CD4~+CD25~+FOXP3~+调节性T细胞及其亚型在结直肠癌组织中分布和临床意义的研究

目的:探讨CD4~+Cff25~+FOXP3~+调节性T细胞(Treg)及其亚型在结直肠癌组织(colorectal carcinoma,CRC)的分布和临床病理特征的关系.方法:收集42例CRC新鲜手术标本,应用冰冻切片、免疫组织化学SP法检测肿瘤组织和癌旁组织中FOXP3~+阳性细胞数,分析其与临床病理特征的相关性;应用双重免疫组化检测FOXP3和ICOS表达,分析FOXP3~+ICOS~+Treg和FOXP3~+ICOS-Treg两种细胞亚型分布情况.结果:CRC患者肿瘤组织中FOXP3分布显著多于癌旁组织,差异显著(P＜0.001);中低分化组Treg细胞数明显高于高分化组(P＜0.01);淋巴结转移组Treg细胞数明显高于无淋巴结转移组(P＜0.05);无远处转移组Treg细胞数明显高于有远处转移组(P＜0.05);FOXP3+ICOS+Treg细胞亚群在CRC组织中高表达,与癌旁组织相比差异显著(P＜0.01).结论:CRC的发生发展与其癌组织局部微环境中Treg数量变化相关,Treg在CRC组织过量表达可能是导致肿瘤免疫逃逸的重要因素之一;抑制CRC微环境中浸润性Treg细胞功能可提高肿瘤局部免疫治疗效果.     

HIV感染后胃黏膜CD4+、CD8+T细胞数量分布及CD38表达的改变

目的 研究不同感染阶段HIV感染者胃黏膜中CD4+和CD8+T细胞数量和分布情况,及免疫细胞激活状态的改变.方法 有胃黏膜组织活检标本的HIV感染者42例,其中有明确临床分期诊断的36例,另选非HIV感染者胃黏膜组织活检标本10例为对照,利用免疫组织化学方法检测研究对象胃黏膜活检组织中CD4、CD8及CD38的表达,以图像分析系统分析其差异.结果 (1)AIDS患者胃黏膜中CD4+T细胞与对照组和无症状者相比,均显著减少(P(0.01),无症状者多数淋巴滤泡中仍有一定量CD4+T细胞,间质中多呈不均匀聚集分布,统计学与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05);(2)HIV感染者胃黏膜内CD8+T细胞普遍噬腺体和黏膜上皮,部分病例胃黏膜内CD8+T细胞局部过度增生,与对照组相比,CD8+T细胞在感染者胃黏膜中显著增多(P<0.01),无症状者与AIDS患者CD8+T细胞差异无统计学意义(P>0.05);(3)在HIV感染者胃黏膜内,CD38阳性细胞主要分布于黏膜表层至浅1/3～2/3层,与对照组相比,HIV感染者胃黏膜中CD38表达增强(P<0.01),无症状者与MDS患者CD38表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 HIV感染者胃黏膜中CD4+T细胞的数量和分布与疾病进展有密切联系,HIV对CD4+T细胞的感染和破坏导致黏膜免疫系统功能异常,可能是胃黏膜内CD8+T细胞数量增加,CD38表达增强的重要原因之一.     

膀胱癌患者高表达活化的CD4~+记忆性T细胞和CD8~+T细胞和低表达M0巨噬细胞与临床预后佳有关

目的研究膀胱癌免疫细胞的浸润模式,探索免疫细胞与预后的关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)下载膀胱癌转录本数据及相应临床数据,CIBERSORT软件反卷积法计算22种免疫细胞所占比例,R软件分析各临床分期中免疫细胞浸润模式,Kaplan-Meier生存分析各免疫细胞与预后的关系。结果从TCGA数据库下载基因转录本数据共433例,包含414例膀胱癌组织,19例正常组织。数据矫正后用CIBERSORT软件计算免疫细胞所占比例,筛选后得到膀胱癌组织146例,正常膀胱组织4例。活化的CD4~+记忆性T细胞、 CD8~+ T细胞在膀胱癌临床Ⅳ期表达量最低,M0巨噬细胞在膀胱癌临床Ⅳ期表达量最高,膀胱癌组织活化的CD4~+记忆性T细胞、 CD8~+ T细胞高表达,M0巨噬细胞低表达利于预后。结论膀胱癌组织活化的CD4~+记忆性T细胞、 CD8~+ T细胞高表达,M0巨噬细胞低表达,与临床预后好有关。     

CD4~+T、CD8~+T、Foxp3~+T细胞在卵巢癌组织中的分布及临床意义

本研究探讨卵巢癌组织中CD4+、CD8+、Foxp3+T细胞的分布特征及其与卵巢癌临床病理特征的相关性。采用免疫组织化学法检测41例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织中的CD4+、CD8+、Foxp3+T细胞数,并对卵巢恶性肿瘤组织癌巢及间质中的CD4+、CD8+、Foxp3+T细胞数与年龄、病理分级、FIGO分期、淋巴结转移、月经史、腹水、单侧/双侧、包膜是否完整、CA125水平及组织学类型之间的关系进行统计学分析。结果显示,1卵巢癌组织中的CD4+、CD8+、Foxp3+T细胞的数量及CD4+T/CD8+T细胞的比值与良性对照组相比有显著性差异(P0.05)。2卵巢癌组织癌巢内CD4+、CD8+T细胞的数量及CD4+T/CD8+T细胞的比值显著低于间质内(P0.05)。3卵巢癌癌巢内,CD4+、CD8+、Foxp3+T的数量及CD4+T/CD8+T细胞的比值均与临床分期有关(P0.05);CD8+、Foxp3+T的数量还与病理分级有关(P0.05)。4卵巢癌组织间质内,CD8+T细胞的数量与FIGO分期、组织学类型有关(P0.05);Foxp3+T细胞的数量与病理分级、FIGO分期、淋巴结转移有关(P0.05);III期、双侧卵巢癌患者CD4+T/CD8+T细胞的比值低于I/II期、单侧卵巢癌患者,差异有统计学意义(P0.05)。5Foxp3+T细胞和CD8+T细胞在癌巢内及间质内均呈正相关(r=0.516,P0.05;r=0.430,P0.05)。综上所述,卵巢癌组织中CD8+、Foxp3+T细胞的数量明显增加,且与FIGO分期呈正相关,提示二者可能共同参与卵巢癌的发生发展;晚期卵巢癌组织中Foxp3+T细胞的数量增多、CD4+T/CD8+T细胞比值下降提示患者卵巢局部的免疫反应受到抑制。     

低氧对人结肠癌细胞自噬相关分子表达的影响

目的为探索低氧对SW480细胞自噬影响的分子机制。方法免疫磁珠分选筛选出具有干细胞特性的CD133~+细胞,将SW480细胞和CD133~+在低氧环境中进行培养,免疫荧光检测HIF-1α表达,Western blot检测LC3的表达,用免疫组化检测94例结直肠癌组织中HIF-2α和Beclin1的表达。结果低氧可诱导SW480细胞内HIF-1α的表达激活。低氧时,SW480细胞与CD133~+细胞内LC3的表达量均在增加,并具有时间依赖性,但是CD133~+细胞中LC3Ⅰ向LCⅡ的转化不断增加,而SW480细胞内这种转化却不断减弱。在结直肠癌组织当中,HIF-2α和Beclin1在低分化组中的表达量均高于高分化组(P0.05),但HIF-2α表达量在淋巴无转移组中高于淋巴转移组(P0.05),Beclin1表达量在淋巴转移组中高于淋巴无转移组(P0.05),在Duke、s分期的A-B期中低于C-D(P0.01)。结论低氧可通过诱导HIF在SW480细胞中的表达,并提高LC3的表达,使大部分SW480细胞发生凋亡,但可使一小部分CD133~+细胞发生自噬,保护CD133~+细胞免于凋亡。     

高表达Foxp3的肺癌细胞抑制人CD4~+T细胞免疫活性

目的:研究高表达转录因子Foxp3的肺癌细胞对CD4~+T淋巴细胞的作用。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株,荧光定量PCR和Western blot检测细胞Foxp3的表达;ELISA法检测NCIHh Foxp3培养上清中IL-8、IL-10表达量的变化;分离并活化CD4~+T淋巴细胞,用含20%NCIH-h Foxp3肿瘤上清的培养基培养,检测CD4~+T淋巴细胞IL-2表达量的变化;将NCIH-h Foxp3与活化的CD4~+T淋巴细胞共培养,MTT评价免疫效应细胞增殖情况;免疫细胞化学法观察NCIH-h Foxp3细胞对活化CD4~+T淋巴细胞黏附作用的抑制。结果:建立高表达Foxp3的NCIHh Foxp3肺癌细胞株,与阴性对照相比,NCIH-h Foxp3细胞培养上清IL-8表达量降低,IL-10表达量升高,NCIH-h Foxp3肿瘤细胞能抑制活化的CD4~+T淋巴细胞IL-2的表达、增殖及浸润。结论:肺癌细胞Foxp3的表达对活化的CD4~+T淋巴细胞有免疫抑制作用,这可能与NCIH-h Foxp3分泌细胞因子IL-8表达量降低,IL-10表达量升高有关。     

结核病患者外周血中CD4~+ CD25~+调节性T细胞水平的检测

探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其转录因子Foxp3在结核病发病机制中的作用。研究对象为肺结核患者22例(病例组)以及健康对照者23例(对照组)。采用FACS检测外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的百分率,采用real-time PCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达以及CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、IFN-γ和IL-4的相关性。结核病患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞的百分率,病例组(3.38±1.23)%高于对照组(1.97±0.62)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。血清单个核细胞Foxp3 mRNA相对表达水平为134.54±6.76,高于对照组(40.98±2.34,P0.05)。CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞以及与IFN-γ和IL-4的表达呈负相关。结核病CD4~+CD25~+调节性T细胞数量增加、特异性转录因子Foxp3 mRNA表达上升,由此引发的免疫抑制效应可能是结核病发生发展的重要原因之一。     

CD4~+CD25~+CD127~-T细胞在抗CD45RB抗体诱导免疫耐受中的作用

目的:研究CD4+CD25+CD127-T细胞在抗CD45RB抗体诱导的免疫耐受中所发挥的作用,从而阐明抗CD45RB抗体诱导免疫耐受作用的机制。方法:体内实验建立小鼠异位心脏移植模型,观察抗CD45RB抗体对移植物生存期的影响。体外实验观察抗CD45RB抗体对T细胞增殖抑制能力和对CD4+CD25+CD127-T细胞生成的影响。流式细胞术检测外周血和混合细胞中CD4+CD25+CD127-T细胞百分率,ELISA法检测血清和培养液中IL-2和IL-10含量,Real-TimePCR法检测脾脏和混合细胞中Foxp3基因的表达,移植心脏病理学观察。结果:抗CD45RB抗体显著延长移植物存活时间(P0.01),对ConA刺激引起的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制能力(P0.05)。与对照组相比,实验组CD4+CD25+CD127-T细胞百分率和Foxp3 mRNA表达量均明显增加(P0.05),实验组IL-2水平较对照组明显降低(P0.05),但IL-10含量较对照组明显升高(P0.05)。病理结果显示对照组移植心脏出现典型细胞免疫性损伤病理改变,而实验组中几乎无炎性细胞浸润现象。结论:抗CD45RB抗体能显著延长移植物存活时间,其诱导免疫耐受机制与上调CD4+CD25+CD127-T细胞百分率和增加Foxp3 mRNA表达量有关。     

组织芯片观察CD44+/CD166+结直肠癌干细胞的形态及分布

背景：越来越多的研究将CD44作为结直肠癌干细胞的一个特异性的标志物。 目的：观察结直肠癌干细胞CD44⁺/CD166⁺在原发性结直肠癌组织中的数量、位置及分布方式。 方法：取61份结直肠癌、10份正常肠黏膜组织及18份伴不典型增生的结直肠腺瘤标本制成42点的共3块组织芯片。 结果与结论：免疫组织化学双染结果显示,正常肠黏膜中未见CD44⁺/CD166⁺细胞,在伴不典型增生腺瘤中可见极少量CD44⁺/CD166⁺细胞,结直肠癌中可见到少量CD44⁺/CD166⁺双阳性细胞。双阳性细胞主要分布在结直肠癌腺管基底侧,呈灶状或散在分布;细胞呈立方形,胞浆稀少,胞核规则,呈卵圆形或高柱状,随着结直肠癌分化程度的降低,数量增多,且其数量在浸润较深的癌巢中较多。提示结直肠癌干细胞的数量、位置、分布方式及其形态有助于结直肠癌的诊断及判断预后。     

丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞与淋巴细胞亚群分布的影响

目的探讨丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞(Treg)与淋巴细胞亚群分布的影响及临床意义。方法流式细胞术检测40例川崎病患儿和30例体检健康儿童外周血中CD4~+CD25~+Treg细胞的表达水平以及108例川崎病患儿和41例体检健康儿童外周血中淋巴细胞亚群分布。ELISA法检测川崎病患儿血浆中TGF-β1浓度。108例川崎病患儿中有30例收集到对应的丙种球蛋白(IVIG)治疗后全血,流式细胞术检测CD4~+CD25~+Treg、TGF-β1及淋巴细胞亚群在川崎病患儿丙种球蛋白(IVIG)治疗前后表达水平的差异。结果与健康体检组相比,川崎病患儿CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显降低,外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显降低,CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显增高,差异均有统计学意义(均P0.01)。与IVIG治疗前相比,川崎病患儿IVIG治疗后外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显增高(均P0.05),外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显增高(均P0.05),CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显降低(均P0.05)。治疗后患儿外周血CD4~+CD25~+Treg水平、血浆TGF-β1浓度及淋巴细胞亚群表达水平与健康对照相比无差异(P0.05)。结论 Treg细胞与淋巴细胞比例失常是导致儿童川崎病免疫紊乱的重要原因。检测CD4~+CD25~+调节T细胞及淋巴细胞亚群分布对评估川崎病患儿的细胞免疫状况,辅助诊断和指导治疗具有重要的临床价值。     

人卵巢癌PD-1~+CD8~+T细胞CD38/CD101的表达及其临床意义

目的研究卵巢癌患者外周血、癌组织中的PD-1~+CD8~+T细胞表面CD38和CD101的表达和分布情况,分析各PD-1~+CD8~+T细胞亚群频率与卵巢癌患者临床病理参数的相关性,判断CD38和CD101在PD-1~+CD8~+T细胞亚群的频率对卵巢癌患者诊断和疗效的指示性作用。方法采用流式细胞术检测卵巢癌患者、正常人外周血单个核细胞和卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞中CD38和CD101在PD-1~+CD8~+T细胞亚群频率;运用多种统计学方法分析各PD-1~+CD8~+T细胞亚群频率及其与卵巢癌临床病理参数和疗效指标的相关性;运用免疫荧光染色技术检测CD38分子和CD101分子在卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞中的表达和定位情况。结果与健康对照组相比,卵巢癌患者外周血单个核细胞和肿瘤浸润淋巴细胞中,总PD-1~+CD8~+T细胞亚群频率、CD38和CD101在PD-1~+CD8~+T细胞亚群共表达频率显著升高。PD-1~+CD38~+CD101~+CD8~+T细胞频率与卵巢癌患者的临床分期、淋巴结转移和术后化疗疗效呈显著负相关。免疫荧光染色证实了CD38和CD101在卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞胞膜上有部分共定位表达。结论该研究结果表明CD38和CD101在PD-1~+CD8~+T细胞亚群共表达频率可作为卵巢癌患者辅助诊断和预测预后的指标之一,并有可能作为判断卵巢癌患者抗PD-1免疫治疗适用性的辅助生物学指标。     

CD4~+CD25~(high) Foxp3~+调节性T细胞在新生儿脐血及成人外周血的比较

目的:检测新生儿脐血及成人外周血中CD4+CD25~(high) Foxp3+调节性T细胞(Treg)的比例,探讨Treg在新生儿脐血中的临床意义.方法:采用流式细胞术(FCM)检测30例新生儿脐血单个核细胞中CD4+T细胞、CD4+CD25+/CD4~+、CD4~+CD25~(high) /CD4~+T细胞百分比以及绝对计数,进一步分析CD4~+CD25~+及CD4~+CD25~(high) T细胞中Foxp3~+的百分比,以及利用RT-PCR方法检测Foxp3 mRNA表达水平,并与27例成人外周血单个核细胞(PBMC)中的上述指标进行比较.结果:与成人PBMC比较,新生儿脐血单个核细胞中CD4~+T细胞百分比及绝对计数均增高(P＜0.01＝;CD4~+CD25~+/CD4~+及CD4~+CD25~(high) /CD4~+百分比减低(P＜0.05＝,但绝对计数增高(P＜0.01＝;新生儿脐血CD4~+CD25~+ 及CD4~+CD25~(high) T细胞中Foxp3~+表达较成人外周血减低(P＜0.01＝;新生儿脐血Foxp3 mRNA表达水平亦较成人外周血减低(P＜0.05＝.结论:新生儿脐血中存在单纯且数量较多的CD4~+CD25~(high) 调节性T细胞,但Foxp3的表达水平低于成人外周血,它们可能具有独特的免疫调节作用,但功能尚未成熟.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+CD25~+Treg与CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。     

MicroRNA-126调控CD4~+Foxp3~+T细胞的外周诱导及功能

目的探讨Micro RNA-126对CD4~+Foxp3~+Tregs的外周诱导调控及功能的影响。方法分选Balb/c小鼠脾脏CD4~+CD25-初始T细胞,在anti-CD3/CD28的激活下,用TGF-β进行诱导培养,在第3、5天FACS检测CD4~+Foxp3~+Tregs的比例,Real-time PCR检测mi R-126的表达;采用mi R-126抑制剂抑制mi R-126后,FACS检测CD4~+Foxp3~+Tregs的比例,Real-time PCR检测mi R-126的表达;进而采用mi R-126 ASO下调CD4~+Foxp3~+Tregs中mi R-126的表达,Real-time PCR检测IL-10和TGF-β的表达,CFSE标记技术分析CD4~+Foxp3~+Tregs免疫抑制功能。结果 mi R-126在活化的Tregs中的表达高于在活化的CD4~+CD25-T细胞中的表达(P0.05);TGF-β在体外诱导生成Foxp3~+CD4~+T细胞的比例组间差异具有统计学意义(P0.05),同时在Tregs的诱导过程中,mi R-126的表达上调(P0.05);CD4~+CD25-T细胞体外瞬时转染mi R-126抑制剂,与对照组比较,Foxp3~+CD4~+T细胞的比例组间差异具有统计学意义(P0.05),mi R-126抑制剂能有效下调mi R-126的表达(P0.05);与对照组相比,mi R-126 ASO转染组Tregs中Foxp3、CTLA-4和GITR的表达均降低(P0.05),且TGF-β和IL-10的m RNA相对表达均降低(P0.05);CFSE标记细胞增殖实验显示,mi R-126 ASO Tregs组CD4~+CD25-T细胞增殖与Tcon组、Control Tregs组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论下调mi R-126的表达能显著削弱CD4~+Foxp3~+Tregs的外周诱导和免疫抑制功能。     

反复流产妇女外周淋巴细胞亚群分布及T细胞CD4~+CD25~+表达特点

目的探讨反复流产女性外周淋巴细胞亚群分布状况及T细胞CD4+CD25+表达情况。方法选取2017年1月～2019年3月于医院就诊的90例反复流产女性作为研究观察组,另选取同期于医院进行产检正常健康妊娠者60例作为研究对照组。分别采集两组受检对象血液检测其外周血液中T细胞、B细胞、NK细胞和T细胞CD4~+CD25~+及CD4~+/CD8~+情况。结果观察组外周血CD3+、B细胞CD3-CD19+含量与对照组相比较,P0.05;观察组CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+和CD4~+CD25~+及NK细胞CD3-CD56~+含量分别为(43.51±2.59)%、(25.17±3.12)%、(1.81±0.22)%、(5.14±1.39)%、(14.79±3.04)%与对照组(40.25±2.47)%、(29.28±2.87)%、(1.41±0.14)%、(10.38±2.63)%、(9.28±2.67)%相比较,差异显著,具有统计学意义(P0.05)。结论反复流产女性存在外周淋巴细胞亚群分布及T细胞CD4+CD25~+表达异常情况,因此临床可通过检测女性外周淋巴细胞亚群分布及T细胞CD4~+CD25~+表达来判断其预后,从而为临床及时干预提供参考依据,有利于指导临床治疗,积极改善患者预后。     

HIV感染者外周血CD8~+NK细胞百分比及功能变化研究

目的探讨HIV感染者外周血中CD8~+NK细胞百分比的变化与表达CD107a的能力。方法选取未经高效抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)治疗的HIV慢性感染者,感染者按照CD4~+T细胞数量分成高、低2组,用流式细胞仪检测其外周CD8~+NK细胞百分比的变化情况和CD107a的表达量。结果 HIV感染者外周血中CD8~+NK细胞的百分比明显低于正常人(P=0.011 1),CD8~+NK细胞的百分比与病毒载量成明显的负相关关系(r=-0.541 9,P=0.045 3)。K562细胞系刺激后,CD4~+T细胞高组CD107a的表达量明显增高。结论具有抗病毒作用的CD8~+NK细胞在HIV感染后百分比下降;CD8~+NK细胞水平高以及功能较强者HIV病毒水平相对降低,CD4~+T细胞数量相对高。     

妊娠浓度的雌激素对诱导CD4~+CD25~-naive T细胞转化为CD4~+CD25~+Treg细胞的影响

目的 体外观察妊娠浓度的雌激素能否诱导CD4+CD25-naiveT细胞转化为CD+CD25+Treg细胞,并探讨其相关性.方法 以CD4+CD25-T细胞作为反应细胞,实验组加入妊娠水平的雌激素(E2)及CD3/CD28单抗作为刺激原培养72 h,设阴性对照组(仅加入CD3/CD28单抗)和空白对照组.72 h后检测各组中CD4+CD25+T细胞和CD4+Foxp+T细胞比例变化及Foxp3 mRNA表达.结果 1)阴性对照组CD+CD25+T细胞比例较空白对照组显著增高(P＜0.001),而实验组CD4+CD25+T细胞比例进一步升高(P＜0.001).2)阴性对照组不能诱导CD4+Foxp+T细胞比例增高,但实验组CD4+Foxp3+T细胞的比例则较其它2组均显著升高(P＜0.001).3)RT-PCR提示阴性对照组Foxp3 mRNA的表达量较空白对照组无显著差异(P＞0.05);而实验组F0xp3 mRNA的表达昔较其它2组均显著升高(P＜0.001).结论 体外淋巴细胞刺激实验提示妊娠状态下雌激素的高水平与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例的升高密切相关.     

浸润性膀胱癌组织中E2F3表达与CD8~+ T细胞浸润数量的相关性分析

目的探讨膀胱癌组织中E2F转录因子3(E2F3)表达与CD8~+T细胞浸润的特点及其与膀胱癌恶性生物学行为之间的相关性。方法采用免疫组织化学染色法检测110例不同病理分期、分级的膀胱癌组织和相应正常膀胱组织中E2F3的表达情况及CD8~+T细胞浸润特征,Western blot法检测82例膀胱癌组织及相应正常膀胱组织中E2F3、CD8蛋白水平,直线相关分析方法分析E2F3表达与CD8~+T细胞浸润的相关性。结果膀胱癌组织中E2F3高表达,膀胱癌组织中E2F3表达随肿瘤分期、分级增加逐步增高,而相应肿瘤内CD8~+T细胞浸润数目逐步减少,E2F3高表达组肿瘤内CD8~+T细胞浸润数目显著低于E2F3低表达组。E2F3阳性率及CD8~+T细胞的浸润数量减少与肿瘤病理分期、分级、肿瘤大小、伴有淋巴结转移或远处转移等肿瘤临床侵袭性指标密切相关。相关性分析显示肿瘤E2F3表达水平与肿瘤内CD8~+T细胞浸润数目呈负相关。生存分析表明E2F3高表达患者术后5年预后更差。结论膀胱癌组织中E2F3水平与肿瘤侵袭性关系密切,与肿瘤内CD8~+T细胞浸润数量呈负相关。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞/Th17细胞失衡与婴幼儿脓毒症

目的 观察不同免疫状态下婴幼儿脓毒症CD4~+CD25~+Foxp3~(high)岫调节性T细胞(Tr)/Th17细胞的变化,探讨婴幼儿脓毒症适应性免疫紊乱可能的机制.方法 婴幼儿脓毒症48例,健康同龄儿童对照组26例.用流式细胞术榆测CD14~+单核细胞HLA-DR表达率,CD4~+CD25~+Foxp3~(high)Tr 比例及Th17细胞比例;用ELISA法检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β及IL-17A等浓度,计算IL-10/TNF-α比值;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4~+T细胞Foxp3、ROR-γt mRNA表达及IL-17A mRNA表达.以CD14~+单核细胞HLA-DR表达＞或＜30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组).结果 DR-L组IL-10/TNF-α比值明显高于DR-H组(P＜0.05)及对照组(P＜0.05).CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞比例及转录因子Foxp3基因表达DR-L组明显高于对照组及DR-H组(P＜O.05).Th17细胞比例、IL-17A血浓度、Th17细胞IL-17A基因表达及转录因子ROR-γt基因表达DR-H组及DR-L组均明显高于对照组(P＜0.05),两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).DR-H组和DR-L组Th17细胞主要分化调控因子IL-6、IL-1β血清浓度明显高于正常对照组(P＜0.05),两组问IL-6、IL-1β浓度差异无统计学意义(P＞0.05),DB-L组CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞主要调节因子TGF-β血浓度明显高于DR-H组及对照组(P＜0.05).结论 Th17持续过度活化可能是导致脓毒症前炎症细胞因子/趋化因子持续增高的原因之一;CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Th17细胞失衡可能参与脓毒症混合性拮抗反应综合征(MARS)的发生发展,婴幼儿脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Thl7细胞失衡的原因之一.     

TIM-3在人非小细胞肺癌CD4~+肿瘤浸润淋巴细胞的表达增强提示预后不良

目的研究负性共刺激分子T细胞免疫球蛋白和黏蛋白分子3(TIM-3)在人非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤浸润淋巴细胞的表达及临床意义。方法采用免疫荧光标记结合流式细胞术检测56例NSCLC患者肿瘤组织和癌旁组织浸润淋巴细胞表面TIM-3的表达并分析其表达与患者预后的关系。结果 TIM-3在肿瘤浸润CD4+T细胞和CD8+T细胞的表达率分别为(28.64±10.46)%和(30.77±15.58)%,高于癌旁组织的(13.32±6.95)%和(12.98±8.19)%;TIM-3与程序性死亡蛋白1(PD-1)在肿瘤浸润淋巴细胞呈现共表达;TIM-3在肿瘤浸润CD4+T淋巴细胞的表达与NSCLC患者的生存预后有关。结论TIM-3的表达在肿瘤免疫中起到负性调节作用,对患者的生存预后有不良影响。