三氯乙烯诱发SD大鼠产生免疫反应的模型研究

目的研究SD大鼠对三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)免疫刺激的反应,拟建立大鼠对TCE免疫反应的模型.方法背部皮内注射体积分数为15%的TCE免疫SD大鼠,1周1次,免疫5次后于大鼠左后足跖膜下注射TCE攻击,6h称左右后足重量计算肿胀度.取TCE免疫大鼠心脏血,分离并培养单个核细胞.将培养的细胞与系列浓度的TCE共同培养2d后,检测细胞酸性磷酸酶的活性,据此判断细胞的活化增殖程度.结果 TCE免疫大鼠攻击足肿胀度与空白对照组大鼠的相比差异显著(P＜0.005).体积分数为3%的TCE可使培养的大鼠血单个核细胞的增殖达到峰值.结论重复皮内注射TCE可使SD大鼠产生某种免疫反应.SD大鼠的单个核细胞可被TCE刺激活化.     

亚砷酸钠染毒对SD大鼠肝脏的损伤作用及血清相关蛋白的表达

  目的  探讨亚慢性砷暴露对大鼠肝脏糖代谢的影响及相关分子机制。  方法  以SD大鼠为研究对象,实验设对照组（灌胃蒸馏水）、亚砷酸钠（NaAsO₂ ）高、中、低剂量组（8、4、2 mg/kg,灌胃NaAsO₂）。连续12周。记录大鼠体重,第12周口服葡萄糖耐量试验（OGTT）检测葡萄糖耐受情况。12周后处死大鼠,取毛发和肝脏,检测毛发砷含量、肝脏糖原含量、己糖激酶和丙酮酸激酶活性;观察肝脏病理变化;检测糖代谢相关蛋白磷脂酰肌醇 – 3 – 激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、糖原合成酶激酶 – 3β（GSK3β）、磷酸化糖原合成酶激酶 – 3β（P-GSK3β）、葡萄糖转运体2（GLUT2）、葡萄糖转运体4（GLUT4）表达情况。  结果  统计大鼠体重变化发现,亚砷酸钠高、中剂量组雄性和雌性大鼠体重在第8、12周时有所降低;与对照组[0.43 ± 0.08]mg/kg相比,NaAsO₂高、中、低剂量组[（49.24 ± 8.02）、（21.06 ± 3.42）、（14.59 ± 2.00）mg/kg]毛发砷含量明显升高（P＜0.05）;大鼠葡萄糖耐量异常、肝脏糖原含量降低;与对照组己糖激酶、丙酮酸激酶[（2.84 ± 0.08）、（55.95 ± 0.96）（U/mg）]活性相比,NaAsO₂高、中剂量组己糖激酶[（1.94 ± 0.11）、（2.14 ± 0.03）（U/mg）]、丙酮酸激酶[（43.64 ± 1.05）、（44.26 ± 0.10）（U/mg）]活性降低（P＜0.05）;病理结果显示,NaAsO₂高、中剂量组肝细胞轻度脂肪变性,有较多圆形空泡产生;WB结果表明,与对照组[PI3K（1.03 ± 0.02）、AKT（1.36 ± 0.02）、P-GSK3β/ GSK3β（0.96 ± 0.04）、GLUT2（1.24 ± 0.12）、GLUT4（1.80 ± 0.15）]相比,NaAsO₂高剂量组PI3K[0.76 ± 0.06]、AKT[1.19 ± 0.04]、P-GSK3β/GSK3β[0.76 ± 0.03]、GLUT2[0.82 ± 0.11]和GLUT4[0.88 ± 0.14]蛋白表达降低,NaAsO₂中剂量组AKT[1.08 ± 0.10]、GLUT4[1.38 ± 0.10]蛋白表达降低,NaAsO₂低剂量组GLUT4[1.10 ± 0.12]蛋白表达降低（P＜0.05）。  结论   亚慢性砷暴露可致大鼠肝脏糖代谢紊乱,其机制可能与改变糖原含量、影响糖代谢相关酶活性和相关蛋白表达有关 。     

TCDD对SD大鼠肝脏超微结构的影响

采用一次性腹腔注射的方法对雌性SD大鼠进行TCDD染毒,剂量为10μg/kg,用透射电镜观察其肝脏超微结构的变化。结果可见,肝细胞部分线粒体溶解,粗面内质网脱颗粒,池崩解,滑面内质网池扩张、融合,侧重以核染色质溶解、部分凝固为特征,肝细胞脂肪变,枯否氏细胞核染色质凝聚,细胞器轻度溶解。提示TCDD染毒24h对大鼠肝脏损害广泛,能使肝细胞和枯否氏细胞超微结构发生明显改变。     

硒对大鼠肝脏抗氧化酶活性及基因表达的影响

目的：探讨补硒对大鼠肝脏抗氧化酶活性及基因表达的影响。方法：给大鼠补充不同剂量的硒，观察补硒对大鼠肝脏硒、丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）、硫氧还蛋白还原酶（TR）活性及TR mRNA表达的影响。结果：补硒20μg/kg能显著降低MDA含量，增强SOD、CAT、GSH－Px的活性，而补硒40，80μg/kg却显著增加MDA含量，降低CAT、GSH－Px和TR的活性，并能降低TR mRNA表达水平。硒的含量则表现出剂量依赖性。结论：硒对机体有双重作用，适当剂量硒增强机体抗氧化功能，过高剂量硒使机体中毒。     

基因芯片检测三唑磷染毒大鼠肝脏基因表达

[目的]研究低剂量暴露于有机磷农药三唑磷的慢性毒性分子机制。[方法]用Affymetrix RT-U34基因芯片技术,分析以含100mg/kg三唑磷的饲料喂养6个月后的大鼠亚慢性毒性试验差异基因表达,同时作其病理检查。[结果] 三唑磷平均摄入剂量为5.21 mg/(kg·d)的100 mg/kg剂量组与对照组相比,有30个基因和表达序列发生2倍以上变化, 涉及代谢酶、免疫、DNA损伤修复、应激和细胞结构成分。诱导I相代谢酶P450IIC13和II相代谢酶GSTA2、SULTLE2和促进DNA修复GADD45A基因表达上调,部分代谢酶、免疫、应激有关基因表达下调。细胞结构基因表达变化支持了病理结果。[结论]三唑磷农药亚慢性毒性可能累及代谢酶、免疫、应激和细胞结构成分等方面的变化。     

光气急性染毒对大鼠肝脏的影响

目的探讨光气染毒对大鼠肝脏的影响。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组、光气染毒组,每组共30只;动物置于染毒箱内,对照组动物吸入空气5 min,染毒组动物吸入浓度为8.33 mg/L的光气5 min;在染毒后1、3、6、12、24 h,采用质量分数为20%的乌拉坦腹腔注射麻醉后,采集血液样本和肝脏组织,进行血气分析、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测,在对肝脏组织进行苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察病理学变化。结果染毒3 h后,大鼠动脉氧分压和氧合指数明显下降,6 h达到最低点,分别为(58.67±8.64)mm Hg(临床呼吸衰竭标准60 mm Hg)和(202.30±29.80)mm Hg(急性肺损伤诊断标准300 mm Hg,急性呼吸窘迫综合征诊断标准200 mm Hg);3 h和6 h时染毒组ALT明显高于对照组(t=6.399,P0.01;t=4.165,P0.01),AST在各时间点均有升高(P0.05)。1 h时染毒组肝脏器系数较对照组升高(t=2.982,P=0.01),在3 h、6 h时达到峰值,明显高于对照组(t=3.780,P0.01;t=4.633,P0.01),12 h、24 h时较前略有下降,但与对照组差异仍有统计学意义(t=2.353,P=0.04;t=2.594,P=0.03)。HE染色后可见染毒组肝细胞索间红细胞浸润多见,且越接近中央静脉区越严重,在染毒3 h后达到高峰,之后逐渐缓解,24 h时接近正常。结论光气染毒可以引起肝内淤血、肝质量增加和转氨酶增高,此可能与吸入光气后导致的低氧血症和血液流变学变化及随之发生的氧化应激有关。     

三氯乙烯染毒对豚鼠肝功能与凋亡基因表达的影响

目的探讨使用三氯乙烯(TCE)染毒对豚鼠肝功能和肝细胞凋亡基因(BAX、BAD、Bc1-2)表达的影响。方法将24只豚鼠随机分为3组,采用豚鼠最大值法(GPMT),设立TCE实验组、阴性对照组、阳性对照组,用皮内注射的方式分别注射TCE、橄榄油、2,4-二硝基氯苯(DNCB),实验结束后观察动物皮肤改变,应用自动生化分析仪检测动物肝功能指标,用荧光定量PCR检测肝细胞凋亡基因表达水平。结果 TCE实验组和阳性对照组动物出现明显皮肤损害。TCE实验组动物血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力明显高于阴性对照组(P0.05或P0.01)。肝细胞BAX、BAD的mRNA表达水平比阴性对照组显著升高,Bc1-2表达水平下降(P0.05或P0.01)。结论三氯乙烯可诱导豚鼠产生明显的皮肤变态反应,引起实验动物肝功能指标改变和肝细胞凋亡基因表达水平明显改变。     

三氯乙烯致肝脏损伤作用及其机制研究进展

三氯乙烯（Trichloroethylene,简称TCE）是目前国内广泛应用的有机溶剂之一,常使用于电子、电镀、五金、印刷等行业,其主要的用途是金属表面的去污、脱脂、清洁等。近年来我国部分地区,特别是广东珠江三角洲地区,每年都有多起TCE中毒事件发生,由于TCE中毒病情严重、复杂,涉及皮肤、肝、肾、心脏多个器官受损,甚至出现病人死亡事件,从而引起人们的高度重视[1-4]。肝细胞作为肝脏的主要实质性和功能性细胞,并且也是多种损伤因素的易损细胞,肝脏损伤的发生机制比较复杂,可分为化学性     

腹腔感染对大鼠肝脏白蛋白基因表达的影响

严重腹腔感染常伴有低白蛋白血症，并与死亡率密切相关。感染影响肝脏白蛋白合成的分子机理尚未明了。本研究以盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）方法制造腹腔感染模型，在ＣＬＰ前（ｎ＝８）、ＣＬＰ后４、８、１２、２４、４８和９６ｈ（ｎ＝６）分别处死动物，并留取血和肝脏标本...     

职业接触三氯乙烯引起皮肤和肝脏损害的调查

目的对职业接触三氯乙烯(TCE)引起皮肤和肝脏损害的临床表现进行探讨。方法对2004—2006年深圳发生的7例典型TCE中毒病人进行调查,记录每个病人的职业接触情况、主要临床症状和体征,对血常规、肝功能、尿常规、尿三氯乙酸(TCA)、心电图进行检查分析。结果7例中毒病人中6人发生在电子厂与五金制品厂;TCE接触工龄19~43 d,平均30.6 d;具有头晕、头痛、皮肤瘙痒、发热的比例分别为85.7%、71.4%、100.0%和57.1%;具有皮肤红斑、皮疹、水疱的病人分别为100.0%、57.1%和42.8%;肝肿大3人,尿蛋白阳性2人;ALT、AST、总胆红素(TB IL)异常率分别为100.0%、85.7%、57.1%;心电图检查异常3人,尿三氯乙酸TCA升高5人。结论三氯乙烯中毒可引起神经系统、皮肤、肝脏损害,并对心脏、肾脏也有一定影响,应深入研究其中毒机制,以保护工人身体健康。     

三氯乙烯药疹样皮炎患者免疫相关基因的表达水平

目的 探讨三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎患者外周血免疫相关基因Foxp3、GATA3、CTLA4、T-bet的mRNA表达.方法 选取TCE药疹样皮炎患者8例为病例组,8例健康人为对照组,抽取两组对象的外周血,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术检测外周血免疫相关基因Foxp3、GATA3、CTLA4、T-bet的mRNA的表达水平.结果 与对照组比较,病例组Foxp3、GATA3、CT-LA4基因mRNA表达水平分别升高115％、97％和241％,差异有统计学意义(P＜0.01);与对照组比较,病例组T-bet基因mRNA表达水平下降47％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TCE药疹样皮炎的部分免疫相关基因表达水平发生明显改变,这些基因可能在TCE引起的变态反应中发挥重要作用.     

三氯乙烯所致药疹样皮炎50例临床分析

目的　了解三氯乙烯 (TCE)所致药疹样皮炎的临床特点、并发症 ,探讨治疗方法 ,为研究病因和发病机制提供依据。方法　对 1997～ 2 0 0 0年在我院住院的 5 0例TCE所致药疹样皮炎患者临床资料进行回顾性分析。结果　患者发病与接触浓度不平行 ,无明显的剂量 -效应关系 ,呼吸道或皮肤接触均可发病 ;潜伏期 5～ 6 6d ,平均潜伏期 31.5d(M) ;临床表现以皮肤损害、发热、浅表淋巴结肿大和肝功能损害为主 ;感染为主要并发症 ;糖皮质激素治疗有效。结论　患者临床表现类似药疹 ,临床分型以剥脱性皮炎、多形红斑为主 ;发病机制应属变态反应 ,而IV型可能性大。早期、适量、足程使用糖皮质激素 ,加强皮肤护理 ,积极护肝及防治感染 ,是提高TCE所致药疹样皮炎患者生存率的关键。     

SD大鼠的繁殖性能及子代生长发育情况

目的对浙江省医学科学院实验室已有生殖毒性资料进行统计分析,以研究SD大鼠繁殖性能特征,分析仔鼠在断乳前的生长发育情况,并比较雌雄仔鼠生长发育的差异。方法对已有历史数据即8个批次两代繁殖毒性试验对照组数据进行统计分析。观察终点包括受孕情况、产仔情况、窝重、窝大小、断乳前仔鼠体重,采用excel软件对相关数据进行统计学分析。结果 SD大鼠妊娠周期为22～25 d,交配行为集中分布在第1个动情周期。交配成功率为94.27%（87.50%～100.00%）,受孕率为92.19%（87.50%～100.00%）,活产率为98.81%（95.24%～100.00%）,出生存活率为94.67%（87.78%～99.14%）,哺育成活率为95.85%（89.74～98.82%）。出生0、4、7、14、21 d仔鼠平均体重分别为（6.54±0.64）g、（10.66±1.72）g、（16.74±2.42）g、（32.93±5.28）g、（51.64±6.59）g。其中雌性仔鼠的平均体重分别为（6.40±0.58）g、（10.48±1.62）g、（16.47±2.32）g、（32.41±4.02）g、（50.72±6.49）g,雄性仔鼠的平均体重分别为（6.68±0.70）g、（10.86±1.84）g、（17.05±2.55）g、（33.05±4.37）g、（52.59±7.05）g;两者差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SD大鼠各项繁殖指数均较高,适合用于开展生殖毒性试验。研究发现,哺乳期雌雄仔鼠体重已存在明显的差异,分别将雌雄仔鼠体重等相关参数进行统计分析,能更好地反映大鼠生殖毒性研究结果。     

二氯乙酸对淋巴细胞的毒性和CXCR2/3表达的作用

目的 探讨三氯乙烯及其代谢产物对淋巴细胞增殖的影响以及二氯乙酸在三氯乙烯药疹样皮炎发病过程中的作用.方法 抽取健康人外周静脉血,分离淋巴细胞,分别在2 h和4 h检测0.02 0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、30.00mmol/L共12个浓度二氯乙酸、三氯乙烯、三氯乙酸刺激培养的淋巴细胞增殖能力;通过中性红试验找到二氯乙酸的半数致死量(NR_(50)),依据NR_(50)检测细胞在不同浓度二氯乙酸刺激下乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用实时荧光定量技术检测二氯乙酸刺激下体外培养的淋巴细胞CXCR2和CXCR3基因mRNA的表达情况.结果 细胞增殖能力检测结果显示,20.00mmol/L二氯乙酸刺激时的细胞活力为50%,而30.00mmol/L三氯乙烯和三氯乙酸刺激的细胞活力仍保持在60%以上.与对照组相比,染毒4 h时各剂量二氯乙酸刺激时SOD活力均明显降低,并且酶活力随剂量的升高呈下降趋势,差异均有统计学意义(P<0.05).第4 h在0.88、1.75、3.50、7.00mmol/L二氯乙酸刺激时的LDH活力与第1 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05).在0.5、10.0 mmol/L二氯乙酸刺激培养48 h下,CXCR 2和CXCR3基因mRNA的表达分别是对照细胞表达量的10.34、5.66倍和19.43、8.75倍,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 二氯乙酸对体外培养的淋巴细胞具有较强的毒性作用,可能是三氯乙烯药疹样皮炎的主要诱导剂.     

三氯乙烯药疹样皮炎患者体内补体等变化情况观察

目的探索三氯乙烯药疹样皮炎发病机制。方法对三氯乙烯药疹样皮炎患者部分免疫相关血液生化指标进行分析,观察各指标随病程变化情况。收集13例确诊三氯乙烯药疹样皮炎患者入院时和治疗1个月后血液生化检查中部分免疫相关指标(包括IgG、IgA、IgM、C3、C4等),比较治疗前后这些指标是否发生变化。结果治疗前C3含量和IgM含量明显低于治疗后(近似正常状态)(0.846vs1.402,0.818vs0.949,均P<0.05),其他指标差异无显著性。结论三氯乙烯药疹样皮炎患者病程中可能存在补体活化,从而引起脏器损伤。     

补锌对白内障大鼠血清中NO和NOS影响的研究

目的:探讨补锌对白内障大鼠血清一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法:用亚硒酸钠复制SD大鼠白内障模型,治疗组大鼠双眼点质量浓度为0.4%葡萄糖酸锌(C12H22O14Zn)眼药水,10周后观察各组实验大鼠晶状体的变化并测定血清一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:模型组及治疗组大鼠血清NO含量均低于对照组,且差异具有非常显著性意义(P<0.01);模型组大鼠血清NO含量低于治疗组,其差异也具有非常显著性意义(P<0.01)。而模型组及治疗组大鼠血清NOS活性均低于对照组,差异均无显著性意义(P>0.05);模型组大鼠血清NOS活性低于治疗组,其差异也无显著性意义(P>0.05)。结论:给白内障大鼠眼内补锌对血清NO含量具有明显的影响,而对血清NOS活性无明显影响。     

利用蛋白质组学技术研究三氯乙烯刺激肝细胞后蛋白质差异表达

目的应用双向电泳及串联质谱技术，研究不同剂量三氯乙烯（TCE）诱导L-02肝细胞蛋白质表达谱的差异。方法L-02肝细胞分别用不同剂量TCE和溶剂对照（二甲亚砜）处理后，提取细胞总蛋白，双向凝胶电泳分离蛋白质组成分，银染显色，经ImageMaster 2D Platinum 5．0软件分组分析比较四组图谱，并对差异蛋白斑点进行基质辅助激光解吸／电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF-TOF-MS）分析鉴定。结果得出差异较明显的蛋白质斑点15个，不同剂量TCE刺激后表达分别上调、下调或消失，提示TCE可引起肝细胞蛋白表达发生改变。通过质谱鉴定和IPI human数据库检索，鉴定了其中9个TCE诱导L02肝细胞相关的蛋白质。结论这些结果为深入研究TCE毒作用相关的蛋白质及TCE毒作用的分子标志物提供依据，并为阐明TCE毒作用的分子机制提供线索。