快速微量Dot—IGSS检测日本血吸虫病人血清中抗体的研究

本文用日本血吸虫可溶性虫卵抗原点于微孔滤膜上,以快速微量斑点免疫金银染色法(Rapid microvolume Dot-IGSS,Rm Dot-IGSS)检测血吸虫病患者血清中相应抗体,并与Dot-IGSS相比较,检测血吸虫病人血清69份,两法阳性率均为100％。检测正常人血清50份,两法阴性率均为100％。检测华支睾吸虫病人血清10份,两法均未出现交叉反应。检测肺吸虫病人血清10份,Rm Dot-IGSS未出现交叉反应,Dot-IGSS有1例出现交叉反应。     

检测丝虫病人血清中循环抗原的价值

分别从印度萨瓦格拉姆班氏丝虫病流行区及昌迪加尔非流行区收集人体血标本,127份血清分为正常人(流行区和非流行区)、丝虫病(微丝蚴血症及临床丝虫病)及非丝虫病流行区肠道蠕虫感染(如钩、蛔虫感染)5组,按Kaliraj法制备兔抗微丝蚴血清(RAS),从丝虫性象皮肿和鞘膜积液病人收集血清,取50ml血以35%饱和硫酸铵沉淀免疫球蛋白(Ig),沉淀部分置3ml磷酸钠缓冲液(pH7.2,0.05M)透析过夜,获得人体丝虫血清免疫球蛋白(FSI),用DEAE-Sephadex-A50层析FSI(9ml磷酸钠缓冲液含蛋白810     

环介导同温DNA扩增技术快速检测弓形虫DNA的初步研究

目的 建立一种快速的弓形虫活动性感染检测方法. 方法 根据刚地弓形虫特异性基因B1的基因序列设计一套用于环介导同温DNA扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的特异性引物,用DNA聚合酶Bst在65 ℃水浴箱中对含有弓形虫基因组DNA的样本进行LAMP扩增,用荧光染料SYBRⅡ染色及琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色观察结果.同时进行常规PCR对照试验. 结果 琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色发现LAMP扩增产物为大小不等的DNA片段,在扩增产物中加入荧光素SYBRⅡ顔色由紫红色变成绿色荧光,而阴性对照管仍保持紫红色.环介导同温DNA扩增的敏感性为103个弓形虫/ml, 高于常规PCR. 结论 LAMP扩增检测弓形虫DNA的方法已经建立,为发展弓形虫病快速诊断方法奠定了良好的基础.     

~3H乙肝病毒DNA探针在分子杂交检测血清中乙肝病毒DNA的临床应用

自从1983年本所建立斑点分子杂交方法检测血清乙肝病毒DNA以来,(以下简称斑试)有数篇报导应用~(32)P乙肝病毒DNA探针进行临床检测。说明斑试敏感、特异,并证实了乙肝病毒DNA与HBeAg、Dane颗粒、DNAP之间有良好的相关性,一些资料表明将~(32)P乙肝病毒DNA探针应用SouthernBlot法检测肝组织内乙肝病毒DNA状态。~3H乙肝病毒DNA探针过去多用于肝组织内病毒的原位杂交。我们应用缺刻转移标记制     

快速热启动PCR与巢式PCR检测乙肝病毒HBV DNA的比较实验

本文以热启动 PCR 方法用国产石蜡代替进口石蜡与巢式 PCR 比较,共同测定20份血清标本,所得实验结果基本一致。巢式 PCR 在模板的提取过程中操作复杂,费时费力,实验人员不易掌握,而热启动 PCR 用一种廉价的裂解液与待测血清混合,一步PCR 在三个小时内即可出实验结果。此方法灵敏度高,特异性好,简便快速,减少了实验步骤与污染机会,适合临床推广应用。     

聚合酶链反应检测溃疡病胃粘膜组织中乙肝病毒DNA的临床研究

本文采用聚合酶链反应(PCR)技术,用血清酶联免疫吸附试验(ELISA)对HBsAg、HBeAg、HBcab阳性的21例消化性溃疡病患者胃粘膜组织进行HBVDNA检查,并对乙肝病毒在溃疡病中的作用机理进行了探讨。观察到乙肝病毒阳性的溃疡病患者治愈率低于乙肝病毒阴性的溃疡病患者(P<0.01)。乙肝病毒阳性的溃疡病患者胃粘膜组织中有HBVDNA存在,用胃酸泵抑制剂治疗溃疡病愈合慢,易复发。结果提示对此类溃疡病患者,是否需用抑制乙肝病毒的药物和提高机体免疫功能的药物。     

奶牛感染乙肝病毒的初步检测报告

<正> 几年来,本区从事牛奶生产人员在健康体检中检出HBsAg的阳性率(15.8％)高于其它职业人员(8.33％)。这种现象是否与接触奶牛和牛乳有关,为此对武汉市牛奶公司某牛奶场108头奶牛和81份鲜乳进行了HBsAg、HBsAb、HBeAg(简称三项检测)的检测,现将初步结果报告如下。     

微小隐孢子虫卵囊DNA提取及用于PCR检测

目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法 微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因序列(L16996)设计一对寡核苷酸引物,分别对3种方法制备模板进行PCR扩增分析。Chelex-100提取的DNA也用于观察PCR检测的敏感性。结果3种方法制备的微小隐孢子虫卵囊模板用于PCR检测均获得1条446 bp条带,Chelex-100提取的DNA用于PCR检测的敏感性至少达0.5个卵囊。结论3种方法提取的微小隐孢子虫卵囊DNA均可用于PCR检测,Chelex-100法是一种高效而快速的微量提取DNA方法,适用于对隐孢子虫DNA的检测。     

磁性分离法快速提取HCVmRNA用于RT—PCR检测

以异硫氰酸胍裂解血清，释放病毒核酸（ＲＮＡ），加生物素化的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）寡核苷酸探针与ＨＣＶｍＲＮＡ特异结合，用亲和素包被的磁珠与其连接，经洗涤，即获纯化的ＨＣＶｍＲＮＡ模板，作逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）。磁性分离法提取模板用于ＰＣＲ检测肝病患者血清３０例，ＨＣＶＲＮＡ阳性２１例（７０％）。该法与常规有机溶剂抽提法相比，操作简便，仅需１小时，且更为稳定，可适用于临床标本的检测应用。     

提取布鲁氏菌质粒DNA的初步探讨

为了探讨布鲁氏菌是否携带质粒,我们于1987～1989年开展了本项实验研究,现将实验结果报告如下。 一、材料和方法 1.菌株:所用菌株有国际标准强毒菌株544A、16M、1330S和弱毒菌苗菌株M_5、S_2、104M。同时有对照质粒株E.coli PBR322和PVB110株。本次用10株布鲁氏菌和2株对照质粒株采用两种不同方法各提取     

DNA探针检测间日疟原虫的初步研究

由于间日疟原虫目前尚不能体外培养,抗原制备困难,使间日疟的流行病学调查及诊断受到限制。本文报道以间日疟原虫红内期基因组DNA库0.24kb DNA片段为探针,用~(32)P标记后进行点杂交试验检测间日疟原虫的初步结果。 材料与方法 含间日疟原虫红内期基因组DNA库亚克隆VPL101/5 0.24kb DNA片段的重组质粒pUC19由澳大利亚昆士兰医学研究所Kidson赠送。按文献方法进行感受态细胞JM 109的制备、重组质     

用合成的DNA探针检测人血中的间日疟原虫

以恶性疟的重复DNA顺序片断为探针检测恶性疟原虫已有文献报道,但尚无间日疟DNA探针的报告。最近Arnot等报告了间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)的编码为19个碱基对的9肽重复片段。本文报告在此基础上合成寡核苷酸序列作为间日疟DNA探针,检测病人血中间日疟原虫的效果。为了比较此探针的特异性和交叉反应性,还合     

光生物素标记DNA探针检测疟原虫DNA的初步研究

使用放射性同位素标记的DNA探针检测靶DNA的敏感度高,故目前多采用[~32P]作为标记物.但因~32P的半衰期甚短,而且需要特殊条件处理放射性物质,在普通实验室内难以采用.本研究使用光生物素(PH-OTOPROBE~TM Biotin)标记DNA探针,以点杂交试验检测疟原虫DNA. 材料和方法:使用美国VECTOR Laboratories公司生产的光可激活生物素标记DNA,以制备生物素化DNA探针。获自恶性疟原虫(Honduras 1株)红内期cDNA库的重组质粒DNA(克隆7,用EcoR1将其切成     

应用ELISA检测旋毛虫病人血清中特异性IgG、IgM和IgE

<正> 前文在报道用间接免疫过氧化物酶试验(HP)诊断旋毛虫病时曾提到,用HP与ELISA同时对比检测(IgG),二者有着极为近似的结果和相互平行的关系。用ELISA检测旋毛虫病人特异性IgG、IgM和IgE等国外虽有报道,但国内尚研究不多,为获得此方面某些资料,我们应用辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG、IgM和IgE,对39例现症旋毛虫病患     

磁性分离法快速提取HCV mRNA用于RT－PCR检测

以异硫氰酸胍裂解血清，释放病毒核酸（ＲＮＡ），加生物素化的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）寡核苷酸探针与ＨＣＶｍＲＮＡ特异结合，用亲和素包被的磁珠与其连接，经洗涤，即获纯化的ＨＣＶｍＲＮＡ模板，作逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）。磁性分离法提取模板用于ＰＣＲ检测肝病患者血清３０例，ＨＣＶＲＮＡ阳性２１例（７０％）。该法与常规有机溶剂抽提法相比，操作简便，仅需１小时，且更为稳定，可适用于临床标本的检测应用。     

快速DNA提取法在检测卡氏肺孢子虫PCR中的应用

为寻求一种适用于临床诊断的PCR方法。方法用快速PCR模板DNA制备方法提取实验大鼠肺组织,支气管肿泡灌洗液和血液中的卡氏肺孢子虫DNA,进行PCR扩增,并与传统的DNA提取法进行对比。结果两种方法收到一致的理想结果。结论快速法提取的DNA适用于卡氏肺孢子虫的PCR检测。将此法试用于临床病例检测,也收到如期结果,初步显示其推广应用前景。     

乙肝患者外周血单个核细胞中乙肝病毒复制中间体RNA与乙肝病毒DNA相关性的研究

采用逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）技术检测乙肝患者外周血单个核细胞（PBMCs）乙肝病毒复制中间体RNA（HBV RNA）,60例乙肝患者5例PBMCs中HBV RNA阳性,26例PBMCs中HBV DNA阳性,27例血清HBVDNA阳性;PBMCs HBVDNA 阳性患者中有4例PBMCs HBV RNA阳性,血清HBV DNA阳性患者中有3例PBMCs HBVRNA阳性;17例血清HBeAg阳性患者中有4例PBMCs HBV RNA阳性。血清HBeAg、HBV DNA及PBMCs中HBV DNA阴性患者,其PBMCs HBV RNA仍可能阳性,其PBMCs可成为乙肝患者肝病复发和传播的来源。     

血吸虫病人血清中乳酸脱氢酶及其同功酶的测定

乳酸脱氢酶(LDH)是一种糖酵解酶,广泛存在于人体及动物的各种组织内,以心、肾、骨骼肌最为丰富,肝、脾、胰及肺组织内次之.而LDH同功酶是一组能催化同一反应,而结构不尽相同的酶类.该酶具有相对的器官特异性,对器官的损伤定位和疾病鉴别诊断,比测定LDH总活性更有价值.为了解日本血吸虫病患者血清中此酶的变化,我们在测定血吸虫病人血清LDH总活性的同时,对LDH同功酶进行了测定,并与健康人作了对照观察.