刘氏正骨方2号对过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs促成骨分化的影响

目的探究刘氏正骨方2号对过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs中Wnt信号通路及成骨相关因子的影响。方法分别用刘氏正骨方2号含药血清、BMP-2干预BMSCs,并分为对照组、中药组、BMP-2组,采用CCK-8法检测细胞活性,ALP染色、茜素红染色检测成骨诱导28 d后各组细胞ALP活性和矿化情况,荧光定量PCR、Western Blot法检测各组细胞中Col1A2、OCN、OPN、Sclerostin表达。采用腺病毒转染技术过表达BMSCs中Sclerostin基因,分为空白对照组、过表达Sclerostin组,再分别用空白血清、中药血清体外干预3 d后,检测Wnt信号通路相关分子(LRP5、β-catenin)和成骨相关因子Runx2的表达情况。结果与空白对照组比较,中药组BMSCs细胞活性及成骨分化程度增强,BMP-2组成骨分化程度高于中药组,但BMP-2组细胞活性最低(P0.05);在Sclerostin基因表达方面,中药组出现表达抑制,而BMP-2组呈上调趋势(P0.05)。腺病毒转染BMSCs可抑制BMSCs细胞活性,上调Sclerostin mRNA和蛋白表达。与NT比较,Ad-SOST组细胞活性降低,LRP5、β-catenin、Runx2表达下调(P0.05);与空白血清比较,中药血清干预后NT组、Ad-SOST组细胞活性不同程度增强,而LRP5、β-catenin、Runx2表达上调(P0.05)。结论刘氏正骨方2号具有增强BMSCs细胞活性、促进成骨分化作用,可影响过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs的LRP5、β-catenin、Runx2表达。     

淫羊藿素通过BMP/Runx2/Osx信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化研究

目的观察淫羊藿素对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化过程中BMP/Runx2/Osx信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。方法贴壁筛选法体外培养BMSCs,随机分为空白对照组、阳性转化液组、抑制剂组、淫羊藿素组及淫羊藿素+抑制剂组。ELISA法检测各组ALP活性、BGP、COL-Ⅰ、BMP-2、BMP-9蛋白分泌量;RTReal-TimePCR法检测各组ALP、BGP、Osterix和Runx2 mRNA基因表达。结果 ELISA实验结果表明,淫羊藿素能促进ALP细胞活性,促进BGP、COL-Ⅰ、BMP-2、BMP-9的蛋白表达,且随着干预时间延长而呈上升趋势。RT-PCR结果显示,淫羊藿素可显著上调成骨相关转录因子ALP、BGP,Runx2及Osterix的转录表达,与空白对照组比较差异显著(P0.05);与阳性对照液组比较差异显著(P0.05),但其活性较强。结论淫羊藿素能促进BMSCs定向成骨转化,其作用机制可能与激活BMP/Runx2/Osx信号通路有关。     

左归丸对骨髓间充质干细胞成骨分化相关基因甲基化的影响

目的研究左归丸对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨分化的表观遗传学机制。方法 30只SD大鼠给予左归丸溶液(浓度为472.5 g/L)灌胃,每次1 ml,每日2次,连续灌胃3天后经腹主动脉采血,制备左归丸含药血清。无菌条件下取出SD大鼠双侧股骨和胫骨,收集骨髓冲洗液,贴壁法培养传代所得BMSCs。取2代BMSCs以5×104/cm2密度接种于培养皿,分为3组,对照组常规培养;成骨诱导组用10%空白血清加成骨诱导剂培养;左归丸组用10%左归丸含药血清加成骨诱导剂培养。干预14天后采用RT-PCR及甲基化特异性PCR检测法进行Runx2、Osterix、OC及β-catenin基因表达和甲基化状态检测。结果左归丸组Runx2、Osterix、OC、β-catenin的相对表达量较对照组、成骨诱导组均上调(P0.05)。左归丸组Runx2、Osterix、OC、β-catenin基因甲基化率均低于对照组、成骨诱导组(P0.05)。结论左归丸含药血清可通过去甲基化的表观遗传调控机制促进BMSCs向成骨细胞分化。     

微小RNA-34a对强直性脊柱炎滑膜成纤维细胞成骨分化的影响

目的:探讨miRNA-34a对强直性脊柱炎(AS)滑膜成纤维细胞成骨分化的影响及其机制。方法:将滑膜成纤维细胞分为正常组(来自创伤性骨折患者的细胞)、AS对照组(来自AS患者的细胞)、AS+NC组(转染阴性对照并给予转化生长因子-β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)处理AS细胞)和AS+miRNA-34a寡核苷酸模拟物(miRNA-34a mimics)组(转染miRNA-34a mimics并给予TGF-β1和BMP-2处理AS细胞),采用实时-PCR检测各组细胞中miRNA-34a和成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2) mRNA以及Notch信号通路的Notch1受体与其下游靶基因Hes1 mRNA的表达水平;将Notch信号通路激活剂rhNF-κB加入含miRNA-34a mimics的细胞中,观察ALP、OCN和Runx2 mRNA的表达变化。结果:与正常组相比,AS对照组和AS+NC组细胞中miRNA-34a表达降低,ALP、OCN、Runx2、Notch1和Hes1 mRNA的表达水平均明显升高(P0.05);与AS+NC组相比,AS+miRNA-34a mimics组细胞中miRNA-34a表达升高,而ALP、OCN、Runx2、Notch1和Hes1 mRNA的表达水平均明显降低(P0.05)。给予rhNF-κB作用后,miRNA-34a mimics对ALP、OCN和Runx2 mRNA的抑制作用减弱。结论:miRNA-34a可通过调控Notch信号通路抑制AS滑膜成纤维细胞的成骨分化能力。     

JNK通路对左归丸含药血清调控MC3T3 成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响

目的:探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在左归丸含药血清调控成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和成骨特异转录因子核心结合因子(Runx2) mRNA表达中的作用.方法:以MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,选用JNK特异抑制剂SP 600125,实验分为空白对照组、SP 600125组、左归丸组、左归丸加SP 600125组、倍美力组、倍美力加SP 600125组.孵育48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测SP600125对左归丸含药血清干预MC3T3-E1成骨前体细胞增殖作用的影响,采用Western blot法分析JNK蛋白磷酸化水平,采用Real Time RT-PCR法检测成骨细胞特异转录因子Runx2 mRNA表达情况.结果:与空白对照组比较,左归丸含药血清组显著促进细胞增殖,明显上调p-JNK蛋白和Runx2 mRNA表达(P＜0.01);SP600125显著抑制左归丸含药血清诱导的增殖和p-JNK蛋白表达(P＜0.01),对Runx2 mRNA表达的影响不显著.结论:JNK信号通路的激活可能参与了左归丸含药血清诱导的MC3T3-E1成骨前体细胞增殖,但左归丸含药血清诱导的Runx2mRNA高表达对JNK信号通路依赖不显著.     

老鹳草素通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化

目的:观察Wnt/β-catenin信号通路在老鹳草素诱导小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化中的作用机制。方法:分离、培养小鼠BMSCs,分为对照组(DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素低剂量组(10-9mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素中剂量组(10-8mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量组(10-7mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂)组和DKK1组。成骨诱导第7天时,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量。成骨诱导48 h时,采用Real time-PCR和Western-blot检测各组Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达。结果:成骨诱导第7天时,老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖,呈剂量依赖性(均P<0.05);同时ALP活性及OCN含量较对照组显著升高,呈剂量依赖性(均P<0.05)。成骨诱导48 h时,老鹳草素各剂量组Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较对照组显著上调,GSK-3βmRNA和蛋白表达较对照组显著下调,呈剂量依赖性(均P<0.05)。加入DKK1后,细胞增殖受到显著抑制,ALP活性及OCN含量显著降低(均P<0.05);同时Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著下调,GSK-3βmRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs的增殖及向成骨方向分化,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化相关基因表达的影响

目的:观察老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并对成骨分化过程中相关基因表达进行检测。方法:分离、培养小鼠BMSCs,加入不同浓度老鹳草素(1×10-9,1×10-8,1×10-7mol·L-1)培养,另设空白组,分别于成骨诱导第7,14天采用碱性磷酸酶(ALP),骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量,并进行ALP染色。于成骨诱导第21天时采用茜素红染色检测成骨分化过程中钙结节形成数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测BMSCs成骨分化过程中OCN,ALP,骨涎蛋白(BSP),Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA和蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,成骨诱导后第7,14天时,老鹳草素各剂量组ALP活性,OCN含量及ALP染色强度均明显升高(P0.05),成骨诱导第21天时,老鹳草素各剂量组矿化结节数量及OCN,ALP,BSP,Runx2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs向成骨方向分化,成骨相关基因OCN,ALP,BSP,Runx2均参与这一过程。     

补肾活血汤调控Runx2及Osterix促进BMSCs成骨分化的作用研究

目的:探讨补肾活血汤提高骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal cells,BMSCs)Runx2及Osterix基因表达,促进成骨分化的作用。方法:从双侧股骨和胫骨分离大鼠BMSCs并使用腺病毒载体转染BMSCs细胞,构建过表达Runx2细胞株,Q-PCR法对转染细胞株进行鉴定,CCK8法评价补肾活血汤对BMSCs活性的影响,ALP半定量活性检测法评价补肾活血汤对BMSCs成骨分化的影响,RT-PCR、Western Blot法检测补肾活血汤对成骨相关标志物Runx2和Osterix表达量的影响。结果:成功构建过表达Runx2的BMSCs细胞,补肾活血汤组在25μg/m-200μg/ml之内对细胞活性没有影响,与正常培养组比较补肾活血汤100μg/ml组ALP活性显著提高,与正常培养组比较补肾活血汤50μg/ml、100μg/ml组Runx2和Osterix的mRNA和蛋白相对表达量显著增加。结论:补肾活血汤能提高BMSCs中Runx2和Osterix的表达,促进成骨分化。     

左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化中TGF-β1 mRNA的影响

目的:研究左、右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用.方法:将28只大鼠随机分为4组,分别以左归丸(ZGW)、右归丸(YGW)、阳性对照药戊酸雌二醇片(estradiol valerate tablets,EVT)和蒸馏水给大鼠灌胃,各组灌胃剂量分别为18.9,20.52 g·kg-1,0.36 mg· kg-,1.0 mL·kg-1,日2次,于第4天给药2h后,腹主动脉取血,离心,56℃水浴灭活30 min后,大鼠含药血清制备完成.再配制10％各组含药血清的α-MEM分别加入诱导剂(YDJ)(10-7mol· L-1地塞米松、50μmol· L-维生素C、10 mmol·L-1β-甘油磷酸钠)与单纯诱导剂组共5组对BMSCs(1×105/L)进行干预9d,用Westernblot法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原(type Ⅰ collagen,COL Ⅰ)蛋白表达,用RT-PCR法检测转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-1)mRNA表达.结果:Control组比较:ZGW+ YDJ组、YGW+ YDJ组、EVT+ YDJ组均可促进BMSCs的ALP,COLⅠ蛋白的表达,上调BMSCs TGF-β1 mRNA表达(P＜0.05);与YDJ组比较:ZGW+ YDJ组、YGW+ YDJ组可促进BMSCs的ALP,COL Ⅰ蛋白的表达,上调BMSCs TGF-β1mRNA表达(P＜0.05);且ZGW+ YDJ组优于YGW+ YDJ组(P＜0.05).结论:左、右归丸含药血清能协同诱导剂促进BMSCs成骨分化,且左归丸组更为有效,表明中医“滋肾阴”对BMSCs的成骨诱导更为有效.     

含左归丸鼠血清对3T3-L1前脂肪细胞芳香化酶mRNA表达的影响

目的：观察含左归丸鼠血清对3T3-L1前脂肪细胞芳香化酶 mRNA 表达的影响。方法：将雌性育龄期大鼠分为正常组20只、假手术组17只、模型组8只、阳性对照组11只、左归丸高剂量组（左高组）6只、左归丸低剂量组（左低组）9只,连续灌胃11周,分离血清检测 E2;以2％各类鼠血清加入培养液培养分化中的3T3-L1前脂肪细胞,48 h 后测细胞上清液E2和细胞芳香化酶 mRNA 表达。结果：与模型组比较,左高组、左低组给药前后体重有升高趋势,但无明显统计学意义（P＞0.05）;左高组、左低组鼠血清 E2值较模型组无明显统计学意义（P ＞0.05）;培养3T3-L1前脂肪细胞48h 后,细胞上清液 E2值左高组（9.40±3.61）pg／mL、左低组（8.94±2.91）pg／mL 比模型组（3.99±0.76）pg／mL 略有升高;模型组（0.39）芳香化酶 mRNA 表达（P450arom／GAPDH）水平高于左高组（0.25）。结论：左归丸对去势雌鼠血清 E2和体重无明显影响,可增强3T3-L1前脂肪细胞的芳香化酶活性。     

复叶耳蕨总黄酮通过BMP信号通路促进MSC成骨分化

目的:研究复叶耳蕨总黄酮(total flavonoids from Arachniodes exilis,TFA)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。方法:通过茜素红染色、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性考查BMSCs成骨情况;RT-PCR检测Ⅰ型胶原酶α1(collagen typeⅠα1,COL1A1)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopotin,OPN)、BMP2、BMP4、Runx2、Osterix转录水平;ELISA检测骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)信号通路相关蛋白BMP2、BMP4、Runx2表达情况。结果:TFA能显著增加BMSCs碱钙结节的形成、ALP活性,上调COL1A1、OCN、OPN的表达,促进BMSCs成骨分化,而Noggin能抑制该作用;TFA能显著上调BMP2、BMP4、Runx2、Osterix的表达。结论:TFA可能通过BMP信号通路促进大鼠BMSCs成骨分化。     

刘氏正骨方对BMSCs成骨分化中Wnt信号通路及Sclerostin基因的影响

目的探究刘氏正骨方对骨髓间充质干细胞成骨分化中Wnt信号通路的影响。方法使用刘氏正骨方含药血清或BMP-2对骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行28 d成骨诱导后,检测BMSCs的细胞活性、ALP活性及细胞矿化情况;采用RT-PCR和Western blotting法检测细胞中Col 1A2、OCN、OPN和Sclerostin基因表达情况。使用含2.5%、5%、10%中药血清对BMSCs进行14 d体外干预,检测Wnt信号通路关键因子LRP5、Sclerostin及成骨关键转录因子Runx2的表达情况。结果1)中药组和BMP-2组中BMSCs中ALP活性及细胞矿化现象明显强于对照组,且中药组明显高于BMP-2组(P<0.05);Col1A2、OCN、OPN的表达也呈现相同趋势改变(P<0.05),但Sclerostin基因呈现明显表达下调(P<0.05)。2)高浓度中药血清可上调LRP5和Runx2表达(P<0.05),下调Sclerostin基因表达(P<0.05)。结论刘氏正骨方可以促进BMSCs体外成骨分化,其作用机制可能与下调Sclerostin基因表达、激活Wnt信号通路有关。     

左、右归丸对去卵巢大鼠BMSCs成骨、成脂分化后Caspase-3/Bcl-2的影响

目的观察左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨、成脂分化后凋亡蛋白表达的影响。方法 60只雌性SD大鼠,取40只切除双侧卵巢制备模型,随机均分为模型组(1.0 g/kg蒸馏水)、左归丸组(9.45 g/kg左归丸)、右归丸组(10.26 g/kg右归丸)和补佳乐组(0.09 mg/kg戊酸雌二醇),另取10只作为空白组(1.0 g/kg蒸馏水),10只双侧切除卵巢周围少量脂肪作为假手术组(1.0 g/kg蒸馏水),各组灌胃给药12周后,处死大鼠,取股骨和胫骨体外培养BMSCs,采用MTT法检测细胞增殖,Western blot法观察半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的蛋白表达。结果 MTT法显示,左、右归丸对BMSCs增殖有促进作用,左归丸效果更佳。成骨分化后,与空白组相比,模型组Caspase-3蛋白表达上调(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达下调(P0.01);与模型组相比,左归丸组、右归丸组Caspase-3蛋白表达下调而Bcl-2蛋白上调(P0.05,P0.01)。成脂分化后,与空白组比较,模型组、左归丸组和右归丸组Caspase-3蛋白表达显著上调,Bcl-2蛋白下调(P0.05),成骨、成脂分化后左归丸组与右归丸组比较均有显著性差异(P0.05)。结论左、右归丸均能抑制去卵巢大鼠BMSCs成骨、成脂分化后的凋亡,且左归丸有益于成骨分化,右归丸有益于成脂分化。     

淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化作用的实验研究

目的观察淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用特点。方法 (1)采用机械分离及全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度的淫羊藿苷在第3、6、9、12、15、18、21天对细胞上清液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,采用茜素红染色法检测各浓度组BMSCs矿化情况,观察不同浓度的淫羊藿苷促BMSCs骨向分化的作用。(2)将BMSCs细胞分为空白对照组、成骨诱导组及淫羊藿苷组(0.5μg/m L),在培养第7、14、21天检测各组细胞上清ALP活性,并于第14及21天分别检测各组细胞ALP阳性染色率与矿化结节数,同时采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测3个不同时间点各组细胞中核心结合蛋白因子(Runt-related transcripition factor-2,Runx2)及骨钙素(Osteocalcin)mRNA的表达水平。结果 (1)0.05~5.0μg/m L淫羊藿苷均可明显提高细胞上清液中ALP活性,其中0.2~2.0μg/m L浓度组细胞结节数亦明显增加(P0.01)。(2)淫羊藿苷促BMSCs骨向分化时,Runx2 mRNA表达水平及ALP活性均先升后降;Osteocalcin mRNA表达水平则持续上升(P0.01);与成骨诱导组比较,作用14天后,淫羊藿苷组ALP活性及ALP阳性染色率均明显提高(P0.05,P0.01)。结论淫羊藿苷通过上调Runx2基因的表达,促使BMSCs向成骨细胞分化,并通过增加细胞ALP分泌及Osteocalcin基因的表达,促进细胞矿化的发生,从而促使新生成骨细胞的成熟。     

少阳生骨方含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨少阳生骨方对BMSCs成骨分化的影响,并初步探究其可能的作用机制。方法:以不同浓度少阳生骨方含药血清(0.035、0.07、0.14、0.28、0.56 g/mL)干预BMSCs,MTT法检测细胞增殖。将BMSCs分为少阳生骨方含药血清组(含药血清组)、对照组(无药血清组)、经典诱导组(阳性对照),碱性磷酸酶染色测定成骨活性,茜素红染色鉴定矿化结节形成,免疫组化检测各组中BMP-2、Runx2蛋白表达水平。结果:0.28、0.56 g/kg灌胃少阳生骨方含药血清对BMSCs有显著的促增殖作用(P0.05),少阳生骨方含药血清诱导7、14天能显著增加BMSCs碱性磷酸酶活性、矿化结节数及成骨相关蛋白BMP-2、Runx2阳性表达(P0.05)。结论:少阳生骨方能诱导BMSCs成骨分化,其机制可能与上调BMP-2、Runx2蛋白的表达有关。     

左归丸含药血清通过JNK信号通路诱导MC3T3成骨细胞分化的研究

目的 探讨JNK信号通路对左归丸(熟地、菟丝子、川牛膝、龟甲胶、鹿甲胶、山药、山茱萸、枸杞子)含药血清干预MC3T3成骨细胞分化的影响.方法 选用JNK特异抑制剂SP600125,制备大鼠含药血清,实验分为空白对照组、SP600125组、左归丸组、左归丸加SP600125组、倍美力组、倍美力加SP600125组.孵育48 h后,采用PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,采用Western blot法分析ALP蛋白表达水平;孵育7 d,采用改良钙钴染色法检测ALP活性;孵育14 d,采用茜素红染色法测定矿化沉积情况.结果 与空白对照组比较,左归丸组显著促进MC3T3成骨细胞分化,明显上调ALP蛋白表达水平(P＜0.01);与左归丸组比较,左归丸加 SP600125组孵育48 h对ALP活性及蛋白影响不显著,但显著对抗左归丸含药血清对孵育7 d的ALP活性和孵育14d的矿化结节的促进作用(P＜0.01).结论 左归丸含药血清可能部分通过JNK信号通路干预MC3T3成骨细胞分化,在分化末期尤其依赖JNK通路.     

补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

【目的】探讨补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外成骨细胞分化的能力。【方法】用不同浓度的补肾活血汤含药血清干预BMSCs,7d后应用4-硝基苯基磷酸二钠盐（PNPP）偶氮法测定碱性磷酸酶（ALP）活性,21d后行茜素红染色（ARS）观察钙盐沉积情况判定成骨能力,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测Runx相关转录因子2（Runx2）、骨钙素（OCN）、骨桥蛋白（OPN）的基因表达以评估成骨能力。【结果】与空白血清组比较,补肾活血汤低、中、高剂量血清组BMSCs的ALP活性、茜素红染色面积及Runx2、OCN、OPN基因表达水平均升高（P<0.05或P<0.01）。【结论】补肾活血汤可促进BMSCs向成骨细胞分化,其机制可能与上调Runx-2、OCN、OPN表达有关。     

干扰环状核糖核酸zeste基因增强子同源物2促进骨髓间充质干细胞成骨分化的机制研究

目的:探究环状核糖核酸(RNA) zeste基因增强子同源物2(circEZH2)调控骨形态发生蛋白2(BMP2)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法:使用生长培养基培养骨髓间充质干细胞,将骨髓间充质干细胞随机分为对照组、si-NC组、si-circEZH2组、si-circEZH2+si-NC组和si-circEZH2+si-BMP2组;qRT-PCR法检测各组骨髓间充质干细胞中circEZH2及BMP2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组骨髓间充质干细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组骨髓间充质干细胞凋亡情况,碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测ALP活性,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测各组骨髓间充质干细胞中BMP2、成骨相关蛋白骨钙素(OC)、RUNT相关转录因子2(Runx2)和骨桥蛋白(OPN)表达水平。结果:相较于对照组和si-NC组,si-circEZH2组骨髓间充质干细胞中circEZH2的表达水平、细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低(P<0.05),BMP2 mRNA表达水平、ALP活性、BMP2、OC、Runx2及OPN表...     

补肾健脾方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的:观察补肾健脾方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化能力的影响。方法:大鼠随机分为正常组、悬吊组、补肾健脾方高、中、低剂量组共5组。除正常组外,其余各组大鼠头低位-30度尾部悬吊连续21 d模拟失重,后3组大鼠从实验第1天开始分别按剂量11.4,5.7,2.8 g·kg-1·d-1给予补肾健脾方ig 21 d,其余各组大鼠ig等容积的生理盐水。全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行成脂分化诱导,油红O染色法检测脂滴形成情况,Real Time PCR法和Western bolt法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA和蛋白表达,在成脂诱导分化的第7,14,21天分别检测细胞内甘油三酯(TG)含量。结果:较正常组,悬吊组大鼠BMSCs经成脂诱导后7,14,21 d TG含量均明显升高(P0.01),成脂诱导21 d成脂能力,PPARγmRNA和蛋白表达明显增强(P0.01);较悬吊组,补肾健脾高、中、低剂量组大鼠BMSCs经成脂诱导7,14,21 d后TG含量降低(P0.01,P0.05),经成脂诱导21 d后成脂能力均明显减弱(P0.01),PPARγmRNA和蛋白表达减少(P0.01,P0.05);较补肾健脾中剂量组,补肾健脾高剂量组大鼠BMSCs经成脂诱导14,21 d后TG含量降低(P0.05),经成脂诱导21 d后补肾健脾高剂量组成脂能力均减弱(P0.05),PPARγmRNA和蛋白表达均减少(P0.05,P0.01),补肾健脾低剂量组PPARγ蛋白表达增多(P0.05)。结论:补肾健脾方具有抑制尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的作用,以补肾健脾方高剂量作用为优,其机制可能与下调PPARγ表达有关。     

左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞成骨及成脂诱导的研究

目的:研究体外左、右归丸诱导大鼠骨髓充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)成骨及成脂的影响。方法:以左、右归丸水煎液和阳性对照药补佳乐、蒸馏水分别给予SD大鼠灌胃取血制备含药血清,分别加成骨和成脂诱导剂干预BMSCs,成骨诱导后采用改良钙钴法检测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)表达,成脂诱导第10天油红O染色。结果:左、右归丸组与空白组比较,可显著提高细胞中ALP活性,促进钙化结节形成;左、右归丸可减少脂滴形成,降低细胞中甘油三酯含量。结论:左、右归丸对BMSCs分化的调节具有双向性,既促进BMSCs成骨分化同时又抑制BMSCs成脂分化。