基于治未病思想探讨益气活血方干预慢性阻塞性肺疾病大鼠病程作用的实验研究

目的:探究名老中医防治慢性阻塞性肺疾病(COPD)经验方"益气活血方"作用机理,并探索"治未病"思想的运用。方法:复制COPD动物模型,在第0、4、12周不同时间段给予益气活血方药进行干预,采用ELISA法检测COPD大鼠肺组织SIg A、SC、TGF-β1和VEGF的表达水平,分析比较差异。结果:3个时间段模型组SIg A、SC、TGF-β1及VEGF表达均有明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。益气活血方药物干预后,第4周段中、低剂量组SIg A、SC及VEGF,低剂量组TGF-β1表达降低,差异有统计学意义(P0.05);第0周段除高剂量组VEGF表达也降低外,其余结果与第4周段一致;第12周段则是高、中、低剂量组SIg A、SC、TGF-β1及VEGF表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:益气活血方对COPD病程各阶段异常SIg A、SC、TGF-β1、VEGF均有不同程度的调节干预作用;"治未病"思想可作为COPD防治工作的重要策略。     

玉屏风散合四物汤对慢性阻塞性肺疾病气道重塑的影响

目的:观察玉屏风散合四物汤对气道重塑的影响。方法:将SPF级雄性Wistar大鼠利用随机数字表分为正常组,模型组,玉屏风散合四物汤低、中、高剂量组,每组10只。慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型采用气管滴注脂多糖加烟熏的方法构建。收集大鼠肺组织匀浆进行分泌型免疫球蛋白A(SIg A)、分泌成分(SC)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)、血管内皮生长因子(VEGF)的检测。结果:与正常组相比,模型组SIg A、SC、TGF-β_1、VEGF含量均显著升高,差异有统计学意义(P0.05);与模型组相比,玉屏风散合四物汤低剂量组SIg A、SC、TGF-β_1、VEGF含量显著降低,差异有统计学意义(P0.01);中剂量组对TGF-β_1作用不明显,对其余3种指标效果较好(P0.05,P0.01),高剂量组只对VEGF有作用(P0.01)。结论:玉屏风散合四物汤能有效降低COPD大鼠SIg A、SC、TGF-β_1、VEGF的含量,这可能是其治疗COPD的重要机制之一。     

黄芪山甲方抗肾间质纤维化多靶点效应的拆方研究

目的:观察黄芪山甲方按照不同治则拆方后对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾间质纤维化的治疗作用。方法:42只UUO雄性大鼠,随机分为7组:假手术组、模型组、益气组、活血化瘀组、清热解毒组、益气活血组、益气清热组,各6只。术后14d观察血肾功能指标、光镜肾脏病理改变及转化生长因子-β1(TGF-β_1)、纤维黏连蛋白(FN)的表达。结果:与假手术组比较,各造模组治疗后各项观察指标差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,益气活血组治疗后血尿素氮及血肌酐指标同时下降,差异有统计学意义(P0.05);益气组治疗后肾间质纤维化评分差异无统计学意义(P0.05),其余各组差异有统计学意义(P0.05);各治疗组肾脏TGF-β_1、FN的表达差异有统计学意义(P0.05)。结论:黄芪山甲方中活血化瘀法及清热解毒法可以延缓肾脏间质纤维化病理改变进程以及下调肾组织TGF-β_1、FN的蛋白表达。单独益气组只能下调肾组织TGF-β_1、FN的蛋白表达,但与其他治则联合有较好的增效作用,益气活血组在全方中的作用最重要。     

健脾益气摄血方对ITP模型小鼠血清SIgA和β-EP影响研究

目的:研究健脾益气摄血方对ITP小鼠血清中SIg A(分泌型免疫球蛋白A)、β-EP(β-内啡肽)的影响。方法:免疫造模法建立ITP小鼠模型,以强的松和健脾益气摄血方(颗粒)为干预药物,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清SIg A和β-EP含量。结果:与空白对照组比较,模型小鼠血清SIg A、β-EP含量升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与模型对照组比较,经强的松干预治疗后SIg A含量下调,差异具有统计学意义(P0.05);经健脾益气摄血方干预后,β-EP含量下调,差异具有统计学意义(P0.05)。结果提示,强的松对SIg A、β-EP均有调节效应;健脾益气摄血方虽然不能调控SIg A,但对β-EP具有调控作用。结论:健脾益气摄血方治疗ITP效应机制与调控β-EP含量,影响免疫问答有一定关系。     

温经化瘀止痛法对寒凝血瘀证痛经大鼠Th17、Treg细胞分化及其细胞因子表达的影响

目的观察温经化瘀止痛法对寒凝血瘀证原发性痛经大鼠Th17、Treg细胞分化及其特征性细胞因子(IL-17A、TGF-β)表达的影响,探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的免疫机制。方法将50只大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药高剂量组和中药低剂量组。除空白组外,通过寒冷刺激法联合苯甲酸雌二醇和缩宫素建立寒凝血瘀证原发性痛经大鼠模型。从造模第7天开始,分别给予中药、布洛芬和蒸馏水治疗。检测各组Th17、Treg细胞比例、IL-17A、TGF-β含量及IL-17A、TGF-βmRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组Th17细胞比例、IL-17A含量、IL-17A mRNA表达和IL-17A/TGF-β比值均升高(P0.05,P0.01);Treg细胞比例、TGF-β含量和TGF-βmRNA表达降低(P0.01)。与模型组比较,西药组和中药低剂量组Th17细胞比例降低,中药高、低剂量组IL-17A含量降低,中药高剂量组IL-17A mRNA表达降低(P0.05,P0.01);各治疗组Treg细胞比例、TGF-β含量和TGF-βmRNA表达均升高,IL-17A/TGF-β比值降低(P0.01)。中药两组间比较,中药低剂量组调节Th17、Treg细胞比例和降低IL-17A含量优于中药高剂量组(P0.01);中药高剂量组升高TGF-β含量、降低IL-17A mRNA表达优于中药低剂量组(P0.01)。结论温经化瘀止痛法调节Th17、Treg细胞比例及IL-17A、TGF-β表达可能是其治疗寒凝血瘀证PD的免疫机制之一。     

补肾化痰法对肥胖型多囊卵巢综合征模型大鼠IL-1β、VEGF表达水平的影响

目的探讨中医补肾化痰法对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠血清及卵巢组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。方法选取3周龄雌性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为空白组(等量生理盐水灌胃)、模型组(等量生理盐水灌胃)、阳性组(二甲双胍0.043 g/kg)、高剂量组[补肾活血生药3.0 g/(kg·d)灌胃]、中剂量组[补肾活血生药2.0 g/(kg·d)灌胃]和低剂量组[补肾活血生药1.0 g/(kg·d)灌胃]各10只大鼠,除空白组外其余各组均建立肥胖型PCOS模型大鼠,对比各组大鼠连续干预14d后的血清及卵巢组织中IL-1β、VEGF的表达水平。结果模型组的血清IL-1β、VEGF水平显著高于其他组别(P<0.05),空白组和阳性组、中药高、中、低剂量组的IL-1β、VEGF水平比较,差异均不具有统计学意义(P>0.05);与空白组相比,模型组大鼠子宫匀浆液中VEGF浓度明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,阳性组大鼠子宫匀浆液中VEGF浓度明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);中药高剂量组大鼠子宫匀浆液中VEGF浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05);其余各组大鼠子宫匀浆液中VEGF浓度无明显差异,不具备统计学意义(P>0.05);与空白组相比,模型组大鼠卵巢匀浆液中IL-1β浓度明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,阳性组大鼠卵巢匀浆液中IL-1β浓度明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);中药高剂量组大鼠卵巢匀浆液中IL-1β浓度降低,差异有显著统计学意义(P<0.05);其余各组大鼠卵巢匀浆液中IL-1β浓度无明显差异,不具备统计学意义(P>0.05)。结论中医补肾化痰法可显著降低肥胖型PCOS模型大鼠血清、子宫及卵巢组织中的IL-1β、VEGF表达水平。     

四物汤对COPD气道重塑大鼠血清TGF-β1、VEGF、MMP-9/TIMP-1水平的影响

目的 探讨四物汤对COPD气道重塑大鼠血清TGF-β1、VEGF、MMP-9/TIMP-1水平的影响.方法 复制COPD气道重塑大鼠模型,观察药物干预前后大鼠行为学改变及支气管、肺的病理变化,采用双抗体夹心ELISA法检测大鼠血清TGF-β1、VEGF、MMP-9/TIMP-1水平.结果 大鼠行为学改变及支气管、肺的病理变化显示COPD气道重塑大鼠模型复制成功.与正常组相比,模型组血清TGF-β1、VEGF含量明显增高（P＜0.01）,MMP-9/TIMP-1比值有升高趋势.四物汤干预后,与模型组相比,四物汤高、中、低剂量组血清TGF-β1含量均明显下降（P＜0.01）;四物汤高、中剂量组血清VEGF含量明显下降（P＜0.01）,低剂量组下降（P＞0.05）;四物汤高、中、低剂量组血清MMP-9/TIMP-1比值有下降趋势.结论 四物汤可降低COPD气道重塑大鼠血清中TGF-β1、VEGF的含量,调节MMP-9/TIMP-1失衡状态,抑制成纤维细胞和内皮细胞的生长,降解胶原的合成以及支气管壁和血管壁的基质沉积,减缓COPD气道重塑病变.     

益气活血散结方对肝纤维化大鼠转化生长因子-β_1及血管内皮生长因子的影响

目的探讨益气活血散结方对肝纤维化大鼠转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法选择健康SD大鼠56只,随机分为正常组(8只)、模型组(12只)、秋水仙碱组(9只)、益气活血散结方低剂量组(9只)、益气活血散结方中剂量组(9只)、益气活血散结方高剂量组(9只)。正常组皮下注射橄榄油,其他5组注射40%的CCl_4和橄榄油造模,连续6周。自造模之日起,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,秋水仙碱组给予秋水仙碱0.1 mg/(kg·d)灌胃,益气活血散结方低、中、高剂量组分别给予0.55 g/(kg·d)、1.1 g/(kg·d)、2.2 g/(kg·d)的益气活血散结方灌胃,连续10周。灌胃结束后,取各组大鼠血液,采用ELISA法检测TGF-β_1及VEGF水平,然后取肝脏,HE染色及胶原纤维染色后观察各组大鼠肝脏组织病变情况。结果模型组大鼠血清TGF-β_1及VEGF水平均明显高于其他5组(P均0.05);益气活血散结方低、中、高剂量组随着给药剂量的升高,TGF-β_1及VEGF水平均逐渐降低(P均0.05)。模型组肝纤维化程度严重;秋水仙碱组及益气活血散结方各组肝纤维化程度均明显轻于模型组。结论益气活血散结方可抑制TGF-β_1及VEGF的表达,具有抗肝纤维化作用。     

祛风活血丸对EAU大鼠模型TGF-β2表达的影响

目的通过观察祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠模型葡萄膜TGF-β2表达的影响,探讨祛风活血丸对EAU模型大鼠的治疗效果。方法将60只Lewis大鼠随机分为6组,分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、祛风活血丸低、中及高剂量组,每组10只。空白对照组不作处理,其余均予以右后足垫注射光感受器间维生素A类结合蛋白多肽片断(IRBP),建立EAU大鼠模型,造模成功后进行灌胃。空白对照组与模型对照组予以蒸馏水灌胃,祛风活血丸低、中、高剂量组分别予以不同剂量祛风活血丸灌胃,阳性对照组予以熊胆开明片灌胃。分别于灌胃后第7、14、21、28 d分批处死大鼠,取眼球做免疫组化,检测TGF-β2的表达。结果 TGF-β2免疫组化:各时间点模型对照组与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P0.01);祛风活血丸各组大鼠与空白对照组相比,葡萄膜TGF-β2含量明显降低,各时间点差异均有统计学意义(P0.01),其中以中、高剂量组最为明显;低剂量组于给药后第7及21 d差异有统计学意义(P70.01;P210.05);第14及第28 d差异无统计学意义(P0.05);阳性对照组于给药后各时间点差异均有统计学意义(P14,210.01;P7,280.05)。结论祛风活血丸能通过调节免疫因子TGF-β2的状态,对大鼠葡萄膜炎发挥一定程度的治疗作用。     

脑络欣通对局灶脑缺血/再灌注大鼠胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达的影响

目的 探讨益气活血治法之代表中药复方脑络欣通及其拆方(益气方、活血方)对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达的影响以及在不同时间点局灶性脑缺血再灌注模型大鼠GFAP蛋白表达的特点.方法 将健康的Wistar大鼠120只先饲养观察3天,随机分为假手术组、模型组、益气活血方(脑络欣通)组、益气方组和活血方组5组,每组24只,1天、3天、7天三个不同时间点各8只.采用线栓大脑中动脉法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别观察益气活血、益气、活血3种治法及其代表方药在缺血2h时分别再灌注1天、3天和7天的治疗效果;以免疫组化染色SABC法检测胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达.结果 缺血再灌注各时间点,假手术组无强阳性表达,模型组明显可见GFAP表达,与假手术组比较有显著性差异(P＜0.01);各治疗组GFAP阳性染色的阳性细胞总面积表达增加,与模型组比较,其中再灌注1天时无显著性差异(P＞0.05),再灌注3天、7天时脑络欣通组和益气方组与模型组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);各治疗组间比较,1天无差异,3天脑络欣通组GFAP表达最高,与益气方组和活血方组比较有显著性差异(P＜0.01);7天各治疗组间无显著性差异(P＞0.05).结论 经过益气活血法(脑络欣通)及其拆方(益气方、活血方)干预后,脑络欣通在调节GFAP(3天上调、7天下调)表达的效应上要优于其拆方(益气方、活血方).     

金水清合剂对IgA肾病大鼠TGF-β1、CTGF、VEGF表达的影响

目的:探讨复方中药金水清合剂对IgA肾病大鼠TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白及mRNA表达的影响。方法:4周龄SPF级SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、治疗1组、治疗2组、治疗3组,复制大鼠IgA肾病模型,观察组在模型组的基础上,分别于第5周、第7周、第9周,给予金水清合剂灌胃治疗,1次/d,至第12周末,HE及PAS染色观察肾脏病理学改变,Western-blot检测肾组织TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白的表达,RT-PCR检测TGF-β1、VEGF及CTGF mRNA的表达。结果:正常组大鼠肾组织结构完整清晰,模型组大鼠可见肾小球系膜区增宽,系膜基质、系膜细胞中到重度增生,观察组病变程度比模型组轻,治疗1组改善最为明显。与正常组比较,模型组TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白的表达升高,且差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,观察组表达降低,且差异有统计学意义(P0.05);观察组间比较差异有统计学意义(P0.05);与正常组比较,模型组TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA的表达升高,且差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,观察组表达降低,且差异有统计学意义(P0.05);观察组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:金水清合剂能显著改善IgA肾病大鼠肾脏损害,早期治疗改善最为明显,其作用机制可能为下调TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白及mRNA的表达。     

续骨丹对胫骨骨不连大鼠VEGF，TGF-β表达的影响

目的:研究续骨丹外敷疗法对大鼠胫骨不连模型血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)表达的影响。方法:选取10只SD大鼠为空白组,成模50只SD大鼠随机分为模型组,续骨丹高、中、低剂量组(150,75,25 mg·kg-1),经皮电刺激神经组(transcutaneous electrical nerve stimulation,TENS)。分别在干预后4,8周对大鼠行X射线检测、测量骨间距;苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测骨损伤区和血清中VEGF,TGF-β变化。结果:与模型组比较,续骨丹高、中、低剂量组,TENS组骨间距和VEGF,TGF-β表达显著升高(P0.01);与TENS组比较,续骨丹高剂量组骨间距和VEGF,TGF-β表达显著升高(P0.01),续骨丹中剂量组差异不显著,续骨丹低剂量组显著降低(P0.05,P0.01)。结论:续骨丹可以通过调节VEGF,TGF-β的表达,改善局部血流供应,诱导血管重建和骨重建,促进骨不连愈合。     

祛湿益气固本方对COPD大鼠肺组织COX-2、VEGF表达的影响

目的 观察祛湿益气固本方对COPD大鼠肺组织COX-2、VEGF表达的影响,探讨祛湿益气固本方治疗COPD的机制.方法 采用纯香烟熏联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、祛湿益气固本方干预组.正常组、模型组用生理盐水灌胃,干预组给予祛湿益气固本方灌胃,连续14d.用免疫组化法检测肺组织中COX-2、VEGF的表达.结果 模型组COX-2、VEGF的表达较其他各组高,差异有统计学意义,P〈0.05;祛湿益气固本方干预组COX-2、VEGF的表达较模型组低,差异有统计学意义,P〈0.05;与正常组相比无统计学意义,P〉0.05.结论 ① COPD的发病机制可能与其肺组织中COX-2、VEGF的表达升高有关;②祛湿益气固本方对COPD有干预作用,可能与降低肺组织中COX-2、VEGF的表达有关.     

益气消癥通络方对慢性阻塞性肺疾病血管重塑模型大鼠VEGF、ET-1和CTGF表达的影响

目的:探讨益气消癥通络方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)血管重塑模型大鼠血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)、内皮素-1(ET-1)、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:60只Wistar大鼠随机分为6组:空白组(n=10)、模型组(n=10)、西药组(n=10)、益气消癥通络方低剂量组(n=10)、中剂量组(n=10)及高剂量组(n=10)。造模采用香烟烟雾暴露联合气道注入脂多糖(LPS)法制备COPD血管重塑大鼠模型。实验第4天起,模型组大鼠按10 mL/(kg·d)给予生理盐水灌胃;西药组大鼠雾化吸入布地奈德混悬液(剂量按体表面积换算为成人量的6.17倍),1次/d;中药组干预分别按照益气消癥通络方低剂量组[17.89 g/(kg·d)]、中剂量组[35.78 g/(kg·d)]、高剂量组[53.67 g/(kg·d)]灌胃给药,共12周。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清VEGF、ET-1、CTGF水平。结果:大鼠肺血管病理改变显示COPD血管重塑大鼠模型造模成功。ELISA检测结果:与正常组大鼠血清VEGF、ET-1、CTGF表达水平相比,其余各组均升高,差异有统计学意义(P0.01);与模型组VEGF、ET-1、CTGF表达水平相比,西药组的VEGF、ET-1含量表达下降,差异有统计学意义(P0.01),益气消癥通络方低剂量组、中剂量组及高剂量组的VEGF、ET-1、CTGF表达水平明显均有下降趋势,差异有统计学意义(P0.01);与西药组大鼠血清VEGF、ET-1、CTGF水平比较,益气消癥通络方低剂量组ET-1、CTGF表达水平均下降,差异有统计学意义(P0.05),中剂量组及高剂量组VEGF、ET-1、CTGF含量均下降,差异均有统计学意义(P0.05);与益气消癥通络方高剂量组比较,西药组、低剂量及中剂量组差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:益气消癥通络方能够通过降低VEGF、ET-1、CTGF表达水平,干预COPD血管重塑,其中益气消癥通络方高剂量效果更为显著。     

活血益气方及其拆方对大鼠心肌梗死边缘区血管内皮生长因子及其上游调控因子miR-126的影响

目的探讨活血益气方促血管新生的可能作用机制及配伍规律。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血益气方组、益气方组、活血方组,每组6只。除假手术组外其余各组建立心肌梗死模型。造模24 h后活血益气方组、益气方组、活血方组给予浓度分别为3.2 g/ml、2.4 g/ml、0.8 g/ml相应中药溶液0.5 ml/100 g灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水,每日1次。4周后取各组大鼠梗死边缘区心肌组织用实时荧光定量PCR法检测心肌梗死边缘区组织miR-126、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果模型组大鼠梗死边缘区心肌组miR-126的表达低于假手术组(P0.01);活血益气方组、益气方组、活血方组miR-126的均表达低于模型组,活血益气方组、活血方组VEGF mRNA的表达高于模型组(P0.05或P0.01);活血益气方组对miR-126、VEGF mRNA的调节优于益气方组(P0.05或P0.01)。结论活血益气方促血管新生的作用机制可能与上调VEGF及下调其上游调控因子miR-126有关,活血药和益气药具有协同作用。     

活血益气方及其拆方药物血清对VEGF165转染 脐静脉内皮细胞分泌MMP-9,MMP-2的影响

目的:探讨活血益气方及其拆方含药血清对含有血管内皮生长因子(VEGF) 165的重组质粒pcDNA3.1-VEGF165转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌基质金属蛋白酶(MMP)2,9的影响.方法:构建pcDNA3.1-VEGF165重组质粒,采用Fugene HD将质粒瞬时转染至HUVEC中.制备活血益气方及其拆方含药大鼠血清、生理盐水正常血清,以5％药物血清作用于转染后的HUVEC,Western blot法检测VEGF的表达,ELISA法测定MMP-2,MMP-9的表达.结果:(1)活血益气方组VEGF蛋白表达高于生理盐水组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).拆方各组则低于活血益气方组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).(2)活血益气方组、活血方组MMP-2含量高于生理盐水组,与之比较有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).拆方各组中仅益气方组MMP-2含量低于活血益气方组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).(3)活血益气方及其拆方各组MMP-9含量均高于生理盐水组,仅活血益气方组、活血方组与之比较有统计学差异(P<0.01,P＜0.05).拆方各组MMP-9含量均低于活血益气方组,与之比较具有统计学差异(P＜0.01).结论:活血益气方可以促进转染后HUVEC表达VEGF及分泌MMP-2,MMP-9,活血方药在这方面起主要作用.推测其治疗性血管生成作用机制可能与促进内皮细胞分泌MMP,从而促进内皮细胞迁移,提高血管通透性有关.     

活血益气方及其拆方对大鼠心肌梗死边缘区Spred1及血管新生的影响

目的观察活血益气方及其拆方对心肌梗死后大鼠梗死边缘区心肌组织血管新生负性调控因子Spred1及血管新生的影响,探讨活血益气方促血管新生的可能作用机制及配伍规律。方法健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组6只与手术组24只,手术组行左冠状动脉前降支结扎术制备急性心肌梗死模型,随机分为模型组、活血益气方组、益气方组、活血方组。假手术组只穿线不结扎。连续给予相应药物4周后,处死大鼠,取梗死边缘区心肌组织进行指标检测。采用免疫组织化学法观察微血管密度(microvasculardensity,MVD)、微血管平均直径(mean microvascular diameter,MMVD);采用实时荧光定量PCR法检测Spred1 mRNA的表达;采用Western Blot法检测Spred1蛋白的表达。结果 (1)模型组MVD高于假手术组,MMVD小于假手术组(P0.01);活血益气方组、益气方组、活血方组MVD高于模型组(P0.01或P0.05),其中以活血益气方组最为明显,MMVD大于模型组,仅活血益气方组与之比较具有统计学差异(P0.01);益气方组、活血方组MMVD小于活血益气方组,分别与之比较,均具有统计学差异(P0.01)。(2)模型组梗死边缘区心肌组织Spred1 mRNA表达高于假手术组(P0.05);活血益气方组、益气方组、活血方组Spred1mRNA表达高于模型组,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05);益气方组、活血方组Spred1mRNA表达均高于活血益气方组,仅活血方组与之比较具有统计学差异(P0.01)。(3)模型组梗死边缘区心肌组织Spred1表达高于假手术组,两者比较未见统计学差异(P0.05);活血益气方组、益气方组、活血方组Spred1表达均低于模型组,比较差异具有统计学意义(P0.05);益气方组Spred1表达低于活血益气方组,活血方组Spred1表达高于活血益气方组,分别与之比较,均未见统计学差异(P0.05)。结论活血益气方及其拆方具有不同程度促进心肌梗死模型大鼠梗死边缘区血管新生的作用,以活血益气方作用最为显著,益气方、活血方在其中起协同作用,其作用机制可能与下调Spred1、上调其mRNA的表达有关。在Spred1 mRNA上调的情况下,Spred1表达降低,提示Spred1 mRNA可能存在转录后调节因子,其具体作用机制尚需进一步研究。     

黄芪白术配伍干预慢性阻塞性肺疾病气道重塑的实验研究

目的观察黄芪白术配伍干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑的影响。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组及黄芪白术低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余4组采用气管缓慢注入脂多糖(200μL/只)加烟熏的方法复制COPD大鼠模型,正常组气管滴注等容积0.9%氯化钠注射液。造模4周后,黄芪白术低、中、高剂量组大鼠分别予3.6、7.2、14.4 g/(kg·d)黄芪白术中药灌胃,正常组和模型组每日灌胃等容积无菌蒸馏水,均每日1次,连续灌胃4周。灌胃结束后取各组大鼠右肺组织,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肺组织匀浆中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、分泌片(SC)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量,取左肺组织制作病理切片。结果模型组SIgA、SC、TGF-β1、VEGF含量与正常组比较均明显升高(P0.01);黄芪白术低剂量组SIgA、SC、TGF-β1、VEGF含量均低于模型组(P0.01);黄芪白术中剂量组SIgA、SC、VEGF含量均低于模型组(P0.01);黄芪白术高剂量组VEGF含量低于模型组(P0.01)。黄芪白术高剂量组SIgA、SC、TGF-β1、VEGF含量均高于黄芪白术低剂量组(P0.05)。结论黄芪、白术配伍能降低COPD大鼠SIgA、SC、TGF-β1、VEGF的含量,对减缓气道重塑进展有积极作用。     

玉屏风散加味方干预COPD气道重塑相关细胞因子作用研究

目的探讨玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的调节作用。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、玉屏风散加味方高剂量组、玉屏风散加味方中剂量组、玉屏风散加味方低剂量组、阳性组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠采用被动吸烟加气管内注入LPS的方法复制COPD大鼠模型,玉屏风散加味方各组给予相应剂量玉屏风散加味方灌胃,阳性组给予罗红霉素胶囊溶液灌胃,正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃。灌胃30 d后用ELISA方法测定大鼠肺泡灌洗液中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1水平,计算MMP-9/TIMP-1比值。结果模型组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显高于正常组(P均0.05),MMP-9/TIMP-1比值明显低于正常组(P0.05);玉屏风散加味方高、中剂量组及阳性组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显低于模型组(P均0.05),玉屏风散加味方高剂量组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显低于玉屏风散加味方低剂量组(P均0.05)。结论玉屏风散加味方可延缓COPD气道重塑病变,其干预COPD气道重塑的作用可能是通过调节气道局部细胞因子MMP-9、TIMP-1和TGF-β1表达实现的,且以高剂量效果最为明显。     

左归复方对2型糖尿病妊娠大鼠胰腺CD4、TGF-β1的影响

目的:通过构建2型糖尿病(T2DM)大鼠妊娠模型,探讨左归复方对2型糖尿病妊娠大鼠模型胰腺组织CD4、TGF-β1表达的影响。方法:将40只雌性SD大鼠随机分为5组,其中4组以高糖高脂饮食并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型组,采用电化学法对各组大鼠按照血糖水平排序,随机将40只雌性SD大鼠分为正常组、中药低剂量组、中药高剂量组、达美康组、模型组,2∶1雌雄比例合笼,建立2型糖尿病大鼠妊娠模型。观察大鼠一般情况,妊娠第0.5天开始对以上5组分别予等容量0.9%氯化钠注射液、低剂量左归复方、高剂量左归复方、达美康混悬液、蒸馏水灌胃21d,观察各组大鼠胰腺组织病理形态学的变化,免疫组化法检测胰腺CD4、TGF-β1蛋白的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组胰腺CD4水平显著升高,TGF-β1水平显著降低,差异均有统计学意义(P0.01或P0.05);与模型组比较,中药低、高剂量组胰腺CD4水平显著降低,达美康组TGFβ1水平显著升高,差异有统计学意义(P0.01或P0.05);中药低剂量组较达美康组CD4、TGFβ1水平低,差异有统计学意义(P0.01)。结论:左归复方能够改善2型糖尿病大鼠CD4、TGF-β1蛋白的表达。