高血糖对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝纤维化形成的影响及机制探讨

目的探讨高血糖对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝纤维化形成的影响及机制。方法将60只SD大鼠随机数字法分成正常对照组、高血糖模型组、高血糖伴NASH组、氨基胍组和虎杖组,分别检测各组大鼠血糖值,病理学变化(HE染色),纤维化程度,肝组织基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和晚期糖基化终产物(AGEs)含量的变化及各组大鼠α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白(desmin)的表达评分。结果 (1)血糖:氨基胍组和虎杖组大鼠血糖[(14.20±11.74)/(5.25±0.92)mmol/L]低于高血糖组[(22.20±1.70)mmol/L]和NASH组[(22.21±5.49)mmol/L](均P<0.05);(2)病理学改变:与正常对照组比较,高血糖组和NASH组肝组织出现细胞变性和纤维化改变。与NASH组比较,虎杖组肝细胞结构形态较正常,只有较轻度水肿、脂肪变性等炎性改变,未见明显纤维化;α-SMA[(4.92±1.69)分]、Desmin[(4.75±1.75)分]表达及TIMP-1[(3473.76±372.06)pg/m L]、TGF-β1[(125.26±28.60)ng/m L]、AGEs[(75.86±22.36)ng/m L]含量也显著降低(均P<0.01)。氨基胍组肝组织脂肪变性、水样变性、纤维化程度有所减轻,α-SMA表达增高(9.00±2.04)分(P<0.05),TIMP-1[(3543.67±377.05)pg/m L]、AGEs[(75.86±22.35)ng/m L]含量降低(P均<0.01),同时TGF-β1表达减低[(145.31±43.14)ng/m L],但差异无统计学意义(P>0.05)。结论高血糖可促进NASH大鼠肝纤维化形成,降低血糖和减少AGEs形成可减轻或抑制肝纤维化的发生;作用机制之一是激活肝星状细胞。虎杖较氨基胍改善NASH大鼠肝纤维化的作用更明显。     

外源性核酸对肝纤维化大鼠血浆中去甲肾上腺素和多巴胺的影响

目的 探讨外源性核酸对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型血浆中去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)的影响及其抗肝纤维化的可能机制.方法 将30只Wistar大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型组、外源性核酸处理组.苏木精-伊红染色,光镜下观察肝组织病理学改变,Van Gieson(VG)染色分析肝纤维化程度,同时用高压液相色谱-电化学(HPLC-ECD)法检测大鼠血浆中NE和DA水平.结果 核酸组大鼠肝组织病理学改变较模型组有明显改善.模型组大鼠血浆DA含量[(0.39±0.19) ng/ml]显著低于正常组[(0.92±0.53) ng/ml](P<0.05),核酸组大鼠血浆DA的含量[(0.87±0.55) ng/ml]高于模型组(P<0.05).大鼠血浆NE含量模型组[(1.13±0.77) ng/ml]和核酸组[(1.38±0.71) ng/ml]低于正常组[(4.38±2.77) ng/ml] (P<0.05),核酸组与模型组NE的含量无明显差异(P>0.05).结论 外源性核酸对慢性肝损伤有一定的保护作用,可显著改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化损伤.其可能的作用机制之一是通过调节肝纤维化大鼠血浆中NE的前体物质DA的含量,增加了交感神经的活性而起到抗纤维化的作用.     

肝纤维化大鼠肝组织Na+/Ca2+泵mRNA表达

目的: 了解肝纤维化大鼠肝组织Na /Ca2 泵(Na /Ca2 exchanger,NCX) mRNA表达状况,探讨其与肝纤维化程度的关系及意义.方法: CCl4 sc法诱导大鼠肝纤维化,观察肝组织NCX及α1(Ⅰ) mRNA表达水平,检测血清HA,CⅣ,PCⅢ,血清肝纤维化相关酶 (β-NAG,MAO,ALD)、肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量及肝组织病理学变化,分析其相关性与临床意义.结果: 20只正常大鼠肝组织NCX mRNA表达除1只弱阳性外,其余均为阴性,半定量积分仅为(0.10±0.00);而30只模型组大鼠全部呈阳性,半定量积分显著增加(P<0.05).与正常组比较,模型组大鼠血清HA[(455.79±113.55) vs (112.41±45.62) μg/L],CⅣ,[(159.62±29.64) vs (35.69±9.68) μg/L],PCⅢ [(265.54±98.21) vs (89.99±10.85) μg/L]明显增高(均为P<0.01);β-NAG,MAO,ALD活性显著增加(分别增加2.20,2.14,1.57倍,P<0.01),模型组大鼠NCX mRNA表达与α1(Ⅰ) mRNA表达水平、肝组织Hyp含量、血清HA,CⅣ,PCⅢ水平、肝组织纤维化积分均呈正相关,相关系数r分别为 0.48, 0.64, 0.52, 0.49, 0.56, 0.60(均为P<0.05).结论: 肝纤维化大鼠肝组织NCX mRNA表达明显增强,与胶原代谢水平及肝脏组织病理学变化呈正相关,有望作为判断肝纤维化的有用指标,值得进一步研究.     

一贯煎对CCl4诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:研究一贯煎对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响。方法:用50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)大鼠腹腔注射造模,每周2次,共9w。于造模3w和6w末,随机抽取正常及模型大鼠处死作动态观察。从第7w始模型大鼠随机分为模型对照组和药物干预组,药物干预组给予一贯煎灌胃,共计3w。9w末检测肝组织Fas、Bax、Bcl-xL、细胞色素(Cyt)C、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡情况。结果:①与正常组大鼠比较,3w、6w及9w时模型大鼠肝组织Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。与9w模型组比较,一贯煎组Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01),而Cyt C和Bcl-xl蛋白表达在各组之间无显著差异(P>0.05)。②与正常组比较,造模3w时肝组织Caspase-3蛋白表达达到高峰(P<0.01),肝细胞凋亡数量亦达到高峰;6w、9w模型组大鼠Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡较3w有降低的趋势。与9w模型组大鼠比较,一贯煎组大鼠Caspase-3蛋白表达显著降低,肝细胞凋亡显著减少。结论:一贯煎抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的作用机制可能与干预Fas和内质网凋亡通路有关。     

黄芪注射液对大鼠缺血再灌注损伤的预防作用

【目的】探讨黄芪注射液对大鼠缺血再灌注损伤的预防作用。【方法】采用线栓栓塞法制备大鼠中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,观察各组大鼠神经功能缺损情况并评分,测定脑组织含水量、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)含量,血清谷氨酸(glutamate,Glu)、天冬氨酸(aspartate,Asp)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)含量。【结果】黄芪注射液组神经功能缺损评分[(1.78±0.46)分]和脑组织含水量[(80.4±1.8)%]较模型组神经功能缺损评分[(2.91±0.62)分]和脑组织含水量[(87.6±2.0)%]显著降低(P<0.05);Glu[(61.38±5.28)μg/ml],Asp[(34.86±3.98)μg/ml]和MDA[(7.36±1.29)nmol/mg]含量较模型组Glu[(82.46±7.71)μg/ml],Asp[(48.20±5.01)μg/ml]和MDA[(10.12±1.68)nmol/mg]含量显著降低(P<0.05);SOD含量[(68.37±2.51)U/mg]较模型组SOD含量[(59.15±2.80)U/mg]显著升高(P<0.05)。【结论】黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤具有良好的预防作用。     

大黄素维持肝硬化大鼠高动力循环状态下肠屏障完整性实验研究

目的观察大黄素对肝硬化大鼠高动力循环状态下肠屏障完整性的维持作用。方法 SD雄性大鼠25只,随机分为对照组5只、肝硬化模型组10只、大黄素干预组10只,模型组与干预组予500m L/L四氯化碳(3m L/100g)皮下注射复制肝硬化大鼠模型,对照组大鼠给予生理盐水(3m L/100g)皮下注射,均为8周。干预组制模第15天起予大黄素(5mg/m L,5m L/kg)灌胃,对照组和模型组每日给予相当体积的生理盐水灌胃,均1天1次。8周后处死大鼠,行墨汁推进试验测定肠道传输功能,测定门脉压力,血清生化指标测定,取末端回肠组织及肝脏组织观察组织病理学改变,肠黏膜TUNEL凋亡检测。结果 (1)大鼠小肠黏膜损伤:模型组>干预组>对照组(P<0.05)。(2)门脉压力:模型组(13.73±1.81)mm Hg,较对照组(5.64±0.88)mm Hg显著升高(P<0.05),大鼠明显处于高循环状态;干预组门脉压力(10.25±1.47)mm Hg,较模型组明显降低(P<0.05)。(3)血清生化指标(ALT、AST、TB、ALP)水平:模型组[(594.22±317.82)U/L,(1008.33±778.70)U/L,(6.00±5.29)μmol/L,(802.78±396.94)U/L]较对照组[(60.20±21.30)U/L,(149.80±43.03)U/L,(1.00±0.44)μmol/L,(196.20±31.29)U/L]显著升高(P<0.05);干预组[(292.20±140.12)U/L,(350.40±173.35)U/L,(2.49±1.10)μmol/L,(552.20±303.37)U/L]较模型组明显降低(P<0.05);ALB模型组(16.29±1.26)g/L较对照组(23.42±1.56)g/L明显下降(P<0.05),干预组(18.89±1.02)g/L较模型组明显上升(P<0.05)。(4)肠道黑染百分比:模型组(68.05±2.09)%,较对照组(81.68±3.15)%明显减少(P<0.05);干预组(74.50±4.28)%,较模型组明显增加(P<0.05)。(5)肠黏膜凋亡小体:模型组明显多于对照组,而干预组大黄素干预后的小肠上皮细胞凋亡较模型组明显下降。结论大黄素对肝硬化大鼠高动力循环状态下肠屏障完整性有较好的维持作用。     

孕期饮用酒精对子代大鼠学习记忆及海马H2S/CBS系统的影响

目的 研究孕期饮用酒精对子代大鼠学习记忆及海马硫化氢(H2S)的影响.方法 建立大鼠孕期饮用酒精模型,子代成年后,检测学习记忆、海马组织H2S含量、胱硫醚β-合酶(cystathionine-betasynthase,CBS)活性,免疫组化检测海马区CBS蛋白表达.结果 学习记忆测试结果显示孕期饮用酒精组子鼠学习记忆成绩[(43.00±15.33)次]比正常对照组和饮酒对照组明显下降[(25.13±12.35)次和(26.12±11.95)次,P＜0.05)];孕期饮用酒精组子鼠海马组织H2S含量[(30.32±5.84) nmol/g]较正常对照组[ (52.51±7.85) nmol/g]和饮酒对照组[(49.93±4.29) nmol/g]明显下降(P＜0.01);孕期饮用酒精组子鼠海马组织CBS活性[(55.13±4.45) nmol/g]较正常对照组[(71.06±5.58) nmol/g]和饮酒对照组[ (69.96±6.13) nmol/g]明显下降(P＜0.01);孕期饮用酒精组子鼠海马区CBS蛋白表达较正常对照组和饮酒对照组明显下降.结论 孕期饮用酒精对子代大鼠的神经损伤可能与H2S/CBS系统的下调有关.     

海马神经元凋亡通路在氯胺酮抗抑郁中的变化

目的全身麻醉药氯胺酮具有快速有效抗抑郁作用,但其具体机制尚不完全清楚。文中观察大鼠海马神经元凋亡通路在氯胺酮抗抑郁中的变化。方法健康成年雄性SD大鼠48只,随机数字表法分为3组(n=16):对照组、不可预知应激组及氯胺酮组。对照组不予处理,不可预知应激组及氯胺酮组采用慢性不可预知应激建立抑郁模型。对照组、不可预知应激组经腹腔分别注射等渗盐水1 m L,氯胺酮组注射氯胺酮(10 mg/kg)。给药后1 h,每组随机取8只大鼠行强迫游泳实验和糖水消耗实验观察其行为学变化;其余8只采用Western blot法检测海马Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达水平。结果氯胺酮组强迫游泳时间[(115.83±9.17)s]较不可预知应激组[(165.33±4.59)s]明显缩短(P<0.01),与对照组[(110.50±12.28)s]差异无统计学意义(P>0.05);不可预知应激组较对照组强迫游泳时间明显延长(P<0.01)。氯胺酮组糖水消耗比例[(80±6)%]较不可预知应激组[(58±5)%]明显增加(P<0.01),与对照组[(86±10)%]差异无统计学意义(P>0.05);不可预知应激组较对照组糖水消耗比例明显减少(P<0.05)。氯胺酮组Bcl-2表达水平[(157±21)%]较不可预知应激组[(73±3)%]明显上升(P<0.05),Bax表达水平[(114±6)%]、Caspase-3表达水平[(78±13)%]较不可预知应激组[(175±4)%、(165±6)%)]明显降低(P<0.01);不可预知应激组Bcl-2表达水平较对照组明显减少(P<0.05),Bax、Caspase-3表达水平明显增加(P<0.05)。结论氯胺酮可能通过抑制大鼠海马神经元凋亡通路参与其抗抑郁作用。     

血清转化生长因子β对大鼠肝纤维化影响的研究

目的观察转化生长因子β(TGF-β)对肝纤维化模型SD大鼠肝功能的影响。方法将60只SD大鼠随机平均分为3组:正常对照组不做任何处理;生理盐水对照组腹腔注射生理盐水;肝纤维化模型组腹腔注射10%四氯化碳(CCl4)建立肝纤维化模型。造模6周后采集血清全自动生化仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测TGF-β的含量,实时荧光定量PCR法检测肝纤维化相关基因血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)和结缔组织生长因子(CTGF)表达情况。结果生理盐水对照组ALT、AST和TGF-β含量与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05);肝纤维化模型大鼠血清ALT、AST较正常对照组及生理盐水对照组大鼠明显增高(P<0.01),TGF-β的含量明显增高(P<0.05),肝纤维化模型组肝纤维化相关基因PDGF-BB、CTGF表达明显,而生理盐水组与对照组均无表达。结论血清中TGF-β与大鼠肝纤维化密切相关,在大鼠肝纤维化模型中明显增高,同时肝纤维化组织中PDGF-BB、CTGF表达也增高。     

HG颗粒对肝纤维化大鼠GSH、MDA及TNF-α含量的影响

目的:研究HG颗粒对CCl4所致肝纤维化大鼠肝脏谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响.方法:80只SD大鼠随机分为6组,除正常对照组10只外,其余各组大鼠皮下注射CCl4,同时给予高脂饲料和体积分数为20%乙醇喂养6周,建立肝纤维化大鼠模型,存活动物随机分为5组,正常对照组(蒸馏水1 mL/kg),模型对照组(蒸馏水1 mL/kg),HG颗粒高、中、低3种剂量组(6、3、1.5 g/kg HG),复方鳖甲软肝片组(1g/kg复方鳖甲软肝片).6组动物1次/d灌胃,连续4周.末次给药24 h后处死动物,观察各组大鼠肝脏GSH、MDA及血清TNF-α含量的变化.结果:模型对照组大鼠肝脏GSH、MDA及血清TNF-α含量[(5.01±1.92)μg/g,(230.4±29.47)μg/g,(2.71±0.62)nmol/L]与正常对照组((9.65±2.31)μg/g,(101.7±13.79)μg/g,(0.72±0.15)nmol/L]比较出现明显异常,HG颗粒可显著改善肝纤维化大鼠各观察指标的异常.结论:HG颗粒对CCl4致的大鼠肝纤维化有良好的治疗作用.     

人脐带间充质干细胞移植对肝硬化大鼠TGF-β1和HGF表达的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)治疗肝硬化大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)和肝细胞生长因子(HGF)的表达及机制。方法 40%CCl4大豆油腹部皮下注射制备肝硬化大鼠模型,将肝硬化大鼠随机分成模型组、生理盐水组(NS组)、移植组,每组8只,另设8只作为对照组。移植前、移植后3周分别用Western blot和ELISA法检测大鼠肝组织和血清TGF-β1和HGF水平。同时于光镜下观察肝纤维化程度,计算肝纤维化组织学半定量计分。结果模型组较对照组大鼠肝组织和血清TGF-β1明显升高,HGF明显降低(P<0.05);移植组较模型组TGF-β1明显降低,HGF明显升高(P<0.05)。光镜下,模型组肝组织破坏,假小叶形成;移植组,肝纤维化明显改善。模型组大鼠肝纤维化组织学半定量计分较对照组明显增高(P<0.05);移植组较模型组计分明显降低(P<0.05)。结论 HUC-MSCs移植后可通过下调TGF-β1及上调HGF的表达,改善受损的肝组织。     

咯利普兰对肺纤维化大鼠内皮素-1水平的影响

目的:观察喀利普兰对肺纤维化大鼠内皮素-1(ET-1)含量的影响。方法:48只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和喀利普兰组,对照组腹腔注射体积分数为5%乙醇的生理盐水,后2组制备模型前一天腹腔分别注射体积分数为5%乙醇的生理盐水(0.5mL)和喀利普兰溶液(0.25mg·kg-1·d-1);分别于第7、28天收集标本,测定肺匀浆ET-1和羟脯氨酸(HYP)含量。结果:造模后第7、28天,3组大鼠肺匀浆中ET-1含量差异均有统计学意义(F=9.749,8.771,P<0.05)。模型组肺匀浆ET-1含量[(98.82±15.25)mg/g,72.88±22.59)mg/g]均高于对照组[(65.72±17.67)mg/g,(36.00±15.49)mg/g,P<0.05)];而喀利普兰组[(78.03±12.02)mg/g,(49.05±14.38)mg/g]低于模型组(P<0.05)。第28天,喀利普兰组肺HYP含量[(1.316±0.225)mg/g]低于模型组[(2.399±0.152)mg/g)](P<0.05)。结论:喀利普兰对平阳霉素诱发的肺纤维化有阻断作用,可能是通过拮抗ET-1而实现。     

磷酸肌酸钠对缺氧幼鼠脑组织中钙调蛋白、一氧化氮水平的影响

目的:研究磷酸肌酸钠(PCr)对缺氧幼鼠脑组织中钙调蛋白(CaM)及一氧化氮(NO)水平的影响.方法:将75只SD幼鼠随机分为磷酸肌酸钠治疗组(PCr组)、模型组和正常对照组3组,PCr组和模型组制成缺氧模型,并于缺氧前0.5 h、缺氧后即刻、24 h和48 h分别腹腔注射PCr和等量生理盐水,正常对照组不作缺氧处理.各组大鼠于缺氧后6 h观察脑组织的病理改变,于48 h检测脑组织中CaM及NO含量的变化.结果:缺氧后6 h,PCr组较模型组神经细胞破坏减少,水肿、坏死明显减轻.3组幼鼠脑组织中CaM和NO含量差异均有统计学意义(F分别为27.425和22.137,P<0.001).PCr组的CaM含量[(41.19±1.13) ng/L]较正常对照组[(39.56±0.86) ng/L]稍高(P<0.05),但较模型组[(42.04±0.76) ng/L]降低(P<0.05);PCr组的NO含量[(0.73±0.13) μmol/g]较正常对照组[(0.55±0.07) μmol/g]稍高(P<0.05),但较模型组[(0.86±0.17) μmol/g]降低(P<0.05).结论:PCr可以通过降低脑组织中CaM、NO的含量而发挥对缺氧所致的脑损伤的神经保护作用.     

小柴胡汤对实验性肝纤维化模型大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达干预研究

目的:研究肝纤维化模型大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化情况,探讨不同剂量小柴胡汤对实验性模型大鼠肝纤维化程度的影响。方法:肉眼观察、常规HE染色法和免疫组化染色法观察小柴胡汤对实验性肝纤维化模型大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响。结果:6、12周肝纤维化模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与正常对照组比较显著增加(P<0.01);12周肝纤维化模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量较6周肝纤维化模型组显著增加(P<0.05)。小柴胡汤治疗组与同期肝纤维化模型组相比,肝纤维化程度显著减轻(P<0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显减少(P<0.05)。不同剂量小柴胡汤组间Ⅰ、Ⅲ型胶原含量比较无显著性差异(P>0.05)。结论:肝纤维化发生、发展过程中,Ⅰ、Ⅲ型胶原含量显著增加,小柴胡汤能减轻模型大鼠肝纤维化程度,下调Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。     

低频超声治疗对SD大鼠颊囊黏膜溃疡愈合的影响

目的探讨低频超声对大鼠实验性口腔黏膜溃疡愈合时间及溃疡组织中一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量的影响。方法健康Sprague-Dawley(SD)大鼠36只,雌雄各半,完全随机分为6组(n=6),1组设为正常对照组,其余5组利用氧自由基诱导法+物理烧伤法建立SD大鼠颊囊黏膜口腔溃疡动物模型,分别为溃疡组、药物组和低频超声组(1.1、1.58、2.06 W)。末次治疗24 h后观察溃疡愈合时间,并采用分光光度计测定大鼠口腔颊囊黏膜组织中NO、NOS含量。结果大鼠溃疡病理特点与人类口腔溃疡病理特点基本相似。低频超声组较溃疡组及药物组的溃疡愈合时间短。NO活性测定结果显示,低频超声组1.1、1.58、2.06 W[分别为(9.86±1.69)、(9.42±1.34)、(8.51±1.26)μmol/g]较溃疡组[(23.85±4.81)μmol/g]显著降低(P<0.05),与正常对照组(10.88±1.68)μmol/g比较无统计学差异(P>0.05);NOS活性检测结果同样表明,低频超声组1.1、1.58、2.06 W[分别为(3.89±0.72)、(4.35±0.53)、(4.74±0.81)μmol/g]较溃疡组[(6.48±0.77)μmol/g]显著降低(P<0.05),与正常对照组(3.83±0.99)μmol/g比较无统计学差异(P>0.05)。结论适合剂量参数的脉冲低频超声能有效降低溃疡组织中的NO、NOS活性含量,对溃疡的愈合有一定的促进作用。     

扶正化瘀胶囊对气虚血瘀型肝纤维化模型大鼠细胞自噬基因LC3Ⅱ和p62的干预作用

目的探讨扶正化瘀胶囊对气虚血瘀肝纤维化模型大鼠细胞自噬基因LC3Ⅱ和p62mRNA、蛋白表达水平的干预作用。方法 40只SD大鼠根据随机数字表法分正常组、肝纤维化组、气虚血瘀肝纤维化组和扶正化瘀治疗组,每组10只。肝纤维化组、气虚血瘀肝纤维化组、扶正化瘀治疗组大鼠采用四氯化碳(CCl_4)与橄榄油按4:6比例配40%油剂,按0.3mL/100g剂量,皮下注射制备模型,气虚血瘀型肝纤维化组大鼠在肝纤维化模型制备的基础上加用游泳疲劳试验制备气虚血瘀型肝纤维化模型。正常组、肝纤维化组、肝纤维化气虚血瘀组大鼠给予生理盐水2mL灌胃,1天1次,连续4周。扶正化瘀治疗组大鼠给予扶正化瘀胶囊混悬液,按0.5g/kg体质量灌胃,1天1次,连续4周。实验结束后处死大鼠摘取肝脏,测定肝重、肝湿重,天狼星红染色后评价肝脏纤维化程度,采用qPCR、Western blot测定肝组织LC3Ⅱ、p62 mRNA和蛋白表达水平。结果扶正化瘀治疗组大鼠体质量(375.80±24.36)g、肝湿重(11.31±1.13)g,高于气虚血瘀肝纤维化组(356.10±20.45)g、(10.34±1.13)g,P0.05;天狼星红染色显示,气虚血瘀肝纤维化组大鼠肝纤维化程度最重,扶正化瘀治疗后显著改善;气虚血瘀肝纤维化组Ishak评分(5.80±0.80)分最高,扶正化瘀治疗组(2.70±0.90)分显著下降(P0.05)。气虚血瘀肝纤维化组LC3ⅡmRNA(1.44±0.01)及蛋白(3.01±0.57)表达最高,扶正化瘀治疗组LC3ⅡmRNA(1.20±0.01)、蛋白(2.04±0.30)均显著下降(P0.05);气虚血瘀肝纤维化组p62 mRNA(0.95±0.05)、蛋白(0.19±0.12)表达最低,扶正化瘀治疗组p62 mRNA(1.12±0.01)、蛋白(0.67±0.32)显著升高(P0.05)。结论气虚血瘀型肝纤维化模型大鼠较单纯肝纤维化模型大鼠LC3Ⅱ表达量明显增加,自噬底物p62消耗明显,扶正化瘀胶囊可以显著抑制LC3Ⅱ/p62表达。     

亚低温对脓毒症大鼠肝组织能量代谢影响的研究

目的通过测定亚低温情况下脓毒症(sepsis)大鼠肝组织腺苷酸及乳酸含量改变,并结合肝细胞超微结构的变化,初步探讨亚低温能否减轻脓毒症大鼠组织损伤的程度。方法24只Wistar大鼠均分为正常对照组(NC组)、内毒素组(LPS组)、亚低温组(MHT组),应用高效液相色谱法及生化法分别测定各组肝组织腺嘌呤核苷酸及乳酸水平,并在透射电镜下观察肝细胞超微结构的变化。结果内毒素组大鼠肝组织腺苷酸水平[ATP(4.093±0.424),ADP(1.331±0.136),AMP(1.331±0.312)μmol/g·wet]和亚低温组大鼠肝组织腺苷酸水平[ATP(4.519±0.028),ADP(1.483±0.108),AMP(1.544±0.301)μmol/g·wet]均较正常对照组腺苷酸水平[ATP4.990±0.455,ADP1.632±0.181,AMP1.737±0.407μmol/g·wet]降低,尤以内毒素组明显。亚低温组肝组织腺苷酸水平较内毒素组明显升高;亚低温组肝乳酸含量为[(1.424±0.213)mmol/g·prot,明显低于内毒素组(1.676±0.267)mmol/g·prot,P<0.05],而与对照组比较差异无显著性[(1.379±0.314)mmol/g·prot,P>0.05];电镜下可见亚低温组肝细胞超微结构损伤明显轻于内毒素组。结论亚低温可减缓脓毒症大鼠肝组织能量的消耗,减轻肝组织损伤,可考虑作为防治脓毒症的一种新方法。     

消幻汤对分裂症模型自主活动、空间学习记忆及纹状体内五羟色胺水平的影响

目的 通过研究消幻汤对精神分裂症模型自主活动、空间学习记忆及纹状体内五羟色胺水平的影响,探讨消幻汤治疗精神分裂症的可能机制.方法 雌性清洁级SD大鼠,随机分为:正常组,模型组,消幻汤组,利培酮组.按照0.1 mg/kg给予地卓西平马来酸盐(MK-801)连续腹腔注射两周,刻板行为、旷场实验及Morris水迷宫实验评价大鼠行为的改变.消幻汤组给予消幻汤12g/4ml/kg,利培酮组给予利培酮0.2mg/kg之后,余两组灌服等量生理盐水.4周后观察大鼠行为改变,并使用库仑阵列电化学高效液相色谱测定纹状体内神经递质含量的变化.结果 模型组的大鼠刻板行为评分[(2.54±0.52)分,(2.42±0.51)分,(2.30±0.48)分],高于正常组评分[(1.08±0.28)分],符合模型制备成功标准.经药物干预后,消幻汤组、利培酮组大鼠自主活动[(780.57±248.99)分,(819.76±267.21)分]低于模型组[(1204.15±344.25)分],差异有显著性(P＜0.05);消幻汤组逃避潜伏期[(30.25±13.67)s]较模型组[(44.72±19.88)s]缩短,穿台次数[(5.67±1.44)次]多于模型组[(3.08±1.44)次],均差异有显著性(P＜0.05).消幻汤组及利培酮组纹状体内五羟色胺(5TH)含量[(0.08±0.26)μg/g,(0.11±0.07)μg/g]较模型组[(0.25±0.14)μg/g]降低(P＜0.05),消幻汤组五羟吲哚乙酸(5HIAA)含量[(0.28±0.36)μg/g]较模型组[(0.27±0.09)μg/g]差异无显著性(P＞0.05).结论 消幻汤改善了精神分裂症模型大鼠刻板行为、自主活动和学习记忆损伤,其机制可能与参与了纹状体内的五羟色胺含量的调节有关.     

β-血小板衍生生长因子信号通路在吗啡耐受机制中的作用

目的评价细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和CAMP反应元件结合蛋白(cyclic AMP response element binding protein,CREB)信号通路在β-血小板衍生生长因子(beta platelet-derived growth factor,PDGF)受体介导的大鼠吗啡耐受中的作用。方法 36只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组(n=6):对照组(等渗盐水20μL)、吗啡组(吗啡15μg)、吗啡+伊马替尼组(吗啡15μg+伊马替尼10μg)、吗啡+PDGF-BB组(吗啡15μg+PDGF-BB 10ng)、伊马替尼组(伊马替尼10μg)、PDGF-BB组(PDGF-BB 10 ng)。各组分别鞘内注射药物20μL,1次/d,连续7 d。于给药前1d测定热缩足潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)基础值,给药后1、3、5、7 d鞘内注射30 min后测定PWL,计算最大镇痛效应百分比(maximal possible effect,MPE)。第8天,各组大鼠鞘内单独注射吗啡15μg 30 min后测定PWL,计算MPE,测定PWL后取L4-5脊髓,Western blot法测定ERK、p-ERK、CREB和p-CREB的表达水平。结果吗啡组给药后第5、7天MPE值分别为(52.90±8.20)%和(15.1±3.80)%,较第1天[(100.00±0.00)%]明显降低(P<0.05);吗啡+PDGF-BB组给药后第5、7天MPE值分别为(43.51±5.42)%和(14.81±3.60)%,较第1天[(100.00±0.00)%]明显降低(P<0.05);而吗啡+伊马替尼组给药后第1、3、5、7天MPE值无明显变化;第8天单独鞘内注射15μg吗啡后,吗啡组、吗啡+PDGF-BB组和PDGFBB组MPE值分别为(16.22±2.51)%、(15.22±3.50)%(35.21±4.51)%,较对照组[(100.00±0.00)%]均明显降低(P<0.05);6组大鼠脊髓ERK和CREB表达水平差异无统计学意义;吗啡组、吗啡+PDGF-BB组和PDGF-BB组大鼠脊髓磷酸化ERK和磷酸化CREB表达较对照组均上调(P<0.05);吗啡+伊马替尼组大鼠脊髓磷酸化ERK和磷酸化CREB表达较吗啡组均下调(P<0.05)。结论 PDGFR-β信号通路在吗啡耐受过程中具有重要作用,具体机制与激活下游ERK和CREB通路有关。     

BMP-7在大鼠肝纤维化组织中的动态表达和意义

目的探讨大鼠肝纤维化组织中骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)的表达趋势及意义。方法采用腹腔内注射二甲基亚硝胺(DMN)构建大鼠肝纤维化模型,造模后4天、1、2、4、6、8周分别检测血清ALT、AST、ALB的变化,同时取肝组织用半定量RT-PCR方法检测BMP-7 mRNA的表达。采用HE染色及Masson三色染色,光学显微镜下观察肝组织损伤情况。采用单因素方差分析进行多组均数间的比较。结果肝纤维化模型组血清ALT、AST明显升高,ALB明显下降。BMP-7 mRNA在对照组大鼠和肝纤维化模型组大鼠肝组织中均有表达。与对照组相比,肝纤维化模型组4天时BMP-7mRNA表达显著减少(P<0.05)。1～2周与对照组差别无显著性(P均>0.05),1周与4天比较差异无显著性(P>0.05),2周与4天比较显著升高(P<0.05)。4周较对照组显著升高,达高峰(P<0.05)。6周较对照组显著升高(P<0.05),较4周下降(P<0.05)。8周较6周有显著下降(P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05)。结论 BMP-7 mRNA在正常SD大鼠肝脏有表达,在肝纤维化大鼠肝组织中的表达呈动态改变,在炎症早期表达减少,随着肝纤维化进展,表达增加,在肝纤维化后期表达减少,提示BMP-7参与肝纤维化的发生、发展过程。