缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡机制的研究进展

缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡过程一般经过启动-调控和执行-效应三个阶段。启动阶段的主要事件是一些跨膜信号转导通路的活化和凋亡相关基因的激活;线粒体在凋亡调控和执行阶段起着关键作用;凋亡信号诱使线粒体释放凋亡诱导因子如细胞色素c等,后者又激活半胱天冬酶（caspase）瀑布式级联反应,并激活效应阶段的关键效应酶caspase-3,最终使脑细胞发生不可逆的凋亡。Bcl-2s家族是重要的抗凋亡成员,作用于凋亡途径的不同位点,抑制凋亡的进行。对缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡机制的研究,有助于寻找新的抑制或减轻缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的理想途径。     

先天性肌性斜颈病变组织中细胞凋亡的研究

目的探讨先天性肌性斜颈病变组织中细胞凋亡的程度。方法通过原位末端标记法检测组织中细胞的凋亡情况,采用TUNEL法检测,用光镜观察凋亡细胞,电镜观察超微结构。结果本组42例,男30例,女12例。手术时19例能扪及肿块,23例不能扪及肿块(其中15例有肿块史)。年龄<3个月7例;3～8个月17例;9～12个月7例;>12个月11例。光镜发现一些细胞核染色深。电镜发现肌母细胞核异染色质边积;成纤维细胞髓样结构形成,核固缩;肌细胞肌丝溶解。TUNEL法显示,在有肿块的病儿和月龄3～12个月病儿中,细胞凋亡发生明显。结论先天性肌性斜颈病变组织中不同细胞之间凋亡发生程度不同,可能与疾病的转归及愈后有关。     

凋亡抑制蛋白与临床疾病

近年新发现一类凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis family of protein, IAPs），广泛存在于许多物种如病毒、真核生物、哺乳动物中。ＩＡＰ家族分子高度同源，功能上具有抑制细胞凋亡的作用，与肿瘤、神经元变性、脑缺血等疾病的发生发展有关，故了解ＩＡＰ的生物学特征，认识其在凋亡调控中的作用机制及与维持机体正常生理功能之间的关系，对恶性肿瘤、神经细胞死亡的治疗具有重要的理论和实残意义。     

细胞因子与白血病细胞凋亡

白血病的发生,发展,治疗及预后与细胞凋亡有关,细胞凋亡受基因控制并受细胞因子的调节,本文综述了部分细胞因子对白血病细胞凋亡的影响,展望了细胞因子在白血病防治中的价值。     

一氧化氮与胰岛β细胞凋亡

胰岛β细胞选择性破坏,胰岛素分泌减少,可引起1型糖尿病。胰岛β细胞选择性破坏的机制以往认为是感染及免疫因素造成的胰岛炎所致胰岛β细胞坏死而引起,现认为是胰岛β细胞过度凋亡所致。胰岛β细胞过度凋亡与1型糖尿病的发病密切相关。一氧化氮作为一种新发现的免疫调节分子,参与细胞凋亡过程,并在胰岛β细胞凋亡中起着十分重要的作用。其具体作用机制还不十分清楚,但一氧化氮诱导胰岛β细胞凋亡,并参与1型糖尿病的发生这一事实,还是被多数学者所公认。     

凋亡抑制蛋白与临床疾病

近年新发现一类凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis famitly of protein,IAPs)，广泛存在于许多物种如病毒，真核生物，哺乳动物中，IAP家族分子高度同源。功能上具有抑制细胞凋亡的作用，与肿瘤、神经元变性，脑缺血等疾病的发生发展有关，故了解IAP的生物学特征，认识其在凋亡调控中的作用机制及与维持机体正常生理功能之间的关系，对恶性肿瘤，神经细胞死亡的治疗具有重要的理论和实践意义。     

抑制因子κB与神经细胞凋亡

核因子（NF）-κB是一种广泛存在的核转录因子,它参与多种基因的转录调控,与细胞凋亡等生理病理过程关系密切。抑制因子κB（IκK）作为NF-κB的抑制子,在NF-κB活化的途径中起着最关键的分子开关作用,IκB家族包括IκBa、IκBβ、IκBε、IκBγ（p105）Bcl-3和IκBδ（p100）。各种刺激下神经元和胶质细胞中NF-κB的活化及靶基因转录不同,对细胞凋亡影响不同;神经元和胶质细胞IκBs代谢动力学也存在差异,选择性地针对IκBs亚型或其上游IκB激酶可能达到调控神经细胞凋亡的目的。     

IFNγ联合TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的探讨IENγ（γ干扰素）对TRAIL（肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）诱导神经母细胞瘤细胞株SMS-KCNR（KCNR）细胞凋亡的影响及其发生机制。方法应用RT-PCR方法检测IFNγ作用前后KCNR细胞Caspase8的表达；应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测IFNγ、TRAIL、IFNγ＋TRAIL及IFNγ＋Caspase8抑制剂（zIETD-FMK）＋TRAIL对KCNR细胞生长及凋亡的影响；应用比色法测定Caspase8相对活性。结果KCNR细胞不表达Caspase8，IFNγ作用48h后的KCNR细胞Caspase8表达明显增加；KCNR细胞对TRAIL不敏感，IFNγ诱导表达Caspase8的KCNR细胞对TRAIL敏感；IFNγ＋TRAIL组Caspase8相对活性明显高于TRAIL组及抑制剂组；zIETD-FMK能阻断Caspase8的活化而抑制TRAIL对KCNR细胞的诱导凋亡作用。结论IFNγ通过诱导Caspase8表达而逆转KCNR细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受。     

一氧化氮与胰岛β细胞凋亡

胰岛β细胞选择性破坏，胰岛素分泌减少，可引起I型糖尿病。胰岛β细胞选择性破坏的机制以往认为是感染及免疫因素造成的胰岛炎所致胰岛β细胞坏死而引起，现认为是胰岛β细胞过度凋亡所致，胰岛β细胞过度凋亡与I型糖尿病的发病密切相关。一氧化氮作为一种新发现的免疫调节分子，参与细胞凋亡过程，并在胰岛β细胞凋亡中起着十分重要的作用。其具体作用机制还不十分清楚，但一氧化氮诱导胰岛β细胞凋亡，并参与I型糖尿病的发生这一事实，还是被多数学者所公认。     

血管内皮细胞定量测定在小儿血管畸形和血管瘤细胞增殖凋亡中的意义

目的探讨小儿血管畸形和血管瘤增殖凋亡及血管内皮细胞数的区别。方法共收集真性血管瘤标本37例,根据Mulliken标准分成血管瘤增生组和退化组;血管畸形14例,将标本分成血管瘤增生组和退化组。14例血管畸形标本制成单细胞悬液,加入DNA-PREPTMMLPR液和PI液后,流式细胞仪分析细胞周期,得各期细胞数S%,G2/M%及增殖指数(PI);单细胞悬液标记CD34-FITC/CD31-PE/7-AAD试剂,测定血管内皮细胞数;用AnnxinV和7-AAD双染测定早期凋亡细胞数。结果血管瘤增生组和退化组S%的细胞分别是5.99±1.85、1.92±0.65;G2/M%的细胞分别是7.46±1.82、5.94±1.63;PI分别是13.49±2.08、7.85±1.78,增生期的PI明显高于退化期(P<0.01);AV %分别是9.84±3.05、16.18±4.89。血管畸形的PI、S%分别是8.39±0.89、2.17±1.18,均比增生组低(P<0.05),与退化组比较,差异无统计学意义,G2/M%为6.23±1.64,与血管瘤的增生退化组比较均无明显差异,血管畸形AV %为12.91±4.1,高于血管瘤增生组(P<0.05),与退化组比较差异无统计学意义,细胞增生组和退化组的CD34 %各是0.915±0.33、0.36±0.12,血管畸形CD34 %为0.52±0.14,增生组较其他两组高(P<0.05),而血管畸形与退化组间差异无统计学意义。CD31 %增生组、退化组、血管畸形各是7.77±2.48、5.29±1.72、5.775±1.52,三者间差异无明显统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞术测定PI,S%,AV %及CD34 %可以区别增生期血管瘤和血管畸形,对指导临床治疗有一定意义。     

高氧肺损伤机制的研究进展

支气管肺发育不良是临床应用高氧后较常见的并发症,其发病机制尚不清楚,因此尚无有效的预防和治疗方法。本文从活性氧族和活性氮族的生成、肺泡上皮细胞的死亡、炎性反应、肺组织结构的修复和重建及肺组织的机械损伤等方面综述近年来高氧肺损伤机制的研究进展。     

抗癫(间)药物致肝损伤的研究进展

药物肝毒性是临床医师和患者十分关注的问题.近年来,陆续出现抗癫(间)药物(AEDs)导致肝损伤甚至肝衰竭的病例报道,引起医学界的关注.本文综述AEDs导致肝损伤的发病机制、临床表现、高危因素、监测和预后,对预防AEDs不良反应,促进该类药物在临床的安全应用,均有重要意义.     

新生儿血糖异常与脑损伤研究进展

新生儿尤其是早产儿血糖调节功能不成熟,在某些异常情况下,可使血糖调节机制失衡,从而导致低血糖和高血糖,但常缺乏特异症状.葡萄糖是脑的主要能量来源,而大脑几乎无糖原储备,低血糖可使脑细胞修复失去基本能量来源,脑代射和生理活动无法进行,如不及时纠正会造成永久性脑损伤.高血糖在末成熟脑中的作用则褒贬不一,葡萄糖的脑保护作用可能与血糖水平有关,高血糖的危害主要有二个方面,一方面是高血糖直接导致的血液高渗状态;另一方面是细胞葡萄糖超负荷和氧化磷酸化增加、过氧化物生成增加带来的细胞毒性作用,最终导致多器官功能受损.现就新生儿血糖异常与脑损伤的关系作一综述.     

内皮细胞损伤在马兜铃酸肾病中的作用及其机制

目的 通过观察马兜铃酸-I(AA-I)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡、分泌、转分化的影响,探讨其与共刺激分子CD40/CD40L、转化生长因子-β1(TGF-β1)/TGF-βⅡ型受体(TGF-βⅡR)的关系.方法 应用不同刺激浓度的AA-I作用于HUVEC,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪(FCM)检测AA-I对HUVEC增殖和凋亡的影响; FCM检测血管内皮细胞的标志分子血管内皮生长因子受体(Flk1),共刺激分子CD40L、促纤维化细胞因子TGF-βⅡR表达的变化;Western blot法测定肌成纤维细胞的标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CD40、TGF-β1表达的变化;酶联免疫吸附法检测HUVEC分泌TGF-β1的变化.结果 不同浓度AA-I作用于HUVEC培养96 h后,高浓度AA-I导致细胞增殖受到抑制,各刺激浓度均可导致凋亡,Flk1表达下调、α-SMA表达上调,共刺激分子CD40/CD40L、TGF-β1/TGF-βⅡR 表达增加,明显促进TGF-β1的分泌(P<0.05),上述实验数据改变均呈明显的剂量相关性.结论 AA-I不仅能够抑制内皮细胞增殖,促进其凋亡,并能使其向平滑肌样细胞转化和纤维化.     

造血干/祖细胞凋亡机制研究进展

造血干/祖细胞具有自我更新、增殖分化的潜能,机体的正常造血才得以维持,造血干细胞/祖细胞的增殖分化与细胞凋亡密切相关。凋亡的发生受凋亡相关基因调控。本文就引起造血干细胞/祖细胞凋亡机制研究进展做一综述。     

PC12细胞氧糖剥夺/再灌注损伤中自噬与凋亡现象

目的观察氧糖剥夺/再灌注(OGD/OGD-R)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞自噬和凋亡的发生及进展。方法PC12细胞经氧糖剥夺及再灌注处理建立OGD/OGD-R模型,在处理不同时间点,应用流式细胞仪检测OGD组及OGD-R组细胞活性和凋亡率;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1表达;免疫荧光法观察自噬小体;分别使用自噬上下游抑制剂(3-甲基腺嘌呤、E64 d+pepstatin A)进行调控,观察自噬的波动。结果随着氧糖剥夺时间的延长,OGD组细胞形态损伤逐步加重,凋亡率显著增高,呈时间依赖性;OGD-R组早期细胞活性略有恢复,随着再灌注时程的延长,细胞凋亡率逐渐增高。自噬相关蛋白LC3Ⅱ在OGD短暂处理后其表达即有上升,3 h左右达到峰值,6～8 h恢复到基础水平;Beclin 1蛋白呈先上升后平稳下降趋势。OGD 3 h时间点诱导自噬合并3-甲基腺嘌呤处理后自噬体减少明显;而E64 d+pepstatin A可导致LC3Ⅱ的积聚。OGD-R阶段LC3Ⅱ进一步升高至再灌注12 h后开始下降,Beclin 1蛋白表达呈升高趋势并持续至再灌注24 h。结论 OGD/OGD-R均能激活PC12细胞自噬与凋亡,可为探索自噬与凋亡间潜在的串流奠定基础。     

干细胞向肾脏实质细胞分化的研究进展

随着再生医学的兴起,干细胞移植已成为医学领域的研究热点.干细胞移植作为一门新的治疗方法,目前在临床上已广泛应用于血液系统、肿瘤及自身免疫性疾病.而对于肾脏疾病的治疗目前还多处于实验研究阶段.现对近年来关于干细胞向肾脏实质细胞分化的文献进行回顾分析.     

闭合性肝外伤的非手术治疗

目的探讨小儿闭合性肝外伤非手术治疗(NOM)的可行性及适应证。方法对采用NOM闭合性肝外伤患儿19例的临床资料进行分析。均有明确外伤史,创伤原因以车祸伤居首位,其中肝被膜下血肿11例(57.9%),肝实质裂伤8例(42.1%)。主要治疗措施是输血、止血,密切观察血流动力学指标。结果非手术治愈17例(89.5%),中转手术2例(10.5%)。随访10个月~2年,全部患儿恢复良好。结论由于小儿具有特殊的解剖及生理特点,大多数闭合性肝外伤采用NOM可获得满意效果。密切观察生命体征、及时的影像学检查及注意合并伤的处理是NOM成功的关键。     

体外培养大鼠胰岛细胞凋亡的实验研究

目的：研究体外培养条件下大鼠胰岛凋亡发生及其机制。方法：采用网状纤维染色观察大鼠胰岛分离前后网状纤维分布情况;Hoechst 33258荧光染色法,透射电镜法测定培养1,3,7,14,21 d胰岛细胞凋亡率;放射免疫法测定胰岛素24 h累积分泌量;MTT比色法间接测定细胞存活率;免疫细胞化学ABC法评价Fas,Fas配体(Fas-L)阳性蛋白表达率。结果：大鼠分离后的胰岛网状纤维消失。培养3 d后,电镜观察可见胰岛细胞核皱缩,染色质边集于核膜处等典型的凋亡表现。培养3 d,胰岛凋亡率为(7.6±5.8)%;随培养时间延长,胰岛凋亡率逐渐增加,培养14,21 d,胰岛凋亡率分别为(63.0±2.6)%,(47.2±8.1)%。免疫细胞化学检测Catenin β表达培养7 d消失;Fas阳性蛋白表达率从培养3 d时(8.1±1.8)%上调至14 d,21 d时(38.5±4.7)%,(35.6±6.5)%;Fas-L在培养3 d前无表达,培养7 d为(6.8±3.2)%,14 d,21 d显著上调,分别达到(19.6±4.8)%,(12.4±7.1)%。同时,胰岛素24 h累积分泌量,细胞存活率逐渐下降。结论：大鼠胰岛在体外培养条件下易发生凋亡;Fas,Fas-L可能参与胰岛凋亡事件的发生和发展。     

Apoptosis and White Matter Injury in Preterm Infants

White matter injury in premature infants with or without intraventricular hemorrhage (IVH) remains an important cause of neonatal mortality and neurologic morbidity. The contribution of apoptosis to the cellular death in white matter injury in the preterm infant is unclear. The objective of this study was to determine whether apoptosis contributes to the cellular death in premature infants with cranial ultrasound (US) evidence of IVH and asymmetric periventricular echogenicity (PVE). Brain tissue incorporating frontoparietal white matter was obtained from 21 infants: 6 infants with severe IVH and asymmetric PVE (grade 1V IVH) on US (group 1); 9 infants with minimal IVH or normal US who died within 21 days (group II); and 6 infants with minimal IVH or normal US who died later (group III). The presence of DNA fragmentation, typical of apoptosis, was determined using a terminal deoxytransferase-mediated dUTD nick-end labeling (TUNEL) assay. The TUNEL index for group I infants was significantly greater, i.e., 2.75 ± 1.94% versus 0.84 ± 0.70% for group II and 0.42 ± 0.22 for group III infants (P = 0.004). Most cells showing reactivity had morphologic characteristics consistent with astrocytes and oligodendroglia. The number of white matter cells showing morphologic changes consistent with apoptosis, such as nuclear blebs and karyorrhexis, was also quantitated and was significantly more numerous in group I than in group II infants, i.e., 0.51 ± 0.64% versus 0.02 ± 0.05% (P = 0.0005), and group III infants, i.e., 0.10 ± 0.18% (P = 0.03). These findings implicate apoptosis as a contributing mechanism for the cellular death in infants with IVH and asymmetric PVE. Strategies aimed at preventing the white matter injury will need to incorporate methods of inhibiting the ongoing process of apoptosis. Received March 14, 2001; accepted October 25, 2001.