超抗原SEB对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

[摘要] 目的 观察超抗原肠毒素B（SEB）活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义。方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞、RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应。结果与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖,而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCRVβ14亚族。SEB刺激的T细胞早期（8 h）出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达（P ＜0.01或P ＜0.05）。结论CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对T淋巴细胞分化的作用

目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(stapylococoal enterotoxin A,SEA)对T淋巴细胞亚群Tc/Th细胞增殖的不同影响.方法:以SEA刺激脐带血单个核细胞(CBMCs),以3H-TdR掺入法及ELISA法检测Tc/Th细胞对SEA刺激的反应.结果:经SEA刺激后,CBMCs中的Tc0/Th0增殖并向Ⅰ型或Ⅱ型分化.在较低浓度SEA刺激时,CBMCs分泌IL-10的比例高于γ-IFN;而经较高浓度SEA刺激后,CBMC分泌γ-IFN 的比例高于IL-10.结论: SEA在较低浓度刺激时, 诱导T淋巴细胞向Tc1/Th1的分化;而较高浓度时,在促进T细胞增殖的同时,可以诱导T细胞向Tc2/Th2的分化.     

超抗原葡萄球菌肠毒素A在体外激活淋巴细胞抗成骨肉瘤的作用

目的：探讨超抗原葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）对成骨肉瘤患者外周血淋 寺殖及伤活性的调节作用。方法：分离成骨肉瘤患者外周血淋巴细胞,体外分别经ＰＨＡ,ＳＥＡ和ＳＥＡ加ＩＬ－２刺激后,＾３Ｈ－ＴdＲ参入法检测淋巴细胞对人成骨肉增殖水平,ＭＴＴ间接比色法检测活化的淋巴细胞对人成骨肉瘤细胞（ＳＯＳＰ－９６０７）的杀伤活性。结果：淋巴细胞经ＳＥＡ刺激２４h后增殖和钉伤活笥明显增强且呈剂量信依赖性（Ｐ〈０．０５     

超抗原-葡萄球菌肠毒素抗肿瘤作用的研究进展

<正>超抗原(superantigen,Sag)是Janice White等在1989年研究了金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxin,SE)对T淋巴细胞具有很强的刺激作用后提出的免疫学新概念。从此人们对其研究逐步深入,并取得了很大的进展。应用SAg进行抗肿瘤治疗是20世纪90年代才出现的一种新的治疗方式。SAg是一个庞大的群体,包括许多细菌、病毒和动物肌体内的自身产物,而目前报道的可用于临床抗肿瘤作用的SAg只有SE,而SE是目前已知的人淋巴细胞最强的刺激剂和最有力的     

超抗原葡萄球菌肠毒素B诱导自然杀伤细胞杀伤肿瘤效应的体外实验研究

①目的 探讨SEB对NK细胞杀瘤活性的影响。②方法 采用补体裂解法分离富集NK细胞，分别用10^-9g／ml、10^-8g／ml、10^-7g／ml、10^-6g／ml浓度的SEB作用NK细胞，分别于12、24、36、48h后测定NK细胞对K562细胞的杀伤活性。③结果 SEB处理NK细胞12h后杀瘤活性增强，至24h杀瘤活性最佳；且在一定浓度范田内NK细胞的杀瘤活性随SEB浓度的升高而增强。④结论 超抗原SEB在体外能够增强NK细胞的杀瘤活性。     

超抗原SED突变体的构建表达和鉴定

目的在预测的SED免疫识别活性位点处引入定点突变,构建SED突变体.方法分别设计侧翼引物和突变引物,用megaprimer PCR方法引入突变碱基,将PCR产物与pTrcHis-B质粒连接,转化E.coli DH5α,用IPlG进行诱导表达,金属螫合亲和层析法纯化,免疫印迹检测纯化的蛋白.结果测序结果表明在相应的位置引入了正确突变,SDS-PAGE和免疫印迹检测结果证实了目的蛋白的表达,将构建成功的突变体分别命名为SEDN23A、SEDN23A/H26R、SEDF45A、SEDL59A、SEDN61A、SEDl92A和SEDF203A.结论成功构建了一系列SED突变体,为后续的免疫识别研究奠定了基础.     

葡萄球菌肠毒素B与角朊细胞Fas抗原表达的研究

银屑病是一种表皮细胞增殖和凋亡异常性皮肤病,大量资料表明超抗原与银屑病密切相关,50%银屑病患者皮肤寄居金黄色葡萄球菌,葡萄球菌肠毒素B(SEB)可刺激银屑病患者淋巴细胞活化增殖[1]。为了解SEB或其活化的淋巴细胞对角朊细胞的作用及其与诱导角朊细胞凋亡的Fas抗原表达的关系,本文采用流式细胞仪(FACS)定量分析SEB及其活化的淋巴细胞对角朊细胞Fas抗原表达的影响,以进一步探讨超抗原诱发银屑病的机制1　材料与方法1.1　病例来源　临床和病理确诊的寻常型银屑病患者10例,均来自北京医科大学第三临床医院皮肤科门诊,患者至少一个月未…     

超抗原SED空间结构的同源建模及其免疫识别位点的预测

目的对金黄色葡萄球菌肠毒素口(SED)的空间结构和免疫识别位点进行预测。方法运用同源建模的方法构建了SED的三维空间结构模型，比较SED与其它金黄色葡萄球菌肠毒素超抗原的氨基酸序列、二级结构和空间结构的差异，对可能的活性位点进行预测。结果SED的空间结构与其它肠毒素超抗原相似，具有两个结构域：氨基末端结构域和羧基末端结构域。α-螺旋和β-折叠可能与维持SED超抗原的空间结构以及与MHC的结合有关，而环状区域更多的参与SED与TCR的相互作用。结论结合已有的研究结果，最终确定SED的N23、F45、L59、N61、I92和F203位氨基酸为可能的免疫识别位点．     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A基因克隆与鉴定

目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）全长基因并构建其表达载体。方法采用PCR技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株ATCC13565基因组DNA中获得SEA全长序列共771bp,克隆入pUC57载体中,进行酶切及测序鉴定。结果克隆了SEA全长基因,经测序证实与Genbank中收录的SEA基因序列完全一致。结论本研究成功地克隆了SEA全长基因,为进一步研究SEA基因的靶向抗肿瘤研究奠定了实验基础。     

超抗原（葡萄球菌肠毒素B）诱发银屑病机制探讨

目的为探讨超抗原（SA）诱发银屑病（PS）的发病机制。方法采用~3H—TdH掺入法观察比较银屑病和正常人外用血淋巴细胞（pBLc）对葡萄球菌肠毒素B（SEh）刺激的增殖反应。结果实验组PBLC对SEB的反应明显高于对照组。结论PS体肉可能存在SEB特异的T淋巴细胞，SA启动的特异T淋巴细胞的活化可能是诱发PS的重要因素。     

皮肤归巢T淋巴细胞的趋化性及趋化因子受体的表达

目的 :探讨由接触性过敏原或结核菌素诱发的细胞介导的皮肤炎症反应中 ,皮肤归巢T淋巴细胞的趋化性及其趋化因子受体的表达。方法 :取斑贴试验阳性或结核菌素皮肤反应试验阳性受试者的皮肤标本 ,利用 4 8孔微趋化板技术、流式细胞仪等检测皮肤归巢T淋巴细胞的趋化性及其趋化因子受体的表达。结果 :CC型趋化因子eotaxin、MIP 1α和CXC型趋化因子IL 8对于皮肤归巢T淋巴细胞有趋化效应 ,但这些细胞对RANTES无反应。皮肤归巢T淋巴细胞上CCR3、CCR5、CXCR1和CXCR2呈动态表达 ,而粘附分子ICAM 1则是高表达。在体外培养基中 ,趋化因子受体的表达即趋化运动的能力和粘附分子的表达受IL 2和IL 4的调节。结论 :在细胞介导的皮肤炎症反应中 ,趋化因子及其受体通过与T细胞源性的生长因子IL 2和IL 4的相互作用决定了皮肤归巢T淋巴细胞的定向迁移、粘附、聚集和循环 ,同时也决定了嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的聚集     

达菲抗原趋化因子受体在不同转移性人乳腺癌细胞中的差异表达

目的研究不同转移潜能乳腺癌细胞株中达菲抗原趋化因子受体(Duffy antigen receptor for chemokines,DARC)mRNA表达和蛋白质水平的差异,探讨DARC与乳腺癌细胞转移潜能的相关性。方法培养高低转移潜能的人乳腺癌MDA-MB-435细胞株,并将其接种到裸鼠体内,以体外培养细胞和裸鼠体内原位异种移植瘤为标本,用RT-PCR法检测DARC mRNA的表达,同时在细胞涂片上,用抗Fy3单抗检测DARC的蛋白质水平。结果高转移潜能MDA-MB-435细胞的DARC表达显著性地低于低转移潜能MDA-MB-435细胞,并且在接种高转移潜能MDA-MB-435细胞而形成的裸鼠体内原位移植瘤中的DARC表达也显著性地低于低转移潜能MDA-MB-435细胞来源的移植瘤。结论本研究首次揭示趋化因子清除槽DARC的表达差异与人乳腺癌细胞的不同转移潜能有关,有望成为抑制乳腺癌转移的新靶点。     

金黄色葡萄球菌肠毒素C及其突变体在抗肿瘤和骨科治疗中的应用进展

金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)是一种由金黄色葡萄球菌产生的超抗原,具有强大的T细胞活化增殖能力,中国SEC生物制剂(金葡素注射液)应用于临床抗肿瘤及骨科疾病的治疗。但SEC作为一种天然肠毒素,具有一定的免疫毒性,可导致发热、呕吐、腹泻等不良反应,一定程度上限制了金葡素注射液的临床应用。为提高SEC的超抗原特性,减少毒性,现已开发出多种SEC突变体蛋白,未来可生产出更安全、高效、低毒性或无毒性的生物制剂,扩大SEC的临床应用范围,治疗更多疾病。     

Duffy抗原趋化因子受体在炎症反应调节中的作用研究进展

趋化性细胞因子介导白细胞移行是炎症反应的基本方式,Duffy抗原趋化因子受体（DARC）在趋化性细胞因子的平衡和消除中具有重要的作用.内皮细胞和红细胞DARC表达的变化与多种人类炎症性和感染性疾病相关.该文就DARC的结构和分布、生物学特性及在炎症相关疾病中的作用的研究进展进行综述.     

Duffy抗原趋化因子受体在炎症反应调节中的作用研究进展

趋化性细胞因子介导白细胞移行是炎症反应的基本方式,Duffy抗原趋化因子受体(DARC)在趋化性细胞因子的平衡和消除中具有重要的作用.内皮细胞和红细胞DARC表达的变化与多种人类炎症性和感染性疾病相关.该文就DARC的结构和分布、生物学特性及在炎症相关疾病中的作用的研究进展进行综述.     

金黄色葡萄球菌及其肠毒素B对慢性实验性哮喘小鼠的影响

目的 探索金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对实验性支气管哮喘小鼠肺组织Th0细胞分化的在体调节和对气道炎症的作用.方法 32只15～17 d BALB/c小鼠,随机分为4组:对照组、模型组、金黄色葡萄球菌组、金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)组.用卵蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠慢性哮喘模型,在致敏前14 d对幼年鼠做金黄色葡萄球菌或SEB预防性腹腔注射.观察记录小鼠的耗氧量、肺组织切片、支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞及相关细胞因子等的改变.结果 金黄色葡萄球菌组与模型组相比.肺组织病理切片结构紊乱减轻、炎症细胞明显减少,小鼠耗氧量降低(5.24±0.12 vs 5.59±0.18),BALF中IL-4水平明显下降(44.94±4.51 vs 29.37±4.17),IFN-γ水平明显增加(19.61±3.83 vs 29.33±4.04),SEB组也有上述作用(耗氧量:5.09±0.20;细胞介素4:36.68±5.10;γ干扰素:24.27±3.46).结论 金黄色葡萄球菌能明显减轻实验性哮喘的气道炎症,纠正哮喘小鼠肺组织中Th1/Th2细胞因子的失衡,其作用可能是通过其分泌的SEB.     

金黄色葡萄球菌及其肠毒素B的生物学特性

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus）是一种革兰阳性球菌，广泛分布于自然界，如空气、水、土壤、饲料和一些物品上，也存在于人、动物的体表、鼻咽及肠道部位，绝大多数的金黄色葡萄球菌对人体是不致病的，但有少数可以引起人或动物致病，属于人兽共患病原菌。金黄色葡萄球菌是引起医院感染以及盆腔炎，产褥感染和细菌性食物中毒的一种主要病原菌，可以分泌20多种毒性蛋白质，这些蛋白质是引起人类疾病的主要病原因子。尤其是其中的肠毒素（Staphylococcal enterotoxins，SEs），是具有超抗原活性的一组细菌毒素，有强大的激活淋巴细胞的能力，可使淋巴细胞产生强烈的细胞毒性作用和高水平的细胞因子，如肿瘤坏死因子（TNF）-α等，对肿瘤细胞具有强大的杀伤作用，金黄色葡萄球菌肠毒素的生物学特性越来越受到研究者的关注。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B对脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）诱导脐静脉内皮细胞的凋亡效应。方法用不同浓度SEB感染脐静脉内皮细胞（HUVEC）2、4、8与12h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果SEB各浓度均可诱导HUVEC发生凋亡,与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。当SEB浓度为5μg/ml时诱导细胞凋亡的能力最强;5μg/mlSEB作用HUVEC细胞2h后,即可诱导细胞产生明显的凋亡,且随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加（P〈0.01）。结论SEB可以诱导脐静脉内皮细胞凋亡,并表现出明显的时间、剂量效应关系,这可能与金葡菌L型垂直感染影响宫内胎儿发育的机制有关。