反相离子对HPLC同时测定制马钱子中4种生物碱的含量

目的建立同时测定制马钱子中4种生物碱士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物、马钱子碱氮氧化物含量的反相离子对HPLC法。方法应用Lichrospher S C18色谱柱(4.6mm×300mm,5μm),以乙腈-水(38:62,每1000mL加入磷酸二氢钾3.4g和十二烷基硫酸钠1.7g)为流动相,流速:1.0mL.min-1,柱温:30℃,检测波长:260nm。结果4种生物碱士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物和马钱子碱氮氧化物的线性范围分别为13.7～219.1,12.55～200.8,0.3743～5.988和0.6225～9.96mg.L-1(r>0.9999),平均回收率分别为98.0%,102.2%,103.3%和99.9%(RSD均小于2.5%)。结论该方法简便、准确,重复性好,适用于制马钱子中士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物、马钱子碱氮氧化物的含量测定。     

马钱子减毒总生物碱的制备及毒性

目的制备去除大部分士的宁的马钱子减毒总生物碱,并考察马钱子总生物碱减毒前后成分及毒性的变化。方法用不同体积分数的乙醇溶解马钱子总生物碱,经磁力搅拌、离心后制备得到马钱子减毒总生物碱,HPLC法测定马钱子减毒总生物碱中马钱子碱和士的宁的量。用Q-TOF-MS技术比较鉴定了马钱子总生物碱减毒前后的主要生物碱类成分。通过小鼠口服急性毒性试验考察了马钱子总生物碱减毒前后的毒性变化情况。结果以20%乙醇为溶剂制备的马钱子减毒总生物碱去士的宁效果最好,同时不影响其他19种生物碱类含有量。小鼠口服急性毒性LD50实验表明马钱子减毒总生物碱与马钱子总生物碱的LD50分别为31.08 mg/kg、10.92 mg/kg。结论马钱子总生物碱中士的宁占38.49%,减毒后仅占14%,减毒工艺提高了马钱子总生物碱临床使用的安全性。     

热痹清片中马钱子碱和士的宁在大鼠体内的药动学分析

目的:大鼠灌胃给予热痹清片和制马钱子粉后,计算马钱子碱和士的宁的药动学参数,比较二者在血浆中的药动学特征变化。方法:采用UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中马钱子碱和士的宁的含量。Agela Venusil ASB C18色谱柱(2.1mm×50 mm,3μm),流动相乙腈-0.15%甲酸溶液(60∶40),柱温35℃,流速0.1 m L·min-1,进样量5μL。以盐酸克伦特罗为内标,采用ESI+模式,多反应离子监测(MRM),定量分析的离子分别为马钱子碱m/z 395.22~243.97,士的宁m/z 335.14~183.96,盐酸克伦特罗m/z 277.11~202.87。样品处理采用液液萃取法。利用DAS 2.1软件计算药动学参数。结果:热痹清片和制马钱子粉中马钱子碱的达峰时间(tmax)分别为(27±11),(40±12)min,士的宁依次为(30±9),(42±14)min,马钱子碱的药峰浓度(Cmax)分别为(5.6±1.2),(4.5±1.7)μg·L-1,士的宁依次为(27.3±10.8),(15.9±7.0)μg·L-1,马钱子碱的药时曲线下面积(AUC0-t)分别为(922±96),(710±126)μg·min·L-1,士的宁依次为(3 957±651),(2 031±256)μg·min·L-1,马钱子碱的清除率/生物利用的(CL/F)分别为(4 596±306),(87±34)L·min-1·kg-1,士的宁依次为(880±84),(49±10)L·min-1·kg-1。结论:马钱子碱和士的宁在大鼠体内药动学行为均符合二房室模型。与制马钱子粉比较,热痹清片能显著提高生物利用度,使其有效成分吸收、消除加快。     

HPLC同时测定大鼠血浆中马钱子碱和士的宁的浓度

目的:建立能同时测定大鼠血浆中马钱子碱和士的宁浓度的HPLC分析方法。方法:大鼠血浆样品以石杉碱甲为内标,液液萃取法处理后用Kromasil C18柱分离,以乙腈-0.01 mol.L-1庚烷磺酸钠与0.02 mol.L-1磷酸二氢钾等量混合后用10%磷酸调体系pH 2.8(24∶76)作流动相,检测波长264 nm。结果:血浆中杂质不干扰样品的含量测定,马钱子碱和士的宁在50～2 000μg.L-1线性良好,平均提取回收率均大于86%,日内、日间精密度均小于8%,稳定性符合体内药物分析要求。结论:方法灵敏度高、精密度好,可应用于马钱子总生物碱中主要成分的药物动力学研究。     

马钱子总生物碱的含量测定

目的建立马钱子总生物碱的含量测定方法并用于提取工艺的评价。方法采用酸性染料比色法测定总生物碱含量:以马钱子碱和士的宁为对照品,溴麝香草酚蓝为酸性染料,在pH7.2缓冲溶液条件下,用氯仿萃取。结果马钱子碱在0.0412～0.206mg/mL范围内,士的宁在0.0428～0.214mg/mL范围内浓度与吸光度值呈良好的线性关系。马钱子碱的平均回收率为(101.8±4.6)%(n=5);士的宁的平均回收率为(103.3±2.7)%(n=5)。结论所建立的总生物碱测定方法简便、准确、稳定,可以满足马钱子总生物碱提取工艺考察的需要。     

马钱子总生物碱脂质体的含量与包封率测定

目的 建立测定马钱子总生物碱脂质体含量和包封率的方法,用于处方与工艺评价.方法 采用氨性氯仿法提取马钱子总生物碱并分析其成分,采用硫酸铵梯度法制备马钱子总生物碱脂质体.以士的宁为对照品,采用紫外分光光度法,在254 nm测定用破膜剂溶解的马钱子总生物碱脂质体的吸光度确定其含量.采用葡聚糖凝胶柱分离脂质体和游离药物,分别测定含量后计算包封率.结果 马钱子总生物碱提取物平均得率为3.49%,在总生物碱提取物中士的宁和马钱子碱分别占46.76%和26.51%.士的宁标准曲线的范围是2.4～20 μg/mL,加样回收率在96.66～102.62%范围内.葡聚糖凝胶柱层析的回收率为100.85±0.79%(n=3).结论 所建立的方法简便快捷稳定,可以满足马钱子总生物碱脂质体质量控制的需要.     

风湿关节炎片的质量标准提升研究

目的 提升风湿关节炎片的质量标准,同时考察马钱子总生物碱对照提取物代替马钱子碱、士的宁对照品在提升风湿关节炎片的质量标准中的可行性。方法 对方中麻黄和当归2味中药进行薄层色谱法（TLC）鉴别;使用高效液相色谱法（HPLC）测定处方君药马钱子中马钱子碱和士的宁的含量,并考察马钱子总生物碱对照提取物代替马钱子碱、士的宁对照品测定风湿关节炎片中马钱子碱、士的宁含量的可行性。结果 用TLC鉴别麻黄和当归,图谱斑点清晰,具有较好的专属性;马钱子总生物碱对照提取物中马钱子碱在0.053 1~1.593 0 μg与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,平均回收率为101.90%,RSD为1.85%;士的宁在0.058 9~1.766 5 μg与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,平均回收率为97.27%,RSD为1.72%。以马钱子总生物碱对照提取物和马钱子碱、士的宁对照品为对照,测得样品中马钱子碱含量分别为0.018 8~0.748 1、0.012 6~0.731 5 mg/片;士的宁含量分别为0.034 9~0.813 1、0.038 9~0.795 9 mg/片。结论 建立的方法操作简单、快速、准确,可用于风湿关节炎片的质量控制。采用马钱子总生物碱对照提取物和马钱子碱、士的宁对照品测定样品含量,结果差异无统计学意义,表明马钱子总生物碱对照提取物可代替马钱子碱、士的宁对照品测定风湿关节炎片中马钱子碱、士的宁的含量。     

LC-MS/MS测定马钱子总碱囊泡凝胶经皮给药后大鼠的血药浓度

目的:建立LC-MS/MS测定大鼠血浆中的马钱子碱和士的宁含量,以溶剂萃取法提取大鼠血浆中的待测成分。方法:以他克林为内标,采用Agilent ZORBAX XDB-C18色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-水(0.05%甲酸,10 nmol.L-1甲酸铵)梯度洗脱,质谱采用多反应监测(MRM),用于定量分析的离子对依次为m/z 395.2/324.2(马钱子碱),m/z 335.2/184.2(士的宁)和m/z 199.1/171.1(他克林)。结果:测定血浆样品2种成分的线性范围分别为0.195～100,0.078 1～40μg.L-1,相关系数分别为0.994,0.996,马钱子碱的提取回收率为78.9%～102.4%,士的宁的提取回收率为95.2%～106.1%,方法的精密度、准确度、基质效应和稳定性均符合要求。结论:方法专属性强、灵敏度高,适用于血浆马钱子类生物碱的药代动力学研究。囊泡制剂能够降低马钱子碱进入体循环的药物浓度,且具有缓释作用。     

马钱子配伍白术前后主要生物碱成分变化的HPLC测定

目的:通过马钱子配伍白术(马钱子配伍白术以下简称马白)不同比例水煎液中马钱子碱和士的宁的变化,观察配伍对马钱子主要毒性成分的影响,并寻求减毒较佳配伍比例。方法:采用HPLC分别对配伍前后主要生物碱成分马钱子碱和士的宁的含量进行测定。结果:与马钱子单煎剂比较,马白1∶2煎剂中马钱子碱和士的宁分别升高17.6%和46.9%;马白1∶4煎剂的马钱子碱和士的宁别下降23.5%和8.5%;马白1∶6煎剂中马钱子碱和士的宁分别降低29.0%和16.6%。结论:马白1∶4、1∶6煎剂可降低马钱子毒性成分,起到减毒作用。减毒较佳配比为马白1∶6。     

HPLC测定马钱子配伍生地黄前后马钱子碱和士的宁的含量

目的:研究马钱子配伍生地黄(以下简称马生)不同比例水煎剂中马钱子碱和士的宁的含量变化。方法:采用HPLC分别对马生前后主要生物碱成分马钱子碱和士的宁的含量进行测定。结果:与马钱子单煎剂比较,马生1∶2煎剂中马钱子碱和士的宁分别下降19.49%和0.23%;马生1∶4煎剂中马钱子碱和士的宁分别下降59.93%和31.95%;马生1∶6煎剂中马钱子碱和士的宁分别升高6.25%和43.22%。结论:马生1∶21、∶4煎剂可降低马钱子毒性成分,起到减毒作用。减毒较佳配伍比例为马生1∶4。     

毛细管区带电泳法对马钱子药材中生物碱质量控制的研究

 目的建立马钱子药材中生物碱质量控制的方法。方法利用毛细管区带电泳法,以来涂层石英毛细管(75μm×50 cm)为分离通道,80mmol·L^-1Tris-H₃BO₃(醋酸调pH至4.0)为运行缓冲溶液,分离电压23 kV,进样3.45×10³ Pa,10s；柱温25℃；DAD检测波长214 nm。结果士的宁和马钱子碱的浓度均在1.0～120 mg·L^-1内呈良好线性关系,r分别为0.9999和0.9997；加样回收率分别为96.57%(RSD=1.73%)和102.04%(RSD=1.62%)；最低检测限分别为0.490 mg·L^-1和0.957 mg·L^-1。结论实验证明利用毛细管区带电泳法,马钱子药材中士的宁和马钱子碱能够与其他组分得到很好的分离,方法简单、快速,可作为中药材中有效成分质量控制的方法。     

超滤法测定牛蒡苷及牛蒡苷元的血浆蛋白结合率

目的:测定牛蒡苷及牛蒡苷元的血浆蛋白结合率.方法:采用超滤法结合高效液相色谱法对牛蒡苷及牛蒡苷元与大鼠血浆以及健康人血浆蛋白结合率进行测定.结果:牛蒡苷与大鼠血浆在64.29,32.14,16.07 mg·L-1-下的血浆蛋白结合率分别为(71.2±2.0)％,(73.4±0.61)％,(78.2±1.9)％,与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为(64.8±3.1)％,(64.5±2.5)％,(77.5±1.7)％;牛蒡苷元与大鼠血浆在77.42,38.71,19.36 mg·L-1下的血浆蛋白结合率分别为(96.7±0.41)％,(96.8±1.6)％,(97.3±0.46)％,与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为(94.7±3.1)％,(96.1±0.3)％,(97.9±1.3)％.结论:牛蒡苷与大鼠血浆蛋白有中等强度的结合,略高于与人血浆蛋白结合率;牛蒡苷元与大鼠血浆和健康人血浆均有很强的结合.     

马钱子总生物碱脂质体静脉注射给药后马钱子碱在大鼠体内的药物动力学研究

目的:比较不同磷脂组成马钱子总生物碱脂质体静脉注射给药于大鼠后马钱子碱的体内药物动力学性质.方法:采用硫酸铵梯度法和隐形脂质体技术制备了马钱子总生物碱脂质体,除去游离药物后,测定了其中总生物碱、马钱子碱的含量.测定了马钱子总生物碱溶液和不同磷脂组成马钱子总生物碱脂质体静脉注射给药后不同时间点马钱子碱的血药浓度,药动学参数采用3P97程序进行拟合.结果:马钱子总生物碱溶液与不同磷脂组成脂质体中马钱子碱占总生物碱的比例相同.与大豆磷脂(SPC)脂质体相比,氢化大豆磷脂(HSPC)脂质体给药后的马钱子碱的药动学性质发生了极显著的改变,AUC显著提高了13.3倍,而表观分布容积下降到3.6%,复合磷脂脂质体仅AUC有所提高,其他参数不变.结论:磷脂组成对马钱子总生物碱脂质体静脉注射给药后的体内药动学过程有显著影响.     

超滤法测定丹酚酸A的血浆蛋白结合率

目的:建立血浆样品中丹酚酸A浓度的分析方法,并测定丹酚酸A的血浆蛋白结合率,为进一步展开丹酚酸A的代谢和药动学研究及指导临床用药提供参考。方法:采用超滤法和HPLC测定丹酚酸A在牛血清白蛋白(BSA),大鼠血浆,新西兰兔血浆和比格犬血浆中的蛋白结合率。结果:丹酚酸A在0.01～2.5 mg.L-1线性良好,标准曲线方程为Y=0.807 3X+0.013 2(r=0.999 4)。丹酚酸A与BSA,大鼠血浆,新西兰兔血浆和比格犬血浆在5.0,50.0,100.0 mg.L-1的含药血浆中其平均蛋白结合率分别为(99.79±0.02)%,(99.79±0.03)%,(99.73±0.06)%,(99.81±0.03)%。结论:所建立的方法灵敏度高,专属性和重复性好,操作简单,能够满足定量分析测试要求。丹酚酸A与血浆蛋白有很强的结合,且在已考察的血药浓度范围内其血浆蛋白结合率无明显浓度依赖性和种属差异性。     

HPLC测定人血浆中山莨菪碱的浓度

 目的建立高效液相色谱法测定人血浆中山莨菪碱的血药浓度。方法色谱柱为Diamonsil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-10 mmol·L^-1磷酸二氢钾溶液(pH3.0,内含10 mmol·L^-1高氯酸)(20∶80);柱温:室温;流速:1.0mL·min^-1;检测波长:214 nm。结果标准曲线的线性范围为0.5～50 mg·L^-1(r=0.999 7,n=7),低、中、高3种浓度的平均回收率为(87.2±2.2)%,(92.5±1.0)%,(89.3±2.1)%,日内RSD≤2.5%,日间RSD≤5.2%。山莨菪碱的最低检出量为0.1 mg·L^-1。结论本方法简单、灵敏、重现性好,适用于山莨菪碱临床血药浓度测定及人体药动学研究。     

开颅手术病人口服左旋氧氟沙星片的药代动力学研究

 目的:研究开颅手术患者po左旋氧氟沙星片的药代动力学?方法:采用反相高效液相色谱法测定6名开颅手术患者单剂量po 左旋氧氟沙星300mg后血浆中左旋氧氟沙星浓度,以3P87药代动力学计算程序处理测定结果,计算药代动力学参数?结果:其药代动力学特性符合一室开放模型,消除半衰期、峰浓度、药时曲线下面积、血浆总的清除率分别为(6.150±1.852)h,(3.654±0.390)mg·L^-1,(33.686±8.294)mg·h·L^-1,(9.496±2.940)L·h^-1?所得结果与健康成年人单剂量po左旋氧氟沙星300mg的药代动力学参数近似,但患者的表观分布容积(78.212±6.871)L明显比正常人高?结论:实验结果提示开颅手术可能使左旋氧氟沙星透过血脑屏障量增加?     

益髓通经方中马钱子生物碱纯化工艺优选

目的:优选大孔吸附树脂纯化益髓通经方中马钱子生物碱的工艺条件。方法:以马钱子碱和士的宁的含量为指标,HPLC进行含量测定,通过静态吸附和解吸试验筛选大孔吸附树脂型号,采用单因素试验考察大孔树脂吸附和洗脱条件,确定益髓通经方中马钱子生物碱的纯化工艺。结果:最佳纯化工艺为采用X-5型大孔吸附树脂,上样液质量浓度0.1g.mL-1,上样速度1.0 mL.min-1,上样量4 BV,吸附时间2 h,加1 BV水洗除杂,用6 BV 50%乙醇以2.0 mL.min-1的速度进行洗脱。结论:采用大孔吸附树脂纯化马钱子提取物中生物碱是可行的,优选的纯化工艺简单、经济。     

不同剂量国产甲磺酸左氧氟沙星在健康志愿者体内药动学研究

 目的 研究健康志愿者单次 po 不同剂量国产甲磺酸左氧氟沙星的药动学。方法 30名健康志愿者分3组 po 100,200,300 mg甲磺酸左氧氟沙星,血及尿药浓度均采用HPLC测定。数据用3P87药动学程序进行模型拟合并计算药动学参数。结果 甲磺酸左氧氟沙星药-时曲线符合二室模型,po 100,200,300 mg后其主要药动学参数：t_peak分别为1.287,1.121,1.386 h,t_1/2β分别为7.669,6.569,6.187 h,AUC分别为11.418,21.502,32.746 mg·h·L^-1,0～24 h尿药回收率分别为72.24%,66.31%,68.62%。主要药动学参数在3个剂量组之间无显著性差异。结论 国产甲磺酸左氧氟沙星在健康人体内的处置无剂量依赖性。本研究可为该药的临床应用提供一定科学依据。     

异亚丙基莽草酸血浆蛋白结合率的测定

目的:测定异亚丙基莽草酸的血浆蛋白结合率。方法:采用超滤法结合高效液相色谱法对异亚丙基莽草酸与犬血浆及人血浆的蛋白结合率进行测定。结果:异亚丙基莽草酸与犬血浆在0.3,0.15 g.L-1,0.5 mg.L-1下的血浆蛋白结合率分别为(4.36±0.02)%,(4.12±0.19)%,(2.23±0.59)%。异亚丙基莽草酸在以上3个浓度下与健康人血浆蛋白结合率分别为(11.23±0.01)%,(10.06±0.69)%,(9.72±0.59)%。结论:异亚丙基莽草酸与血浆蛋白的结合较弱。     

醒脑静口服给药栀子苷在Beagle犬体内的药代动力学研究

目的:建立Beagle犬血浆中栀子苷的高效液相色谱分析方法,研究醒脑静口服给药后栀子苷的药代动力学特征及生物利用度。方法:Beagle犬分别口服、注射给予醒脑静,采用HPLC测定Beagle犬血浆中栀子苷浓度,以Kinetica软件拟合,计算相关药动学参数。结果:Beagle犬血浆中栀子苷在1.24～158.88 mg.L-1线性关系良好,口服给药的主要药动学参数为Cmax(11.8±0.6)mg.L-1,Tmax(52.0±4.5)min,AUC(1 280.8±172.0)mg.min.L-1,MRT(118.7±25.4)min。注射给药的药动学参数为Cmax(107.4±6.3)mg.L-1,AUC(7 930.1±670.0)mg.min.L-1,MRT(92.4±5.1)min。生物利用度为(6.46±0.87)%。结论:该实验建立的Beagle犬血浆中栀子苷的HPLC分析方法,适用性良好,提取、方法回收率和日内、日间精密度均符合要求,室温及冻融条件下稳定性良好。醒脑静口服给药栀子苷的生物利用度较低。