流式细胞术免疫分型在形态学诊断困难的白血病中的应用

目的：应用流式细胞仪对11例临床形态学诊断困难的急慢性白血病进行快速、有效地免疫分型,协助临床诊断,以指导临床化疗。方法：采用单克隆抗体三色（FITC、PE、Per-CP）直接免疫荧光标记法及多参数流式细胞术（FCM）检测,分型根据抗体积分系统,并与FAB分型进行比较。结果：①2例临床形态学拟诊断毛细胞白血病,经FCM免疫分型表达为B淋巴细胞性白血病,得以确诊;1例慢性淋巴细胞白血病经FCM免疫分型诊为T淋巴细胞性白血病;②4例临床诊断急性淋巴细胞白血病（L2、L3）的患者经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病;③3例临床形态学诊断困难急性非淋巴细胞性白血病经FCM免疫分型确诊3例为髓系白血病。结论：流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析,可以弥补FAB分型的不足,为临床诊断提供重要依据,并为白血病治疗措施的个体化提供依据。     

形态学分型困难的白血病24例免疫分型

目的: 应用流式细胞仪对24例临床形态学诊断困难的急慢性白血病进行快速、有效地免疫分型,以指导临床化疗. 方法: 采用单克隆抗体双色直接免疫荧光标记法及多参数流式细胞术(FCM),分型根据抗体积分系统,并与FAB分型进行比较. 结果: ① 9例临床诊断慢性淋巴细胞白血病经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病;② 5例临床诊断急性淋巴细胞白血病(L2)的患者经FCM免疫分型确诊1例为B淋巴细胞性白血病;2例为T淋巴细胞性白血病,且1例伴红系异常改变; 1例为未分化型白血病;1例为淋巴细胞白血病B,T双表达;③ 5例急性非淋巴细胞性白血病经FCM免疫分型确诊2例为髓系白血病;3例为红白血病(M6);④ 1例MDS伴骨髓纤维化经FCM免疫分型确诊为M6;⑤ 4例疑似粒-淋双表型白血病经FCM免疫分型确诊为粒-淋双表型白血病. 免疫分型与FAB分型的符合率为79.2%. 结论: 流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析,可以弥补FAB分型的不足,为临床诊断提供重要依据,并为白血病治疗措施的个体化提供依据.     

广西地区儿童急性白血病流式细胞术免疫分型研究

目的:研究流式细胞术(FCM)在广西地区儿童急性白血病(AL)的免疫分型诊断价值,了解儿童白血病免疫亚型的分布情况.方法:采用CD45侧散射(SSC)双参数设门方法进行FCM白血病细胞表面分化抗原分析. 结果:120例广西地区儿童急性白血病分型可分为3型:急性淋巴细胞白血病(ALL)占65.83%;急性髓细胞白血病(AML)占27.5%;混合型白血病占6.67%.79例ALL中,B淋巴细胞白血病(B-ALL)占91.14%,T淋巴细胞性白血病(T-ALL)占7.59%.伴髓系抗原表达的ALL占 25.32 %,主要表达CD13(22.78%).髓过氧化物酶(MPO)在AML特异性表达.结论:应用FCM能对广西地区儿童急性白血病进行正确分型诊断.     

免疫分型在-些特殊类型急性白血病诊断中的应用

目的 报告免疫分型在一些特殊类型急性白血病(AL)诊断中应用的重要意义.方法 应用流式细胞术(FCM)分析369例AL的免疫表型.结果 369例AL中有2例诊断为急性髓细胞白血病(AML)·M0,1例诊断为AML-M7,0例诊断为急性杂合性白血病(HAL),5例诊断为急性未分化型白血病(AUL),2例诊断为侵袭性NK细胞白血病.结论 AML-MO、AML-M7、HAL、AUL和侵袭性NK细胞白血病等特殊类型AL的诊断依赖于细胞免疫表型分析.     

急性髓细胞白血病免疫分型和FAB分型的关系

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)免疫分型和FAB分型的关系。方法:对93例初治AML进行细胞形态学检查和免疫分型检查,免疫分型采用流式细胞术(FCM),并对2种检查结果进行分析。结果:93例AML中M1亚型1例,M2亚型68例,M3亚型13例,M4亚型3例,M5亚型4例,未分类4例;单表型74例,伴淋系抗原表达12例,双表型5例,未表型2例;细胞形态学确诊AML72例,诊断准确率为77.4%;免疫分型确诊AML91例,FAB分型结合免疫分型使诊断的准确率达到97.8%。结论:免疫分型在鉴别AML各亚型和杂合性白血病(HAL)方面具有重要作用,细胞形态学结合免疫分型可提高诊断准确率,弥补FAB分型的不足之处。     

免疫分型在一些特殊类型急性白血病诊断中的应用

目的报告免疫分型在一些特殊类型急性白血病（AL）诊断中应用的重要意义。方法应用流式细胞术（FCM）分析369例AL的免疫表型。结果369例AL中有2例诊断为急性髓细胞白血病（AML）-M0，1例诊断为AML-M7，1例诊断为急性杂合性白血病（HAL），5例诊断为急性未分化型白血病（AUL），2例诊断为侵袭性NK细胞白血病。结论AML-M0、AML-M7、HAL、AUL和侵袭性NK细胞白血病等特殊类型AL的诊断依赖于细胞免疫表型分析。     

流式细胞术在血液病中的应用

流式细胞术(FCM)以其快速、精确、多参数测定单个细胞内容物等特点已成为当代医学实验与临床研究中一项不可缺少的技术,近年来在我国也已受到应有的重视,在血液学与肿瘤学界发展尤为迅速。 应用各种特异性DNA、RNA、蛋白质荧光染料,FCM可进行细胞增殖动力学研究,DNA非整倍体测定,化疗药物敏感试验以及残存肿瘤细胞监测。单克隆抗体的发展使FCM有了更广阔的用途:FCM-免疫分型是白血病与淋巴瘤必要的诊断依据;免疫功能变化反映疾病的机理与进展;CD4~+细胞绝对值小于400/ml是诊断早期AIDS病的佐证;利用特殊单抗可以诊断红细胞与血小板疾病,并探讨其发病机理、研究溶栓药物疗效等。 FCM可对外周血与脐血中造血干/祖细胞的成份提供最快速、最可靠的数据。在细胞凋亡研究中FCM也显示了独特的优点:多参数测定单个细胞内凋亡相关基因的变化,并能鉴别早期凋亡细胞与坏死细胞。 FCM将是以单细胞为基础研究分子生物学变化的最好工具。     

流式细胞术结合Ig基因重排在B细胞淋巴瘤细针穿刺标本诊断中的应用

目的探讨流式细胞术(flow cytometry,FCM)结合PCR检测Ig基因重排在B细胞淋巴瘤(B-celllymphoma,B-NHL)细针穿刺小标本诊断中的应用价值。方法对经组织学确诊的36例B-NHL和28例反应性增生的浅表淋巴结肿大病例行细针穿刺,对其组织学形态、免疫组化染色、FCM免疫表型及细胞学形态进行回顾性分析,并采用BIOMED-2系统引物分析Ig基因重排情况,总结B-NHL各亚型的FCM免疫表型特点及细胞学特点,以及对比分析FCM与Ig基因重排联合诊断与组织学诊断之间的符合率。结果 36例组织学诊断的B-NHL中,31例经FCM/Ig基因重排可确诊(符合率为86.1%),23例可以区分亚型(符合率为63.9%)。28例组织学诊断的反应性增生中,27例经FCM/Ig基因重排可确诊(符合率为96.4%)。结论 FCM免疫表型联合Ig基因重排在对B-NHL诊断和分型方面有较高的应用价值,尤其适用于细针穿刺小标本,但对富于T细胞性大B-NHL和淋巴瘤结内非弥漫性病变的病例诊断意义不大。     

利用多指标流式细胞术和外周血标本进行白血病免疫分型的研究

目的:利用CD45/SCC组合及设门技术的多参数流式细胞术,探讨采用外周血标本在白血病免疫分型中的技术要点和资料分析中的注意事项。方法:检测标本以CD45标记,构建CD45/SSC散点图,采用一组针对不同白细胞系列的单克隆抗体进行三色或双色荧光染色,用设门技术对白血病细胞群体加以限定,进行免疫表型分析。结果:113例急性白血病患者中106例在CD45/SSC散点图上出现可供分析白血病细胞独立群体,占分析标本的94%。描述了不同白血病免疫分型的特点。讨论了运用多参数FCM白血病免疫分型的技术要点和应注意的事项。结论:多数白血病标本在CD45/SCC散点图上可出现白血病细胞群体,对白血病细胞群体设门进行分析,可迅速而可靠地获取免疫分型结果。     

单克隆抗体及流式细胞术(FCM)在小儿急性淋巴细胞白血病免疫分型中的应用及其临床意义的探讨

小儿急性淋巴细胞白血病(急淋或 ALL)是一种细胞形态学相似而免疫特性不同的淋巴细胞恶性克隆性增殖性疾病。应用军事医学科学院提供的几种抗人白细胞表面分化抗原的单克隆抗体(单抗或 McAb)将临床50例急淋患儿分为五种亚型,即普通型(Comm-on),无标记型(Null)、T 型(T)、B 型(B)及 C/T 型(C/T)。并在此基础上,进一步观察了流式细胞术(FCM)对于小儿急淋免疫分型的意义,并分析 FCM 对急淋的诊断价值。     

对MOLT-4细胞用cyclin E+A/DNA流式细胞术分析 - 细胞周期六分法的建立

目的　越来越多的资料表明肿瘤是一类细胞周期性疾病 ,从而使得细胞周期分析在细胞生物学 ,肿瘤生物学领域显得格外重要。迄今为止 ,有很多方法应用于细胞周期分析中 ,但这些方法因为这样或者那样的缺点已无法适应今天的细胞周期分析。本研究的目的是建立一种新的 ,更为合理的细胞周期分析方法。方法　将cyclinE以及cyclinA的单克隆抗体按一定的比例混合后与固定了的MOLT 4细胞孵育 ,后用流式细胞仪检测。结果　我们发明的CyclinE A/DNA多参数流式细胞术能将细胞分为六个细胞群体 :G0 、早G1、晚G1、S、G2 、M期细胞。而在DNA含量直方图仅能区分三个细胞群体 :G0 /G1、S、G2 /M期细胞。结论　CyclinE A/DNA多参数流式细胞术能同时在同一样本中将细胞分为六个细胞群体 :G0 、早G1、晚G1、S、G2 、M期细胞。其对细胞周期分析明显优于目前采用的细胞周期分析方法 ,并且有明显的生物学基础。     

Cell cycle analysis by cyclin E+A/DNA multiparameter flow cytometry in exponen tial growth MOLT-4 cells

Objective To establish a new method for analyzing the cell cycle in tumor which is a kind of cell cycle disease.
Methods Mixtures of cyclin E and cyclin A antibodies were incubated with fixed MOLT-4 cells, and measured by flow cytometry.
Results We developed a cyclin E+A/DNA flow cytometry analysis method, which may distinguish G₀, early G₁, late G₁, S, G₂ and M phase cells, rather than three phases in the DNA content histogram.
Conclusion Cyclin E+A/DNA multiparameter flow cytometry can simultaneously differentiate in the same sample six cell groups: G₀, early G₁, late G₁, S, G₂ and M phase cells. It performed better than any other cell cycle analysis methods that we have used and has a definite cell biology foundation.     

神经生长因子对瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的:探讨神经生长因子(NGF)对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响、病理改变及其对瘢痕的作用机制,为临床预防和治疗瘢痕提供分子及病理学水平的理论依据。方法:对大鼠动物创伤模型进行体内实验,采用倒置显微镜、HE染色、Cason氏改良三色染色、Hamason-Lush-bangh氏染色法、透射电镜等方法进行观察。结果:大鼠动物创伤模型病理染色与透射电镜观察显示,与对照组相比,实验组局部注射细胞因子NGF后,促进了成纤维细胞的生长增殖,刺激了胶原纤维的合成、增生和沉积。结论:NGF对成纤维细胞的生长趋势与增殖活性有明显的促进作用,刺激了胶原纤维的合成、增生和沉积。     

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响

目的探讨中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及凋亡的作用。方法设立空白血清组及中药清毒栓组、保妇康栓组、西药安达芬组,以4%含药血清培养液作用于SiHa细胞,分为3个时间点,通过MTT法检测各组对细胞增殖抑制的影响;同时运用流式细胞分析技术进行TUNEL法检测晚期细胞凋亡的变化。结果经含药血清培养液作用后各组SiHa细胞数量减少,其中以作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.01),且抑制作用安达芬组>清毒栓组>保妇康组,清毒栓组与安达芬组间差异有统计学意义(P<0.05)。各含药血清组对细胞凋亡均有显著的影响,且明显优于空白血清组(P<0.05),各含药血清组凋亡率依次为清毒栓组>保妇康组>安达芬组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论清毒栓含药血清通过促进细胞凋亡而达到抑制肿瘤的目的。     

穿刺活检联合流式细胞仪检测对恶性淋巴瘤诊断和分型临床研究

目的探讨穿刺活检联合流式细胞仪检测对恶性淋巴瘤诊断和分型的情况。方法回顾性分析2009年3月～2012年3月在我市两所医院就诊的恶性淋巴瘤患者62例,均进行流式细胞仪检测和穿刺活检。结果应用流式细胞仪检测结果为：骨髓受累者55例,其中非霍奇金淋巴瘤45例,霍奇金淋巴瘤10例;应用穿刺活检检测结果为：骨髓受累者28例,其中6例在流式细胞仪检测中未检测出;具有统计学差异（P〈0．05）。结论应用流式细胞仪检测比应用穿刺活检法有更高的准确度,但也有假阴性的现象,所以应该将穿刺活检联合流式细胞仪进行检测,这样能提高准确度。     

胞内磷酸化蛋白酪氨酸激酶的流式细胞术检测

目的: 建立流式细胞术检测细胞内磷酸化蛋白酪氨酸激酶(PTKs)的方法。方法: 用佛波醇酯(PMA)及植物血凝素(PHA)刺激Jurkat细胞,用两种不同的固定和透膜方法处理细胞,加磷酸化PTKs特异性单抗P-Tyr-100及FITC标记的二抗,建立胞内磷酸化PTKs的流式细胞检测技术;同时,用免疫印迹方法检测磷酸化PTKs以资对照。用双色荧光技术,对结核杆菌抗原(Mtb-Ag)活化的外周血单个核细胞(PBMC)中的γδT细胞进行胞内PTKs分析。结果: PHA及PMA刺激能够使Jurkat细胞中磷酸化PTKs明显增加,流式细胞术与免疫印迹方法检测的结果一致。通过双色荧光技术检测发现,Mtb-Ag刺激PBMC,可以优先诱导γδT细胞胞内PTKs的活化。结论: 利用流式细胞术可在单细胞水平分析细胞内PTKs的磷酸化状态。     

FCS Express V3软件在流式细胞术课程教学中的作用

采用FCS Express V3软件进行研究生流式细胞术课程的辅助教学,使学生熟练掌握流式细胞仪数据分析技能,并提高其在撰写科研论文时流式细胞仪数据的图形转换、输出、统计资料的处理能力。调查显示,学生对流式细胞术课程的满意度和对该课程的重视程度提高,取得了良好的教学效果。     

三色和双色荧光标记流式细胞术对肾移植免疫反应新指标TLR4的监测

目的 比较三色和双色荧光标记流式细胞术（FCM）在肾移植术后免疫指标TLR4监测中的优缺点。方法 选取10例肾移植术后病例,分别采用三色和双色FCM检测外周血单核细胞中CD14、TLR4和CD80表达情况,计算CD14阳性单核细胞中TLR4和CD80的表达百分率并进行统计比较。结果 两种方法检测CDl4阳性单核细胞中TLR4和CD80阳性表达百分率均无显著性差异（P=0．198,P=0．872）,两种方法对相同血标本的检测结果均呈正相关关系（积矩相关系数r=l,P=0．000;积矩相关系数r=0．999,P=0．0001。另外,应用三色FCM还可同时获得单核细胞中TLR4和CD80双阳性的表达情况。结论 三色和双色FCM检测TLR4的结果无显著性差异,但三色FCM可同时显示TLR4与其下游分子CD80双阳性表达情况,对揭示TLR4参与移植免疫反应机制具有重要价值,而且血标本用量少。节约单克隆抗体。     

Quantification analysis of vascular endothelial cells in human solid tumor]

Angiogenesis is essential for the growth and metastasis of solid tumors. Intratumoral microvessel count, which represents a measure of tumor angiogenesis, has been associated with prognosis of patients with a variety of malignancies. But till now, it is still a problem to quantitate the angiogenesis of tumors exactly. In this study, the endothelial cells in 20 solid tumors were conjugated with anti-CD34 monoclonal antibodies labelled with red-fluorescent substances, and were observed by fluorescence microscopy and quantitated by flow cytometry. The results of flow cytometry were analysed by t-test. The correlation was analysed between percentage of flow cytometry and vessel counts (light microscopy, x 200) in each tumor which was stained with anti-CD34 monoclonal antibodies and anti-VIII factor related antigen polyclonal antibodies by using immunohistochemistry. The results showed there was significant difference between the treatment group and control group in flow cytometry, and a significant correlation between the endothelial cells percentage by flow cytometry and the vessel counts by immunohistochemistry was observed, although the average vessel counts were approximately three times with CD34 staining as much as with VIII factor related antigen staining. These data indicate that flow cytometry as a novel method can quantitate angiogenesis of tumors exactly and quickly.     

1株具有低营养抗逆特性的嗜麦芽寡养单胞菌的分离和鉴定

目的分离和鉴定贮留在流式细胞仪流动室中的YL08菌株。方法从流式细胞仪流动室中活化、分离和纯化得到YL08分离株,接种于LB培养基和PBS缓冲液中,鉴定YL08分离株的形态和营养抗逆特性,通过16S rDNA的序列测定及构建系统发育进化树分析鉴定YL08分离株的种属。结果镜检显示YL08分离株呈短小杆状,革兰染色阴性;YL08分离株具有较强的低营养抗逆特性,在无营养的PBS缓冲液中可以生存6个月以上;序列比对及系统进化树分析证实YL08分离株为嗜麦芽寡养单胞菌（Stenortrophomonas maltophilia）,同源性≥99％。结论从流式细胞仪流动室中分离得到1株具有低营养抗逆特性的嗜麦芽寡养单胞菌YL08株,为流式细胞仪的消毒维护及YL08分离株的低营养抗逆保护机制研究奠定基础。