BAI1的血管生成抑制作用及肿瘤生长抑制作用的研究

目的研究脑组织特异性抑制因子1(BAI1)的血管生成抑制作用及其对胶质母细胞瘤的抑制作用。方法采用COS-TPC法进行重组腺病毒载体的构建,用Northern和Western印迹法测定BAI1mRNA及蛋白(17Kd)的表达。采用背侧皮肤折叠透明腔室法,用活体显微镜观察肿瘤细胞接种后血管生长情况,使用抗von Willebrand因子抗体的免疫组织化学染色,高倍镜下计算血管数量。将U373MG细胞接种于小鼠皮下,待肿瘤长至直径约0.5~1cm时,肿瘤内注射腺病毒重组子,每隔3d注射一次,共注射5次,隔日测量肿瘤大小。结果Northern印迹和Western印迹结果显示BAI1mRNA和蛋白的表达只见于AdeBAI1转染的细胞中,对照组的细胞中未见表达。经AdeBAI1转染细胞皮下接种后肿瘤血管被完全抑制,而对照组在接种后第12天时可见新生血管网形成。免疫组织化学染色结果显示,对照组肿瘤组织中血管数(16.0±3.2/视野,200×)明显多于AdeBAI1转染组(1.6±2.5/视野)。与对照组相比,采用AdeBAI1肿瘤内注射治疗的肿瘤体积明显小于对照组。结论BAI1具有抗血管生成作用,经AdeBAI1肿瘤内注射可以明显抑制肿瘤的生长速度,BAI1可以作为候选基因用于胶质母细胞瘤的基因治疗。     

大蒜素对神经母细胞瘤生长的抑制作用

【目的】探讨大蒜素对神经母细胞瘤生长的影响及相关机制。【方法】MTT法测定不同浓度大蒜素对神经母细胞瘤细胞生长的影响;建立裸鼠人神经母细胞瘤皮下移植瘤模型24只（n=8）,随机分为对照组、大蒜素I组（1mg·kg-1·d-1）和大蒜素Ⅱ组（10mg·kg-1·d-1）,观察其对肿瘤生长的影响,荧光定量PCR法测定大蒜素对裸鼠皮下移植瘤VEGFmRNA表达的影响;ELISA法测定裸鼠血浆VEGF浓度;免疫组化法观察肿瘤微血管密度。【结果】不同浓度的大蒜素均能抑制神经母细胞瘤细胞的生长,高浓度的大蒜素能直接杀死肿瘤细胞;大剂量和小剂量大蒜素对裸鼠神经母细胞瘤皮下移植瘤均有抑制作用。对照组、大蒜素I组和Ⅱ组的肿瘤体积为（2143±127）mm3、（1041±89）mm3和（904±65）mm3（P〈0．05）;大蒜素能下调神经母细胞瘤VEGFmRNA转录,对照组、大蒜素I组和Ⅱ组VEGFmRNA表达量分别为（8．4±0．8）、（6．1±0．7）和（5．1±0．5）;大蒜素能够抑制肿瘤细胞VEGF的表达,对照组、大蒜素I组和Ⅱ组裸鼠血VEGF浓度分别为（78±10）、（45±8）和（35±7）pg／mL;大蒜素可以减少神经母细胞瘤的微血管密度。【结论】大蒜素在体内和体外均可抑制神经母细胞瘤细胞的生长,其机制与大蒜素抑制肿瘤细胞增殖和下调神经母细胞瘤VEGFmRNA的转录和蛋白表达有关。     

去甲斑蝥素对胆囊癌肿瘤血管生成的作用及机制研究

目的探讨去甲斑蝥素(NCTD)对胆囊癌肿瘤血管生成的抑制作用及其机制。方法通过建立荷瘤裸鼠胆囊癌模型和胆囊癌GBCSD细胞模型分别进行血管生成随机干预实验,实验分对照组、5氟尿嘧啶(5FU)组、不同浓度NCTD组、内皮抑素(ES)组、NCTD+5FU组和NCTD+内皮抑素组,每组10只。应用病理学检查、流式细胞术(FCM)、免疫组织化学SABC法、CD34染色和聚合酶链反应(PCR)技术,观测荷瘤大小、凋亡率、瘤周血管形态和微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素2(Ang2)和血管生成抑制因子(TSP)、金属蛋白酶2组织抑制因子(TIMP2)表达。结果(1)NCTD组裸鼠荷瘤MVD(4.1条±1.4条)明显少于5FU组(15.8条±5.9条)和对照组(17.6条±3.2条,均P<0.01);与ES组(4.5条±2.1条)比较,差异无统计学意义。NCTD组显微镜下见凋亡、片状坏死肿瘤细胞周围有血管破坏现象。荷瘤MVD与荷瘤体积(r=0.985,t=8.069,P<0.05)、细胞增殖/凋亡比(r=0.956,t=4.61,P<0.05)相关。(2)NCTD组荷瘤细胞VEGF(32.3%±5.6%)、Ang2蛋白表达(22.6%±3.7%)均明显低于对照组(44.7%±4.2%及36.8%±8.7%)和5FU组(41.0%±4.4%及31.7%±1.8%)(均P<0.01),TSP(166.9%±8.9%)、TIMP2(180.4%±4.1%)蛋白表达则明显高于对照组(14.7%±1.1%及56.7%±0.8%)和5FU组(99.1%±2.8%及100.6%±18.4%)(均P<0.01),与ES组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。VEGF、Ang2表达与荷瘤MVD呈正相关,TSP、TIMP2表达则呈负相关。(3)NCTD应用后逆转录(RT)PCR检测显示,GBCSD细胞VEGFmRNA(578vs435)、Ang2mRNA(236vs139)特异性条带净面积(Pix)明显降低,TIMP2mRNA则明显增高(191vs421),与裸鼠荷瘤血管生成相关蛋白改变一致。结论NCTD可有效抑制、破坏胆囊癌肿瘤血管生成,进而抑制胆囊癌的增殖与生长。其机制可能与NCTD诱导血管内皮细胞凋亡、直接破坏血管内皮细胞、改变血管内皮细胞PCNA/凋亡比、下调血管生成因子VEGF、Ang2和上调血管抑制因子TSP、TIMP2表达有关。     

siRNA沉默GPNMB对人胶质母细胞瘤细胞系生物学特性的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）干扰非转移性黑色素瘤糖蛋白B（GPNMB）表达对人胶质母细胞瘤细胞系生物学特性的影响。方法将GPNMB siRNA片段通过脂质体转染人胶质母细胞瘤细胞系U251和SHG44,Western blot检测GPNMB蛋白表达水平;Annexin V/PI双染法检测GPNMB-siRNA对细胞凋亡的影响;MTT法检GPNMB-siRNA对细胞增殖的影响;Transwell法检测GPNMB-siRNA对细胞侵袭性的影响。结果 GPNMBsiRNA能有效抑制人胶质母细胞瘤细胞系U251和SHG44中GPNMB的表达,与空白对照组比较,GPNMB的缺失对细胞凋亡影响不大,可显著抑制细胞的增殖和侵袭（P〈0.05）。结论 GPNMB基因敲除对人胶质母细胞瘤细胞系U251和SHG44的凋亡无显著影响,但可显著抑制其增殖力和侵袭力,表明GPNMB在人胶质母细胞瘤的发生、发展中起着重要作用,提示GPNMB可以作为治疗人胶质母细胞瘤的潜在靶点。     

组织因子激活人胶质母细胞瘤PI3K/Akt信号途径影响阿霉素细胞毒性的研究

目的研究组织因子(TF)在人胶质母细胞瘤细胞中影响化疗药物敏感性的信号转导机制。方法以分子生物学方法构建TF-pcDNA3表达载体,以脂质体介导进行基因转染。以Western Blotting检测TF表达及信号转导途径活化状态。以WST法检测阿霉素的细胞毒性。结果人胶质母细胞瘤细胞系U373MG高表达TF而LN-229细胞系中TF表达水平低;阿霉素细胞毒性在U373MG中较弱,IC50为1.67±0.03μg/ml;显著高于LN-229,IC50为0.87±0.13μg/ml(P0.05)。磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号途径中的Akt在U373MG中呈强活化,而LN-229中活化水平低。在转染TF-pcDNA3真核表达载体的LN-229细胞中,TF获得强制高表达,与FⅦ作用后可观察到Akt的显著激活。TF强制表达的LN-229细胞中,阿霉素作用后存活细胞数显著增多(P0.05),预先以PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002处理则可使阿霉素作用后的存活细胞数降低到对照水平,抵消TF强制表达对阿霉素细胞毒性的抑制。结论人胶质母细胞瘤中TF的异常高表达可减轻阿霉素的细胞毒性,此效应可能与TF与FⅦ相互作用后激活下游PI3K/Akt信号途径有关。TF介导的信号转导可能藉此影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性和预后。     

靶向人EGFL7基因的短发夹结构RNA对胶质瘤细胞系U251增殖的影响

目的 研究类表皮生长因子域7(EGFL7)基因特异性短发夹结构RNA(shRNA)对胶质母细胞瘤细胞系U251细胞体外增殖的影响。方法 在筛选出人EGFL7基因的有效RNA干扰靶序列并设计构建其重组慢病毒表达载体的基础上,感染胶质母细胞瘤细胞系U251细胞,荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量多聚酶链反应和蛋白质印迹分别检测EGFL7基因的mRNA和蛋白表达水平,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测其增殖能力。结果 EGFL7基因的特异性shRNA转染U251细胞后,EGFL7的mRNA和蛋白表达水平明显降低;细胞的增殖受到明显抑制。结论 EGFL7基因的特异性shRNA可明显抑制胶质母细胞瘤细胞系U251的增殖,提示EGFL7基因在胶质母细胞瘤细胞的增殖中发挥重要作用。     

太白银莲花皂甙-1诱导胶质瘤U87MG细胞凋亡及机制研究

目的 研究太白银莲花皂甙-1对人脑胶质母细胞瘤U87MG凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度不同时间(6、24、48、72 h)太白银莲花皂甙-1对U87MG细胞生长增殖的抑制作用;应用倒置显微镜和Hoehst荧光染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)检测太白银莲花皂甙-1作用U87MG细胞后形态的变化和凋亡情况;通过免疫印迹法法检测太白银莲花皂甙-1处理后细胞凋亡相关蛋白Survivin及活化的Caspase-3的表达.结果 太白银莲花皂甙-1可明显抑制U87MG细胞的增殖,诱导其凋亡;同时下调Survivin表达,激活了凋亡蛋白Activated Caspase-3的表达.结论 体外实验显示,太白银莲花皂甙-1对U87MG细胞具有显著的增殖抑制作用,并能成功诱导人脑胶质母细胞瘤U87MG细胞发生凋亡,其机制可能与抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡有关.     

三羧氨基喹啉对人口腔癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用与其调节巨噬细胞分泌细胞因子的关系

目的 :观察三羧氨基喹啉 ( Linom ide)对人口腔癌裸鼠移植瘤的治疗作用 ,探讨其抗血管生成作用与调节巨噬细胞分泌细胞因子的关系。方法 :建立人舌癌裸鼠移植瘤模型 ,观察 Linom ide对肿瘤生长的抑制作用 ,采用免疫组化染色检测 L inomide治疗组和对照组荷瘤裸鼠的肿瘤微血管密度 ( MV D)的变化 ,采用 ELISA方法检测Linom ide对巨噬细胞分泌促血管因子 TN F- α及血管抑制因子 G M- CSF功能的影响。结果 :10 0 m g/ kg· d- 1、50mg/ kg· d- 1Linom ide腹腔注射组、对照组裸鼠瘤重分别为 ( 0 .4 7± 0 .2 5) g、( 0 .92± 0 .30 ) g、( 1.75± 0 .38) g,治疗组瘤重明显降低 ( P<0 .0 1)。治疗组瘤组织 M VD明显减低 ,与对照组相比 ,50 m g/ kg· d- 1和 10 0 m g/ kg· d- 1Linom ide治疗组的 MV D分别减少了 38.2 %和 57.8%。 Linom ide治疗组腹腔巨噬细胞分泌 TN F-α的水平与对照组比较 ,受到明显抑制 ( P<0 .0 5)。 L inom ide体外处理小鼠巨噬细胞系 RA W 2 6 4.7也可明显抑制其分泌 TN F-α的水平 ( P <0 .0 5) ,并存在剂量效应关系。结论 :Linom ide可有效抑制人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的生长 ,降低肿瘤微血管密度 ,抑制巨噬细胞分泌 T NF-α可能是其一个重要的抗血管生成机制。     

IKK16对人胶质母细胞瘤U87细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨IκB激酶(IKK)抑制剂IKK16对人胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响 ,并探讨其可能作用机制.方法将体外培养的人胶质母细胞瘤U87细胞分为4组 :空白组(未予干预处理) ,对照组(1% 二甲基亚砜) ,IKK16低剂量组(70 nmol/L IKK16)和IKK16高剂量组(200 nmol/L IKK16) ,使用二苯基溴化四氮唑蓝(M T T )法检测IKK16对人胶质母细胞瘤U87增殖的抑制作用 ,Western blot法检测加药后48 h细胞内p65、Caspase-3、Bcl-2和CyclinD1的表达.结果 空白组与对照组U87细胞增殖率比较 ,差异无统计学意义(P＞0 .05);与对照组比较 ,IKK16可以显著抑制人胶质母细胞瘤U87细胞的增殖 ,同时显著降低细胞核内p65的表达(P＜0 .05) ,抑制CyclinD1和Bcl-2的表达 ,增加Caspase-3的表达量(P＜0 .05) ,并呈剂量依赖性.结论IKK16可以抑制人胶质母细胞瘤U87细胞增殖并促进凋亡.     

γ-分泌酶抑制剂对神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S苯基甘氨酸t-丁酯(DAPT)与神经干细胞增殖、分化的关系.方法 分离和体外培养大鼠脑神经干细胞(NSC),采用γ-分泌酶抑制剂DAPT处理后,细胞计数和CCK8检测法观察NSC增殖能力的变化;特异性荧光免疫染色检测NSC诱导定向分化能力的变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Notch信号途径节点分子基因RBP-Jk和Hes1的表达.结果 DAPT能够明显抑制NSC的增殖能力;与对照组相比,NSC诱导分化为神经元和少突胶质细胞的比例分别由(3.7±1.0)%和(4.8±1.2)%上升为(13.8±1.2)%和(14.8±1.6)%,而分化成星形胶质细胞的比例由(82.8±3.7)%下降为(63.4 ±1.2)%;DAPT能下调NSC的RBP-Jk和Hes1 mRNA的表达.结论 γ-分泌酶抑制剂DAPT能抑制大鼠脑NSC的增殖,改变NSC定向分化的能力,这些作用可能是通过抑制γ-分泌酶而下调Notch信号所致.     

shRNA介导胰岛素样生长因子Ⅰ类受体基因沉默诱导人肺癌A549细胞凋亡的体内外研究

目的评价RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子Ⅰ类受体（IGF-IR）表达的抑制作用及其体内外抑瘤效应。方法将IGF-IR特异shRNA转染人肺癌A549细胞株,检测IGF-IR表达水平和bcl-2及caspase-3的表达变化;MTT法检测体外培养细胞的生长抑制率;流式细胞技术检测细胞增殖周期;Western印迹法分析Akt和ERK磷酸化程度;荷瘤裸鼠肺癌模型中观察瘤内注射的抑瘤效应及凋亡情况。结果IGF-IR表达抑制率达89．8％,bcl-2表达为对照组的46％±6％,caspase-3激活为对照组的156％±8％,Akt、ERK磷酸化分别为对照组的20％和36％±3％;肿瘤细胞活力明显下降;直接瘤内注射后肿瘤体积减少至对照组的40％-50％,并促进肿瘤细胞凋亡。结论运用RNAi技术能有效抑制A549细胞IGF-IR的表达,使细胞增殖能力减弱,凋亡增加,瘤体生长受抑。     

Expression of Beclinl in Osteosarcoma and the Effects of Down-regulation of Autophagy on the Chemotherapeutic Sensitivity

To explore the expression of Beclin1 in osteosarcoma and investigate the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity to cisplatin (DDP),the expression of Beclin1 in 28 specimens of osteosarcoma (group A) and 19 specimens of normal bone tissues (group B) were immunohistochemically detected. The expression of Beclin1 mRNA in MG63 cells treated with different concentrations of DDP was examined with RT-PCR. After down-regulation of autophagy in MG63 cells by an autophagy inhibitor,3-methyladenine (3-MA),the cell proliferation inhibition rate of MG63 cells treated with DDP was evaluated by using the MTT assay. The positive rates of Beclinl were 67.85% in group A and 94.73% in group B. Its expression was lower in osteosarcoma than in normal bone tissues,with a significant difference found between them (P＜0.05).RT-PCR showed that the expression of Bcclin1 mRNA in the cells treated with high-dose DDP were higher than that in the non-treated cells,and no significant difference in the expression of Beclin1 mRNA was found between the cells treated with low-dose DDP and the non-treated cells. There was a positive correlation between the level of Beclin1 mRNA expression and the concentration of DDP.MTT assay showed that the proliferation inhibition rates of the cell treated with 3-MA and DDP combined were substantially increased when compared with those treated with DDP alone (P＜0.01).This study demonstrated that autophagy may be implicated in the carcinogenesis of osteosarcoma,and DDP may induce autophagy in the MG63 cells. It also suggests that the down-regulated autophagy could increase chemotherapeutic sensitivity of DDP to osteosarcoma.     

EB病毒核抗原-1特异性核酶对成淋巴细胞系肿瘤形成能力的影响

目的 探讨腺病毒载体介导的ＥＢ病毒核抗原－１（ＥＢＮＡ－１）特异性核酶对成淋巴细胞系（ＬＣＬｓ）在严重的联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠体内致瘤性的影响,方法 用分子克隆技术构建ＥＢＮＡ－１核酶（ＲＺ１）及其无活性诱变体（ＲＺ１ ｍｕｔ）的重组腺病毒表达载体（Ａｄ．ＲＺ１和Ａｄ．ＲＺ１ｍｕｔ）。通过同源重组方式在２９３细胞生成腺病毒,并通过噬斑形成进行分离建立ＬＣＬ。将感染重组腺病毒的ＬＣＬ细胞注射于     

骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad 3信号转导的作用

目的探讨骨形成蛋白-7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK-2细胞分为以下各组：阴性对照组;阳性对照组：TGF-β1（5ng／ml）处理;MCP-1（0．1,1,10及50ng／ml）组,BMP-7组（0．1,1,10,50ng／ml）;MCP-1（1ng／ml）加BMP-7（50ng／ml）组;MCP-1（1ng／ml）加MCP-1中和抗体（5μg／ml）组。应用半定量RT—PCR方法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中Ⅰ型胶原分泌,Western blot方法检测HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达。结果MCP-1（0．1,1ng／ml）组HK-2细胞α—SMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P〈0．01）。ELISA方法测定MCP-1（0．1,1ng／ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P〈0．01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后。HKC细胞α—SMAmRNA表达几乎被完伞抑制（P〈0．001）,而BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后HK-2细胞α—SMAmRNA表达仅部分被抑制（P〈0．01）;MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP-1（1ng／ml）组明显降低（P〈0．05）。Western blot方法检测显示,MCP-1（1ng／ml）组HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P〈0．01）。MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后,HK-2细胞TGF-β1表达均分别比MCP-1（1ng／mL）单独作用明显下调,以MCP-1中和抗体的作用更强（P〈0．01,P〈0．05）;在MCP-1中和抗体或BMP-7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P〈0．01,P〈0．05）。结论MCP-1能诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达上调有关。BMP-7能部分抑制MCP-7诱导HK-2细胞转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达部分下调有关;间时提示MCP-1诱导的转分化可能涉及非TGF—β依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。     

普伐他汀对非肥胖糖尿病小鼠糖尿病预防作用的机制

目的 探讨普伐他汀对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病的预防作用及机制.方法 3-4周龄NOD雌鼠分为4组,对照组(摄普通饲料,30只),小剂量组(普伐他汀1 mg·kg-1·d-1,29只),中剂量组(普伐他汀10 mg·kg-1·d-1,29只)和大剂量组(普伐他汀40 mg·kg-1·d-1,30只),观察糖尿病发病至30周龄.各组另取8只12周龄未患病NOD鼠,胰腺HE染色观察胰岛炎;制备脾细胞悬液后,流式细胞仪检测脾细胞中CD4+ CD25+ 调节性T细胞数量;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测脾细胞对特异性抗原的刺激增殖反应;ELISA法测特异性抗原刺激后脾细胞培养上清干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;RT-PCR检测脾脏IFN-γ、IL-4mRNA的表达水平.结果 30周龄时,大剂量普伐他汀组NOD鼠糖尿病的发病较对照组明显降低(P＜0.01).12周龄时,大剂量普伐他汀组胰岛炎严重程度低于对照组(P＜0.001);大剂量普伐他汀组脾细胞培养上清中IFN-γ水平(42±20)Pg/ml,脾脏IFN-γmRNA表达水平(0.24±0.10)pg/ml均低于对照组(157±32)pg/ml,(0.81±0.18)pg/ml,均P=0.000),IL-4水平(91±22)pg/ml,脾脏IL-4mRNA表达水平(0.39±0.18)pg/ml均高于对照组[(44±20)pg/ml,P=0.000;(0.20±0.08)pg/ml,P=0.002)];小、中、大剂量普伐他汀组和对照组特异性抗原增殖指数分别为3.85±0.35、3.53±0.82、3.32±0.44、3.70±0.62,各组间差异无统计学意义(均P＞0.05);小、中、大剂量普伐他汀组和对照组脾细胞中CD4+ CD25+调节性T细胞数量分别为(9.6±2.6)%、(10.2±2.4)%、(8.9±2.7)%、(10.0±2.4)%,各组间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 早期使用大剂量普伐他汀进行干预,可以通过下调Th1细胞因子INF-γ,上调Th2细胞因子IL-4,促使免疫平衡向Th2方向偏移,从而减轻NOD鼠胰岛炎,预防NOD鼠糖尿病的发生.     

小鼠肝脏内自然杀伤细胞功能和数量与鼠龄变化的关系

目的研究不同鼠龄小鼠肝脏内自然杀伤细胞的功能和数量变化的规律。方法应用4小时51Cr释放法测定2周龄、8周龄小鼠(CL57BL/6)肝脏和脾脏内NK细胞的杀伤活性;应用流式细胞仪测定2周龄、8周龄小鼠肝脏和脾脏内NK细胞的百分率和数量,测定NK细胞表面CD69,M ac-1和Ly49C/I的表达水平;应用RT-PCR法测定肝脏单核细胞内穿孔素的表达强度。结果2周龄和8周龄小鼠肝脏内NK细胞占全部淋巴细胞的百分比大致相同(11.9%±1.7%vs 9.9%±1.6%,P>0.05),但是单位质量肝脏内所含的NK细胞数在2周龄鼠明显多于8周龄鼠[(11.6±2.5)×105/g vs(3.4±0.8)×105/g,P<0.05]。2周龄小鼠肝内NK细胞具有极强的细胞杀伤活性(71.0%±5.5%vs 23.8%±4.4%,P<0.05)。2周龄小鼠肝内NK细胞表型主要是CD69增高M ac-1、Ly49C/I减低,而8周龄鼠肝内NK细胞主要是CD69减低,M ac-1、Ly49C/I增高。2周龄小鼠肝脏单核细胞内高度表达穿孔素。结论2周龄小鼠肝内NK细胞具有极强的杀伤能力和特殊的表型。这提示幼龄期鼠肝脏具有特殊的微环境以及肝脏内NK细胞特殊的发育方式。     

局部血管紧张素原mRNA的表达与核因子-κB的活化在门静脉高压症性血管病变中的意义

目的探讨肝硬化门静脉高压症(PHT)时局部血管紧张素原mRNA表达与核因子-κB(NF-κB)的活化在门静脉高压症性血管病变中的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-0PCR)方法检测肝硬化门静脉高压症病人脾脏动、静脉组织和正常血管局部血管紧张素原mRNA的表达情况,用化学发光凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测局部NF-κB的活性。结果对照组内脾脏动、静脉组织局部血管紧张素原mRNA分别为0.23±0.12、0.18±0.10,显著低于肝硬化门静脉高压症组脾动脉、脾静脉组织局部血管紧张素原mRNA的表达0.48±0.21、0.43±0.16(P<0.05);对照组脾动、静脉局部NF-κB未被检测到明显的活性,而于肝硬化门静脉高压症组检测到显著具有活性的NF-κB表达(P<0.05)。结论肝硬化门静脉高压病人局部血管紧张素原mRNA表达增强,NF-κB的活化,可能是肝硬化门静脉高压症时内脏血管病变形成和发展的原因之一。     

Role of CXCL12 in metastasis of human ovarian cancer

Background In a previous study, we have verified that CXCR4 expression is correlated with tumor aggressive progression and poor prognosis in patients with epithelial ovarian cancer. The aim of this study was to explore the effect of CXCL12-CXCR4 axis on the metastasis of human ovarian cancer. Methods The expressions of CXCR4 and CXCL12 mRNA and protein in human ovarian cancer cell line CAOV-3 was detected by RT-PCR and immunocytochemistry. Methythiazolyltetrazolium (MTT) was used to analyze the effect of different concentrations of CXCL12 on the proliferation of CAOV-3 cells. Transwell invasion chamber and matrigel were used to evaluate the effect of various concentrations of CXCL12 and ascites on the migration and invasion of CAOV-3 cells. The expressions of integrin β(1) and vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) mRNA were detected by RT-PCR. Data were analyzed using ANOVA by SAS 6.12.Results Under serum-free suboptimal culture conditions, CXCL12 (100 ng/ml) significantly enhanced the proliferation of CAOV-3 cells compared with the control and 10 ng/ml CXCL12 groups (0.428 ± 0.051 vs. 0.325 ± 0.045 and 0.328±0.039, P&lt;0.05). This enhancing effect of CXCL12 was significantly inhibited by 10 μg/ml neutralizing CXCR4 antibody or 1 μg/ml CXCR4 antagonist AMD3100. However, 10 μg/ml neutralizing CXCR4 antibody could not inhibit cell proliferation without CXCL12. The levels of migration and invasion of the CAOV-3 cells treated with 100 ng/ml CXCL12 were significantly higher than those in the control (migration: 523.3 ± 25.2 vs 108.0 ± 7.2; invasion: 39.3 ± 4.0 vs. 4.0 ± 1.0). The enhancing effect of CXCL12 on cell migration and invasion increased with the concentration of CXCL12 (100 ng/ml vs10 ng/ml: migration, 523.3 ± 25.2 vs 211.7 ± 24.7; invasion, 39.3 ± 4.0 vs 15.7 ± 3.1, P&lt;0.05), and was strongly inhibited by 10 μg/ml neutralizing CXCR4 antibody or 1 μg/ml AMD3100. The number of migrated and invading cells in the CAOV-3 added with ascites was significantly higher than those in the 100 ng/ml CXCL12 group (migration: 706.6 ± 30.6 vs 523.3 ± 25.2, invasion: 61.7 ± 7.6 vs 39.3 ± 4.0, P&lt;0.05). The level of integrin β(1) mRNA was greatly increased at 3 hours after being treated with CXCL12 (0.53±0.10 vs. 1.53±0.16, P&lt;0.05), and VEGF-C mRNA displayed significant augment at 24 hours after being treated with CXCL12 (0.52 ± 0.09 vs 1.11 ± 0.15, P&lt;0.05).Conclusions CXCL12 and its receptor CXCR4 can promote the proliferation, migration, invasion of ovarian cancer cell line CAOV-3 and enhance its secretion of integrin β(1) and VEGF-C. These effects can be inhibited by neutralizing CXCR4 antibody or AMD3100. CXCL12-CXCR4 axis plays an important role in ovarian cancer growth and metastasis.