养胃解毒合剂对脓毒症大鼠肠组织凋亡因子Bax、Bcl2和Caspase3的影响

目的:通过观察养胃解毒合剂对脓毒症大鼠肠组织TNF-α的表达及Bax、Bcl2、Caspase3相关凋亡蛋白的影响,探讨养胃解毒合剂对脓毒症大鼠的肠保护机制。方法:140只大鼠分为7组,正常组20只、模型组20只、中药正常剂量组20只、中药高剂量(2倍)组20只、西药组(泰能)20只、西药+中药正常剂量组20只、西药+中药高剂量组20只。通过HE染色观察肠组织病理改变;ELISA法对TNF-α的表达进行检测;采用Western Blot(WB)法检测Bax、Bcl2、Caspase3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TNF-α含量明显升高,Bax、Caspase3蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调(P0.01),西药+中药高剂量联合治疗后TNF-α表达明显减少(P0.01)。西药+中药高剂量组肠组织Bax和Caspase3蛋白表达水平下调,Bcl-2蛋白表达水平上调(P0.01)。结论:养胃解毒合剂可能通过抑制TNF-α的表达,介导调控肠组织的Bax、Bcl2、Caspase3凋亡蛋白,起到对脓毒症大鼠的肠保护作用。     

加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织Occludin，ZO-1，Claudin-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10~(-3)g·kg~(-1)),加味四君子汤加减低、中、高剂量组(4.77,9.54,19.08 g·kg~(-1))。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白的表达,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白显著减少(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白均显著增高(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达下调(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达上升(P0.01)。结论:加味四君子汤可能通过增加紧密连接蛋白Occludin,ZO-1,Claudin-1的表达,保护血脑屏障,减轻缺血性脑卒中大鼠脑水肿。     

芍药汤对湿热蕴结型溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜通透性相关蛋白表达的影响

目的:探究芍药汤对湿热蕴结型溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠肠黏膜通透性的作用机理。方法:将60只大鼠随机分为空白组、模型组、芍药汤高、中、低剂量组、柳氮磺吡啶(Salicylazosulfa Pyridin,SASP)组(西药组),每组10只,雌雄各半,采用高脂高糖辛辣饮食+免疫复合法+2,4,6-三硝基苯磺酸(Trinitrobenzenesulfonic Acid,TNBS)结合乙醇的方法复制湿热蕴结型UC大鼠模型,用药干预后第21天处死,取大鼠结肠病变部位组织,检测结肠组织中ZO-1、Occludin mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组中ZO-1、Occludin mRNA表达显著下降(P 0.01);与模型组比较,西药组中ZO-1和Occludin m RNA表达明显升高(P 0.01),芍药汤高、中剂量组ZO-1及Occludin mRNA表达显著提高(P 0.01)。与空白组比较,模型组中ZO-1、Occludin蛋白表达水平显著下降(P 0.01);与模型组比较,西药组、芍药汤各剂量组中ZO-1、Occludin蛋白表达水平明显升高(P 0.01)。结论:芍药汤可以改善湿热蕴结型UC大鼠的肠黏膜通透性,修复肠黏膜屏障功能,达到治疗UC的目的。     

肠激安方对IBS-D大鼠肠道通透性的影响

目的:观察肠激安方对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠肠道通透性的影响,探讨肠激安方治疗IBS-D的作用机制。方法:SD雄性乳鼠,随机分为5组,分别为正常组,模型组,匹维溴铵组(0.018 g·kg~(-1)),肠激安高、低剂量组(33.48,16.74 g·kg~(-1)),除正常组外,均采用"母婴分离+醋酸刺激+束缚应激"三因素结合的方法建立IBS-D模型。给药后,采用透射电镜观察大鼠肠黏膜超微结构;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血浆D-乳酸水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠紧密连接蛋白闭锁蛋白(Occludin),闭合蛋白-1(Claudin-1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Occludin,Claudin-1,紧密连接蛋白-1(ZO-1)mRNA表达。结果:与正常组比较,IBS-D模型组大鼠肠黏膜上皮细胞损伤,微绒毛排列较稀疏,紧密连接间隙增宽,有的不甚明显;血浆D-乳酸水平明显升高(P0.05),结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达降低(P0.05),ZO-1 mRNA表达降低(P0.05)。药物治疗后,与模型组比较,各给药组大鼠肠黏膜细胞损伤修复;匹维溴铵组、肠激安方高剂量组血浆D-乳酸水平明显降低(P0.05),肠激安方低剂量组血浆D-乳酸水平有降低趋势,但不具有统计学差异。各给药组大鼠结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平,ZO-1 mRNA表达水平升高(P0.05)。结论:肠激安方对IBS-D的治疗作用可能是改善肠道通透性实现的。     

大黄通过调控紧密连接蛋白治疗大鼠脓毒症

目的:探究大黄治疗脓毒症大鼠的分子机制。方法:100只Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,大黄高、中、低剂量组(150,100,50 mg·kg~(-1)),除假手术组只暴露盲肠,不进行结扎与穿孔,其余各组采用盲肠结扎法制作大鼠脓毒症模型,记录各组大鼠死亡情况,采用细菌16S rRNA实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测大鼠结肠及肠系膜淋巴结、血液中金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌数量,采用q PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测大鼠结肠紧密连接蛋白紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)和闭锁蛋白(Occludin)水平。结果:与假手术组比较,脓毒症模型组大鼠病死率最高,不同标本的金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌检出率和数量明显升高,ZO-1和Occludin mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,大黄高、中剂量组大鼠病死率降低,大鼠不同标本的上述两细菌检出率和数量有所减低,细菌移位情况减少,大鼠结肠的ZO-1和Occludin mRNA及蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:大黄可调控结肠紧密连接蛋白表达保护肠黏膜屏障,从而抑制脓毒症大鼠细菌移位治疗脓毒症。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠肠黏膜屏障的调控作用

目的观察脾阴虚状态下肠黏膜屏障的改变及滋补脾阴方药的调控作用。方法将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组(简称C组)6只和模型组(简称M组)14只。采用饮食不节与劳倦过度结合耗伤阴液法建立脾阴虚大鼠模型。脾阴虚造模后将M组随机分为脾阴虚组(简称S组)和滋补脾阴方药组(简称Z组)。每周收集粪便进行16S rRNA测序。采用qPCR技术检测空肠Claudin-1、Occludin、ZO-1 mRNA水平;Western Blot法检测空肠Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达;ELISA法检测肠道炎症因子水平。结果在门水平上,S组较C组厚壁菌门比例增加(P0.05),拟杆菌门下降(P0.05),Z组较S组厚壁菌门减少(P0.01),拟杆菌门增加(P0.01);在属水平上,S组较C组乳杆菌属和Paraprevotella属比例升高(P0.05,P0.01),瘤胃球菌属和粘放线菌属下降(P0.01,P0.05);Z组比较于S组乳杆菌属比例明显减少(P0.0001),瘤胃球菌属和粘放线菌属增加(P0.05,P0.01),Paraprevotella属呈下降趋势(P0.05)。与C组比较,S组空肠Claudin-1 mRNA和蛋白表达下降(P0.05,P0.01),Occludin mRNA和蛋白表达降低(P0.01),ZO-1 mRNA和蛋白表达呈降低趋势(P0.05);与S组比较,Z组Claudin-1 mRNA和蛋白水平升高(P0.01),Occludin mRNA和蛋白表达增加(P0.05),ZO-1 mRNA和蛋白水平呈上升趋势。S组空肠IFN-γ和IL-17含量较C组增加(P0.001),sIgA、TGF-β、IL-4与IL-10水平下降(P0.01,P0.001);Z组较S组IFN-γ、IL-17含量减少(P0.001,P0.01),sIgA、TGF-β、IL-4与IL-10含量升高(P0.01,P0.001)。结论滋补脾阴方药能够调节肠道菌群中厚壁菌门、拟杆菌门、瘤胃球菌属、乳酸杆菌属与粘放线菌属比例,增加Claudin-1、Occludin mRNA和蛋白表达,并调节Th1/Th2、Th17/Treg细胞分泌的细胞因子水平,改善脾阴虚大鼠肠黏膜生物屏障、机械屏障及免疫屏障的异常变化。     

电针足三里对脓毒症大鼠肠上皮细胞间紧密连接结构的影响

目的：研究电针足三里对脓毒症大鼠肠上皮细胞间紧密连接结构的影响及可能机制。方法：将60 只SD 大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组各20 只,假手术组仅进行开关腹手术,模型组及电针组用盲肠结扎穿孔法（CLP） 造模,电针组造模后电针双侧足三里,连续3 d。观察大鼠一般情况及造模后3 d生存率, 于造模后3 d 各组取8 只存活大鼠, 留取肠组织电镜观察紧密连接超微结构, 免疫蛋白印迹（Western-blot）、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测闭合蛋白-3（Claudin-3）、闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、咬合蛋白（Occludin） 的蛋白表达及mRNA 表达,酶联免疫吸附法（ELISA） 检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6 （IL-6） 浓度,并抽血测定FITC 标记葡聚糖40 （FD-40） 浓度和D-乳酸水平。结果：造模后3 d 模型组存活率60%,电针组存活率90%,较模型组明显升高（P＜0.05）。与假手术组比较,模型组血清FD-40 浓度、D-乳酸水平及肠组织TNF-α、IL-6 浓度升高（P＜0.05）,肠组织Claudin-3、ZO-1、Occludin 蛋白及mRNA 表达均降低（P＜0.05）;与模型组比较,电针组FD-40 浓度、D-乳酸水平及肠组织TNF-α、IL-6浓度均降低（P＜0.05）,肠组织Claudin-3、ZO-1、Occludin 蛋白及mRNA 表达均升高（P＜0.05）。结论：电针足三里能明显改善脓毒症导致的紧密连接结构病理损伤,上调紧密连接蛋白及mRNA 的表达,从而降低肠道通透性,其机制可能与抑制肠道炎性因子有关。     

基于“逆流挽舟”法探索人参败毒散对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的干预作用＊

目的 观察人参败毒散对TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的影响及其可能机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分组，采用TNBS诱导法造模，人参败毒散各剂量（31.2、15.6、8 g·kg^-1）连续7天灌胃。检测各组血清白介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）含量；结肠组织咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白（Claudin-5）与闭锁蛋白（ZO-1）mRNA和蛋白水平。结果 与空白（Control）组比较，模型（Model）组的血清IL-1β、IL-6、TNF-α、以及IFN-γ含量明显增高（P < 0.05），结肠组织Occludin、Claudin-5与ZO-1 mRNA和蛋白水平明显下调（P < 0.05）。经治疗后，人参败毒散高、中、低剂量（RH、RM、RL）组血清中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量均有降低，RH组干预结果存在统计学意义（P < 0.05）；结肠组织Occludin、Claudin-5以及ZO-1 mRNA表达和蛋白表达均有上调，且RH组干预效应明显优于其他给药组，具有统计学意义（P < 0.05）。结论 “逆流挽舟法”代表方人参败毒散能有效改善UC大鼠症状，其作用机制可能与抑制炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ释放，上调结肠黏膜Occludin、Claudin-5与ZO-1 mRNA和蛋白表达，促进肠上皮紧密连接修复，改善肠黏膜通透性有关。     

中医药干预紧密连接治疗溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎是局限于黏膜和黏膜下层的肠道非特异性炎症,肠上皮细胞和细胞间连接构成了动态的物理屏障,将黏膜组织与腔内共生细菌、病原体和饮食抗原隔开。肠上皮屏障渗漏被认为是溃疡性结肠炎的重要发病机制,而紧密连接功能异常是造成渗漏的主要原因。通过对紧密连接在溃疡性结肠炎疾病进展中所起作用以及中药活性成分、中药复方对紧密连接的基础研究和临床研究加以整理,发现中医药能使紧密连接蛋白Claudin-2表达下调,使Claudin-1、Occludin、ZO-1、ZO-2表达上调,恢复肠黏膜屏障作用,维持肠道环境的稳态,减轻溃疡性结肠炎的症状。     

五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及机制

目的探究五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及其分子机制。方法将30只16月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1 g/kg)和五子衍宗方高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组10只。给予含药饲料或普通维持饲料喂养4个月后,麻醉处死大鼠,取睾丸组织,HE染色观察其形态,统计各组大鼠生精上皮厚度和生精小管直径,电镜观察大鼠睾丸支持细胞紧密连接超微结构,Western blot检测大鼠睾丸紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin(闭锁蛋白)蛋白表达,双标免疫荧光法观察大鼠睾丸支持细胞ZO-1、Occludin、Claudin-11(细胞紧密连接蛋白)、p-p38MAPK(磷酸化p38丝裂原活化蛋白酶)、MMP-9(基质金属蛋白酶9)、Occludin表达和共定位。结果 HE结果显示,五子衍宗方可改善衰老大鼠睾丸组织形态结构,升高衰老大鼠生精上皮厚度和生精小管直径。电镜结果显示,五子衍宗方可改善衰老大鼠紧密连接的超微结构。Western blot结果显示,五子衍宗方可上调衰老大鼠ZO-1、Occludin、Claudin-11蛋白表达。免疫荧光结果显示,五子衍宗方可上调衰老大鼠睾丸支持细胞ZO-1、Occludin、Claudin-11表达,下调p-p38MAPK、MMP-9表达,减少MMP-9和Occludin共定位。结论五子衍宗方可通过抑制p38MAPK/MMP-9通路来改善衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤。     

安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的修复作用及机制研究

[目的] 观察中药安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎（UC）大鼠咬合蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白1（Claudin-1）基因、蛋白及白细胞介素-13（IL-13）/酪氨酸激酶1（JAK1）/信号转导与转录激活因子6（STAT6）信号通路的调控作用,探讨其修复肠黏膜屏障的机制。[方法] 将36只SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、模型组、美沙拉嗪对照组、安肠愈疡汤低、中、高剂量组,经4.5%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液造模及药液灌胃后处死大鼠,留取标本,苏木精-伊红（HE）染色检测各组大鼠结肠黏膜组织病理情况,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法、蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测结肠组织Occludin、Claudin-1基因、蛋白的表达,RT-PCR法检测IL-13、JAK1、STAT6基因的表达。[结果] 各用药组均明显降低组织病理学评分,差异均具有统计学意义（P<0.01）,镜下表现为结肠组织结构好转,炎细胞浸润减轻,均可上调Occludin、Claudin-1基因及蛋白表达（P<0.01）,差异均具有统计学意义;除低剂量组外,余用药组不同程度激活IL-13/JAK1/STAT6通路的基因表达（P<0.05或P<0.01）;以中药高剂量组和美沙拉嗪组的作用最为显著,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。相关性分析发现,Occludin、Claudin-1表达水平与JAK1、STAT6表达水平呈负相关（r=-0.664,r=-0.654,r=-0.629,r=-0.637,P<0.05）,与IL-13表达水平呈正相关（r=0.888,r=0.983,P<0.05）,差异均具有统计学意义。[结论] 中药安肠愈疡汤能够明显促进UC大鼠肠黏膜修复,其作用机制可能与激活IL-13/JAK1/STAT6信号通路,上调Occludin和Claudin-1的表达水平有关。     

白虎加人参汤对转基因2型糖尿病MKR小鼠肠道TLR4/NF-κB信号通路及肠道屏障功能的影响

目的探讨白虎加人参汤对转基因2型糖尿病MKR小鼠肠道屏障及Toll样受4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)炎症通路的影响。方法 32只MKR小鼠高脂饮食喂养4周,随机分为模型组,白虎加人参汤低、高剂量(13.5、54.0 g/kg)组,二甲双胍(200mg/kg)组,8只同龄FVB/N野生小鼠作为对照组。各组ig给药4周后,测定小鼠空腹血糖(FBG)、口服糖耐量(OGTT)、血清炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和脂多糖(LPS)水平的变化,苏木精-伊红(HE)染色对结肠组织形态进行观察,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测结肠组织TLR4、NF-κB、ZO-1、Claudin-1、Occludin mRNA表达变化,Western blotting检测结肠组织ZO-1、Claudin-1、Occludin蛋白表达变化。结果与模型组比较,给药组小鼠FBG水平显著降低(P0.01),白虎加人参汤高剂量组和二甲双胍组小鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α、LPS水平明显降低(P0.05、0.01),TLR4、NF-κBm RNA表达明显下调,结肠上皮黏膜完整性明显改善;白虎加人参汤高剂量组和二甲双胍组小鼠ZO-1、Claudin-1、Occludin mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05、0.01);白虎加人参汤低剂量组小鼠ZO-1、Claudin-1、Occludin mRNA表达升高(P0.05),但蛋白表达水平无明显差异。结论白虎加人参汤能降低MKR小鼠血清LPS含量及炎症相关因子水平,并调控TLR4/NF-κB信号通路,通过改善内毒素血症、肠道屏障功能,减轻肠道炎症反应,从而改善胰岛素抵抗,降低血糖水平。     

芪黄煎剂对胃切除术后大鼠肠黏膜上皮细胞间紧密连接的影响

目的 探讨芪黄煎剂对胃切除术后大鼠肠黏膜上皮机械屏障紧密连接（TJs）形态、结构和其相关蛋白表达的影响。方法 SD大鼠90只随机分为6组，空白对照组不做任何处理；假手术组仅行腹部剖开及缝合处理，术后不做任何处理；模型组胃切除术后予肠内营养；芪黄煎剂低、中、高剂量组在胃切除术后除肠内营养外，给予低、中、高剂量[5、 10、 20 g/（kg·d）]的芪黄煎剂小肠内滴注；每组15只，干预1周。透射电子显微镜下观察大鼠肠黏膜上皮TJs的形态、结构及宽度；激光共聚焦显微镜下观察TJs相关Claudin-1、Occludin和闭锁小带蛋白（ZO-1）的分布和荧光强度；蛋白质印迹检测Claudin-1、Occludin和ZO-1表达水平。结果 空白对照组TJs表现出较强的连续性和完整性；假手术组、模型组TJs宽度较空白对照组变窄（P<0.01），模型组TJs宽度较假手术组变窄（P<0.01）；芪黄煎剂3组TJs宽度较模型组增宽（P<0.01），且呈剂量依赖性。与空白对照组比较，假手术组和模型组Claudin-1蛋白荧光强度和表达增加（P<0.05,P<0.01）,Oc...     

从AMPK介导的自噬研究淫羊藿总黄酮对自然衰老大鼠小肠屏障功能的调节作用

目的:从AMPK介导的自噬探讨淫羊藿总黄酮对自然衰老大鼠小肠屏障功能的调节作用。方法:SD大鼠按其不同发育阶段分为6月龄成年对照组,24月龄衰老组及淫羊藿总黄酮低、中、高剂量(10、20、60 mg/kg)组。用D-乳酸试剂盒检测各组血清D-乳酸含量;采用免疫组化检测各组小肠Claudin-1、Occludin、p-AMPK表达情况;Western blot检测小肠自噬相关蛋白Lc3Ⅱ、Beclin1表达情况。结果:与成年组比较,衰老组血清D-乳酸含量显著升高,小肠Claudin-1、Occludin、p-AMPK、Lc3Ⅱ、Beclin1表达显著降低(P0.01);与衰老组比较,淫羊藿总黄酮中、高剂量组血清D-乳酸水平显著降低,小肠紧密连接蛋白与自噬相关蛋白的表达显著升高(P0.01)。结论:淫羊藿总黄酮可能通过上调AMPK介导的自噬,增加肠上皮细胞间紧密连接蛋白的表达,从而改善衰老大鼠肠道黏膜屏障功能障碍。     

麝香黄芪复方滴丸对体外缺血缺氧血脑屏障通透性及相关调节蛋白的影响

目的探究麝香黄芪复方滴丸调控体外缺血缺氧性血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)模型的作用机制。方法利用大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvessel endothelial cells,BMEC)与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型及缺血缺氧BBB模型。随机分为正常对照组、模型组、麝香黄芪复方滴丸高剂量组(500μg/mL)、中剂量组(100μg/mL)、低剂量组(10μg/mL)及依达拉奉对照组。通过跨内膜电阻(TEER)、辣根过氧化物酶法(HRP)检测BBB通透性变化情况。Western Blot法检测紧密连接(tight junction,TJ)相关蛋白闭合蛋白-5(Claudin-5)、连接黏附分子-A(junctional adhesion molecule,JAM-A)、跨膜蛋白的咬合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(zonula Occludens,ZO-1)表达水平。结果TEER及HRP实验显示,与正常对照组相比,模型组血脑屏障通透性增加(P<0.05);麝香黄芪复方滴丸高、中、低剂量组和依达拉奉组1 d、2 d、3 d各组通透性明显降低(P<0.05);WB结果显示,模型组Claudin-5、JAM-A、Occludin、ZO-1蛋白表达较正常组显著降低(P<0.05);麝香黄芪复方滴丸高、中剂量组较模型组Claudin-5、JAM-A、Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论麝香黄芪复方滴丸能降低缺血缺氧性BBB模型的通透性,其作用机制与调控紧密连接蛋白而达到修复BBB的作用有关。     

清肠化湿方对溃疡性结肠炎湿热证小鼠NLRP6蛋白及相关炎症因子表达的影响

目的探讨清肠化湿方对溃疡性结肠炎(UC)湿热证小鼠NLRP6蛋白及相关炎症因子和紧密连接蛋白Claudin-2、Claudin-5的影响。方法 60只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组,模型组,美沙拉嗪组,低、中、高剂量中药组。除空白组外,其余小鼠置于高温、高湿环境,喂养高糖高脂饲料,饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)蒸馏水1周造成UC湿热证模型。低、中、高剂量中药组分别予浓度8.125、16.250、32.500 g/(kg·d)清肠化湿方灌胃,美沙拉嗪组小鼠予美沙拉嗪溶液灌胃,空白组和模型组给予相同体积的生理盐水灌胃。灌胃7天,观察小鼠的一般情况、体重、粪便性状及隐血情况,进行DAI评分,记录小鼠每小时排出的湿粪粒数以及湿粪重量,测量小鼠结肠长度。HE染色观察结肠病理情况; Western Blot法检测结肠NLRP6、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白(Caspase-1)、紧密连接蛋白(Claudin-2)、Claudin-5表达水平;ELISA法检测血清白细胞介素-18(IL-18)、IL-1β含量;Real-time PCR法检测结肠NLPR6、caspase-1、Claudin-2、Claudin-5 mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分升高(P0.01),结肠长度变短(P0.01);结肠黏膜病理受损严重;NLRP6、Claudin-5蛋白表达降低(P0.05),Caspase-1、Claudin-2蛋白表达增加(P0.05,P0.01);血清中炎症因子IL-1β含量增高(P0.05);NLRP6、Claudin-5 mRNA表达降低(P0.01),Caspase-1、Claudin-2 mRNA表达增加(P0.05,P0.01)。与模型组比较,美沙拉嗪组、中剂量中药组DAI评分降低(P0.01),结肠长度增长(P0.01)、病理情况改善;中剂量中药组NLRP6、Claudin-5蛋白表达上调(P0.05),各治疗组Caspase-1蛋白表达减少(P0.05),美沙拉嗪组及中、高剂量中药组Claudin-2蛋白表达减少(P0.01);美沙拉嗪组及低、中剂量中药组血清IL-1β含量降低(P0.05,P0.01),美沙拉嗪组、高剂量中药组NLRP6 mRNA表达上调(P0.01,P0.05),各治疗组Caspase-1 mRNA表达下调(P0.05),美沙拉嗪组及中、高剂量组Claudin-2 mRNA表达下调,中、高剂量组Claudin-5 mRNA表达上调(P0.05)。结论清肠化湿方能够调节NLRP6蛋白及相关炎症因子、紧密连接蛋白表达水平,从而减轻肠道炎症反应,缓解肠黏膜损伤。     

参苓白术颗粒对功能性腹泻大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白表达的作用

目的:观察参苓白术颗粒对功能性腹泻模型大鼠肠黏膜紧密连接蛋白的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高乳糖+小平台站立法建立功能性腹泻脾虚证大鼠模型,将90只大鼠随机分为正常组,模型组(高乳糖+小平板),匹维溴铵组,参苓白术颗粒高、中、低剂量组,每组15只,参苓白术颗粒高、中、低剂量分别为3.212,1.606,0.803 g·kg~(~(-1)),匹维溴铵给药剂量为0.012 5 g·kg~(~(-1));正常组与模型组灌服生理盐水,每天灌胃3次,共14 d。观察大鼠一般情况,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中二胺氧化酶(DAO)水平、结肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测紧密连接蛋白~(~(-1))(zonula occludens~(~(-1)),ZO~(~(-1))),封闭蛋白~(~(-1))(Claudin~(~(-1))),咬合蛋白(Occludin)mRNA表达,免疫组化法检测ZO~(~(-1)),Occludin蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组血清中DAO水平、结肠黏膜TNF-α含量明显升高(P0.01),ZO~(~(-1)),Claudin~(~(-1)),Occludin mRNA表达明显降低(P0.01),ZO~(~(-1)),Occludin蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,参苓白术颗粒能够降低血清中DAO水平、结肠黏膜TNF-α含量(P0.01),上调功能性腹泻模型大鼠结肠黏膜ZO~(~(-1)),Claudin~(~(-1)),Occludin mRNA表达(P0.01),上调ZO~(~(-1)),Occludin蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:参苓白术颗粒能够调节功能性腹泻大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白表达,调节肠黏膜机械屏障,这可能是从脾论治功能性腹泻的机制之一。     

消渴通痹颗粒对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经ZO-1及claudins-5蛋白的影响

目的观察消渴通痹颗粒对糖尿病大鼠坐骨神经缺血状态血管神经屏障功能的影响及紧密连接蛋白ZO-1及Claudins-5的表达。方法以高脂饮食加链脲佐菌素注射结合股动脉结扎复制糖尿病大鼠坐骨神经缺血模型,以消渴通痹颗粒干预,6周后尾静脉注射Evans Blue观察血管神经屏障渗透状况;Western Blot法检测紧密连接蛋白claudins-5、ZO-1。结果模型组大鼠坐骨神经Evans Blue外渗明显,紧密连接蛋白ZO-1、claudins-5表达减少;中药组血管神经屏障通透性改善,紧密连接蛋白ZO-1、claudins-5表达增加,尤以中剂量组最为明显。结论消渴通痹颗粒可改善糖尿病大鼠周围神经血管神经屏障功能,其机制与增加紧密连接蛋白ZO-1、claudins-5表达有关。     

黄连粗多糖协同小檗碱改善溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤的作用

目的 考察黄连粗多糖与小檗碱在溃疡性结肠炎小鼠治疗中的协同作用。方法 采用雄性BALB/c小鼠30只随机分为5组,除正常组6只外,其余在小鼠日常饮水中给予5%葡聚糖硫酸钠建立结肠炎模型。建模成功后,每组分别进行灌胃给药4 d,每日1次,小檗碱组（100 mg·kg^-1 BBR）、小檗碱+低剂量粗多糖组（100 mg·kg^-1 BBR+22.8 mg·kg^-1 CCP）、小檗碱+高剂量粗多糖组（100 mg·kg^-1 BBR+45.6 mg·kg^-1 CCP）,模型组和正常组灌胃同体积生理盐水。实验结束后处死小鼠提取结肠,通过蛋白免疫印迹法检测小鼠结肠组织紧密连接闭锁连接蛋白-1（ZO-1）、紧密连接蛋白-1（Claudin-1）和闭合蛋白（Occludin）蛋白的表达。以正常组为对照,评价各治疗组模型小鼠疾病活动指数（DAI）评分、结肠长度、结肠组织形态和结肠紧密连接蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,小檗碱组Claudin-1蛋白表达无明显差异,ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高（P<0.01）,黄连粗多糖联合小檗碱组Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高（P<0.01）;与小檗碱组比较,黄连粗多糖联合小檗碱组紧密连接蛋白表达明显强于小檗碱单独给药（P<0.05）。结论 黄连粗多糖协同小檗碱给药能有效改善溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障损伤。     

蛭龙活血通瘀胶囊通过Rho/ROCK通路改善脑出血后脑水肿的实验研究

目的:研究蛭龙活血通瘀胶囊通过Ras同源基因/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho/ROCK)信号通路改善大鼠脑出血后脑水肿的分子机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为模型对照组、蛭龙活血通瘀胶囊1.2 g/kg组、盐酸法舒地尔注射液12 mg/kg组,每组15只,自体血注入法复制脑出血模型,另设正常对照组,干预3 d后检测脑含水量及脑系数、血脑屏障通透性(EB含量)及超微结构,WB法检测脑组织闭锁小带蛋白(ZO-1)、咬合蛋白(Occludin)、RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白表达,qRT-PCR法检测ZO-1、Occludin、RhoA、ROCK2 mRNA水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组脑含水量及脑系数、脑组织EB含量、RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白及RhoA、ROCK2 mRNA表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),血脑屏障超微结构损坏明显,脑组织ZO-1、Occludin蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,各药物组脑含水量及脑系数显著减少(P<0.01),脑组织EB含量显著降低(P<0.01),血脑屏障结构明显改善,ZO-1、Occludin蛋白表达显著上调(P<0.01),ZO-1、Occludin mRNA水平均明显上调(P<0.05),RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白表达显著下调(P<0.01),RhoA、ROCK2 mRNA水平明显下调(P<0.05)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊可能通过抑制Rho/ROCK通路调节血脑屏障功能,改善脑出血后脑水肿。