MMP-1基因1G/2G 多态性在胃癌侵袭转移中的作用

背景与目的：基质金属蛋白酶-1（Matrix metalloproteinase-1，MMP-1）通过降解细胞外基质和基底膜屏障促进肿瘤的浸润转移，本研究探讨MMP-1基因1G／2G多态性在胃癌人群中的分布及其与胃癌侵袭转移的关系。方法：采用聚合酶链反应PCR-变性高效液相色谱分析（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）方法，对102例胃癌患者进行MMP-1基因1G／2G多态性的基因型分析，比较基因型分布和胃癌组织浸润转移等侵袭性指标的关系。结果：MMP-1基因1G／2G多态的1G／1G、1G／2G和2G／2G基因型在胃癌患者中的分布频率分别为15（14．7％）、48（47．1％）、39（38．2％）；1G／2G多态性基因型分布与胃癌淋巴结转移程度（N1VSN2＋N3）显著相关（P=0．013）；与1G／1G纯合子基因型相比，携带2G等位基因型的胃癌患者淋巴结转移更严重（P〈0．05）。1G／2G基因型分布与胃癌组织学类型，肿瘤部位，组织病理分级及胃壁浸润深度（T1＋T2 vs T3＋T4），临床病期等无明显相关（P〉0．05）。结论：MMP-1基因1G／2G多态性与胃癌的侵袭性有关，携带2G等位基因可能是胃癌淋巴结转移的危险因素。     

沉默ABCC4基因逆转人胃癌多药耐药的研究

目的 探讨胃癌耐药复发相关基因ABCC4在胃癌耐药复发中的分子机制。方法 采用免疫组织化学、Western blot、RT-PCR、流式细胞检测胃癌组织及胃癌耐药细胞中ABCC4的表达情况,利用RNA干扰技术下调ABCC4基因在胃癌耐药细胞中的表达水平。结果 ABCC4基因在多种胃癌细胞中高表达,尤其是在胃癌耐药细胞中表达增加更为显著,但在正常胃黏膜细胞中极低表达或表达缺失。RNA干扰下调ABCC4基因可导致胃癌耐药细胞发生凋亡,并且细胞周期被阻滞在G1期以内。5-Fu可以显著抑制ABCC4沉默后肿瘤细胞增殖,同时,也能明显抑制ABCC4沉默后裸鼠体内肿瘤生长。结论 ABCC4基因过度表达于胃癌耐药细胞中,下调ABCC4基因表达可抑制胃癌多药耐药细胞增殖,并且可增强其对化疗药物的敏感度。     

胃、十二指肠

胃癌术中盆腹膜取材检测微转移及其临床意义评估；P物质对体外培养的胃癌细胞内游离钙浓度的影响；全胃切除调节型双通道间置空肠消化道重建；胃癌组织中E钙黏素基因启动子甲基化状态的研究；BRMS1在胃癌组织中的表达与淋巴结转移的关系.     

胃、十二指肠（080334～080371）

韶关市消化系统恶性肿瘤5156例统计分析；胃癌组织和正常胃小凹上皮中抑癌基因E-cadherin hMLH1 APC和MGMT的过甲基化；幽门螺杆菌对原癌基因c—Fos和c—Jun表达的影响；Ezrin和Moesin在胃癌中的表达及其临床意义；胃肠道肿瘤细胞周期素A的表达及其与化疗药物敏感性的关系。     

腺病毒介导的p21基因联合顺铂对胃癌细胞的影响

目的：探讨腺病毒介导的p21基因^WAF1/CIP1基因（p21基因）在人胃癌细胞系SGC0－7901中的表达及其联合顺铂化疗对胃癌细胞生长和荷瘤小鼠的作用。方法：采用腺病毒载体携带p21基因感染人胃癌细胞系，用流式细胞仪测定p21基因对SGC－7901细胞周期的影响，并与DDP联合应用，观察p21基因和（或）DDP对SGC－7901细胞系和荷瘤小鼠的作用。结果：腺病毒介导的p21基因可在胃癌细胞系SGC－7901中过度表达，使胃癌细胞系S期含量下降，抑制其生长，并可诱导胃癌细胞的凋亡；p21基因联合DDP作用使SGC－7901细胞G2／M含量明显下降，并可抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长，且联合作用比单一用药作用更明显。结论：腺病毒介导的p21基因可抑制人胃癌细胞系的生长，抑制瘤体的生长，结合化疗药物其作用更强，为临床应用提供了依据。     

腺病毒介导p21WAF1/CIP1基因转移及诱导胃癌细胞凋亡

目的：探讨p21^WAF1/CIP1基因（p21基因）过表达对人胃癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响，进一步了解p21基因对肿瘤细胞的治疗作用。方法：通过腺病毒介导外源性p21基因转移到有p53基因突变的人胃癌细胞系SGC－7901，对p21基因的表达、细胞生长的抑制与投机和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果：外源性p21基因在靶细胞高水平表达显著抑制了胃癌细胞的生长和集落形成，流式细胞仪检测显示G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad-p21对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。结论；p21基因可能参与肿瘤细胞凋亡的诱导，使p21基因在肿瘤的基因治疗，特别是在与其他凋亡诱导因子联合作用的方案中有更好的应用前景。     

多基因蛋白联合检测在胃癌转移淋巴结中的表达及其相关性

目的研究多基因蛋白在胃癌及其转移淋巴结中的表达水平，探讨其在胃癌转移淋巴结中的临床意义。方法应用免疫组化法检测36例胃癌转移淋巴结中PCNA、C-erbB-2、bcl-2和p16的基因蛋白表达。结果PCNA、c—erbB—2和bcl-2在胃窦部癌转移淋巴结中N1站表达率高于N2、N3站；在各类型胃癌转移淋巴结中N2、N3站表达率呈降低趋势，p16在N3站表达率呈上升趋势；黏液腺癌转移淋巴结中p16表达率最低；分站淋巴结基因表达与原发灶的距离有关。结论联合基因蛋白检测胃癌转移淋巴结可以作为判断术后转移状况和预后的重要参考指标。     

基于Oncomine和GEPIA数据库分析NFE2L3基因在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:通过数据库挖掘分析NFE2L3基因在胃癌组织中的表达水平及其临床意义。方法:通过Oncomine数据库和GEPIA网站分析NFE2L3基因在胃癌组织中的差异性表达及其与生存预后关系；胃癌与正常组织的表达采用t检验分析，采用单因素方差分析胃癌不同临床分期的表达差异，使用Pearson指数分析胃癌相关研究，使用Kaplan-Meier数据分析胃癌患者生存及预后情况，并通过String数据库分析NFE2L3基因上下游的蛋白相互作用及调控关系。结果:胃癌组织中NFE2L3 mRNA表达水平显著高于胃正常组织；GEPIA分析发现高表达的NFE2L3基因与错配修复基因MSH2、MSH6、PSM2有关(P＜0.05)，与错配修复基因PMLH1无明显意义（P＞0.05），NFE2L3与胃癌临床分期无相关性，但是高表达的NFE2L3基因与低生存率及不良预后有关(P＜0.05)。蛋白质分析网络显示NFE2L3可能与HCFC1、OSBPL3、OSBPL6、HNRNPA3、NFE2L2、MAFG、MAFF、MAFK、BACH1、NPRL3等蛋白相互作用。结论:通过多个数据库研究发现NFE2L3在胃癌组织中呈高表达、表达水平与胃癌患者生存与预后有关；NFE2L3可作为与胃癌预后相关的生物标志物及治疗靶点，参与肿瘤发生发展。     

RIN1过表达对人胃癌细胞MKN28增殖的影响研究

[目的]研究RIN1过表达对人胃癌细胞MKN28增殖和细胞周期的影响。[方法]采用PCR法扩增人RIN1基因,并构建重组真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-RIN1。采用脂质体转染法将pcDNA3.1（＋）-RIN1及空载体pcDNA3.1（＋）转染至人胃癌MKN28细胞,G418法筛选阳性克隆;Western blot法和免疫荧光法鉴定RIN1的高表达。CCK-8法和平板克隆实验检测RIN1高表达对MKN28细胞增殖的影响。流式细胞术检测RIN1高表达对MKN28细胞周期的影响。[结果]成功构建RIN1真核表达载体,RIN1基因全长为2 353bp。G418法筛选获得高表达RIN1的MKN28克隆细胞株MKN28/RIN1-1和MKN28/RIN1-2,Western blot结果显示这两株细胞分别为MKN28/3.1的3.21倍和3.17倍。过表达RIN1基因后,MKN28细胞增殖显著性加快,克隆数显著性增加;细胞周期改变,G0/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加。[结论]RIN1基因过表达加速MKN28细胞从G1期向S期的转化促进细胞增殖;RIN1可能成为胃癌治疗的一个潜在靶点。     

KISS-1基因在胃癌组织中的表达与胃癌复发转移的关系

目的：检测KISS-1基因在胃癌中的表达,探讨它与胃癌的临床特征、复发和转移的关系.方法：随机选取2008年菏泽市立医院手术切除的胃癌根治标本50例,采用免疫组化法检测50例胃癌组织中KISS-1基因的表达情况,与正常胃组织做对比,结合临床资料与随访资料进行统计学分析.结果：胃癌组织KISS-1基因的阳性表达率32％,KISS-1基因在低分化、有淋巴结转移、远处脏器转移肿瘤中表达显著降低P＜0.05,5年生存者的KISS-1基因阳性表达率明显高于5年内死亡者,P＜0.05.结论：KISS-1在胃癌组织中的表达明显低于胃正常组织,表明胃癌的发生可能与KISS-1基因的缺失有关.KISS-1在胃癌组织中的表达与患者的年龄、Borrmann分型、肿瘤的大小、部位、病理类型无显著相关性,而与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关.KISS-1基因可能成为预测胃癌恶性潜能的新的生物学标记物,通过恢复和提高体内基因表达水平有望成为胃癌基因治疗的新途径.     

重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞HGC27生长抑制作用的研究

目的:了解重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞株HGC27的作用,为进一步研究p21wif1的生物学作用以及肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:采用RT-PCR技术,构建表达p21蛋白的重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),并将其转染胃癌细胞HGC27,观察细胞形态学改变,用Western blot检测转移基因蛋白在胃癌细胞中的表达,用MTT法检测其对HGC27细胞生长的抑制作用,用流式细胞仪分析其对细胞周期的影响。结果:成功构建重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),所得病毒滴度达到3.5×107PFU/mL,在胃癌HGC27细胞中成功过表达转移基因蛋白p21,使胃癌细胞株细胞周期比例改变,G1期含量明显增加,并抑制其增殖。结论:重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)可诱导胃癌细胞株HGC27细胞G1期阻滞,抑制细胞增殖,该基因疗法可有效抑制体外胃癌细胞的生长。。     

胃、十二指肠（071472～071516）

071472 反义survivin核酸增强胃癌细胞对多西他赛敏感性及其逆转耐药机制的探讨；071473 FAF1 mRNA在人胃癌组织中的裹达及其临床意义；071474 Syk表达对胃癌细胞凋亡的影响；071475 淋巴细胞HLA-B表达与胃癌分化转移的关系；071476 转录因子Sp1在胃癌组织中的裹达及其与胃癌预后的关系……[第一段]     

阻抑素基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用研究

目的:研究阻抑素(prohibitin,PHB)基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用.方法:使用RNA干扰技术和基因转染技术,分别获得PHB基因低表达和高表达的胃癌BGC823细胞.然后采用MTT法和FCM法分别检测PHB基因低表达和高表达的胃癌细胞的增殖率、细胞周期和凋亡情况,Western印迹法检测Bax、Bcl-2和细胞质内细胞色素c的表达水平,并且检测 caspase-3和caspase-9的激活情况.结果:PHB基因转染胃癌BGC823细胞后,细胞生长速度减缓,G1期细胞所占比例明显下降,G2期细胞比例略有上升,S期细胞比例和细胞凋亡率明显上升,Bax表达上调,Bcl-2表达下调,细胞质内细胞色素c水平显著上升,caspase-3和caspase-9的激活程度增加.PHB基因特异性RNA干扰胃癌细胞BGC823后,细胞生长加速,G1期和G2期细胞所占比例变化不大,S期细胞比例略有上升,细胞凋亡率小幅下降,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,caspase-3和caspase-9的激活程度减弱.结论:PHB是抑制胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的重要因子之一,推测该作用可能是通过线粒体途径实现的.     

p27kiplcDNA对胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响

目的 观察p27基因表达对胃癌SGC7901细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法 采用腺病毒介导的方法将p27kiplcDNA导人胃癌SOC7901细胞中，应用TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化，流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果 转染了p27kiplcNA的细胞端粒酶活性显著下降，G1期细胞比率显著增高，细胞增殖指数显著降低。结论 外源性p27基因的表达可使SGC7901细胞生长停滞于G1期，端粒酶活性下降，Ad-p27kipl对治疗胃癌有潜在意义。     

钙调蛋白、钙网蛋白及周期蛋白依赖性激酶1基因在胃癌组织中的表达

目的 研究钙调蛋白(CaM)、钙网蛋白(CRT)及周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)基因在胃癌组织中的表达,及其与胃癌发生发展的相关性.方法 实时定量PCR法定量检测CaM、CRT及CDK1基因在人胃癌组织中的表达,并分析其表达与临床病理参数、幽门螺杆菌感染的关系.结果 胃癌组织和淋巴结组织中CaM、CRT及CDK1基因的表达比癌旁组织高2.08～3.70倍,幽门螺杆菌感染组中此三个基因的表达比非感染组分别上调2.78～7.36倍.其中CaM基因的表达与生存时间相关,CDK1基因的表达与pTNM分期及淋巴结转移相关,而CRT基因的表达与肿瘤大小、生存时间及淋巴结转移相关.结论 Hp通过上调CaM、CRT及CDK1基因的表达参与胃癌的发生发展,联合检测三个基因对判断预后有一定作用.     

p27kip1cDNA对胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响

目的　观察p2 7基因表达对胃癌SGC790 1细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法　采用腺病毒介导的方法将p2 7kip1cDNA导入胃癌SGC790 1细胞中 ,应用TRAP -ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化 ,流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果　转染了 p2 7kip1cDNA的细胞端粒酶活性显著下降 ,G1期细胞比率显著增高 ,细胞增殖指数显著降低。结论　外源性 p2 7基因的表达可使SGC790 1细胞生长停滞于G1期 ,端粒酶活性下降 ,Ad -p2 7kip1对治疗胃癌有潜在意义     

基于数据挖掘分析LUM基因在胃癌中的表达及意义

目的：通过数据库分析LUM基因在胃癌中的表达情况及意义。方法：通过Oncomine数据库分析LUM基因在胃癌中的差异性表达,基于GEPIA网站分析LUM基因表达与胃癌患者生存周期的关系;同时利用MethHC数据库分析LUM基因甲基化水平,使用基于TCGA数据集的UALCAN在线数据库对LUM在胃癌患者中的表达及预后进行验证;并通过String数据库分析LUM基因的蛋白相互作用及上下游调控关系。结果：胃癌组织中LUM的mRNA 表达较正常对照组明显增高;Meta分析进一步证实LUM基因的表达在胃癌组织中明显增高。GEPIA分析发现高表达组患者生存周期明显短于低表达组（Ｐ＜0.05）。与此同时,甲基化分析中得出LUM基因甲基化水平肿瘤组明显高于正常组;TCGA数据集验证显示LUM在胃癌组织中的表达量与预后有关;蛋白质网络分析得出,LUM可能与OGN、CHST1、CHST5、CHST6、DCH、COL1A1、COL1A2、COL3A1、COL4A2、ACAN等蛋白相互作用。结论：基于多个数据库的数据挖掘发现,LUM基因在胃癌组织中呈现高表达,且其表达水平与胃癌患者总体生存相关;LUM是与胃癌预后相关的生物标志物,参与肿瘤的发生发展,或可作为诊断和治疗的潜在靶点。     

MTS1基因的表达与胃癌生物学行为的关系

目的　探讨MTS1基因在胃癌中的表达规律及其临床意义。方法　应用免疫组织化学LSAB方法 ,对 6 5例胃癌的MTS1基因产物p16的表达进行了观察。结果　MTS1基因产物的表达与胃癌的分化程度和预后呈正相关 ,与浸润、淋巴结转移呈负相关。结论　MTS1参与了胃癌的发展过程 ,并与胃癌的部分生物学行为有关 ,可能成为胃癌诊断和判断预后的重要的分子生物学检测指标。     

间隙连接蛋白32和43基因在不同分化类型胃癌细胞株中的表达

目的：研究间隙连接蛋白Cx32，Cx43基因表达水平对胃癌侵袭转移潜能的影响。方法：用RT—PCR法分析Cx32和Cx43基因在不同分化类型胃癌细胞株GES-1、N87、BGC-823中的表达，并分析该基因表达对胃癌侵袭转移潜能的影响。结果：在Cx32表达谱中，N87、BGC-823与GES-1相比明显低表达甚至缺失（P〈0．05），N87与BGC-823之间无明显统计学差异；在Cx43表达谱中，BGC-823表达均低于低转移潜能细胞株GES-1和N87。结论：Cx32、Cx43在胃癌的侵袭和转移中起到重要的作厢。     

c-fos、bcl-2基因表达与肠型、弥漫型胃癌的关系

目的：探讨c-fos、bcl-2基因蛋白表达与肠型、弥漫型胃癌的发生的关系，为胃癌分型、早期诊断提供分子病理学依据。方法：用免疫组织化学方法，检测54例胃癌切除标本c-fos、bcl-2基因蛋白的表达，所有结果均用EXCEL录入计算机、SAS统计软件包分析。结果；在肠型胃癌中c-fos、bcl-2基因蛋白表达高于弥漫型胃癌（P＜0.01）；c-fos、bcl-2基因表达淋巴结转移组高于非转移组（c-fos为63.64%、54.55%；bcl-2为50.00%，27.27％），但无统计学意义；c-fos、bcl-2在癌旁组织、异型增生组织和高分化腺癌中呈强阳性表达。结论：c-fos、bcl-2在肠型和弥漫型胃癌中的不同表达表明两型胃癌的发生机制有所不同，可为胃癌分型提供分子病理学依据；c-fos、bcl-2基因蛋白表达变化发生在肿瘤细胞形态变化之前，可作为胃癌早期诊断的分子病理学指标。