瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞对白介素1β和白介素6的反应

目的研究瘢痕疙瘩浸润、增生、老化３个不同部位的成纤维细胞性状。方法以６例瘢痕疙瘩为标本，６例正常皮肤为对照，通过细胞培养的方法研究了瘢痕疙瘩３个不同部位和正常皮肤的成纤维细胞对白介素－１β（ＩＬ－１β）（２００Ｕ／ｍｌ）和白介素－６（ＩＬ－６）（１００Ｕ／ｍｌ）的反应。结果ＩＬ－１β抑制瘢痕疙瘩增生部成纤维细胞而刺激正常皮肤的成纤维细胞，对浸润及老化部成纤维细胞无明显影响。ＩＬ－６抑制所有的成纤维细胞。结论瘢痕疙瘩不同部位和正常皮肤的成纤维细胞对ＩＬ－１β和ＩＬ－６的反应不尽相同。     

干扰素α-2b对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及端粒酶活性的影响

目的 观察干扰素α-2b（IFNα-2b）对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖、端粒酶活性及凋亡的影响，探讨其在瘢痕疙瘩治疗中的作用机制。方法 进行成纤维细胞原代培养，细胞分别来自8例瘢痕疙瘩标本和8例正常皮肤标本。第3到4代的细胞用于实验。以干扰素α-2b作用于体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞，噻唑蓝（MTF）法检测成纤维细胞生长增殖情况，聚合酶链反应-酶联免疫吸附法（PCR-ELISA法）检测不同时间成纤维细胞端粒酶活性，应用流式细胞仪观察处理后成纤维细胞凋亡。结果 IFNα-2b对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞有生长抑制作用，可明显下调成纤维细胞端粒酶活性，和对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），并呈现出明显的时间-效应关系。体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞经10000U／ml IFNα-2b处理后，能诱导成纤维细胞凋亡发生，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），且具有明显的时间依赖性。结论 作为一个负性调节因子，IFNα-2b能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖并诱导成纤维细胞发生凋亡，降低成纤维细胞端粒酶活性是其作用机制之一。     

α-促黑素细胞激素在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达和作用

目的检测α－MSH在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达和作用,为研究瘢痕疙瘩的形成机理提供新的理论依据.方法将取自患者躯干部位的瘢痕疙瘩皮肤,用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养,DMEM培养液传代、扩增培养,以细胞形态学鉴定成纤维细胞.应用免疫组织化学染色方法检测α－MSH在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达,并应用流式细胞仪从细胞生长及增殖特性方面分析α－MSH对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长和增殖的影响.结果α－MSH能够在瘢痕疙瘩成纤维细胞中得到高表达,浓度为10－6 mmol/L的α－MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞生长、增殖.结论α－MSH能够在瘢痕疙瘩成纤维细胞中得到高表达,瘢痕疙瘩成纤维细胞对α－MSH的反应性增强表明α－MSH可能在促进瘢痕疙瘩的形成中起着重要的作用.     

γ-干扰素对增生性瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的观察γ干扰素对增生性瘢痕及成纤维细胞的作用，探索γ干扰素治疗增生性瘢痕的依据。方法取１０例患者增生性瘢痕标本，培养增生性瘢痕的成纤维细胞，取第１代细胞，分为实验组和对照组。实验组加入γ干扰素１００Ｕ／ｍｌ，作用５天，并观察成纤维细胞的细胞计数、肌成纤维细胞分化比例及细胞凋亡率。结果实验组成纤维细胞计数、肌成纤维细胞分化比例下降，细胞凋亡率增加，与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论γ干扰素抑制成纤维细胞生长，抑制向肌成纤维细胞分化，促进成纤维细胞凋亡。     

α-促黑素细胞激素在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达和作用

目的 检测α-MSH在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达和作用，为研究瘢痕疙瘩的形成机理提供新的理论依据。方法 将取自患者躯干部位的瘢痕疙瘩皮肤，用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养，DMEM培养液传代、扩增培养，以细胞形态学鉴定成纤维细胞。应用免疫组织化学染色方法检测α-MSH在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达。并应用流式细胞仪从细胞生长及增殖特性方面分析α-MSH对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长和增殖的影响。结果 α-MSH能够在瘢痕疙瘩成纤维细胞中得到高表达，浓度为10^-6mmol／L的α-MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞生长、增殖。结论 α-MSH能够在瘢痕疙瘩成纤维细胞中得到高表达，瘢痕疙瘩成纤维细胞对α-MSH的反应性增强表明α-MSH可能在促进瘢痕疙瘩的形成中起着重要的作用。     

康宁克通或干扰素局部注射对瘢痕PDGF BB基因表达影响

目的明确康宁克通和干扰素α２ｂ对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制是否通过ＰＤＧＦ途径。方法对６例增生性瘢痕同一个体分区域同时局部注射康宁克通或干扰素α２ｂ后３天及７天的ＰＤＧＦＢＢｍＲＮＡ原位表达进行了观察。结果①康宁克通或干扰素α２ｂ在局部注射后７天增生性瘢痕的ＰＤＧＦＢＢｍＲＮＡ表达强度比未注射区均明显减少（Ｐ＜０．０１）,但局部注射后３天表达强度与未注射区相比均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。②增生性瘢痕的ＰＤＧＦＢＢｍＲＮＡ原位表达强度高于正常皮肤。结论激素及干扰素α２ｂ治疗瘢痕的机制之一是通过抑制ＰＤＧＦ基因表达,从而减少成纤维细胞的有丝分裂,使瘢痕的成纤细胞增殖受到抑制。     

消瘢醑对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的探讨复方消瘢醑对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,为中药治疗瘢痕提供实验依据. 方法以氢化可的松为实验对照,在体外培养的6例瘢痕疙瘩和6例正常皮肤成纤维细胞培养液中加入不同剂量的消瘢醑,利用3H-TdR掺入法检测12 h,24 h,48 h瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)增殖活性.结果 10、100、1 000 μg/ml消瘢醑和1×10-7 mol/L氢化可的松在12、24、48 h均可抑制NFB和KFB的增殖,P＜0.05.氢化可的松对KFB的抑制作用与NFB相似.10 μg/ml和100 μg/ml消瘢醑对NFB和KFB增殖的抑制与氢化可的松相似. 结论消瘢醑能抑制成纤维细胞的增殖,可能起到治疗瘢痕过度增生的作用.     

肿瘤坏死因子α对膀胱肿瘤细胞作用的影响因素探讨

目的 探讨肿瘤坏死因子抗膀胱癌细胞作用的影响因素。方法 将肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）和不同浓度的丝裂霉素（ＭＣ），顺铂（ＣＤＤＰ）以及干扰素α（ＩＦＮ－α）作用于体外培养的膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７，用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定细胞毒效果。结果 ＴＮＦ－α对ＢＩＵ－８７细胞有明显的浓度依赖性抑制作用，ＭＣ（２．５～５．０ｍｇ／Ｌ）或ＩＦＮ－α（２５００Ｕ－５０００Ｕ／ｍｌ）与ＴＮＦ－α（１００００Ｕ／     

消化系统恶性肿瘤术后丝裂霉素和5-氟脲嘧啶的腹腔化学治疗

目的 减少中晚期消化系统恶性肿瘤术后腹腔内复发和肝转移率。方法 术后将患者随机分成腹腔化疗组（观察组）和静脉化疗组（对照组）,观察组５２例,将丝裂霉素６！１０ｍｇ／ｍ＾２和５氟脲嘧啶１￣１．５ｇ／ｍ＾２加入按２０ｍｌ／ｋｇ的生理盐水中,经左右下腹穿刺置管灌注腹腔。对照组５３例,用ＭＭＣ４￣６ｍｇ／ｍ＾２＋ＮＳ２０－３０ｍｌ静脉注及５－Ｆｕ０．７５￣１ｇ／ｍ＾２＋５％葡萄糖注射液５００ｍｌ静脉点滴治     

α-2b干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及端粒酶逆转录酶、bcl-2 mRNA表达的影响

目的 观察α-2b干扰素(IFNα-2b)对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖、凋亡及端粒酶逆转录酶(hTERT)、bcl-2 mRNA表达的影响,探讨其在瘢痕疙瘩治疗中的作用机制.方法 进行成纤维细胞原代培养,细胞分别来自8例瘢痕疙瘩标本和8例正常皮肤标本.第3～4代的细胞用于实验.以IFNa-2b作用于体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞,MTT法检测成纤维细胞生长增殖情况,应用流式细胞仪观察处理后成纤维细胞凋亡,RT-PCR法检测成纤维细胞hTERT和bcl-2mRNA的表达.结果 IFNα-2b对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞生长有抑制作用,体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞经10 000 U/ml IFNα-2b处理后,能诱导成纤维细胞凋亡发生,RT-PCR检测hTERT和bcb2 mRNA表达降低,和对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),且具有明显的时间依赖性.结论 作为一个负性调节因子,IFNα-2b能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖并诱导成纤维细胞发生调亡,下调成纤维细胞端粒酶活性是其重要作用机制之一.通过抑制端粒酶活性进行抗瘢痕疙瘩治疗可能是一个新途径.     

细胞信号传导在激素和干扰素诱导的增殖瘢痕成纤维细胞凋亡中的作用

目的 探讨对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞在激素和干扰素α-2b(IFNα-2b)作用后是否产生凋亡,以及相关细胞信号传导通路的激活或抑制是否一致.方法 对6例瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及6例皮肤标本,采用细胞培养、免疫组织化学、凝胶电泳及FACE ELISA方法通过检测Bax和Bcl-2蛋白表达、特异性DNA梯状条带以及激活(磷酸化)的ERK1/2和JNK的吸光度A值,对不同成纤维细胞在地塞米松(0.1 mg/ml)和干扰素α-2b(1000U/ml)作用后的细胞凋亡及相关细胞信号传导通路进行了研究.结果 地塞米松可通过激活ERK1/2和JNK细胞传导通路诱导三类不同来源成纤维细胞发生细胞凋亡;干扰素α-2b不能诱导这三类不同来源成纤维细胞发生明显细胞凋亡,且IFN α-2b抑制增殖瘢痕的ERK1/2通路,而对JNK通路无影响,其不引起正常皮肤成纤维细胞ERK1/2和JNK通路的变化.结论 激素类药物和干扰素α-2b对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的作用机制不同.     

瘢痕疙瘩成纤维细胞对肿瘤坏死因子α调节胶原合成作用的反应

目的 探讨瘢痕疙瘩的发病机理及其成纤维细胞生物学特性。方法 用肿瘤坏死因子α（TNF-α）分别处理体外培养正常皮肤与瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用^3H－脯氨酸掺入、胃蛋白酶消化法检测成纤维细胞胶原合成量。结果 10^3U/ml的TNF－α能显著减少瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成量,且与正常皮肤成纤维细胞的反应不同,当TNF－α浓度增至10^4U/ml,瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成量却未进一步减少。结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞对TNF－α下向调节胶原合成作用的反应敏感性在一定程度上有所降低。     

丹参和川芎嗪对瘢痕成纤维细胞生长的体外抑制实验

增生性瘢痕是临床治疗难题之一，目前尚无有效的治疗方法。为了探讨丹参和川芎嗪对瘢痕成纤维细胞的抑制作用，取１２例患者胸部增生性瘢痕组织，通过体外成纤维细胞培养，探讨不同药物浓度、不同作用时间对成纤维细胞生长的影响。结果表明，丹参、川芎嗪对体外培养的瘢痕成纤维细胞具有剂量依赖和时间依赖两方面的抑制作用。使细胞胸腺嘧啶核苷的摄入值降低，分裂指数下降，生长增殖减慢甚至停止。在低剂量时，药物对细胞的抑制是可逆的，丹参在２．５ｍｇ／ｍｌ以上，川芎嗪在５００μｇ／ｍｌ７２小时以上，是不可逆的，药物对成纤维细胞的抑制作用主要通过抑制ＤＮＡ合成来实现。为临床应用中草药治疗增生性瘢痕提供了理论依据     

真皮提取物对成纤维细胞生长抑制作用的实验研究

观察了真皮提取物对体外培养的人皮肤成纤维细胞生长的作用。实验结果表明，真皮提取物在０．２５ｍｇ／ｍｌ以上浓度时即可抑制成纤维细胞的生长，浓度与抑制作用成正相关。据此结果，讨论了真皮提取物在瘢痕防治中应用的可能性。     

瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞周期分析及P53基因突变检测

目的：探讨瘢痕疙瘩周围皮肤中是否有生物学活性异常的成纤维细胞， 以期进一步了解瘢痕疙瘩的发展机制。方法：对所取新鲜组织标本进行细胞培养，通过碘化丙啶（PI）染色，激光流式细胞仪分析细胞周期，比较各组成纤维细胞处于增殖期细胞的百分比。采用PCR技术对P53基因外显子4、5、6进行扩增并测序。结果：瘢痕疙瘩周围皮肤增殖期成纤维细胞百分比与瘢痕疙瘩中央部相似（P＞0．05），介于瘢痕疙瘩边缘部与正常皮肤之间，与两者的差异均有显著性意义（P＜0．05）。所有体外培养瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞（6／6）均存在P53外显子4的点突变，3例（2／6）P53外显子5存在移码突变，均与同病人瘢痕疙瘩成纤维细胞基因突变一致，而两组正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变，结论：瘢痕疙瘩周围0.5cm皮肤内存在生物学活性异常成纤维细胞，这可能为瘢痕疙瘩浸润性生长的结果及其治疗后易复发的原因之一。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞诱导人急性单核细胞白血病细胞来源巨噬细胞极化与肿瘤坏死因子-α表达的研究

目的探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞对M0型巨噬细胞极化、炎症因子表达的影响及可能机制, 为瘢痕疙瘩治疗的新靶点提供理论依据。方法 2020年11月至2021年9月, 中山大学附属第一医院整形外科手术患者瘢痕疙瘩5例或正常皮肤组织3例石蜡标本分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞, 并与佛波酯诱导人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)后形成的M0细胞共培养, 检测巨噬细胞极化标记物及细胞因子表达情况。外源性加入肿瘤坏死因子(TNF-α)检测瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与细胞外基质表达情况。结果瘢痕疙瘩组织中存在以CD163+(M2)为主的巨噬细胞聚集, 相比正常皮肤成纤维细胞, 与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养的M0细胞表达更多TNF-α;流式细胞内染色阳性率分别为19.32%和29.52%。外源性TNF-α刺激下, 瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胞外基质(Ⅲ型胶原α3, COL3A1;纤维连接蛋白, fibronectin1, FN1), 波形蛋白表达增加, 瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞对巨噬细胞极化表面标志CD86和CD163表达变化差异无统计学意义。结论瘢痕疙瘩成纤维细胞促进巨噬细胞TNF...     

氧化苦参碱对病理性瘢痕成纤维细胞增殖凋亡的影响

目的观察氧化苦参碱（oxymatrine,OM）对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡、细胞周期及细胞外信号调节激酶1（ERK1）的影响,并且与瘢痕治疗常规药物氢化可的松（hydrocortisone,HC）的作用进行比较。方法原代的瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤的成纤维细胞（KFb、HFb、NFb）采用组织块培养法培养,将氧化苦参碱（2×10-6mol/L）、氢化可的松（5.5×10-9mol/L）分别作用于KFb、HFb、NFb,用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT）检测细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期、ERK1的变化。结果 OM能明显抑制KFb、HFb和NFb的增殖活性（抑制率分别为12%,14%,10%）,促进KFb的凋亡（增加72%）。HC明显抑制KFb、HFb、NFb的增殖（抑制率分别为21%,21%,15%）,并促进其凋亡（分别增加184%、121%和148%）。上述改变均有统计学意义。OM、HC对三种细胞的细胞周期及ERK1表达无显著作用。结论类似氢化可的松,氧化苦参碱通过抑制瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮肤成纤维细胞的增殖和促进瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡作用而可能应用于瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的治疗。     

康宁克通或干扰素局部注射对瘢痕PDGF BB基因表达影响

目的 明确康宁克通和干扰素α－２b对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制是否通过ＰＤＧＦ途 径。方法 对６例增生性瘢痕同一个体分区域同时局部注射康宁克通或干扰素α－２b后３ 天及７天的ＰＤＧＦ ＢＢ ｍＲＮＡ原位表达进行了观察。结果 ①康宁克通或干扰素α－２b在局部注射后７天的ＰＤＧＦ ＢＢ ｍＲＮＡ表达强度比未注射区均明显减少（Ｐ〈０．０１）,但局部注射后３天表达强度与未注射区相比均无显著性差异（Ｐ〉０．０５）     

内质网分子伴侣GRP94、GRP78和XBP1在病理性瘢痕中的表达初探

目的：检测内质网应激反应的关键分子葡萄糖调节蛋白94（GRP94）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和X-盒结合蛋白1（XBP1）mRNA在病理性瘢痕的表达,探讨其基因表达及内质网应激反应与病理性瘢痕形成及转归的关系。方法：用RT-PCR法检测GRP94、GRP78和XBP1mRNA在：①瘢痕疙瘩（13例）、增生性瘢痕（17例）和正常皮肤（15例）组织以及体外培养的瘢痕疙瘩（5例）、增生性瘢痕（5例）和正常皮肤（6例）成纤维细胞中的表达;②体外培养瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞（各5例）中经0.1mg/ml氢化可的松作用前后的表达。结果：①GRP94、GRP78和XBP1mRNA在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤组织及其成纤维细胞中的表达均无显著性差异（P〉0.05）;②0.1mg/ml氢化可的松作用后,GRP94mRNA在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕来源的成纤维细胞中的表达量均显著下降,具有统计学意义（P〈0.01）;而GRP78和XBP1mRNA在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕来源的成纤维细胞中的表达量改变均无显著性差异（P〉0.05）。结论：内质网分子伴侣GRP94、GRP78和XBP1在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织及其成纤维细胞中基因转录与正常皮肤组织及其成纤维细胞中基因转录水平一致;GRP94mRNA的表达量显著下降可能是糖皮质激素治疗病理性瘢痕的机制之一。     

正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞培养、生物学特征及超微结构的比较研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞的体外培养、生物学特征及超微结构，阐明其应用价值。方法采用成纤维细胞体外培养技术，从正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖、细胞形态、细胞遗传学特征及细胞超微结构方面进行比较研究。结果体外培养的正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞生长率和形态学相同，细胞遗传学特征和超微结构相似。结论据此结果和其他学者的观点，认为建立体外培养的正常皮肤成纤维细胞的细胞实验模型，可用于瘢痕防治的研究。