辛二酰苯胺异羟肟酸通过抑制组蛋白去乙酰化酶改善小鼠心肌肥厚的研究

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)改善小鼠心肌肥厚的作用,为防治心肌肥厚提供新思路。方法:选取60只昆明小鼠,随机分为正常组、假手术组、心肌肥厚组、心肌肥厚+SAHA组,通过部分结扎小鼠胸主动脉建立心肌肥厚模型,最终每组纳入6只。采用苏木素伊红(HE)染色观察小鼠心肌细胞,超声心动图检测小鼠心功能,比色法检测HDAC活性,小鼠心肌组织中HDAC亚型HDAC5和β-肌球蛋白重链(β-MHC)信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平分别运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测。结果:HE染色结果表明心肌肥厚组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、细胞核深染。心肌肥厚组小鼠左心室舒张末期直径、左心室舒张末期容积均显著低于假手术组(P0.05),而室间隔明显较假手术组增厚(P0.05)。心肌肥厚组小鼠HDACs活性显著高于假手术组(P0.05);心肌肥厚组HDAC5和β-MHC的mRNA及蛋白表达水平均显著高于假手术组(P0.05)。SAHA能够显著降低HDAC5表达水平,显著下调心脏肥厚相关基因β-MHC的表达并改善小鼠心功能和心肌肥厚(P均0.05)。结论:HDAC参与了心肌肥厚的发生,HDAC抑制剂SAHA通过抑制HDAC5的表达从而改善小鼠心肌肥厚。     

罗氟司特对压力超负荷诱导的小鼠心肌重构的影响及其机制

探讨罗氟司特(RM)对压力负荷诱导的小鼠心肌重构的作用及机制。方法 利用主动脉缩窄术(AB)构建小鼠心肌重构模型,采用随机数表法,将40只雄性C57/B6小鼠(8~10周)随机分为假手术组(Sham组),AB组,AB+RM(1mg/kg)组及AB+RM(3mg/kg)组,每组10只。AB术后第2天给予小鼠RM灌胃处理,连续灌胃至术后6周。随后行超声心动图检测各组小鼠心脏功能,包括左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室收缩末期内径(LVESD)及左室舒张末期内径(LVEDD);采用HE及天狼猩红染色观察各组心脏组织肥厚及纤维化状况;采用qPCR 法检测心肌肥厚,纤维化及炎症相关基因的mRNA 的表达,包括心钠素、脑利钠肽、β-MHC、结缔组织生长因子、fibronectin、collagen1、collagan3、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α);采用免疫组织化学染色标记CD45及CD68检测心肌组织白细胞和巨噬细胞浸润水平;采用蛋白免疫印迹法检测心肌组织中磷酸化的p38(P-p38)及总p38(T-p38)的蛋白表达水平。采用 SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析。结果 术后6周,与Sham组相比,AB组小鼠LVEF及LVFS水平显著降低,LVESD及LVEDD水平明显升高,心肌肥厚及心肌纤维化水平明显升高,心肌组织中CD45、CD68、IL-6及TNF-α的蛋白表达水平明显增高(P＜0.05);与AB组相比,AB+RM(1mg/kg)组及AB+RM(3mg/kg)组小鼠心功能明显改善,心肌肥厚及纤维化水平明显被抑制,心肌组织炎症水平明显降低(P＜0.05);免疫印迹结果显示,RM(1及3mg/kg)能够明显抑制AB诱导的小鼠心肌组织p38的磷酸化(P＜0.05)。结论 罗氟司特可减轻压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚及纤维化,主要通过调节p38丝裂原激活的蛋白激酶信号通路及炎症反应发挥上述作用。     

龙胆苦苷对压力负荷致小鼠心肌肥厚的保护作用

目的　观察龙胆苦苷（GPS）对主动脉弓缩窄术诱导的C57BL小鼠心肌肥厚是否有预防作用。方法　40只雄性C57BL小鼠随机分成假手术组（n8）和心肌肥厚模型组（n32）,心肌肥厚模型组通过主动脉弓缩窄术建立心肌肥厚模型。术后24　h随机分成心肌肥厚模型组和龙胆苦苷低［2.5　mg/（kg·d）］、中［5.0　mg/（kg·d）］、高［10.0　mg/（kg·d）］剂量组,分别给予生理盐水和不同剂量的龙胆苦苷处理4周。4周后进行心脏超声检查,并测量心脏重量/体重（HW/BW）、心脏重量/胫骨长度（HW/TL）、左心室舒张期末内径（LVEDD）、左心室收缩期末内径（LVESD）、左心室射血分数（LVEF）和短轴缩短率（FS）。PCR技术检测心肌组织中心房钠尿肽（ANP）、脑钠尿肽（BNP）、β肌球蛋白重链（β-MHC）表达的水平,并行病理学检查。结果　与心肌肥厚模型组相比,龙胆苦苷［当剂量达到10.0　mg/（kg·d）］干预4周后,LVEDD较之下降24.9%,LVESD较之下降26.3%;LVEF较之升高49.5%,FS较之升高62.6%,差异均有统计学意义。初步证实龙胆苦苷能够显著降低心肌肥厚参数（心脏重量/体重）（P<0.01）,显著降低心肌细胞平均横截面积（P<0.01）。与心肌肥厚模型组相比,龙胆苦苷组ANP、BNP和β-MHC的表达水平显著降低（P<0.05）。结论　龙胆苦苷对压力超负荷等诱导的心肌肥厚有保护作用。     

组蛋白乙酰化修饰在2种不同方法建立小鼠心肌肥厚模型中的作用

目的:探讨组蛋白乙酰化修饰失衡在2种不同方法建立小鼠心肌肥厚模型中的作用。方法:选取昆明小鼠为研究对象,按照随机数字表法随机分为5组:正常组、0.9%氯化钠溶液组、苯肾上腺素组、手术组和假手术组。苯肾上腺素组给予苯肾上腺素皮下注射,手术组给予部分结扎腹主动脉建立小鼠心肌肥厚模型,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测心肌肥厚相关标志物心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)及β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)mRNA表达水平,免疫印迹(western blot,WB)检测小鼠心肌组织中组蛋白H3赖氨酸残基9位乙酰化(H3K9ac)的表达,比色法检测心肌组织中组蛋白乙酰化酶(histone acetylases,HATs)、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)活性,超声心动图观察小鼠心肌肥厚情况。结果:RT-PCR结果表明苯肾上腺素组、手术组小鼠心肌组织中ANP和β-MHC mRNA表达水平分别显著高于0.9%氯化钠溶液组、假手术组(P0.05);超声心动图结果显示苯肾上腺素组、手术组小鼠室间隔厚度、左室前壁厚度分别显著高于0.9%氯化钠溶液组、假手术组(P0.05),而左室舒张末期直径则分别显著低于0.9%氯化钠溶液组、假手术组(P0.05)。Western blot及比色法结果显示:苯肾上腺素组、手术组小鼠心肌组织中组蛋白H3K9ac的乙酰化水平及HATs活性分别显著高于0.9%氯化钠溶液组、假手术组(P0.05),而HDACs活性则分别显著低于0.9%氯化钠溶液组、假手术组(P0.05)。结论:组蛋白乙酰化修饰失衡均参与了2种不同方式所致的小鼠心肌肥厚。     

缬沙坦对心力衰竭家兔心肌细胞核及肌浆网钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响

【】目的 探讨家兔慢性心力衰竭(心衰)时心肌细胞核及肌浆网钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)蛋白表达及活性的改变及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦长期干预的意义。方法 24只家兔随机分为3组,假手术组、心衰组和缬沙坦组各8只,通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型,于术后7周观察左心室结构、血流动力学的变化及CaMKⅡ的表达和活性的改变。结果 与假手术组比较,心衰组左心室重量指数(LVMI)、左心室舒张末压(LVEDP)显著升高(P<0.05),左心室缩短率(LVFS)及左室射血分数(LVEF)明显降低(P<0.05);与心衰组比较,缬沙坦组LVMI、LVEDP显著降低(P<0.05),LVFS及LVEF明显升高(P<0.05)；心衰组细胞核及肌浆网CaMKⅡ蛋白表达及活性显著高于假手术组 (P<0.05)；缬沙坦组细胞核及肌浆网CaMKⅡ蛋白表达及活性显著低于心衰组(P<0.05)。结论 缬沙坦长期干预心力衰竭,能够改善心脏舒缩功能,可能与其降低细胞核及肌浆网CaMKⅡ蛋白表达及活性有关。     

富含亮氨酸重复蛋白8A膜蛋白对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的探讨干扰富含亮氨酸重复蛋白8A(LRRC8A)膜蛋白对心肌缺血再灌注(IR)损伤心脏功能的影响及可能机制。方法选择SPF级健康雄性SD大鼠48只随机分为假手术组、模型组、基因沉默(LRRC8A-siRNA)组和空载体(Scrambled-siRNA)组,每组12只。模型组、基因沉默组和空载体组建立心肌IR损伤大鼠模型;假手术组不进行结扎。假手术组和模型组于术前24h注射PBS,基因沉默组和空载体组则分别注射LRRC8A-siRNA、Scrambled-siRNA混合液;再灌注2h后检测左心室舒张期末内径(LVEDD)、左心室收缩期末内径(LVESD)、LVEF和左心室短轴缩短率(LVFS)及心肌活性氧、自噬相关蛋白LC3Ⅱ、溶酶体相关蛋白(LAMP2)、ATP、血清NF-κB、TNF-α和白细胞介素6(IL-6)、肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;观察心肌组织病理形态学变化;免疫组织化学法检测心肌LC3Ⅱ和LAMP2表达。结果模型组LVEDD、LVESD、血清CK、CK-MB、LDH、活性氧、NF-κB、TNF-α、IL-6水平及LC3Ⅱ表达明显高于假手术组,而LVEF、LVFS、ATP水平及LAMP2表达明显低于假手术组,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,基因沉默组LVEDD、LVESD、血清CK、CK-MB、LDH、活性氧、NF-κB、TNF-α和IL-6水平及LC3Ⅱ表达明显降低(P0.01),而LVEF[(0.65±0.04)%vs (0.42±0.08)%]、LVFS[(48.91±3.01)%vs (28.63±8.17)%]、ATP水平[(11.1±0.2)ng/g vs(0.9±0.1)ng/g]及LAMP2表达(5.23±0.50 vs 0.41±0.03)明显升高(P0.01);空载体组各指标与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。光学显微镜下可见,基因沉默组心肌细胞形态基本正常,较少发生炎性细胞浸润。结论干扰LRRC8A膜蛋白能够通过抑制活性氧过量产生、炎症及过度自噬,保护心肌线粒体功能,达到预防心肌IR损伤及保护心脏功能的作用。     

阿替洛尔对小鼠心肌肥厚干预作用的研究

目的:观察β1受体阻滞剂阿替洛尔(atenolol,ATE)对主动脉弓缩窄术(aortic arches constriction,AAC)诱导的C57BL小鼠心肌肥厚模型的治疗作用。方法:通过AAC建立心肌肥厚小鼠模型,将24只雄性C57BL小鼠随机分为正常对照组、假手术(Sham)组、AAC组和AAT+ATE组,每组6只小鼠(n=6)。给予ATE 4周后,进行心脏超声检查,并测量心脏质量/体质量(HW/BW)、左心室质量/体质量(LVW/BW)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVEDS)、左室射血分数[LVEF(%)]和短轴缩短率[FS(%)]。应用PCR检测心肌组织中心房钠尿肽(ANP)、脑尿钠肽(BNP)和肌球蛋白重链(α-MHC)基因表达的水平,并行病理学检查。结果:与AAC组比较,正常对照组、Sham组和AAC+ATE组的LVEDD分别降低24.9%、17.7%和18.2%,LVEDS分别降低32.9%、34.1%和26.3%;LVEF(%)分别提高65.6%、75.8%和49.5%,FS(%)分别提高79.7%、100.0%和62.6%(均P<0.05);AAC+ATE组与AAC组相比,LVM/BW和心肌细胞平均横截面积均明显降低(P<0.01);而与正常对照组相比,细胞平均面积明显增大(P<0.05)。AAC+ATE组中ANP、BNP和α-MHC的表达水平显著低于AAC组(P<0.05)。结论:通过阻断β1受体ATE,可以对压力超负荷等原因诱导的心肌肥厚发挥治疗作用。     

红景天苷对慢性心力衰竭大鼠心室重构及肾素血管紧张素醛固酮系统的影响

目的探讨红景天苷对慢性心力衰竭大鼠心室重构及肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)的影响。方法选取SD大鼠行腹主动脉缩窄法制作心力衰竭模型,8 w后取存活的80只模型大鼠随机分为模型组和红景天苷高、中、低剂量组(n=20),红景天苷高、中、低剂量组分别接受24、12、6 mg/kg灌胃处理,每天1次,连续8 w。同时选取20只仅开腹而不结扎的大鼠作为假手术组,假手术组和模型组每天以等量蒸馏水灌胃。比较各组大鼠的超声心动图指标〔左室舒张末内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)〕、心室重构相关指标〔心脏指数(CI)、左心室重量指数(LVMI)、心肌胶原容积分数(CVF)、心肌血管周围胶原面积比(PVCA)及心肌羟脯氨酸〕和RAAS指标〔肾素(PRA)、血管紧张素(Ang)Ⅱ和醛固酮(ALD)〕的水平。结果与假手术组比较,模型组的LVEDD、LVESD、CI、LVMI、CVF、PVCA、羟脯氨酸含量及RAAS指标均升高,LVEF、LVFS降低,以上提示造模成功,模型大鼠发生心力衰竭、心室重构及RAAS激活。红景天苷高、中、低剂量组LVEDD、LVESD、心室重构及RAAS相关指标均低于模型组(P0.05),LVEF、LVFS均高于模型组(P0.05)。红景天苷处理的大鼠中,仅高剂量组的羟脯氨酸含量与假手术组的无差异(P0.05)。结论红景天苷能改善心力衰竭大鼠的心功能及心室重构,可能与其改善RAAS激活有关,且以上改善效应与红景天苷的剂量有关。     

自发性高血压大鼠左心室心肌组织骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂、转化生长因子β1表达情况及其与室性心律失常易感性的关系研究

背景动物实验研究表明,左心室心肌组织骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(BAMBI)表达上调可对抗转化生长因子β1(TGF-β1)的致心肌纤维化作用,而心肌纤维化又与室性心律失常(VA)密切相关,因此推测BAMBI和TGF-β1可能参与了高血压患者VA的发生发展过程。目的分析自发性高血压大鼠左心室心肌组织BAMBI、TGF-β1表达情况及其与VA易感性的关系。方法2018年7月-2019年7月,选取6只14周龄雄性Wistar大鼠作为对照组,6只与Wistar大鼠同源的雄性自发性高血压大鼠作为实验组;两组大鼠均饲养至22周龄。比较两组大鼠22周龄时收缩压、心率、心脏彩超检查结果〔包括左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短率(LVFS)〕、VA诱发成功率,左心室心肌组织BAMBI、TGF-β1 mRNA及其相对表达量。结果两组大鼠22周龄时心率和LVEDD比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组大鼠22周龄时收缩压高于对照组,LVESD大于对照组,LVEF和LVFS低于对照组(P<0.05)。实验组大鼠22周龄时VA诱发成功率高于对照组(P<0.05)。实验组大鼠22周龄时左心室心肌组织BAMBI和TGF-β1 mRNA及其相对表达量均高于对照组(P<0.05)。结论22周龄自发性高血压大鼠左心室心肌组织中BAMBI和TGF-β1表达上调可导致心肌纤维化加重、左心室重构,进而增加VA易感性。     

Notch3介导RhoA/ROCK/Hif1α轴对心肌梗死心功能的影响

目的 分析Notch3介导RhoA/ROCK/Hif1α轴对心肌梗死(MI)心功能的影响。方法 将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和Notch3过表达组三组,每组各15只。大鼠心肌注射Notch3慢病毒过表达后构建MI模型。术后12周检测心功能及心脏血流动力学指标,观察心肌组织结构,并检测心肌组织Notch3和RhoA/ROCK/Hif1α轴相关蛋白水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Notch3表达水平、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末压(LVEDP)显著降低,左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末压(LVESP)、左心室压力最大上升速率(LV+dp/dtmax)、左心室压力最大下降速率(LV-dp/dtmax)、心肌组织RhoA、ROCK1、ROCK2、Hif1α表达水平显著增加(P<0.05);Notch3过表达组大鼠LVESD和LVEDD显著小于模型组,心肌组织Notch3表达水平、LVEF、LVEDP显著高于模型组(P<0.05);LVESP、LV+dp/dtmax和LV-dp/dtmax、心肌...     

淫羊藿次苷Ⅱ通过沉默信息调控子1-叉头蛋白O1通路减轻心肌缺血再灌注损伤

目的探究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用,初步探究可能的作用机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组、淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)组、沉默信息调控子1(SIRT1)抑制剂(Selisistat)组、ICSⅡ+Selisistat组;各组大鼠预处理后采用左冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血再灌注损伤模型大鼠。超声检测大鼠心室功能变化;HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化情况;酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Tunel染色法检测心肌组织凋亡;免疫印迹法检测心肌组织中SIRT1、乙酰化叉头蛋白O1(Ac-FOXO1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Cleaved-Caspase-3、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组左心室舒张末压(LVEDP)升高,平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)降低,cTnI、TNF-α、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,SIRT1表达降低,Ac-FOXO1表达升高,心肌组织Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P0.05)。与模型组相比,ICSⅡ组LVEDP降低,MAP、LVSP、LVEF、LVFS升高,cTnI、TNF-α、IL-1β水平降低,细胞凋亡率降低,SIRT1表达升高,Ac-FOXO1表达降低,心肌组织Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P0.05);Selisistat组LVEDP升高,MAP、LVSP、LVEF降低,cTnI、TNF-α、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,SIRT1表达降低,Ac-FOXO1表达升高,心肌组织Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P0.05)。ICSⅡ+Selisistat组LVEDP、cTnI、TNF-α、IL-1β、细胞凋亡率、Ac-FOXO1表达、心肌组织Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达低于Selisistat组,MAP、LVSP、LVEF、LVFS水平和SIRT1、Bcl-2蛋白表达高于Selisistat组(均P0.05)。结论心肌缺血再灌注损伤大鼠ICSⅡ预处理后,可缓解心肌组织炎症损伤,改善心室功能,其机制可能与激活SIRT1/FOXO1通路有关。     

内源性二氧化硫抑制血管紧张素Ⅱ致心肌肥厚小鼠心肌细胞自噬的研究

目的探讨内源性二氧化硫(SO_2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心肌肥厚小鼠心肌细胞自噬的抑制作用。方法 9周龄健康C57BL小鼠16只,按随机数字表法随机分为野生型对照组(WT Con组)、野生型+AngⅡ组(WT AngⅡ组);心肌特异性天冬氨酸氨基转移酶2(AAT2)转基因小鼠16只,按随机数字表法随机分为AAT2对照组(AAT2 Con组)、AAT2+AngⅡ组(AAT2 AngⅡ组)。每组8只。每只小鼠在背部皮下植入预装生理盐水或AngⅡ的胶囊渗透压泵,连续给药4周。检测4组小鼠全心重/体重(HW/BW)比值;HE染色观察心肌细胞结构变化;免疫组织化学染色检测心肌标志分子α重链肌球蛋白(α-MHC)的表达;高效液相色谱检测心肌组织SO_2含量;Western blot检测内源性SO_2生成酶AAT1和AAT2、心肌表型标志分子α-MHC和β-MHC以及心肌自噬标志分子Beclin-1、LC3、Atg4B以及p62蛋白表达变化。结果与WT Con组相比,WT AngⅡ组心肌组织SO_2含量显著降低(P0.01),AAT1蛋白表达无明显变化(P0.05),AAT2蛋白表达显著减少(P0.05),HW/BW明显增加(P0.01),心肌纤维明显增粗,免疫组织化学法显示心肌细胞浆中α-MHC蛋白表达明显减弱,Western blot结果显示心肌细胞α-MHC蛋白表达显著降低(P0.01),β-MHC蛋白表达显著升高(P0.01),心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高,Beclin-1和Atg4B蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低(均P0.01)。与WT Con组相比,AAT2 AngⅡ组小鼠心肌组织SO_2含量和AAT2蛋白表达显著升高(P0.01),AAT1的蛋白表达无显著变化(P0.05),HW/BW显著降低(P0.05),心肌纤维的增粗显著减轻,α-MHC蛋白向β-MHC蛋白的转化显著降低(P0.01),心肌细胞自噬水平显著降低。结论内源性SO_2/AAT2体系可抑制AngⅡ致小鼠心肌肥厚及心肌细胞自噬。     

左西孟旦调控磷酸酶基因蛋白激酶B通路降低猪冠状动脉微栓塞后心肌细胞的凋亡

目的探讨左西孟旦能否通过调控磷酸酶基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)通路降低猪冠状动脉微栓塞(coronary microembolization,CME)后心肌细胞的凋亡。方法选择12周龄健康小型猪15只,随机分为假手术组、CME组、左西孟旦组,每组5只。猪CME模型建立,观察12h进行心脏超声检测,评估心功能的指标包括左心室舒张末期内径(LVEDD)、LVEF、心排血量及左心室短轴缩短率(LVFS)。TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western blot检测PTEN、Akt、磷酸化Akt、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、活化caspase-3表达水平。结果与假手术组比较,CME组LVEDD明显升高,CME组和左西孟旦组LVEF、LVFS及心排血量明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与CME组比较,左西孟旦组LVEF、LVFS及心排血量明显升高,LVEDD明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与假手术组比较,CME组心肌细胞PTNE和活化caspase-3表达明显升高,CME组磷酸化Akt表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与CME组比较,左西孟旦组心肌细胞PTNE和活化caspase-3表达明显降低(0.236±0.095 vs 0.485±0.135,0.364±0.196 vs 0.725±0.436,P0.05),磷酸化Akt表达明显升高(0.972±0.467 vs 0.723±0.265,P0.05)。结论左西孟旦预处理可明显减少CME后心肌细胞凋亡并改善心功能,其机制可能是通过调控PTEN/Akt通路来实现。     

抑制1-磷酸鞘氨醇裂解酶活性加重缺血性心力衰竭

目的:观察1-磷酸鞘氨醇(S1P)裂解酶(SPL)在小鼠缺血性心衰(HF)模型中的作用。方法:将60只成年雄性C57/BL6J小鼠随机分为以下4组:假手术(Sham)组、心肌梗死(MI)组、假手术+THI(Sham+THI)组[THI是SPL的抑制剂]及MI+THI组,每组15只(n=15),将25 mg/L THI溶于饮水中,于手术24 h后连续饲喂2周。MI4周后,采用ELISA试剂盒测定心肌中S1P的含量。根据心脏质量/体质量(HW/BW)评价心肌肥厚。用小动物心脏超声评估小鼠心脏结构和功能,经Masson三色染剂染色法观察心脏纤维化。用Western blot检测转化生长因子-β(TGF-β)蛋白的表达。实时PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、心房钠尿肽(ANP)、脑钠尿肽(BNP)和平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)mRNA的水平。结果:与MI组相比,MI+THI组小鼠心肌组织中S1P的含量增加(P0.01);左心室射血分数(LVEF)降低(P0.01),左心室收缩末期内径(LVESD)和舒张末期内径(LVEDD)均增加(均P0.05),HW/BW增加(P0.01),心脏纤维化加重;TGF-β蛋白的表达增加(P0.01);Ⅰ、Ⅲ型胶原、ANP、BNP和α-SMA mRNA的水平均显著增加(均P0.01)。与Sham组相比,Sham+THI组小鼠上述指标无显著差异。结论:抑制SPL的活性可能增加梗死后心肌病理性S1P信号的激活,加重MI后的心脏重构和HF。     

瑞舒伐他汀对急性心肌梗死大鼠心肌重构的作用及其机制

目的探讨瑞舒伐他汀对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌重构的作用及其机制。方法选择健康成年雄性SD大鼠60只,通过结扎冠状动脉左前降支建立AMI大鼠模型51只,按照随机数表法分成假手术组、模型组和他汀组,每组各17只。他汀组大鼠灌胃给药瑞舒伐他汀钙片10 mg/(kg·d),1/日,另外两组大鼠给予等量的蒸馏水,连续给药6周。采用彩色多普勒超声诊断仪检测左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)及左室收缩末期内径(LVESD)。应用RT-PCR技术检测心肌组织基质金属蛋白酶-2/9/10(MMP2/9/10)、Perionstin蛋白及转化生长因子-β1(TGF-β1)m RNA表达情况。结果模型组和他汀组大鼠的LVEDD及LVESD均明显高于假手术组,LVEF显著低于假手术组,差异均具有统计学意义(P均0.05)。与模型组相比,他汀组大鼠的LVEDD及LVESD明显下降,LVEF显著升高,差异均具有统计学意义(P均0.05)。与假手术组相比,其余两组大鼠心肌组织中MMP-2/9/10、Perionstin蛋白及TGF-β1的m RNA表达均明显升高;其中他汀组大鼠心脏中MMP2/9/10、Perionstin蛋白及TGF-β1的m RNA表达显著低于模型组,且差异均具有统计学意义(P均0.05)。药物干预结束后,假手术组大鼠存活率为76.47%(13/17)明显高于模型组的41.18%(7/17)和他汀组的64.71%(11/17),同时他汀组的存活率显著高于模型组,且差异均具有统计学意义(P均0.05)。结论瑞舒伐他汀可改善AMI大鼠心脏功能,可能通过调节MMP2/9/10、Perionstin蛋白及TGF-β1的m RNA表达来调控其心肌重构。     

二十碳五烯酸在糖尿病心肌病损伤中的作用及机制

目的 探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对糖尿病心肌病损伤的作用及其机制。 方法 小鼠随机分为正常 (Con) 组、EPA处理 (Con+EPA) 组、糖尿病模型 (DM) 组、糖尿病模型EPA处理 (DM+EPA) 组。腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）构建糖尿病小鼠模型,超声检测各组小鼠心脏功能,麦胚凝集素 (wheat germ agglutinin, WGA)检测心肌细胞横截面积,TUNEL化学染色检测细胞凋亡率,Western blot检测小鼠心脏组织cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、动力相关蛋白(dynamin-related protein, Drp)1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phospho-AMP-activated protein kinase, P-AMPK）的表达水平。 结果 与Con组相比,DM组小鼠左心室收缩末内径（left ventricular end-systolic diameter, LVESD）和左心室舒张末内径（left ventricular end diastolic diameter, LVEDD）值上调,左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）和左室短轴缩短率（left Ventricular Fraction shortening, LVFS）下降,细胞横截面积增大,凋亡率显著增加,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax表达增加、Bcl-2表达降低,同时p-AMPK/AMPK比值升高,Drp1表达增多（P < 0.05）。但是EPA处理DM小鼠可使LVESD、LVEDD值下调,LVEF、LVFS值上升,心肌横截面积减小,凋亡率降低,并使cleaved caspase-3、Bax表达降低、Bcl-2表达增加（P < 0.05）。而且EPA处理DM小鼠后AMPK磷酸化进一步增加,Drp1表达减少。 结论 EPA通过抑制心肌肥大及凋亡改善糖尿病诱导的心功能损伤,其机制可能与AMPK/Drp1信号相关。     

心脏收缩力调节对慢性心力衰竭兔心肌重构的影响

目的:观察心脏收缩力调节(CCM)对慢性心力衰竭(心衰)兔心肌重构的影响并探讨其可能机制。方法:选取新西兰大白兔30只,分为假手术组、心衰组、心衰+CCM组,各组均n=10。假手术组仅开胸,未行升主动脉套扎。心衰组、心衰+CCM组通过升主动脉根部套扎法建立兔慢性心衰模型,心衰+CCM组模型制作成功后给予4周的CCM治疗。分别于实验第12周末和(或)第16周末对各组实验动物,采用超声心动图检测心脏功能,Masson染色评价心肌组织纤维化及病理形态改变,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆B型利钠肽(BNP)水平,蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测心肌组织I型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、MMP抑制因子(TIMP)1、半乳糖凝集素3蛋白表达水平。结果:(1)超声心动图结果:实验第12周末与假手术组相比,心衰组、心衰+CCM组左心室收缩末内径(LVESD)、左心室舒张末内径(LVEDD)明显扩大,左心室缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)明显下降(P0.05);实验第16周末,与心衰组相比,心衰+CCM组的LVESD、LVEDD、LVEF、LVFS指标明显改善(P0.05)。(2)病理学改变:Masson染色示与假手术组相比心衰组心肌组织胶原纤维含量明显增加(P0.05),CCM可部分减轻心衰心肌组织的胶原纤维沉积(P0.05)。(3)实验第12周末,与假手术组相比,心衰组、心衰+CCM组血浆BNP水平明显升高(P0.05)。实验第16周末,与心衰组相比,心衰+CCM组的血浆BNP水平下降,但仍高于假手术组(P0.05)。(4)Western blot法检测结果:心衰组心肌组织中I型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、MMP2、MMP9、TIMP1、半乳糖凝集素3的蛋白表达水平明显高于假手术组(P0.05),心衰+CCM组心肌组织中I型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、MMP2、MMP9、TIMP1、半乳糖凝集素3的蛋白表达水平较心衰组明显下降(P0.05),但仍高于假手术组(P0.05)。结论:心脏收缩力调节可以改善慢性心衰兔心功能及心肌重构,其机制可能与下调心衰心肌组织中I型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、MMP2、MMP9、TIMP1、半乳糖凝集素3蛋白的表达有关。     

miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡

目的]探讨miR-301影响冠心病大鼠心肌细胞凋亡的机制。 [方法]SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-301激动剂组(agomir miR-301组)、miR-301激动剂对照组(agomir NC组)、Wnt/β-catenin通路抑制剂组(Dkk1组)及agomir miR-301＋Dkk1组,每组10只。除对照组外,其余各组均高脂喂养建立大鼠冠心病模型,连续给药1周后,超声检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、左心室舒张期末内径(LVEDD)和左心室收缩期末内径(LVESD)等心功能指标。HE染色观察大鼠心肌组织形态,TUNEL检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测心肌组织miR-301表达,Western blot检测大鼠心肌组织Caspase-3、Bax、Wnt3a及β-catenin蛋白表达。 [结果]与对照组相比,模型组大鼠LVEF、FS降低49.2%、49.1%,心肌组织miR-301表达水平降低69.0%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平降低60.7%、39.7%(P＜0.05),LVEDD、LVESD升高32.2%、99.6%,心肌细胞凋亡率升高1362.6%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高100.0%、114.6%(P＜0.05);与模型组相比,agomir miR-301组大鼠LVEF、FS升高71.4%、71.8%,心肌组织miR-301表达水平升高1935.5%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平升高102.4%、45.1%(P＜0.05),LVEDD、LVESD降低15.6%、39.2%,心肌细胞凋亡率降低65.0%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低70.2%、78.4%(P＜0.05),而Dkk1可逆转这种现象。 [结论]miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡。     

不同G蛋白耦联受体激酶对β-肾上腺素受体诱导心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活化的影响

目的探讨不同G蛋白耦联受体激酶(GRK)对β-肾上腺素受体(β-AR)诱导的心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活化的影响。方法雄性小鼠(体质量20²8 g)分为野生对照组(WT:SPF级C57BL/6小鼠,作为阳性对照)、GRK2,3,5,6基因敲除组(GRK2KO、GRK3KO、GRK5KO、GRK6KO)和β1、2-AR突变组[GRK(-):β-AR缺乏GRK磷酸化位点,作为阴性对照]。各组小鼠分别给予异丙基肾上腺素(ISO)刺激或等量生理盐水2周,断颈处死动物,切取左心室并剥离粘连组织,经液态氮处理后贮存于-80℃。Western blot用于检测有活性的CaMKⅡ(p-CaMKⅡThr286/T-CaMKⅡ)的表达变化;采用ELISA方法检测心肌匀浆CaMKⅡ活性;HE染色检测心肌细胞组织学变化。结果给予ISO刺激后,与阳性对照WT小鼠变化相同,GRK2KO,GRK3KO和GRK6KO小鼠心肌组织中p-CaMKⅡ表达水平明显增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P<0.05),而GRK5KO与阴性对照GRK(-)小鼠变化相同,ISO刺激组与非刺激组相比心肌组织中p-CaMKⅡ表达无明显增加;ELISA检测也发现,ISO刺激后WT及GRK2KO,GRK3KO,GRK6KO小鼠心肌组织匀浆的CaMKⅡ活性显著增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P<0.05),而GRK5KO及GRK(-)小鼠ISO的CaMKⅡ活性无明显增加。HE染色发现,WT小鼠ISO刺激与非刺激组相比心肌横截面积明显增大[(1388.2±270.3)μm2比(825.5±414.9)μm2,P<0.05],GRK5KO小鼠ISO刺激组与非刺激组比较,心肌横截面积无明显差异[(837.1±112.8)μm2比(883.5±235.9)μm2,P>0.05]。结论 GRK5对β-AR诱导的CaMKⅡ激活是必要的;GRK5基因敲除可能通过引起CaMKⅡ表达改变而改善β-AR持久兴奋诱导的心肌肥厚。     

美托洛尔缓释片对血流储备分数>0.80冠心病患者心功能的影响

目的探讨美托洛尔缓释片对血流储备分数(FFR)0.80冠心病患者心功能的影响。方法选取孙逸仙心血管医院2012—2015年收治的FFR0.80的冠心病患者81例,随机分为对照组39例和观察组42例。在常规治疗基础上,对照组患者给予安慰剂,观察组患者给予美托洛尔缓释片;两组患者均连续治疗3个月。比较两组患者治疗后心率、血压(收缩压、舒张压)、心功能分级,治疗前及治疗后1、2、3个月心功能指标〔左心房内径(LAD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左房室瓣-室间隔间距(EPSS)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室质量(LVM)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)和左心室射血分数(LVEF)〕,随访3个月期间再入院情况。结果观察组患者治疗后心率、收缩压、舒张压低于对照组,心功能分级优于对照组(P0.05)。时间与方法在LVEDD、LVESD、LVFS、LVEDV、LVESV、LVEF上存在交互作用(P0.05),在LAD、EPSS、LVM上无交互作用(P0.05);时间在LAD、LVEDD、LVESD、EPSS、LVFS、LVM、LVEDV、LVESV、LVEF上主效应显著(P0.05);方法在LAD、LVEDD、LVESD、EPSS、LVFS、LVM、LVEDV、LVESV、LVEF上主效应显著(P0.05);治疗后1个月观察组患者LVESD低于对照组(P0.05);治疗后2个月观察组患者LAD、LVEDD、LVESD、LVEDV低于对照组,LVFS、LVEF高于对照组(P0.05);治疗后3个月观察组患者LAD、LVEDD、LVESD、EPSS、LVM、LVEDV、LVESV低于对照组,LVFS、LVEF高于对照组(P0.05)。观察组患者随访期间再入院率低于对照组(P0.05)。结论美托洛尔缓释片可有效降低FFR0.80冠心病患者心肌耗氧量,抑制患者心室重构并改善患者心功能。