲酰基吲哚[3,2-b]咔唑（FICZ）组CD3／28＋细胞因子＋FICZ;⑦AHR拮抗剂白藜芦醇组：CD3／28＋细胞因子＋2％CSE＋白藜芦醇;⑧溶剂对照组：CD3／28＋细胞因子＋DMSO。细胞因子为含TGF-β/IL-1β／IL-6／IL～23的混合细胞因子,以诱导Th17细胞和调节性T细胞分化。培养5d后,收集细胞,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋细胞（Treg细胞）,以及胞内细胞因子IL-17＋的CD4^＋T细胞（Th17细胞）,计算各种刺激培养条件下,诱导生成的Th17及Treg细胞占CD4^＋T细胞的百分比。结果①CSE对Th17细胞分化的影响：空白对照组Th17细胞比例为（0．69±0．12）％,加入T细胞刺激剂后为（1．32±0．12）％,在此基础上加入CSE的干预组IL-17＋细胞比例升高为（2．17±0．24）％,（t=3．21,P〈0．01）;细胞因子组IL-17＋细胞比例为（1．35±0．08）％,而在此基础上加入CSE的干预组Th17细胞升高为（2．58±0．39）%（t=3．13,P〈0．01）。②CSE对Treg细胞分化的影响：在空白对照组中,Treg细胞占CD4^＋T细胞中的比例为（0．21±0．19）％,在加入T细胞刺激剂后,Treg细胞比例升高（3．59±0．37）％,加入细胞因子后,Treg细胞比例明显增加（5．85±0．76）％;在继续加入CSE干预后,Treg细胞比例明显减少（3．07±0．33）％（t=3．74,P〈0．01）;同样,T细胞刺激剂CSE干预组也出现Treg细胞比例减少（2．19±0．19）％,（t=2．71,P〈0．05）。③AHR活化对Treg细胞和Th17细胞分化的影响：AHR激动剂FICZ组的Treg细胞比例明显低于细胞因子组[（2．60±0．40）％,（5．85±0．76）％]（t=4．18,P〈0．01）,但Th17细胞比例升高[（2．86±0．43）％,（1．35±0．08）％]（t=3．65,P〈0．01）。AHR阻断剂白藜芦醇组中的Treg细胞比例和Th17细胞比例均低于细胞因子组,分别为[（0．33±0．14）％,（5．85±0．76）％],（t=7．71,P〈0．01）和[（0．42±0．07）％,（1．35±0．08）％],（t=8．87,P〈0．001）,并且和空白对照组接近,在细胞培养第5天通过7-AAD-AnnexinV对该组细胞检测并未发现细胞异常凋亡或死亡情况,结合该组细胞培养过程中的镜下形态推测该实验组CD4^＋T细胞的分化增殖受到白藜芦醇抑制。结论CSE可促进CD4^＋T细胞向Th17细胞分化,并抑制Treg细胞分化,这一过程可能通过AHR诱导。     

肝衰竭前期大鼠模型的建立及辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞失衡的研究

目的研究肝衰竭前期大鼠模型建立的方法以及地塞米松和胸腺肽干预前后辅助性T淋巴细胞(Th)17、调节性T淋巴细胞(Treg)和Th17/Treg的变化。方法 64只大鼠随机分为四氯化碳(CCl4)组和脂多糖(LPS)联合D-氨基半乳糖(D-Gal N)组,分别建立肝衰竭前期大鼠模型。通过观察大鼠活动,肝功能以及全血Th17、Treg的变化,评价成模效果。并用地塞米松和胸腺肽进行干预,观察干预效果。计量资料组间比较采用t检验,组内比较采用配对t检验。结果造模组血清ALT、AST、TBil水平显著升高,与对照组相比差异均有统计学意义(CCl4组:t值分别为-3.95、-3.60、-3.57,P值分别为0.006、0.009、0.009;D-Gal N联合LPS组:t值分别为-10.56、-9.63、-11.82,P值均0.001)。造模后大鼠外周血Th17均上升、Treg均下降,Th17/Treg失衡。造模组大鼠肝组织病理符合肝衰竭前期改变。地塞米松干预后大鼠Th17下降(CCl4组:0.830±0.224 vs 0.580±0.105,t=3.25,P=0.014;D-Gal N联合LPS组:1.301±0.163 vs 0.921±0.141,t=4.12,P=0.004)、Treg上升(CCl4组:0.317±0.076 vs 0.385±0.083,t=-11.13,P0.001;D-Gal N联合LPS组:0.351±0.110 vs 0.570±0.119,t=-4.06,P=0.005)、Th17/Treg再平衡(CCl4组:2.201±0.556 vs 1.511±0.534,t=3.56,P=0.09;D-Gal N联合LPS组:3.699±0.976 vs 1.619±0.423,t=3.82,P=0.07),胸腺肽干预后Th17上升(CCl4组:1.161±0.219 vs 1.270±0.230,t=-5.74,P=0.001;D-Gal N联合LPS组:0.451±0.095 vs 0.929±0.130,t=-8.61,P0.001)、Treg下降(CCl4组:0.643±0.100 vs 0.615±0.092,t=2.66,P=0.032;D-Gal N联合LPS组:0.200±0.085 vs 0.161±0.095,t=3.15,P=0.016)、Th17/Treg失衡加剧(CCl4组:1.799±0.625 vs 2.071±0.587,t=-6.47,P0.001;D-Gal N联合LPS组:2.244±0.634 vs 5.770±1.455,t=-11.72,P0.001)。结论 CCl4和LPS联合D-Gal N两种方法均可成功建立肝衰竭前期大鼠模型,均未出现死亡,肝组织学及血清生化学变化符合肝衰竭前期改变。地塞米松干预后Th17/Treg失衡改善,胸腺肽干预后动物模型Th17/Treg失衡加剧。     

肺结核合并乙型肝炎患者抗结核化疗中核苷类药物预防肝损伤的临床研究

目的：研究核苷类药物预防肺结核合并乙型肝炎患者抗结核化疗中肝损伤的临床效果。方法统计分析2009年8月至2013年8月我院收治的100例肺结核合并乙型肝炎患者的临床资料。结果观察组患者的轻度损伤发生率明显比对照组高（P＜0．05）,中度损伤、重度损伤发生率明显比对照组低（P＜0．05）,肝损伤发生率明显比对照组低（P＜0．05）;肝损伤出现时间明显比对照组晚（P＜0．05）,肝损伤恢复时间明显比对照组早（P＜0．05）;停止抗结核治疗、肝功能衰竭、肝硬化、死亡发生率明显比对照组低（P＜0．05）,痊愈率明显比对照组高（P＜0．05）;治疗后 ALT、AST、HBV-DNA均明显比对照组低（P＜0．05）。结论核苷类药物能够有效预防肺结核合并乙型肝炎患者抗结核化疗中肝损伤。     

血清γ-谷氨酰转肽酶水平与2型糖尿病周围神经病变的关系

目的探讨2型糖尿病患者血清γ-谷氨酰转肽酶（GGT）水平与糖尿病周围神经病变（DPP）的关系。方法随机选择2010年1月至2011年12月于南京军区总医院内分泌科就诊的159例2型糖尿病患者,检测身高、体重、空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、GGT、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血脂水平等数据。根据密西根评分系统及神经传导速度将患者分为有周围神经病变组（DPP组）和无周围神经病变组（无DPP组）,其中DDP组患者82例,平均年龄（57±13）岁,无DPP组患者77例,平均年龄（56±12）岁。同时将患者按GGT水平分为：A组（GGT≤50U／L）、B组（GGT〉50U／L）,其中A组115例,平均年龄（56±14）岁,B组44例,平均年龄（58±13）岁。样本均数比较采用t检验,采用多因素logistic回归分析DPP的危险因素。结果与无DPP组相比,DPP组患者体重[（69±13）比（66±9）kg,t=1．854,P〈0．05]、血清GGT[（32±25）比（18±9）U／L,t=4．310,P〈0．01]、ALT[（24±17）比（19±7）U／L,t=2．304,P〈0．05]、甘油三酯[（2．5±2．0）比（1．4±0．9）mmol／L,t=4．165,P〈0．01]、HbAlc[（9．4±3．0）％比（8．6±1．9）％,t=-1．727,P〈0．05]显著增高。A组患者ALT、AST显著低于B组[（16±11）比（34±17）U／L和（17±7）比（29±15）U／L;t=3．721、2．669,P〈0．05],同时A组患者的胫神经运动传导速度（MCV）、腓总神经运动传导速度（MCV）及腓总神经感觉传导速度（SCV）均优于B组[（45．4±5．0）比（40．3±5．6）m／s、（47．3±4．8）比（40．2±5．4）m／s和（48．4±5．1）比（41．3±9．7）m／s,t=4．031、4．110、4．006,P〈0．05]。对在DPP组和无DPP组间差异有统计学意义的5个指标与DPP再进行多因素logistic回归分析发现,只有血清GGT与DPP的发生显著相关（优势比为1．10,P〈0．05）。结论血清高GGT水平与2型糖尿病患者周围神经病变的发生存在一定相关性,是周围神经病变的可能危险因素。     

健脾补肾法对慢性乙型肝炎患者Th9／Treg平衡的影响及意义

目的：观察健脾补肾法对慢性乙型肝炎（CHB）患者Th9／Treg平衡的影响及临床意义。方法：选择符合抗病毒指征的CH8患者100例,分为观察组及对照组,每组各50例,观察组采用健脾补肾中药联合核苷（酸）类似物治疗,对照组仅用核苷（酸）类似物治疗,治疗前后测定Th9、Treg水平,疗程为24周。同时选择健康志愿者50例,测定Th9、Treg水平。结果：慢性乙肝患者与健康对照组Th9、Treg、Th9／Treg比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,观察组Th9、Treg、Th9／Treg治疗前后比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,对照组Th9、Treg、Th9／Treg治疗前后比较差异均无统计学意义（P〉0．05）;观察组与对照组Th9、Treg、Th9／Treg治疗后比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。观察组ALT复常率与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,观察组HBVDNA转阴率与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,观察组HBeAg转换率与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：Th9／Treg在乙肝病毒感染患者中存在失衡,健脾补肾中药能通过调节Th9／Treg提高核苷（酸）类似物治疗CHB的疗效。     

老年慢性心力衰竭患者辅助性T细胞17及白介素-17的检测及临床意义

目的研究老年慢性心力衰竭（chronic heart failure,CHF）患者外周血中辅助性T细胞17（Thl7）的比例及白介素-17（IL-17）的变化及临床意义。方法选择老年CHF住院患者作为CHF组（n=30）,同时设置对照组（n=30）,利用流式细胞技术和ELISA法分别检测2组患者外周血中Thl7细胞比例和IL-17的水平。结果CHF组外周血中Thl7／CD4＋T细胞比例显著高于对照组[（3．83±1．04）％比（2．25±0．78）％,P〈0．05];CHF组患者外周血中IL-17水平显著高于对照组[（8．97±3．06）ng／L比（6．12±2．34）ng／L,P〈0．05]。结论老年C／IF患者外周血中Thl7细胞比例及IL-17水平升高,调节Th17细胞的治疗可能为CHF治疗提供新思路。     

酒精性肝损伤大鼠肠道屏障功能改变及谷氨酰胺的保护作用观察

目的 观察酒精性肝损伤大鼠肠道屏障功能的改变,并探讨谷氨酰胺的保护作用。方法 36只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、模型组（B组）和谷氨酰胺治疗组（C组）,分别检测肠道细菌易位率、肠粘膜通透性,同时观察血生化、肝脏和末段回肠粘膜病理学改变。结果 与A组比,B组大鼠血清AST和ALT水平显著升高（AST：256．6±50．8U／L对175．2±16．2U／L,P〈0．05;ALT：86．5±5．4U／L对53．7±13．2U／L,P〈0．05）,C组无显著变化（P〉0．05）;B组肠道细菌易位率明显增高（62．5％,P〈0．05）,C组无显著变化（35．0％,P〉0．05）;B组肠粘膜通透性显著升高（235．1±26．4ml·min^-1·cm^2对30．1±33．6ml·min^-1·cm^2,P〈0．05）,C组肠粘膜通透性比B组明显下降（190．9±19．8ml·min^-1·cm^2对235．1±26．4ml·min^-1·cm^2,P〈0．05）：B组大鼠末段回肠病理损伤明显加重（3．8±0．9对0．4±0．5,P〈0．05）,C组比B组明显下降（2．7±0．7对3．8±0．9,P〈0．05）。结论 大鼠酒精性肝损伤伴有肠道屏障功能改变,谷氨酰胺对大鼠酒精性肝损伤及肠道屏障功能具有双重保护作用。     

慢性丙型肝炎肝硬化患者外周血辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞及相关因子检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎肝硬化(CHC-LC)患者外周血Th17/Treg失衡及其相关细胞因子变化的临床意义。方法收集2014年5月-2016年5月于天门市第一人民医院就诊的CHC患者96例,其中CHC患者54例(CHC组)、CHC-LC患者42例(LC组)、健康体检者40例(HC组)。采用流式细胞术检测3组的外周血Th17/Treg细胞表达情况,采用ELISA法检测血清IL-6、IL-10、IL-17及TGFβ,同时检测HCV RNA、AST、ALT、TBil。多组比较采用方差分析,进一步两组间比较采用SNK-q检验;计数资料组间比较采用χ2检验;相关性分析采用Pearson相关性分析法。结果 LC组的外周血Th17细胞比率[(5.97±0.84)%]、Treg细胞比率[(3.14±0.72)%]、Th17/Treg(1.90±0.52)均显著高于HC组[(2.39±0.46)%、(1.72±0.53)%、(1.39±0.12)]和CHC组[(4.75±0.67)%、(2.81±0.87)%、(1.69±0.45)],差异均有统计学意义(F值分别为312.95、47.21、17.34,P值均0.001)。LC组的各细胞因子IL-6、IL-17、IL-10及TGFβ均显著高于HC组和CHC组,差异均有统计学意义(F值分别为160.38、574.11、23.90、36.97,P值均0.001)。Th17细胞比率、Treg细胞比率、Th17/Treg及各细胞因子(IL-17、IL-6、IL-10、TGFβ)与ALT、AST呈显著正相关性(ALT:r值分别为0.633、0.525、0.631、0.931、0.841、0.372、0.343,P值均0.05;AST:r值分别为0.597、0.502、0.564、0.873、0.813、0.365、0.337,P值均0.05),Th17细胞比率、Treg细胞比率、IL-6、IL-17、TGFβ与TBil均呈显著正相关性(r值分别为0.344、0.231、0.401、0.339、0.307,P值均0.05)。结论 Th17/Treg细胞及相关因子可能与CHC及LC的发生发展密切相关,Th17/Treg及其相关细胞因子检测可能对CHC-LC的防治具有重要意义。     

不同基因型慢性乙型肝炎患者外周血辅助性T细胞分化和树突状细胞的功能

目的探讨不同基因型的慢性乙型肝炎（乙肝）患者体内辅助性T细胞（Th）和树突状细胞（DCs）功能差别。方法检测29例不同基因型慢性乙肝患者外周血Th细胞因子（IL-12、IL-2、IL-4）的表达，并对其中20例不同基因型患者进行外周血DC的分离和体外诱导培养，观测其形态和数量变化，检测DC分泌的IL-12含量，对数据应用t检验进行统计学分析。结果慢性乙肝患者与正常对照组比较，外周血IL-12、IL-2、IL-4表达明显升高（t=2．9272，P〈0．01；P〈0．01；P〈0．05）。C型患者组与D型患者组比较，丙氨酸转氨酶（ALT）、IL-12、IL-2、Th1／Th2明显升高（t=2．4626，P〈0．05；P〈0．05；P〈0．05；P〈0．01），IL-4明显降低（P〈0．05）。慢性乙肝患者外周血的单核细胞经培养和细胞因子诱导后，可获得成熟的具有典型形态的DC。慢性乙肝患者组与正常对照组比较，DC数量明显减少（t=5．4186，P〈0．01）。DC分泌的IL-12水平明显降低（t=3．265，P〈0．01）。不同基因型患者之间DC的数量与DC分泌IL-12差异无统计学意义。结论慢性乙肝患者体内存在Th分化的不平衡；C型慢性乙肝患者体内Th1优势应答，肝脏炎症较重，治疗效果及预后较差。     

拉米夫定联合抗结核药物治疗肺结核合并乙型肝炎病毒携带者的临床分析

目的探讨在抗结核治疗的基础上联合应用拉米夫定治疗肺结核合并乙型肝炎病毒（HBV）携带者肝损伤发生情况,及拉米夫定使用的疗程和疗效。方法将江西省胸科医院治疗前肝功能正常的初治肺结核合并慢性HBV携带者142例,通过随机数字表法分为拉米夫定治疗组73例（失访4例,69例获得随访）和对照组69例（失访6例,63例获得随访）。对照组抗结核治疗至满疗程后停药,拉米夫定治疗组在使用抗结核治疗的同时,应用拉米夫定治疗至18个月后停药,两组患者均随访24个月,定期检测肝功能,对两组患者不同时期肝损伤率、总肝损伤率、死亡率、HBV-DNA阴转率、结核病治愈率及失败率进行分析。使用SPSS13．0软件进行统计学处理,以7。检验或Fisher确切概率法对计数资料进行统计分析,P〈0．05为差异有统计学意义。结果拉米夫定治疗组患者4周内肝损伤率、总肝损伤率、死亡率分别为4．3％（3／69）、20．3％（14／69）、0．0%（0／69）,均低于对照组[19．0％（12／63）、49．2％（31／63）、7．9％（5／63）],差异均有统计学意义（X2=7．064,P=0．007;X2=15．176,P=0．0001;Fisher确切概率法,P=0．023）。抗结核治疗结束时和随访结束时,拉米夫定治疗组患者HBVDNA阴转率E24．6％（17／69）、21．7％（15／69）]均高于对照组[3．2％（2／63）、3．2％（2／63）],差异均有统计学意义（X2=12．311,P=0．0005;X2=10．115,P=0．001）。拉米夫定治疗组患者结核病治愈率（89．9％,62／69）高于对照组（73．0％,46／63）,差异有统计学意义（X2=6．277,P=0．012）;治疗失败率（4．3％,3／69）低于对照组（17．5％,11／63）,差异亦有统计学意义（X2=5．972,P=0．015）。结论应用拉米夫定可降低慢性HBV携带者眼用抗结核药物所导致的肝损伤,使用18个月后停用相对安全,可为肺结核合并慢性HBV携带者应用拉米夫定治疗提供一定的临床依据。     

虎眼万年青对四氯化碳致大鼠急性肝损伤防治作用的实验研究

目的研究虎眼万年青对大鼠急性肝损伤的防治作用。方法将实验大鼠随机分为正常对照组、四氯化碳（CCl4）急性肝损伤组、甘草酸二胺防治组和虎眼万年青防治组。观察各组大鼠肝功能和肝组织的变化。结果造模2周后，急性肝损伤组大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、前白蛋白（PA）分别为1012．5±443．74U／L、955．10±436．89U／L、14．7±2．58mg／L，虎眼万年青防治组分别为359．70±385．04U／L、451．50±297．84U／L、26．2±4．21mg／L，说明虎眼万年青能显著降低急性肝损伤大鼠血清ALT、AST的活性（P〈0．05），提高大鼠血清PA水平（P〈0．05），并改善肝组织炎性反应，作用与甘草酸二胺防治组无显著性差异（P〉0．05）。结论虎眼万年青对四氯化碳致大鼠急性肝损伤有明显的防治作用。     

辅助性T细胞Th17与1型糖尿病发病的关系

目的阐明1型糖尿病患者自身免疫反应与辅助性Th17T细胞的关系及其机制。方法选取2009年1月至2010年12月在武汉大学中南医院内分泌科诊治的门诊和住院1型糖尿病患者39例[1型糖尿病组,男21例,女18例,平均年龄（31±13）岁],另选择同期在武汉大学中南医院体检的健康志愿者36名[健康对照组,男19名,女17名,平均年龄（29±12）岁]和内分泌科收治的住院2型糖尿病患者40例[2型糖尿病组,男28例,女12例,平均年龄（36±8）岁]。采用流式细胞仪检测外周血Th17辅助性T细胞比例,应用荧光实时定量聚合酶链反应检测外周血单核细胞RORγt基因表达,运用酶联免疫吸附法检测血浆白细胞介素．17A和B细胞活化因子水平。采用t检验进行组间数据比较。结果1型糖尿病组Th17辅助性T细胞含量[（4．2±0．8）％VS（1．8±0．6）％,t=8．338,P=0．005]、血浆白细胞介素-17A水平[（2．42±0．24）VS（1．37±0．37）ng／L,t=5．601,P=0．021]、RORγt mRNA表达（5．0±1．3VS1．4±1．0,t=38．959,P=0．000）、B细胞活化因子水平[（91±5）VS（66±8）ng／L,t=6．211,P：0．015]显著高于健康对照组。偏相关分析显示,在1型糖尿病组中,B细胞活化因子与白细胞介素-17A水平呈显著正相关（r=0．623,P=0．000）。多元逐步回归分析显示,Th17辅助性T细胞与1型糖尿病患者空腹C肽水平呈显著负相关（r=-0．069,P=0．011）。结论Th17辅助性T细胞分泌的白细胞介素-17A可能通过促进B细胞活化因子的分泌影响B细胞的存活,参与1型糖尿病的发生。     

5981例肺结核患者服用抗结核固定剂量复合制剂所致肝损伤分析

目的分析肺结核患者服用抗结核固定剂量复合制剂（FDC）致肝损伤的发生情况,为抗结核FDC在全国推广使用提供政策依据。方法20112012年,选择甘肃、河北、吉林、四川、山东五省,每省选1个地市作为研究现场。各研究现场2011年7月1日至2011年12月31日新登记的初治活动性肺结核患者接受抗结核FDC治疗。共纳入患者5981例,用医学数据管理软件EpiData3．1录入患者个案信息,用SPSS16．0软件进行数据统计学分析。分析患者肝损伤不良反应发生时间及程度、肝损伤不良反应临床症状与实验室检查异常一致性、肝损伤患者治疗方案调整方法等,以P〈0．05为差异有统计学意义。结果肝功能异常者占14．4％（862／5981）,其中丙氨酸转氨酶异常者占2．4％（145／5981）,总胆红素异常者占4．0％（241／5981）,直接胆红素异常者占11．9％（714／5981）。中、重度肝损伤者占56．1％（484／862）。中、重度肝损伤发生在服药1个月内者占57．2％（277／484）。有消化系统不良反应临床症状者占10．3％（619／5981）,将有消化系统不良反应临床症状者与肝功能异常者的率进行比较,消化系统不良反应率（10．3％）与直接胆红素异常发生率（11．9％）两者差异无统计学意义（X2=1．1382,P〉0．05）,但与总胆红素异常（X2=14．3116,P〈0．05）和丙氨酸转氨酶异常（X2=19．4849,P〈0．0001）间差异有统计学意义。中、重度肝损伤患者中23．1％（112／484例）改用散装抗结核药品替换FDC治疗。结论应用抗结核FDC治疗肺结核患者致肝损伤情况不可忽视,中、重度肝损伤患者应该改用散装抗结核药物进行治疗。     

辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞比值失衡在免疫性肝损伤大鼠模型中的变化特点

目的探讨大鼠免疫性肝损伤模型建立的方法以及辅助性T淋巴细胞(Th)17/调节性T淋巴细胞(Treg)失衡在免疫性肝炎大鼠模型中的变化特点。方法采用随机数字表法将30只雌性Wistar大鼠分为3组,每组10只,分别是急性免疫性肝损伤模型(AC)组、慢性免疫性肝损伤模型(CC)组和健康对照(HC)组。AC组和CC组分别通过尾静脉注射α-galcer和刀豆蛋白A(ConA)建立,HC组注射等量的生理盐水。建模成功后检测血清转氨酶ALT、AST等;HE染色观察大鼠肝脏病理改变;免疫组化法检测肝脏中Foxp3、RORγt蛋白表达。外周血和脾脏悬液中Th17、Treg细胞频率变化采用流式细胞分析术检测并计算Th17/Treg比值。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验。结果与HC组比较,AC组、CC组血清中ALT、AST、TBil均升高,Alb水平降低,差异均有统计学意义(F值分别为14.782、20.765、16.088、74.181,P值均<0.001)。HE染色,与HC组相比,AC组、CC组分别出现急慢性肝细胞损伤改变。与HC组相比,AC组Th17细胞频率及蛋白(RORγt)水平均显著升高(P值均<0.05),Treg细胞频率亦升高(P<0.05),Th17/Treg比值也显著上升(P<0.05);CC组Th17细胞频率、Treg细胞频率均显著升高,Th17/Treg比值明显下降(P值均<0.05)。结论α-galce及ConA均可成功建立免疫性肝损伤模型,均未出现死亡,肝组织学及血清生化学变化符合急、慢性免疫性肝炎特点。Th17/Treg失衡在炎症反应、组织损伤中发挥了重要作用,且与其免疫状态和病情进展密切相关。     

肠源性内毒素血症对慢性乙型肝炎患者调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞17的影响

目的探讨肠源性内毒素血症(IETM)对慢性乙型肝炎(CHB)患者调节性T淋巴细胞(Treg)/辅助性T淋巴细胞(Th)17的影响。方法选取2014年12月-2015年10月在山西医科大学第一医院住院治疗的CHB患者(CHB组)80例,同时选取健康体检者(HC组)20例作为对照。根据内毒素(ET)水平将CHB组分为ET阳性组和ET阴性组。测定外周血单个核细胞中叉头样转录因子(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)mRNA的表达,Treg和Th17百分比,以及ALT、HBV DNA水平。计量资料两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果 CHB组Treg、Th17百分比、Foxp3、RORγt相对表达量与HC组比较均明显增高[(6.51±1.18)%vs(5.91±1.29)%,(4.99±1.07)%vs(4.18±0.87)%,2.12±0.83 vs 1.60±0.70,1.56±0.77 vs 1.09±0.59],P值均0.05。ET阳性组Treg、Th17百分比、Foxp3、RORγt相对表达量、Th17/Treg、RORγt/Foxp3、ALT水平与ET阴性组比较均明显增高[(6.75±1.17)%vs(6.21±1.14)%,(5.39±1.03)%vs(4.48±0.91)%,2.29±0.90 vs 1.91±0.70,1.84±0.76 vs 1.23±0.64,0.82±0.19 vs 0.74±0.16,0.95±0.38 vs 0.74±0.54,(220.16±115.82)U/L vs(170.86±99.69)U/L],P值均0.05。ET阳性组HBV DNA载量比ET阴性组增高,但差异无统计学意义(P0.05)。相关分析表明,CHB患者ET水平与Th17、Treg及ALT呈正相关(r值分别为,P值均0.05),而与HBV DNA无相关性。结论 CHB患者体内存在的IETM可能通过调控Foxp3、RORγt mRNA表达增加,导致外周血Treg、Th17百分比升高,进而Treg/Th17比例失衡,使HBV难以清除而导致慢性化。     

男性急性冠脉综合征患者血清睾酮与炎性因子改变的相关性

目的：测定不同类型冠心病（CHD）患者血清睾酮、血浆白介素-18（IL-18）、IL-10的水平,探讨睾酮与IL-18、IL-10的相关性,及在CHD发生发展中的可能作用。方法：96例男性CHD患者被分为急性心梗（AMI）组（35例）、不稳定型心绞痛（UAP）组（32例）和稳定型心绞痛（SAP）组（29例）,另选择30例经冠脉造影排除冠心病的患者为非冠心病对照组,采用酶联免疫吸附法测定各组血清睾酮,血浆IL-18、IL-10水平。结果：血清睾酮水平在UAP组、AMI组均显著低于非冠心病对照组[（6．89±1．35）mmol／L比（5．02±1．87）mmol／L比（13．46±1．99）mmol／L,t=1．917～2．365,P均〈0．05],且AMI组显著低于UAP组（t=1．034,P〈0．05）;IL-18水平在SAP组、UAP组和AMI组均显著高于非冠心病对照组[（209．32±80．49）pg／ml比（316．78±75．63）pg／ml比（457．78±83．21）pg／ml比（146．72±79．36）pg／ml,t=2．016～3．167,P均〈0．05],且UAP、AMI组显著高于SAP组（t=2．173,2．596,P〈0．05）;IL-10水平在SAP组、UAP组和AMI组显著高于非冠心病对照组[（116．45±42．76）pg／ml比（85．64±27．33）pg／ml比（70．26±18．55）pg／ml比（48．46±18．27）pg／ml,t=2．9972．018,P均d0．053,而AMI组、UAP组显著低于SAP组（t-2．034,2．291,P〈0．05）。Pearson直线回归分析显示,CHD组的血清睾酮水平与IL．10（r=-0．678,P〈0．01）,IL-18（r=-0．579,P〈O．01）水平呈显著负相关。结论：冠心病血清睾酮及IL-18,IL-10水平有显著改变,且血清睾酮与IL-18,IL-10呈显著负相关,可作为评价冠状动脉粥样硬化病变的新指标。     

抗病毒治疗对慢性丙型肝炎CD4^＋CD25^＋调节性T细胞频率和功能的影响

目的研究抗病毒治疗前后慢性丙型肝炎患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）频率和功能的变化。方法筛选HLA—A2阳性慢性丙型肝炎患者31例，给予聚乙二醇化干扰素α-2a（相对分子质量为40000）180μg每周1次皮下注射，联合口服利巴韦林。分别在治疗前和治疗结束随访24周时应用流式细胞仪检测患者CD4^＋CD25^＋ Treg细胞占外周血CD4^＋T细胞的频率，应用液闪计数仪检测其对HCV特异性CD8^＋T细胞增殖的抑制作用，ELISA法检测细胞培养上清γ干扰素（IFN-γ）水平的变化情况。结果治疗结束随访24周，患者外周血CD4^＋CD25^＋ Treg细胞频率为（9．6±3．0）％，明显低于治疗前的（11．0±2．3）％（t=2．028，P〈0．05）；持续病毒学应答（SVR）组CD4^＋CD25^＋ Treg细胞频率为（8．9±2．7）％，明显低于未获得SVR患者组的（10．4±2．3）％（t=3．324，P〈0．01）。抗病毒治疗后CD4^＋CD25^＋ Treg细胞抑制HCV特异性CD8^＋T细胞增殖的作用减弱。治疗后患者IFN-γ水平为（3959±577）pg／ml，明显高于治疗前的（1965±326）pg／ml（t=16．1，P〈0．01）；获得SVR患者组IFN-γ（6824±568）pg／ml，明显高于未获得SVR患者组的（2219±286）pg／ml（t=29．853，P〈0．001）。结论慢性丙型肝炎患者随着HCV RNA水平的下降，CD4^＋CD25^＋Treg细胞频率降低，抑制HCV特异性CD8^＋T细胞增殖的作用减弱。     

姜黄素抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应的机制研究

目的探讨姜黄素抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法以0、250、500μmol／L棕榈酸干预小鼠巨噬细胞RAW264．724h,观察细胞形态,逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中受体相互作用蛋白140（RIPl40）、肿瘤坏死因子a（TNF-a）、白细胞介素-6（IL-6）mRNA水平,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清中TNF-a、IL-6水平;噻唑蓝法（MTr）确定姜黄素作用RAW264．7细胞的最佳时间和浓度;细胞分为姜黄素组和对照组,分别给予20μmol／L姜黄素和二甲基亚砜（DMSO）预处理1h后,均给予500μmol／L棕榈酸作用24h,观察细胞形态并检测细胞中RIPl40、TNF-a、IL-6mRNA水平和上清中TNF-a、IL-6浓度。采用单因素方差分析和t检验对研究数据进行统计检验。结果500μmol／L棕榈酸组RIPl40mRNA表达较0μmol／L组显著升高（3．40±0．51比1．01±0．21,t=7．436,P〈0．01）;0、250、500μmol／L棕榈酸组TNF-amRNA（1．00±0．03、1．79±0．12、2．16±0．13）和蛋白[（197±25）、（371±10）、（485±17）ng／L]、IL-6mRNA（1．00±0．51、2．55±0．15、2．59±0．17）和蛋白[（953±66）、（1081±36）、（1182±18）ng／L]与棕榈酸剂量明显相关（F=99．308、187．049、152．958、26．594,均P〈0．01）;棕榈酸处理后,细胞变圆、皱缩甚至崩解;姜黄素作用RAW264．7细胞的最佳时间为1h,最佳浓度为20ixmol／L;姜黄素组与对照组相比,RIPl40mRNA（1．00±0．05比0．63±0．01,t=一13．79,P〈0．01）、TNF-amRNA（0．64±0．11比1．00±0．07,t=一4．532,P〈0．05）和蛋白[（322±12）比（485±17）ng／L,t=一13．577,P〈0．01]、IL-6mRNA（0．57±0．05比1．00±0．02,t=一14．167,P〈0．01）和蛋白[（241±47）比（1182±18）ng／L,t=一44．810,P〈0．01]均显著降低,而细胞形态正常,细胞问仍有连接融合。结论RIPl40可能参与姜黄素抑制棕榈酸诱导的炎症反应过程。     

2型糖尿病合并胃癌行胃切除后不同消化道重建对血糖代谢的影响

目的探讨2型糖尿病合并胃癌行胃切除后不同消化道重建方式对2型糖尿病患者血糖代谢的影响。方法选取2008年1月至2012年1月在第二军医大学长海医院普外科就诊的胃癌合并2型糖尿病的胃切除患者66例为研究对象,按照胃肠道重建方式进行分组,分为胃远端大部切除术并行毕Ⅰ式吻合组（A组,26例）和胃远端大部切除术并行毕Ⅱ式吻合组（B组,40例）。观察2组患者术前年龄、病程、体质指数（BMI）、糖化血红蛋白（HbA1c）、胰岛素剂量、空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hPG）,比较2组患者术后1周及3个月FPG、2hPG的变化。组间比较采用方差分析。结果A组手术前后FPG和2hPG差异均无统计学意义（均P〉0．05）。B组术后1周、术后3个月FPG及2hPG与术前比较差异均有统计学意义[分别为FPG：（7．0±0．6）比（6．1±0．4）比（10．2±1．0）mmol／L,F=4．25,P〈0．05;2hPG：（8．8±0．1）比（7．3±1．1）比（11．4±1．8）mmol／L,F=3．87,P〈0．05];同时B组术后1周及术后3个月FPG及2hPG与A组比较差异均有统计学意义[分别为FPG：术后1周为（7．0±0．6）比（10．0±0．7）mmol／L,t=5．35,P〈0．05;术后3个月为（6．1±0．4）比（9．8±0．7）mmol／L,t=4．78,P〈0．05;2hPG：术后1周为（8．8±0．1）比（12．3±0．5）mmol／L,t=6．12,P〈0．05;术后3个月为（7．3±1．1）比（11．7±0．6）mmol／L,江6．78,P〈0．05]。结论胃远端大部切除术行毕Ⅱ式吻合重建对胃癌合并2型糖尿病患者的高血糖有明显的缓解作用。     

肺结核合并乙肝患者抗结核治疗联合拉米夫定减少药物性肝损伤的临床观察

[目的]观察肺结核合并慢性乙型病毒性肝炎（乙肝）患者,在结核治疗中联合应用拉米夫定对肝功能的影响。[方法]68例服用抗结核药物的慢性乙肝患者,随机分为2组。拉米夫定组33例,强化期服用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇2个月,巩固期服用异烟肼、利福平、乙胺丁醇7个月,同时给予拉米夫定100mg,每天1次口服;对照组35例,服用与拉米夫定组相同的抗结核治疗方案。评价治疗前后患者临床症状、肝功能及HBVDNA。[结果]拉米夫定组肝损伤发生率为9．09％;对照组为40．0%（P〈0．01）;拉米夫定组临床症状和肝功能明显好于对照组（P〈0．01）;治疗结束时,拉米夫定组患者HBVDNA为（3．1±0．3）lg拷贝／ml,对照组为（6．5±0．8）lg拷贝／ml。随访期间,2组间肝炎发病率比较差异无统计学意义（P〉O．05）。[结论]拉米夫定可以减少肺结核合并慢性乙肝患者抗结核治疗导致的药物性肝损伤的发生机率和程度,安全性好。