DNA限制性内切酶分析应用于伴放线放线杆菌的鉴定和分型

The aim of the present study was to investigate the potential of restriction endonuclease analysis (REA) for the identifying and typing of Actinobacillus actinomycetemcomitans (Aa). Bacterial chromosomal DNA was extracted and digested with BamHI, HindIII, Sal I and Xho I respectively and separated by agarose gel electrophoresis. DNA fragment patterns of Aa and Haemophilus aphrophilus differed strikingly from each ether. The patterns of Aa FDC Y4 and Aa ATCC 29523, belonging to two different serotypes, also differed notably. Among the 4 enzymes used, Sal I and Xho I gave the most satisfactory results. The results of our work suggested that REA could be used to identify and type Aa. REA is stable, sensitive, accurate and reproducible. The method might be valuable in molecular epidemiologic studies on periodontopathic organisms.     

霍乱弧菌染色体DNA限制性内切酶分析

目的 探讨冬季分离的霍乱弧菌与非冬季分离的霍乱弧菌在染色体基因组织构上的差异。染色体酶切位点的差异与菌株生物学性状及变异的关系。方法 采用10％SDS裂解细菌，酚和氯仿抽提染色体及纯化。分别用限制性内切酶BamHI、HindIII、EcoRI和PstI进行染色体DNA酶切。结果 冬季分离的与非冬季分离的霍乱弧菌标本染色体DNA经限制性内切酶酶切后酶切图谱基本一致。流行菌株与非流行菌株染色体DNA酶切图谱差异较大，酶谱明显不同。结论 冬季分离的霍乱弧菌标本与非冬季分离的霍乱弧菌标本生物学性状上的差异不能反映细菌染色体基因组上的差异。流行菌株与非流行菌株在细菌染色体基因结构组上存在明显的差异。     

几种趋化因子在伴放线放线杆菌刺激的巨噬细胞中的表达

目的探讨趋化因子在伴放线放线杆菌刺激的巨噬细胞中的表达情况。 方法将伴放线放线杆菌和巨噬细胞共同培养,利用β-actin作为内参照,半定量逆转录PCR(RT—PCR)法,测定在不同时间点巨噬细胞表达趋化因子(IL-8、MIP-1α、RANTES、MGSA、MIG)mRNA的相对量。 结果共同培养6h后,巨噬细胞中IL-8和MIP-1α mRNA表达量明显增加(P<0.05,P<0.01),并且随着培养时间的延长,表达量也增加。趋化因子RANTESmRNA的表达量无明显变化。 结论趋化因子IL-8和MIP-1α mRNA表达量明显增加,提示其可能参与了以伴放线放线杆菌为优势致病菌的青少年牙周炎的免疫反应。     

几株结核杆菌DNA的限制性内切酶谱比较

改良了一种从结核杆菌中提取高分子量ＤＮＡ的方法，并将所获得的三株人型结核杆菌（两株地方株、一株标准株），一株牛型结核杆菌的ＤＮＡ用于ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ、ＥｃｏＩ、ＨｉｎｄⅢ四种不同的限制性内切酶的消化，经电泳后产生了它们各自的酶谱。结果显示出，牛型结核杆菌的四种酶谱均显著区别于三株人型结核杆菌，说明它作为独立的型别存在；人型结核杆菌标准的ＰｓｔＩ酶谱与两株人型结核杆菌地方株存在显著差异；而两株人     

限制性内切酶酶切及限制性内切酶酶切图谱分析

限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是一类能够识别DNA的特异序列并在识别位点剪切双链DNA的核酸内切酶。主要存在于原核生物中，大多数来自于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制一修饰体系，限制外源DNA、保护内源DNA。1970年Smith等分离到第一种限     

用限制性核酸内切酶分析钩端螺旋体DNA的研究

作者选用钩体赖型56601株、017株、秋季型56606株、曼耗2型67020株、1987年分离株87112、87369株,用内切酶EcoR Ⅰ、Bgl Ⅱ、Hha Ⅰ和Hind Ⅲ消化分析其DNA,结果表明:钩体017株的四种内切酶图谱明显不同,在EcoR Ⅰ酶切图谱上,赖型、秋季型、曼耗2型钩体DNA的主要差别在高分子区带,赖型强毒力株017较同型弱毒力株56601在10.5kb处染色较深;三型钩体的Hind Ⅲ酶切图谱仅有细小差异;分离株87112和87369的EcoR I 酶切图谱与赖型56601和017基本一致。在HindⅢ酶切图谱上,分离株87112与赖型56601株、017株相似。提示:限制性核酸内切酶分析可以作为钩体分型和鉴定的手段。     

几种趋化因子在伴放线放线杆菌刺激的巨噬细胞中的表达

目的探讨趋化因子在伴放线放线杆菌刺激的巨噬细胞中的表达情况.方法将伴放线放线杆菌和巨噬细胞共同培养,利用β-actin作为内参照,半定量逆转录PCR(RT-PCR)法,测定在不同时间点巨噬细胞表达趋化因子(IL-8、MIP-1α、RANTES、MGSA、MIG)mRNA的相对量.结果共同培养6h后,巨噬细胞中IL-8和MIP-1α mRNA表达量明显增加(P＜0.05,P＜0.01),并且随着培养时间的延长,表达量也增加.趋化因子RANTES mRNA的表达量无明显变化.结论趋化因子IL-8和MIP-1α mRNA表达量明显增加,提示其可能参与了以伴放线放线杆菌为优势致病菌的青少年牙周炎的免疫反应.     

HSV临床分离株的限制性核酸内切酶酶切分析与鉴定

采用三种方法从感染细胞中分离HSV DNA。同时对用三种方法提取的HSV DNA的量以及与细胞DNA分离程度的差别作了比较。采用其中一种方法对10株流行病学上无关的、分别来自疱疹性角膜炎和口唇疱疹病人的分离病毒株,用限制性核酸内切酶BglⅡ、HindⅢ和BamHⅠ进行了酶切分析与鉴定,BglⅡ和HindⅢ可明显区分HSV的型间差别,BamHⅠ可对10株HSV进行株间的鉴定。     

放线共生放线杆菌的分离、鉴定及耐药谱的测定

目的：探讨放线共生放线杆菌（A.a）分离、鉴定的方法,确定其耐药谱。方法：采用选择性培养基、厌氧培养技术及生化鉴定的方法从临床青少年牙周炎、成人快速进展型牙周炎及青少年严重牙龈炎患者的牙周袋内分离出A.a。在此基础上进行了10种抗生素对所分离的全部A.a菌株及1株标准菌株最低抑菌浓度的检测。 结果：共分离出24株A.a,其对庆大霉素、四环素、氨苄青霉素、丁氨卡那霉素及青霉素G呈现出不同程度的耐药性,但对罗红霉素、甲硝唑、链霉素、红霉素及头孢唑啉钠敏感。 结论：罗红霉素、甲硝唑、链霉素、红霉素及头孢唑啉钠在治疗与A.a相关的牙周病能够发挥作用,本研究为A.a耐药性质粒的提取及鉴定打下了基础。     

Association between coinfection of Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans and Treponema denticola and periodontal tissue destruction in chronic periodontitis

Pberyio adlovnetoitlaisr ibso nae c doemsmtruocnti oonral a nddis epaoscek ecth aforarmctaetriiozne·dThis disease is generally divided into two clinical types:chronic periodontitis(CP)and aggressive periodontitis(AgP)·The former exhibits obvious local inflammationand the latter is characterized by destructiveimmunoreactions,which result in adoption of differenttherapeutic strategies·1It is widely accepted thatperiodontitis occurs as a result of infection by subgingivalbacteria,particularl…     

放线共生放线杆菌培养上清对成骨细胞分化及间隙连接通讯的影响

目的探讨放线共生放线杆菌(actinobacillus actinomycetemcom itans,A.a)培养上清对成骨细胞分化以及细胞间隙连接通讯的影响。方法在A.a培养上清中体外培养成骨细胞,中性红检测成骨细胞活性,RT-PCR检测成骨细胞分化标记,免疫组化观察Ⅰ型胶原蛋白表达,利用划痕标记荧光染料示踪(SLDT)法与Westernblot检测Connexin43的表达,研究成骨细胞间隙连接通讯的变化。结果20%以下浓度的A.a培养上清对成骨细胞无明显致死性。RT-PCR结果显示A.a培养上清中成骨细胞分化标记的表达降低。免疫组化结果显示A.a培养上清中成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白表达降低。SLDT法结果显示A.a培养上清中成骨细胞荧光染料扩散低于对照组。Western blot检测结果显示A.a培养上清中成骨细胞Connexin43表达降低。结论A.a培养上清对成骨细胞分化及细胞间隙连接通讯有抑制作用。     

伴放线放线杆菌侵入人颊黏膜上皮细胞的研究

[目的]探讨伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,A.a)与人口腔颊黏膜上皮细胞之间的关系,加深对A.a侵入颊黏膜上皮细胞能力的了解.[方法]运用荧光原位杂交技术和激光共聚焦扫描显微镜对12例侵袭性牙周炎患者(AgP)、30例慢性牙周炎患者(CP)和12例牙周健康者频黏膜上皮细胞中的细菌进行定位及半定量.[结果]受检者口腔颊黏膜细胞内均检测出细菌.分别有11名AgP患者、27名CP患者和1名牙周健康者上皮细胞内检测出A.a;颊黏膜上皮细胞内A.a占全细菌相对比例为60%～100%处比较时,AgP组与CP组之间的差异具有显著性意义(P＜0.01).[结论]A.a能够黏附和侵袭口腔颊黏膜上皮细胞.     

侵袭性牙周炎患者抗伴放线聚集杆菌血清c型IgG滴度分析

目的：分析侵袭性牙周炎（aggressive periodontitis, AgP）患者血清中的抗伴放线聚集杆菌（Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Aa）血清c型IgG抗体滴度及其影响因素。方法：采集62例AgP患者（18例切磨牙型,44例广泛型）和45例牙周健康者的空腹静脉血,同时收集AgP患者的龈下菌斑和非刺激性全唾液用于Aa的检测（PCR方法）,应用酶联免疫吸附方法测定血清中抗Aa血清c型IgG抗体滴度。结果：AgP组和健康对照者血清中的抗Aa血清c型IgG抗体检出率均为100%,AgP组的抗体滴度为11.1±1.9,显著高于健康对照组（9.1±1.8,P<0.01）。切磨牙型AgP患者的抗Aa血清c型的IgG抗体滴度和抗体升高率与广泛型比较差异无统计学意义。唾液或龈下菌斑样本Aa检出阳性的AgP患者抗体滴度显著高于Aa阴性患者（11.9±1.3 vs. 10.7±2.1, P<0.05）。结论：Aa血清c型为我国AgP患者定植的Aa的重要血清型,广泛型AgP患者血清抗Aa抗体滴度与切磨牙型AgP患者无明显差异。     

不同血清群型钩端螺旋体DNA的限制性内切酶谱分析

用7种限制性内切酶分析了不同血清群型钩端螺旋体DNA间的遗传差异。结果表明:CfoI和Eco RI的消化酶谱分辨效果较好,各血清型钩体间多存在明显差异,但同血清型的不同株之间酶谱基本相同。     

慢性牙周炎患者抗伴放线放线杆菌IgG滴度改变的临床意义

目的：明确慢性牙周炎(chronic periodontitis, CP)患者血清抗伴放线放线杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Aa)血清c型的抗体反应并探讨其与牙周临床指标的关系。方法: 采集30例CP患者和45例牙周健康者的空腹静脉血, 同时收集CP患者的龈下菌斑和非刺激性全唾液用于Aa的检测(PCR方法), 应用酶联免疫吸附方法（ELISA）测定血清中抗Aa血清c型IgG抗体滴度。结果: CP组和健康对照组血清抗Aa血清c型抗体检出率均为100%。CP组IgG抗体滴度高于健康对照组,差异有统计学意义［(10.9 ± 1.9） vs （9.1 ± 1.8）, P=0.000］; 同时CP组抗体滴度升高率也高于健康对照组, 差异有统计学意义(23.3% vs 0%, P=0.003)。龈下菌斑或唾液Aa检出阳性的7例慢性牙周炎患者血清IgG抗体滴度(12.6 ± 1.6)高于Aa阴性患者(10.4 ± 1.7), 差异有统计学意义(P=0.005)。 CP患者血清抗Aa IgG抗体滴度与全口平均探诊深度呈正相关(r=0.344, P=0.068)。结论: 血清c型为CP患者定植的Aa的重要血清型;CP患者血清抗Aa抗体并非简单的保护作用。     

通用引物检测登革热病毒NS1基因及其酶切分型

目的：利用通用引物经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测登革病毒RNA，并经限制性内切酶酶切鉴定病毒型别。方法：用C6／36细胞培养登革病毒，碘化钠法提取病毒RNA，利用通用引物进行RT-PCR，对PCR产物用Mav I限制性内切酶酶切鉴定。结果：应用通用引物RT-PCR方法可检测到含量为0．212ng／L的病毒RNA，扩增的产物及酶切片段与预期的靶序列长度和限制酶谱分析相一致。结论：用登革病毒NS1区通用引物通过RT-PCR并经酶切分型，是诊断登革病毒感染的一种简易快速的方法。     

抗伴放线放线杆菌IgY的制备及其抑菌研究

目的用伴放线放线杆菌诱导母鸡产生特异性IgY抗体,以及抑制其生长。方法应用免疫接种法,水稀释法及盐析法提取和纯化IgY抗体,液体培养抑菌法测定抗伴放线放线杆菌IgY抗体对伴放线放线杆菌的抑制作用,以及ELISA法测定IgY抗体效价。结果(1)85.63%~90.35%纯度的IgY结合抗原的效价达1∶32 000;(2)细菌浓度为5×105CFU/mL,IgY抗体浓度为5.0 mg/mL,1.0 mg/mL时,培养24 h抑菌率分别为31.60%、10.24%明显高于对照组的0.00%(P<0.01,P<0.05);培养72 h抑菌率分别为64.20%、53.21%明显高于对照组的0.00%(P<0.01);(3)细菌浓度为1×105CFU/mL,IgY抗体浓度为5.0 mg/mL,1.0 mg/mL时,培养24 h抑菌率分别为35.71%、30.95%明显高于对照组的0.00%(P<0.01,P<0.05);培养72 h抑菌率分别为65.11%、54.04%明显高于对照组的0.00%(P<0.01)。结论伴放线放线杆菌能够诱导母鸡产生高效价的特异性IgY;特异性抗伴放线放线杆菌IgY抗体在一定的浓度内有抑制伴放线放线杆菌生长的作用。