姜黄素下调PI3K/AKT/mTOR通路抑制人肝癌细胞系增殖

目的观察姜黄素对体外培养人肝癌细胞系HL-7702增殖的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养HL-7702细胞,不同浓度的姜黄素(0、10、20、40和80μmol/L)处理48 h。PI3K/AKT抑制剂LY294002联合姜黄素处理细胞。分别用MTT法检测细胞增殖,用Western blot法检测细胞内PI3K、AKT、m TOR、Bax、Bcl-2及活化的caspase-3的蛋白含量。结果姜黄素可以浓度依赖性的抑制HL-7702细胞增殖,增加细胞中PI3K、AKT和m TOR的磷酸化水平(P0.05)。姜黄素可诱导HL-7702细胞凋亡,增加Bax和活化的caspase-3的含量(P0.05),减少Bcl-2的含量(P0.05)。LY294002与姜黄素联用后,姜黄素对细胞增殖及凋亡无明显作用。结论姜黄素可抑制人肝癌细胞系HL-7702增殖,诱导细胞凋亡,作用机制可能与其下调PIK/AKT/m TOR信号通路的活性有关。     

乙肝病毒X 蛋白结合蛋白可能通过PI3K / Akt 信号通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)通过调控PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常肝脏细胞HL7702和肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白表达;以肝癌细胞HepG2为研究对象,MTT实验、划痕实验检测过表达HBXIP及抑制HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的影响,Western blot检测过表达HBXIP的肝癌细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达,分析PI3K抑制剂(LY294002)对过表达HBXIP的肝癌细胞增殖和迁移的影响。结果:与HL7702细胞比较,肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白相对表达水平均明显升高(P0.05);过表达HBXIP能够促进肝癌细胞增殖和迁移能力,促进肝癌细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达,而沉默HBXIP后肝癌细胞增殖和迁移能力降低;使用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路能够逆转过表达HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的促进作用。结论:HBXIP在肝癌细胞中高表达,可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移。     

P13K抑制剂对胶质瘤Akt2、p-Akt表达影响的研究

目的探讨P13K抑制剂LY294002对胶质瘤Akt2、p-Akt表达的影响。方法试验分组：取对数生长期的胶质瘤U251细胞,调整细胞浓度为1×104个/ml,24 h后换液,LY294002组中DMEM高糖培养基含LY294002的浓度设四个梯度,其终浓度分别为5、10、20、40μmol/L 对照组为含等量含有机溶剂DMSO（浓度为0.4%）的DMEM高糖培养基。分别用免疫细胞化学法和Western blot法检测Akt2、p-Akt蛋白的表达。结果胶质瘤细胞株U251细胞中存在Akt2和p-Akt蛋白的高表达,应用P13K抑制剂LY294002可抑制该细胞株细胞中Akt2和p-Akt蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低。结论LY294002可通过抑制P13K活性,抑制Akt的表达及活化,使Akt2和p-Akt蛋白的表达降低,提示抑制P13K/Akt途径可能是LY294002发挥抗肿瘤作用的重要机制,P13K/Akt可能成为胶质瘤治疗的靶点。     

姜黄素联合顺铂调控PI3K/Akt信号通路对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:讨论姜黄素联合顺铂对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移及凋亡能力的作用,并分析其与PI3K/Akt通路的关系。方法:首先用不同浓度的姜黄素及顺铂单独处理细胞株,根据各浓度细胞的存活率确定35µmol/L姜黄素、4.0 mg/L顺铂疗效最好,用于后续实验。将卵巢癌耐药细胞分为空白对照组、姜黄素单独处理组(35µmol/L)、顺铂单独处理组(4.0 mg/L)、姜黄素+顺铂联合处理组(35µmol/L+4.0 mg/L),采用MTT法、Transwell小室、流式细胞术检测四组细胞的生长抑制率、迁移细胞数及细胞凋亡率;Western blot检测四组细胞中p-PI3K及p-Akt蛋白表达水平;PCR检测四组细胞中PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,其余三组细胞生长抑制率及细胞凋亡率均显著升高,迁移细胞数显著减少(P<0.05),且姜黄素+顺铂联合组细胞生长抑制率及细胞凋亡率显著高于姜黄素组、顺铂组,迁移细胞数则低于姜黄素组、顺铂组(P<0.05);与空白对照组比较,姜黄素处理组及姜黄素+顺铂联合组细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低、Bax mRNA显著升高(P<0.05),且联合组细胞表达量明显低于姜黄素处理组(P<0.05),而顺铂单独处理组细胞中PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素联合顺铂能够提高卵巢癌耐药细胞的敏感性,抑制细胞的增殖及迁移,同时诱导细胞凋亡,这一过程可能通过下调PI3K/Akt通路的表达实现。     

PI3K/Akt通路在滋养细胞增殖中的调控机制研究

旨在探讨PI3K/Akt信号转导通路在滋养细胞增殖中的作用及具体调控机制。体外培养滋养细胞系EVT。应用MTT法检测不同浓度表皮生长因子（EGF）刺激后EVT的增殖情况;应用流式细胞技术检测不同处理组EVT凋亡情况。使用PI3K抑制剂LY294002处理细胞后,检测以上各项结果的变化。结果发现：1.随EGF浓度增高,EVT增殖呈现增强趋势,EGF在10ng/ml及其以上时效应明显;2.EGF能够显著降低EVT的凋亡发生;3.使用PI3K抑制剂LY294002明显逆转EGF的促进EVT增殖的效应。提示表皮生长因子可以活化滋养细胞的PI3K/Akt信号通路,进而促进细胞增殖,并且抑制其凋亡,PI3K抑制剂可以明显抑制EGF的促EVT增殖作用。     

Adipophilin通过PI3K/Akt通路促进细胞内脂质蓄积

目的:探讨adipophilin促进细胞内脂质蓄积的可能机制,为动脉粥样硬化的防治提供参考。方法:分别通过q PCR、Western blot和油红O染色观察氧化型低密度脂蛋白(ox LDL)处理RAW264.7细胞不同时间后,细胞内Akt、p-Akt和adipophilin的蛋白水平及脂质蓄积情况;并检测PI3K/Akt抑制剂LY294002处理后,上述指标的变化;HEK293细胞过表达adipophilin后,检测Akt的活性;并用免疫共沉淀实验检测adipophilin与Akt之间的相互作用。结果:ox LDL处理细胞后,随着时间的延长,脂滴增多,Akt被活化,adipophilin表达增加,而LY294002处理则可抑制上述变化;过表达adipophilin后,p-Akt水平增高,但adipophilin与Akt之间未见直接相互作用。结论:Adipophilin可通过PI3K/Akt途径促进细胞内脂质蓄积,但可能不是通过直接相互关系发挥作用的。     

PI3K/Akt通路在低氧诱导脂肪干细胞增殖和向内皮细胞分化中的作用

文题释义：PI3K/Akt信号通路：Akt是PI3K/Akt信号转导通路的核心,其分子质量约为60 kD,是原癌基因c-akt表达编码的一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。外源性抑制剂LY294002或wortmannin均可负向调节PI3K/Akt信号通路,导致第二信使PIP3逆行转化为PIP2,阻断其调节作用。 低氧：氧体积分数是机体微环境的重要组成部分,直接影响着细胞的成活和生物学行为。在体外培养过程中氧体积分数为1%-5%时即可为脂肪干细胞的增殖和功能提供足够的刺激,同时维持细胞形态和多向分化能力不变,因此可以认为低氧环境可以更好地为干细胞特性的维持提供信号传导。 背景：大量研究证明低氧可以促进干细胞的增殖和分化,但目前尚不清楚其通过何种途径发挥作用。 目的：观察低氧对脂肪干细胞增殖和向内皮细胞分化的影响,并探讨PI3K/Akt通路在此过程中的作用。 方法：取培养至第3代的Wistar大鼠脂肪干细胞,分为常氧组、低氧组、低氧+LY294002组,3组均在体积分数为20%O₂培养箱中培养24 h,然后低氧组转移至体积分数为2%O₂培养箱中进行培养,常氧组继续在体积分数为20%O₂培养箱中培养,低氧+LY294002组在低氧培养环境下的细胞培养基中加入终浓度为25 mmol/L的PI3K/Akt通路抑制剂LY294002。培养24 h后,Western blot检测p-Akt的表达明确PI3K/Akt通路的激活情况;CCK-8法检测各组脂肪干细胞的增殖情况;各组脂肪干细胞加入血管内皮细胞诱导培养基进行诱导分化10 d,分别通过qRT-PCR及抗CD31免疫荧光染色检测各组脂肪干细胞分化为内皮细胞的情况。 结果与结论：①第3代脂肪干细胞呈现出典型的梭形结构,流式细胞仪检测结果显示CD34和CD45表达阴性,CD105表达阳性,并可向成骨及成脂细胞方向分化;②低氧培养条件下p-Akt的表达明显升高,加入LY294002后p-Akt的表达受到明显抑制;③低氧组细胞增殖率明显高于常氧组和低氧+LY294002组(P < 0.05),低氧+ LY294002组脂肪干细胞的增殖率低于低氧组(P < 0.05);④低氧组内皮细胞基因及特异性蛋白CD31的表达明显高于常氧组和低氧+LY294002组(P < 0.05),低氧+LY294002组内皮细胞基因及特异性蛋白CD31的表达低于低氧组(P < 0.05),但仍高于常氧组(P < 0.05);⑤结果证实PI3K/Akt通路在低氧诱导的脂肪干细胞增殖及向内皮细胞分化过程中发挥重要作用。 ORCID: 0000-0001-8454-263X(殷令妮) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

红景天苷对内皮祖细胞功能及其PI3K/Akt通路的影响

 目的：研究红景天苷对人内皮祖细胞（EPCs）功能及其对磷酸肌醇3羟基激酶（PI3K）/Akt通路的影响。方法：体外培养正常人外周血EPCs,观察红景天苷或PI3K抑制剂的干预对EPCs增殖、黏附、迁移及一氧化氮（NO）分泌量的影响。MTT法检测细胞增殖、Western blotting检测Akt蛋白表达。结果：与对照组比较, 红景天苷能促进EPCs的增殖、黏附及迁移功能（P<0.05）,促进EPCs分泌NO,增加细胞内磷酸化Akt蛋白的水平。但这些作用均被PI3K抑制剂LY294002抑制（P<0.05）。结论：红景天苷通过PI3K/Akt通路调节EPCs的功能。     

RANTES对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制研究

目的:探讨RANTES对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用MPP~+处理PC12细胞建立帕金森细胞模型,并分别转染RANTES siRNA和pcRANTES,MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blot检测总Akt(t-Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)和cleaved caspase-3蛋白表达水平。结果:RANTES siRNA显著抑制RNATES的表达,而pc DNA RANTES成功使RNATES过表达;过表达RNATES可显著上调MPP~+处理的PC12细胞增殖(P0.05),并抑制MPP~+诱导的PC12细胞凋亡(P0.05),下调cleasved caspase-3蛋白表达水平(P0.05)。此外,过表达RANTES可显著促进p-Akt/t-Akt蛋白表达水平(P0.05),且PI3K/Akt通路抑制剂LY294002显著抑制RNATES对PC细胞增殖的促进作用和凋亡的抑制作用(P0.05)。结论:RANTES可通过PI3K/Akt信号通路促进MPP~+处理的PC12细胞的增殖并抑制细胞的凋亡。     

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移

 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用。方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6, rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和05 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt, t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt, p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。 结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P<005）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P<005）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降103%～697%,细胞迁移率下降379%～416%,差异均有统计学意义（P<005）。 结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

人参皂苷Rb1对体外培养胎鼠神经干细胞增殖及分化的影响

目的:探讨人参皂苷Rb1对体外培养胎鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响及其可能的作用机制。方法:分离培养胎鼠皮层NSCs,CCK-8法及BrdU掺入法测定不同浓度人参皂苷Rb1对NSCs增殖的影响,确定促进NSCs增殖的最佳人参皂苷Rb1浓度;细胞免疫荧光法检测各组β-Ⅲtubulin、GFAP及DAPI的表达,计算GFAP/DAPI、β-Ⅲtubulin/DAPI百分比;Western Blot、CCK-8法测定PI3K/Akt抑制剂LY294002干预下Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平及其OD值。结果:人参皂苷Rb1能够促进体外培养的NSCs增殖,最佳浓度为1μmol/L;不同浓度人参皂苷Rb1组GFAP/DAPI及β-Ⅲtubulin/DAPI百分比与对照组相比无显著性差异(P0.05);但人参皂苷Rb1组(1μmol/L)的OD值及p-Akt蛋白水平均较对照组高(P0.01),且这种作用可以被LY294002逆转。结论:人参皂苷Rb1在一定浓度范围内可以促进体外培养神经干细胞的增殖,PI3K/Akt信号通路在人参皂苷Rb1促进神经干细胞增殖作用中发挥重要作用。     

低表达S100钙离子结合蛋白A6促进食管腺癌SK-GT-4细胞的增殖和迁移

目的 探讨S100钙离子结合蛋白A6（S100A6）对食管腺癌SK-GT-4细胞增殖和迁移的影响。 方法 慢病毒转染,构建稳定细胞系shNC和shS100A6,Real-time PCR检测S100A6 mRNA表达情况;倒置显微镜和MTT检测细胞的增殖能力,Transwell检测细胞的迁移能力及U0126（MER1/2的抑制剂）、LY294002（PI3K抑制剂）对细胞增殖、迁移的影响;Western blotting检测细胞中S100A6、p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白的表达情况,检测U0126、LY294002对p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白表达的影响。 结果 构建了敲低S100A6的稳定细胞系,敲低S100A6促进了细胞的增殖和迁移,p-ERK、p-Akt水平升高,细胞周期抑制蛋白p21表达量下降、细胞周期蛋白D1(cyclinD1）表达升高,间质细胞标志蛋白——波形蛋白（vimentin）、β-连环蛋白（β-catenin）表达升高;U0126处理shS100A6细胞后,对细胞的增殖无影响,抑制细胞的迁移,p-ERK、β-catenin表达下降;LY294002处理shS100A6细胞后,抑制细胞的增殖和迁移,p-Akt表达下降,p21表达量升高,cyclinD1表达量下降,β-catenin表达下降。 结论 低表达S100A6促进细胞的增殖和迁移,其可能机制是通过p-Akt调控细胞周期的进程促进细胞增殖,通过激活p-Akt/p-ERK调控β-catenin促进细胞的迁移。     

β-榄香烯对卵巢癌细胞凋亡的影响及机制

目的研究β-榄香烯对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响及机制的探索,从而为β-榄香烯在卵巢癌中的应用提供实验基础。方法常规培养人卵巢癌SKOV-3细胞,传代,分组。应用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪以及TUNEL方法检测人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡率,并采用Westen blot方法检测caspase 3、caspase 8、caspase 9、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Cyto-c及p-Akt蛋白表达。结果与对照组相比,β-榄香烯处理组凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9及Cyto-c蛋白表达水平明显升高。与对照组相比,P-Akt及HIF-1α蛋白表达水平明显升高,而加入LY294002(PI3K/Akt/m TOR抑制剂),p-Akt及HIF-1α蛋白的表达水平明显降低。结论β-榄香烯抑制宫颈癌细胞增殖和诱导细胞凋亡可能与上调凋亡蛋白及Cyto-c蛋白表达及活化PI-3K信号通路进而诱导HIF-1α高表达相关。     

雷公藤甲素对感染性休克大鼠脑的保护作用

目的探讨雷公藤甲素对感染性休克大鼠的脑保护作用及其可能机制。方法将SPF级SD大鼠50只,体重200-250 g,随机均分为假手术组(Sham组)、感染性休克组(LPS组)、雷公藤甲素组(TR组)、PI3K抑制剂组(LY294002组)、雷公藤甲素联合PI3K抑制剂组(TR+LY294002组)。尾静脉注射5 mg/kg脂多糖(LPS)制备大鼠感染性休克模型,TR组于造模前腹腔注射TR 200μg/kg,分别于感染性休克发生后12 h处死大鼠。HE染色观察大鼠脑组织病理变化;检测脑组织中NO、ROS、SOD及MDA水平;TUNEL法检测大鼠脑内细胞凋亡;实时PCR法检测各组大鼠脑组织中Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA表达水平;Western blot法检测大鼠PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt及p-Akt表达情况。结果 LPS组大鼠脑组织损伤严重,脑组织中SOD水平降低,ROS、NO及MDA水平升高。TR可以抑制LPS引发的大脑损伤及神经细胞凋亡,与LPS组相比,TR组大鼠脑组织中SOD, PI3K、p-Akt蛋白的表达水平升高,ROS、NO/MDA及Bax/Bcl-2 mRNA比率及Caspase-3 mRNA表达水平降低。但是,给予PI3K抑制剂后,TR的抗凋亡作用被抑制。结论 TR对感染性休克大鼠的脑保护作用与激活PI3K/Akt信号通路相关。     

P13K/Akt信号通路在白蛋白诱导肾小管上皮细胞转化生长因子β1表达中的作用

目的 研究白蛋白对人肾小管上皮细胞(HK-2)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响,以及P13K/Akt信号通路在这一过程中的作用.方法 体外培养HK-2细胞,分为对照组、白蛋白(BSA)组和白蛋白加抑制剂(BSA+Ly294002)组.分别于培养12、24、48 h后,用MTT法检测HK-2细胞的增殖;RT-PCR检测HK-2细胞TGF-β1 mRNA的表达;Western印迹测定HK-2细胞TGF-β1和磷酸化的PI3K(p-PI3K)、Akt(p-Akt)蛋白分泌.结果 白蛋白可明显诱导HK-2细胞增殖(P<0.05),诱导后12 hBSA组与对照组比较,TGF-β1 mRNA表达明显上调(0.472±0.025比0.233±0.021,P<0.05);TGF-β1蛋白明显上调(296±20.1比100±13.2,P<0.05);p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著增加(P<0.05).加Ly294002 12 h时HK-2增殖受抑制;48 h时TGF-β1 mRNA、蛋白和p-PI3K、P-Akt蛋白的表达也受到抑制(均为P<0.05).结论 白蛋白通过活化PI3-K/Akt信号转导通路诱导肾小管上皮细胞产生TGF-β1.     

盐酸小檗碱通过PI3K/Akt信号通路促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的分化

目的:研究盐酸小檗碱对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1分化与矿化的调控作用及其机制。方法:MC3T3-E1细胞给予不同浓度(0、1、5、10和20 mg/L)的盐酸小檗碱刺激3 d,CCK-8法检测细胞活性。不同浓度的盐酸小檗碱分别干预3 d和7 d,检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。进一步将实验随机分为4组:对照组、盐酸小檗碱组、盐酸小檗碱+LY249002(PI3K/Akt通路抑制剂)组及LY249002组。干预2 d后,采用real-time PCR检测成骨细胞分化相关因子ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达情况,采用Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt的表达水平。将MC3TC-E1细胞用矿化培养基诱导21 d,茜素红染色检测其矿化情况。结果:与对照组相比,不同浓度的盐酸小檗碱对细胞活性的影响没有明显差异;不同浓度的盐酸小檗碱处理MC3T3-E1细胞后ALP活性有不同程度升高。Real-time PCR结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进ALP、OCN、OPN及Runx2的mRNA表达(P 0. 01),而LY294002能抑制这些分化相关因子的表达。Western blot检测结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进p-Akt蛋白的表达(P 0. 01),其作用被LY249002抑制。茜素红染色发现盐酸小檗碱组矿化明显,但LY294002能抑制盐酸小檗碱的促进作用。结论:盐酸小檗碱可以促进小鼠前成骨细胞的分化与矿化,其机制可能与其激活PI3K/Akt信号通路有关。     

促红细胞生成素促进内皮祖细胞增殖依赖于PI3K/Akt信号通路

背景:促红细胞生成素能促进组织损伤部位血管生成,与其促进内皮祖细胞增殖、分化密切相关,但促红细胞生成素促进内皮祖细胞增殖、分化的机制尚不清楚。目的:观察促红细胞生成素对小鼠骨髓来源内皮祖细胞功能活性的影响,并初步阐明其信号机制。方法:密度梯度离心法分离获取小鼠骨髓内皮祖细胞,鉴定后传代培养,以PI3K特异性抑制剂LY294002作干预处理,实验细胞分为EGM-2组、促红细胞生成素处理组(培养液中促红细胞生成素浓度分别为1,5,10 U/m L)、促红细胞生成素+LY组(培养液中分别含有10 U/m L促红细胞生成素及10 mmol/L LY294002)、LY组(培养液中含10 mmol/L LY294002)、二甲基亚砜组(培养液中含1 m L/L二甲基亚砜),分别采用CCK8试剂盒、流式细胞法检测细胞增殖和凋亡,采用ELISA法检测细胞裂解液内皮型一氧化氮合酶、血管内皮生长因子含量,Western blot法测定细胞裂解液中Akt及p-Akt表达。结果与结论:促红细胞生成素能显著促进内皮祖细胞增殖,并随培养基中促红细胞生成素含量增加而呈现量效关系,而促红细胞生成素的促增殖作用可被LY294002完全抑制。促红细胞生成素处理组细胞凋亡率明显低于促红细胞生成素+LY组。LY组、促红细胞生成素+LY组细胞裂解液中内皮型一氧化氮合酶、血管内皮生长因子含量显著低于促红细胞生成素处理各组。各组Akt表达无明显差异,而促红细胞生成素+LY组p-Akt表达显著低于促红细胞生成素各组。上述结果提示,促红细胞生成素能显著促进体外培养的内皮祖细胞的增殖、降低内皮祖细胞的凋亡率,其作用依赖于PI3K/Akt信号通路。     

APS通过PI3K/AKT信号通路促进神经干细胞增殖

目的观察APS是否通过PI3K/AKT信号通路促进神经干细胞增殖。方法将神经干细胞,随机分为对照组、APS(5%)组、APS(5%)+LY294002组和LY294002组,用间接免疫荧光法检测Nestin和Brdu;CCK-8检测细胞增殖;Elisa检测VEGF、FLK-1含量;Western blot法检测FLK-1、PI3K、P-Akt蛋白表达。结果 APS可以提高LY294002干预后神经干细胞增殖(P0.05),提高VEGF、FLK-1含量(P0.05),提高FLK-1、PI3K、P-Akt蛋白表达(P0.05)。结论 APS可能通过促进Akt磷酸化,活化PI3K/AKT信号通路,调节PI3K/AKT信号通路下游靶基因,促进神经干细胞增殖。     

米诺环素通过调控PI3K/Akt通路抑制硝普钠诱导的PC12细胞凋亡

 目的： 探讨PI3K/Akt信号通路在米诺环素（minocycline,MC）抑制硝普钠(sodium nitoprusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡中的作用。方法：将体外培养的PC12细胞分为4组：空白对照组、SNP组、MC+SNP组和PI3K抑制剂LY294002+ MC+SNP组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测不同时点（0.5、1、2、3 h）各处理组PI3K/Akt通路蛋白p-Akt和Akt的表达。结果：SNP处理PC12细胞24 h能抑制细胞生长,加入10 μmol/L MC预处理30 min可明显提高细胞活力,降低细胞凋亡率（P<0.05）,抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。MC组的p-Akt表达高于其它组,而加入LY294002后可阻断MC的上述效应。结论：MC可通过调控PI3K/Akt通路抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA抑制马兜铃酸诱导HUVECs凋亡及其可能机制

目的观察丹参酮ⅡA(TSN)对马兜铃酸(AA)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制。方法体外培养HUVECs,设对照组、AA刺激组(AA终浓度为10 mg/L)、TSN干预组(先加入0.2、0.4和0.8 mg/L TSN,1 h后再加入AA)和LY294002预处理组(20μmol/L的PI3K抑制剂LY294002预处理30 min后,再加入TSN)。24 h后,MTT法检测细胞增殖;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双荧光染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞Bcl-2、Bax和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达及比色法测定细胞caspase-3活性。结果与对照组相比,AA引起细胞凋亡率显著增加(P0.05),细胞Bcl-2和p-Akt表达降低(P0.05),细胞Bax表达升高(P0.05);TSN能减轻AA对细胞凋亡率及对细胞Bcl-2、Bax和p-Akt表达的作用(P0.05);PI3K抑制剂LY294002可抑制TSN的抗凋亡作用(P0.05)。结论 TSN可抑制AA诱导的HUVECs凋亡。