β－arrestin2基因转染对人肺腺癌细胞 A549的凋亡影响

目的：观察外源性β－arrestin2基因对人肺腺癌细胞株 A549凋亡的影响。方法：将真核表达重组体pcDNA3．1－β－arrestin2质粒和空载体 pcDNA3．1质粒采用脂质体转染技术分别导入人肺腺癌 A549细胞,然后采用 G418筛选方法获得稳定转染的细胞系,采用 qRT －PCR 和 Western blot 分别在基因水平和蛋白水平检测β－arrestin2基因的表达。采用流式细胞仪分析转染细胞的凋亡情况。结果：经脂质体转染和筛选,建立了稳定表达β－arrestin2基因的 A549细胞系。转染β－arrestin2基因的细胞生长速度较未转染组和转染空白载体组相比明显减慢（P ＜0．05）。结论：β－arrestin2基因可促进人肺腺癌细胞 A549的细胞凋亡。     

p73基因过量表达对人肺癌细胞A549凋亡及其化疗敏感性的作用

背景与目的：部分非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表达野生型p53基因（wild-type p53,wt-p53）,因此在基因治疗中克服这些NSCLC对wt-p53的抵抗机制就非常重要。P53基因家族的新成员p73是p53的同源体,本研究旨在探讨对wt-p53基因治疗抵抗的人肺腺癌细胞A549在外源p73基因转染或联用化疗药后凋亡程度和对化疗药物敏感性的变化。方法：将真核表达重组质粒pcDNA3-HA-p53或pcDNA3-HA-p73α转染入A549细胞,G418筛选,Western blot检测P53或P73α的表达。MTT法分析转染细胞对顺铂和阿霉素的敏感性,用流式细胞术、TUNEL法和DNA片段法分析化疗药作用下转染细胞的凋亡变化,克隆形成实验观察细胞生物学性状的改变。结果：转染p53或p73α基因的A549细胞可以稳定高表达p53或p73α蛋白。转染p73α的A549细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度（6．25μmol／L的顺铂或0．25μmol／L的阿霉素）作用下生长明显受到抑制。顺铂的IC50值从22．65μmol／L降至3．75μmol／L,阿霉素的IC50值从4．20μmol／L降至0．06μmol／L。p73能使A549细胞受顺铂和阿霉素诱导的细胞凋亡增加。而p53没有明显作用。流式细胞术显示p73α基因转染后,顺铂诱导的细胞凋亡率从10．6％升高到36．8％（P〈0．01）,阿霉素诱导的细胞凋亡率从13．0％升高到41．1％（P〈0．01）。克隆形成实验显示．p73α基因转染能明显降低顺铂和阿霉素作用后A549细胞的克隆形成数（P〈0．01）。对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为2．0和2．4倍。结论：外源性p73基因的导入增加了wt-p53型A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药的敏感性。该作用可能与p73基因能不依赖于p53基因诱导细胞凋亡有关。p73基因可用于治疗wt-p53不能发挥作用的恶性肿瘤。     

人MT1H 基因对肺腺癌细胞A549 增殖的影响及其机制

 目的 研究外源性人金属硫蛋白1H（MT1H）基因稳定转染对肺腺癌细胞A549生长的影响及其机制。方法 构建MT1H基因真核表达质粒pcDNA3．1（-）-MTIH，以脂质体法转染A549细胞，经G418筛选，获得阳性单克隆细胞。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后MT1H mRNA和蛋白表达，MTT实验检测其增殖能力的变化，流式细胞仪分析细胞周期时相分布。然后RT-PCR检测cy-clinD1的表达。结果 MT1H在A549细胞中获得表达。与未转染组和空质粒转染组比较，pcDNA3．1（一）～MT1H转染组细胞增殖速度明显增快，G0／G1期细胞减少，S期细胞增多，cyclinD1 mRNA水平明显升高。结论 MT1H能够促进肺腺癌细胞A549增殖，可能和上调cyclinD1促使细胞进入S期增多有关。     

上调miR-125a对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨上调microRNA-125a（miR-125a）对肺癌A549细胞凋亡的影响及可能机制。方法 人工合成miR-125a基因序列,将miR-125a基因克隆至真核表达载体pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-miR-125a,同时设计并构建阴性对照质粒pGenesil-control。将以上载体经脂质体介导转染肺癌A549细胞并分为3组：成功转染pGenesil miR-125a的A549细胞（A549-miR-125a组）,成功转染pGenesil-control的A549细胞（A549-control组）,以及未进行转染的A549细胞（A549组）。采用实时定量PCR技术（QPCR）检测各组细胞的miR-125a表达水平,Annexin V-FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法检测p53基因的蛋白水平。结果 经酶切和测序鉴定证明pGenesil-miR-125a重组质粒构建成功。A549-miR-125a组的miR-125a水平为2.72±0.41,高于A549-control组的0.97±0.16和A549组的0.96±0.11（P＜0.01）;A549-miR-125a组的细胞凋亡率为（31.04±2.48）％,高于A549-control组的（6.91±0.72）％和A549组的（6.73±0.56）％（P＜0.05）;A549-miR-125a组的p53蛋白水平为3.91±0.46,高于A549-control组的1.01±0.06和A549组的0.99±0.04（P＜0.01）。结论 上调miR-125a可促进肺癌细胞的凋亡,提示其在肺癌的发生、发展中有重要作用,可能的机制是上调p53的蛋白表达。     

人Id3基因在肺腺癌A549细胞中的表达及其对细胞生长的抑制

目的：研究外源性分化抑制因子3（Inhibitor of differentiation3，Id3）基因表达对人肺腺癌细胞系A549细胞生长的抑制作用。方法：构建磁，和EGFP的融合基因表达载体pEGFP／Id3，采用脂质体转染技术将pEGFP／Id3导入A549细胞。FCM分析转染细胞EGFP表达效率，荧光显微镜观察EGFP表达情况；半定量RT—PCR、免疫细胞化学分析转染后A549细胞Id3mRNA和蛋白的表达。MTT法检测转染后A549细胞生长抑制情况，FCM分析A549细胞周期进程，AnnexinV／7-AAD和Hoechst33258染色检测转染后细胞的凋亡情况。结果：成功构建入肚，与EGFP融合基因表达载体pEGFP／Id3；荧光显微镜和FCM观察到EGFP的有效表达，转染48—72h时EGFP表达率最高；Id3mRNA及蛋白在转染后的A549细胞中能有效表达。转染后48h和72h，pEGFP／Id3转染组A549细胞生长受到明显抑制（P〈0．01）；细胞周期分析表明，pEGFP／Id3转染组G0／G1期细胞显著高于对照组（P〈0．05）；AnnexinV／7-AAD双染结果显示，pEGFP／Id3转染组细胞的早期凋亡率[（10．67±2．60）％]显著高于pEGFP组[（3．39±2．21）％]和未转染组[（2．35±0．95）％]（P〈0．05）；Hoechst33258染色结果也证实pEGFP／Id3组A549细胞出现明显凋亡形态特征。结论：外源性加基因在肺腺癌A549细胞中的表达能抑制细胞增殖，并诱导细胞凋亡。     

转染NF—kB抑制物基因对食管癌细胞系生物活性的影响

目的：将NF—kB抑制物基因pcDNA3／mI kBα S32A／S36A转染食管癌细胞株EC1，观察对NF—kB因子活性及对细胞生长的影响。方法：采用脂质体转染法将pcDNA3／mI kBα S32A／S36A质粒转染入EC1细胞进行瞬时表达．检测其对EC1细胞的影响，用Western blot和RT—PER方法检测转染前后NF—kB p65、NF—kB p50蛋白和mRNA表达水平的变化。结果：与转染pcDNA3．0质粒和未转染质粒组比较，转染pcDNA3．0／mI kBα S32A／S36A质粒EC1细胞的生长速度受到明显抑制，P〈0．05。转染pcDNA3／mI kBα S32A／S36A质粒的EC1细胞，在0、24、48、96小时未见NF—kB p65、NF—kB p50蛋白和mRNA表达，而转染pcDNA3．0质粒EC1细胞可见核内NF—kB p65和NF—kB p50蛋白表达。结论：转染NF—kB抑制物基因IkBα后可抑制EC1细胞的生长，并抑制细胞NF—kB p65、NF-kB p50基因的表达．该结果提示调节NF—kB的表达可能是食管癌基因治疗的靶点。     

外源性P73基因对WtP53型人肺腺癌细胞A549化疗敏感性的影响

目的 研究外源p73基因转染wtp53型人肺腺癌A549细胞对其化疗药物敏感性的影响。方法 用脂质体介导的转染技术。将含有全长人野生型p73α cDNA和野生型p53 cDNA的真核表达重组质粒分别导入A549细胞，观察基因转染前后肿瘤细胞对化疗药物顺铂和阿霉素敏感性的变化。结果 A549-p73α细胞可以稳定地表达P73α蛋白，其生长速度较未转染p73α和转染wtp53基因的A549细胞明显减慢，克隆形成数下降，凋亡细胞明显增多。与未转染组比较，在原本没有抑制和杀伤作用的化疗药物浓度作用下A549-p73α细胞生长明显受到抑制，顺铂和阿霉素的IC50值分别降低为约1／6和／70。结论 研究显示外源性p73基因的导人增加了wtp53型人肺腺癌A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药物的敏感性，为p73基因用于治疗wtp53不能发挥作用的恶性肿瘤提供实验依据。     

转染BAX基因对A549细胞系的凋亡及化疗敏感度的影响

目的 探讨BAX转染是否增强人肺癌A549细胞对顺铂致凋亡的敏感度。方法 通过CCK8法检测顺铂对A549细胞体外增殖的影响。应用脂质体介导重组真核表达载体BAX-pcDNA3.1和空载体pcDNA3.1质粒转染至人肺癌A549细胞中,G418筛选阳性细胞。RT-PCR法检测BAX在A549细胞中的表达。将不同浓度的顺铂分别作用于A549、A549/BAX和A549/pcDNA3.1细胞72 h,CCK8法测定各组细胞的存活率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果 顺铂能抑制A549细胞体外生长,BAX和顺铂使A549细胞发生G₁/S期细胞阻滞。RT-PCR显示转染BAX基因的A549细胞中BAX表达显著增加,转染BAX基因及加药组细胞凋亡率明显增加。 结论 稳定转染BAX基因明显增强A549细胞对顺铂致凋亡作用的敏感度。     

LGI1基因对胶质瘤细胞作用的研究

目的：研究富亮氨酸胶质瘤失活基因1（LGI1）与胶质瘤细胞生长及胶质瘤细胞凋亡的关系。方法：构建pcDNA3.1／LGI1质粒，采用脂质体介导的方法转染LGI1缺失的胶质瘤细胞系。RT—PCR法和免疫组化法检测转染细胞的LGI1基因表达．MTT法检测转染细胞的增殖活性，Annevin V—FITC法检测转染细胞的凋亡。结果：pcDNA3．1／LGI1转染胶质瘤细胞系A172后，A172细胞LGI1mRNA和蛋白表达阳性；细胞增殖活性受到抑制，MTT吸收值在转染后24和48小时下降。与正常对照组相比有统计学意义（P〈0．05）；转染后24小时早期凋亡细胞较多，48小时后早期凋亡减少。结论：LGI1基因可抑制肿瘤细胞的增殖，诱导细胞凋亡。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。