加味佛手散抑制大鼠子宫内膜异位症血管生成及其机制

目的探讨复方中药新药加味佛手散抑制子宫内膜异位症(EMS)血管生成作用及机制。方法采用子宫内膜自体移植法建立大鼠EMS模型,免疫组化和Western blot方法检测异位内膜组织中微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)和内皮抑素(endostatin)蛋白的表达,放射免疫分析法(RIA)分别检测大鼠血清和异位内膜组织中前列腺素E2(PGE2)的含量。结果加味佛手散0.045、0.09、0.18 g.kg-1能有效抑制异位内膜组织体积的增生,加味佛手散0.09、0.18 g.kg-1能降低MVD,降低VEGF蛋白的表达,降低大鼠血清和异位内膜组织中PGE2的含量,加味佛手散0.18 g.kg-1能够升高endostatin蛋白的表达。结论加味佛手散具有抗血管生成作用,其作用机制与抑制VEGF、促进endostatin蛋白表达有关。     

Bcl-2 与急性白血病患者骨髓组织血管新生的关系

目的通过检测急性白血病（AL）患者骨髓病理切片中血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）及Bcl-2蛋白的表达和微血管的生成情况及VEGF及Bcl-2蛋白的表达和微血管生成之间的相关性。方法免疫组织化学染色方法检测35例AL患者和35例对照组骨髓病理切片中的,Bcl-2表达;ELISA检测患者血清中VEGF-C的表达。结果对照组患者血清中VEGF-C为（126.34±21.22）pg/ml,实验组患者血清中VEGF-C为（324.45±34.12）pg/ml,35例AL患者,微血管密度（microvessel density,MVD）的平均光密度值为（0.3573±0.030）。35例对照组骨髓病理免疫组织化学片中,MVD的平均光密度值为（0.2192±0.037）。AL患者的MVD平均光密度值明显高于对照组,有显著性差异。结论 AL患者的骨髓组织中由于VEGF的表达,诱导产生更多的Bcl-2蛋白来降低AL细胞凋亡,从而增加AL的恶性程度。     

复制缺陷型腺病毒载体介导的VEGF基因治疗大鼠缺血皮瓣的研究

目的探讨重组复制缺陷型腺病毒携带VEGF基因对大鼠缺血皮瓣成活的影响。方法选用30只SD大鼠，体重350-400g，随机分为三组，Ad-VEGF组、Ad-GFP组和空白对照组，每组10只，在其背部形成8cm×2cm的全厚随意型皮瓣。于皮瓣受区筋膜下分别注射携带血管内皮细胞生长因子基因的腺病毒（Ad-VEGF165 cDNA）、携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒（Ad-GFP）、0．9％氯化钠注射液。皮瓣原位缝合，术后7d观察实验结果。结果基因组皮瓣成活面积百分比与其他两个对照组差异有统计学意义。免疫组织化学显示VEGF165组毛细血管周围VEGF沉积、组织切片微血管密度明显高于两个对照组（P〈0．05）。结论局部受区筋膜下注射Ad-VEGF165可诱导局部VEGF蛋白表达，促进新生血管的形成，提高缺血皮瓣的成活面积，是一种简单有效的基因治疗方法。     

胰岛素样生长因子-1促进移植颗粒脂肪组织血管增生的实验研究

目的用成年雄性新西兰大白兔30只研究胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors 1,IGF-1)在颗粒脂肪移植中的促进血管增生作用。方法取成年雄性新西兰大白兔腹部脂肪制备成颗粒脂肪,实验组经20 pg/L IGF-1处理和对照组经纯水处理后移植于背部。移植组织在不同观察时间取出后行α肌动蛋白(Actin)染色,用计算机图像分析技术测定微血管数目。结果IGF-1处理组血管数目在移植10、20、40 d后分别为93.41/cm2、138.12/cm2、104.15/cm2,显著高于同一观察时间的纯水处理组(P<0.05)。Actin染色强度也较高。结论一定浓度的IGF-1对移植颗粒脂肪组织具有促进血管增生作用。     

缺氧诱导因子-1α、血管内皮因子与宫颈癌血管生成的关系

目的 探讨宫颈癌中缺氧诱导因子-1α(hypoxia include 1α,HIF-1α)的表达及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)的相关性,分析与宫颈癌等生物转移行为的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测HIF-1α、VEGF的表达;用CD34单克隆抗体标记肿瘤微血管密度(MVD).结果 宫颈癌组织HIF-1α及VEGF与正常宫颈组织差异有显著性(P＜0.05);HIF-1α及VEGF表达呈一致性,呈正相关;HIF-1α或VEGF阳性肿瘤组织的MVD值显著高于阴性组织.结论 HIF-1α参与了诱导VEGF表达并促进肿瘤血管生成,提示检测HIF-1α和VEGF,对于早期诊断宫颈癌有重要意义.     

三氧化二砷对小鼠肝癌生物学行为的影响

目的研究三氧化二砷对HepA小鼠肝癌生长、血管生成及侵袭与转移特性的影响。方法建立皮下种植肝癌小鼠模型,用药后观察小鼠肿瘤体积变化及抑瘤率;利用免疫组织化学观察移植瘤中血管内皮生长因子（VEGF）,对移植瘤的微血管密度（MVD）进行计数。结果三氧化二砷对小鼠肝癌瘤体体积和抑瘤率均具有抑制作用;三氧化二砷能抑制肿瘤新生血管生成,降低VEGF的表达,并能降低肿瘤MVD,与未用药对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论三氧化二砷能缩小肿瘤体积、增加抑瘤率,并能降低VEGF的表达,减少微血管密度。     

血管内皮细胞生长因子-165和血管形成素-1促进干细胞动员

目的 研究缺血肌肉转染腺病毒(Ad-)携带人血管内皮细胞生长因子-165(VEGF-165)和人血管形成素-1(Ang-1)基因后引起的细胞动员效应。方法 制作大鼠下肢血管闭塞模型,肌肉内注射Ads-VEGF-165和／或Ad5-Ang-1,以Western法检测生长因子蛋白表达、免疫组化检测基因导入后在缺血肌肉引起的效应。结果(1)局部转基因肌肉组织高表达人VEGF-165蛋白和人Ang-1蛋白;(2)与对照组相比,接收两因子转染后的骨骼肌纤维间溴化脱氧尿嘧啶(BrdU)阳性的浸润细胞显著增多,呈协同效应。有细胞同时表达内皮细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞标志性抗原。部分细胞表达CD117^ 并分化为新生微血管的内皮细胞。结论(1)两因子能促进CD117^ 骨髓干细胞动员到缺血组织部位并分化为内皮细胞参与血管新生;(2)两因子可能协同动员召集能在缺血部位聚集并分化为其它类型细胞的干／祖细胞;(3)两因子可能同时作为血管生成因子和细胞动员剂用于缺血性疾病的干细胞移植治疗中,以增强缺血损伤修复效果和节省干细胞用量。     

血管内皮生长因子及受体FLTl在大肠癌中的表达及意义

目的探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）受体FLTl和血管生成及大肠癌发展的关系。方法应用免疫组织化学技术，检测102例大肠癌组织FLTl及VEGF蛋白表达和微血管密度（MVD），分析血管生成与大肠癌组织学分级、浸润深度、Dukes分期、淋巴结转移、肝转移和预后的关系。结果FLTl及VEGF阳性者MVD值显著高于阴性者（P〈O．01）。FLT1、VEGF表达和MVD与大肠癌Dukes分期、淋巴结转移密切相关（P〈0．01）。VEGF表达和MVD与肝转移相关（P〈0．01），但FLTl与肝转移无关。FLTl及VEGF表达阳性或高MVD的大肠癌患者5年生存率较低（P〈O．01）。VEGF表达与FLTl表达密切相关（P〈O．01）。结论FLTl及VEGF与大肠癌的血管生成密切相关，对大肠癌的生长和浸润转移有促进作用。     

BMP2、VEGF165双基因共表达质粒在小鼠骨髓基质干细胞的表达

目的观察转染BMP2和VEGF165双基因共表达质粒在小鼠骨髓基质干细胞的表达情况。方法脂质体介导下将双基因真核表达质粒pIRES-BMP2-VEGF165导入小鼠骨髓基质干细胞,用RT-PCR和免疫组织化学方法观察BMP2和VEGF165双基因在小鼠骨髓基质干细胞内的表达。结果转染BMP2、VEGF165的小鼠骨髓基质干细胞有明显的BMP2和VEGF165 mRNA及其蛋白表达。结论转染BMP2和VEGF165双基因的小鼠骨,髓基质干细胞能同时表达以上两种基因。     

血管内皮生长因子165诱导人血管内皮细胞多药耐药表型

目的：研究血管内皮生长因子165（VEGF165）对血管内皮细胞药物敏感性的影响。方法：人真皮微血管内皮细胞（HDMEC）与抗癌药物和VEGF165混合培养,MTT法分析药敏变化,琼脂糖电泳检测细胞凋亡,RT-PCR、免疫印迹法分析HDMEC产生多药耐药表型的机制。结果：VEGF165体外诱导HDMEC对多种抗癌药物耐药,如表柔比星、顺铂、足叶乙甙、丝裂霉素C、长春新碱、CPT-11、泰素等,其机制与VEGF165诱导HDMEC上调表达多药耐药相关蛋白和肺耐药相关蛋以及下调表达Bax蛋白有关。结论：VEGF165诱导血管内皮细胞的多药耐药表型,提示化疗时抗癌药物的抗血管生成活性可能取决于肿瘤微环境。     

人canstatin基因对人食管癌裸鼠移植瘤中bcl-xl和cyclin D1表达的影响及意义

目的探讨人canstatin基因对人食管癌裸鼠移植瘤的的影响作用,寻求其抑制肿瘤生长的机制。方法 KYSE150细胞建立裸鼠食管癌动物模型,Ad-canstatin实施干预,RT-PCR检测肿瘤组织bcl-xl、cy-clinD1的mRNA的表达水平。免疫组织化学方法检测微血管密度（MVD）。结果治疗组肿瘤体积明显小于两个对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,而两对照组间差异无统计学意义。对电泳结果进行灰度分析和统计学分析显示canstatin治疗组cyclinD1、bcl-xl的mRNA表达明显低于GFP组和PBS组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。canstatin治疗组MVD明显低于对照组。结论人canstatin基因对人食管癌移植瘤的生长具有抑制作用,其作用机制可能与抑制cyclin D1、bcl-xl表达而抑制肿瘤血管生成有关。     

肝细胞生长因子（HGF）对脂肪移植存活的影响

目的探讨解决脂肪移植存活率低的有效途径。方法选用Wistar大鼠18只,随机分为3组,每组6只,分别用10ng／ml HGF、1ng/mlHGF、生理盐水处理三组,移植1个月后分别采集移植的脂肪组织,测量纯移植体的体积,对不同实验组和对照组大鼠行HE染色观察移植组织病理学变化。结果10ng／ml和1ng／mlHGF处理组的移植体的存活量高于盐水处理组的存活量P〈0．05）,10ng／ml和1ng／mlHGF处理组间的存活量差异无显著意义（P〉0．05）。结论一定浓度的HGF对移植鼠颗粒脂肪组织有促进其血管增生的作用,可以提高移植后脂肪组织存活量。     

缺氧诱导因子-1α在胶质瘤中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在人脑不同级别胶质瘤中的表达,分析HIF-1α、血管内皮生长因子（VEGF）和微血管密度（MVD）之间的相互关系及意义。方法采用免疫组化法检测54例胶质瘤组织中HIF-1α及VEGF的表达情况,并以VIII-R-Ag作为标记计数微血管密度（MVD）。结果58例胶质瘤组织HIF-1α的表达阳性率为65.5%（33/58）,HIF-1α的表达强度和胶质瘤的病理分级呈正相关（χ2=14.24,P〈0.05）。HIF-1α的表达和VEGF的表达呈正相关（χ2=4.02,P〈0.05）,HIF-1α和MVD呈正相关（t=3.22,P〈0.05）。结论HIF-1α与人脑胶质瘤组织中血管生成及病理分级密切相关,为治疗胶质瘤的提供一种可能的途径。     

重组VEGF165基因腺相关病毒的包装和鉴定

目的包装重组VEGF165基因的无致病性腺相关病毒,以其作为基因载体感染HUVEC细胞并检测其表达,并在体外检测病毒生物学活性。方法从含有VEGF165基因的pET-32a（＋）-VEGF165原核表达载体中扩增出VEGF165片段,构建重组骨架质粒pAAV-VEGF165。将此质粒和对照质粒pAAV-GFP分别与腺相关病毒包装质粒pAAV-RC、辅助质粒pAAV-Helper用钙-磷共转法转染HEK293细胞,通过同源重组分别产生rAAV-VEGF165和rAAV-GFP重组腺相关病毒。通过real-timePCR法测定病毒滴度后,转染HUVEC细胞并检测其表达,并通过感染HUVEC来检测其促增殖作用。结果扩增出的VEGF165片段成功构建至重组骨架质粒中,pAAV-VEGF165经双酶切和测序鉴定正确。病毒包装效率达90%以上,收获纯化rAAV-VEGF165病毒滴度达6.0×1010pfu/mL。重组腺病毒rAAV-VEGF165能够感染HUVEC细胞并得到显著性表达;与未转染组和GFP组相比,能够显著促进HUVEC细胞的增殖。结论我们成功包装了重组腺相关病毒rAAV-VEGF165,它能够感染HUVEC细胞并高表达VEGF165蛋白,并具有促增殖作用,这为进一步开展VEGF165基因的基因靶向治疗奠定了基础。     

中药肾复舒颗粒合用阿托品对肾衰大鼠残余肾VEGF和MVD的影响

目的观察中药肾复舒颗粒合用阿托品对肾衰大鼠残余肾组织血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD)分布与肾损伤的影响。方法将5/6肾切除SD大鼠随机分为肾复舒治疗组、肾复舒+阿托品治疗组和模型组,并设假手术组为正常对照,术后1周开始给药,连续8周后处死动物。采血检测各组用药前后血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)和尿蛋白的浓度变化;并取大鼠残余肾组织切片用HE染色和免疫组化法检测肾组织VEGF表达水平及MVD、肾小球硬化指数(GSI)、肾小管间质损伤指数(TIS)。用MVD与BUN、Cr、GSI、TIS和尿蛋白作相关分析。结果两治疗组肾组织VEGF、MVD表达比对照组明显增强;VEGF与MVD成正相关;MVD与血尿素、肌酐、GSI、TIS和尿蛋白成负相关(P<0.05);且肾复舒+阿托品组改变更为明显(P<0.05)。结论肾复舒和阿托品能加强VEGF在残余肾组织的表达,增加微血管密度;降低肾小球硬化和肾小管间质损伤程度。2种药物合用作用更为明显。     

2-甲氧基雌二醇联合环磷酰胺对小鼠晚期乳腺癌模型的抑瘤作用

目的：研究2-甲氧基雌二醇（2-ME2）和环磷酰胺（CTX）对小鼠晚期乳腺癌模型的抑瘤作用及两者结合的疗效.方法：将BALB/c 4T1乳腺癌模型小鼠,随机分为生理盐水对照组、2-ME2组、CTX组、2-ME2＋CTX联合组,观察肿瘤生长情况;给药21d后,处死小鼠并分离瘤组织和双肺,计算抑瘤率和肺转移率;免疫组化SP法检测瘤组织中缺氧诱导因子（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达以及微血管密度（MVD）.结果：2-ME2＋CTX联合组的抑瘤率高于2-ME2组、CTX组,差异有统计学意义（P＜0.05）;2-ME2＋CTX联合组小鼠肺脏转移灶数目明显低于2-ME2组及CTX组,差异有统计学意义（P＜0.05）;2-ME2＋CTX联合组移植瘤MVD及HIF-1α、VEGF蛋白表达明显低于2-ME2组和CTX组（P＜0.05）.结论：2-ME2联合CTX应用对小鼠乳腺癌的疗效优于单用CTX或2-ME2;在抑制小鼠乳腺癌移植瘤血管新生方面,2-ME2、CTX具有协同作用.     

磷酸肌酸对小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及机制研究

目的 探讨磷酸肌酸(creatine phosphate,Cp)对小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及其相关机制.方法 建立昆明小鼠S180肉瘤模型,60只小鼠随机分为4组:0.9%氯化钠溶液对照组(对照组)、Cp低剂量组(200 mg/kg)、Cp中剂量组(400 mg/kg)、Cp高剂量组(800 mg/kg),观察4组小鼠移植瘤重量;流式细胞术测定基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMP-2)蛋白的表达;免疫组化检测肿瘤组织微血管密度(microvasvular density,MVD);RT-PCR检测移植瘤组织中血管内皮生长因子(vascular endothlial growth factor,VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(base fibroblast growth,bFGF)mR-NA的表达水平.结果 对照组、Cp低剂量组和中剂量组移植瘤重量、VEGF、bFGFmRNA、MMP-2、TIMP-2水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);Cp高剂量组与对照组、Cp低、中剂量组比较,小鼠移植性肉瘤质量明显减小,MVD数显著减少,VEGF、bFGFmRNA和MMP-2蛋白表达明显减少,TIMP-2蛋白表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Cp低、中剂量对肿瘤血管生成无明显影响;Cp高剂量对肿瘤血管生成具有明显的抑制作用,其机制可能与通过下调MMP-2、VEGF和bFGF、上调TIMP-2的表达水平有关.     

畸胎瘤源性生长因子和血管内皮因子在老年男性肺鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨畸胎瘤源性生长因子(PCDGF)和血管内皮因子(VEGF)在老年男性肺鳞癌中的表达与临床病理参数之间的关系。方法以免疫组织化学方法检测65例肺鳞癌标本、20例不典型增生、20例鳞状上皮化生、20例炎症肺组织中PCDGF和VEGF蛋白的表达情况,并以CD105抗体标记肿瘤组织血管内皮细胞,计数微血管密度(MVD)。结果 PCDGF、VEGF在老年肺鳞癌、不典型增生、鳞状上皮化生、炎症肺组织中的表达依次增加(P<0.01);PCDGF和肿瘤组织学分级及淋巴结转移呈正相关(P<0.01),VEGF与淋巴结转移相关(P<0.01),而与组织学分级无关(P>0.05)。MVD值在PCDGF与VEGF强阳性组的表达均显著高于其相应的非强阳性组(P<0.01);PCDGF与VEGF的表达呈正相关(ra=0.861,P<0.01)。结论 PCDGF可能通过调节VEGF的表达而破坏肿瘤细胞的基底膜、促进新生血管生成,参与肿瘤的发生、侵袭及转移。联合检测PCDGF、VEGF和CD105蛋白的表达可能作为判断老年男性肺鳞癌生物学行为的潜在指标。     

奥沙利铂两种给药模式下抗肿瘤效果的体内实验对比研究

目的观察奥沙利铂（L-OHP）小剂量和常规两种给药模式下对小鼠皮下移植瘤生长的抑制作用和对血管内皮生长因子（VEGF）的表达和微血管密度（MVD）的影响。方法建立肝癌H22小鼠模型后,小鼠随机分组4组,5%葡萄糖对照组、奥沙利铂0.75 mg.kg-1和1.5 mg.kg-1组,第二天开始给予腹腔等容积注射给药,连续10 d,奥沙利铂15 mg.kg-1组,第二天腹腔给药1次。第十二天处死小鼠,计算瘤重抑瘤率,测定肿瘤标本的VEGF和MVD的表达。结果奥沙利铂1.5 mg.kg-1组肿瘤生长明显低于对照组,小鼠体重与对照组相比没有明显下降,而且瘤重抑瘤率与奥沙利铂15 mg.kg-1组没有差别（P〉0.05）,与对照组比较能明显抑制肿瘤组织中VEGF及MVD的表达。奥沙利铂15 mg.kg-1组出现体重下降及血液学副作用,不能明显抑制肿瘤组织中VEGF及MVD的表达。结论小剂量奥沙利铂的抑瘤作用明显,而且没有副作用,能够抑制肿瘤组织中VEGF表达和血管生成。