真武汤含药血清对异丙肾上腺素致心肌细胞凋亡Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察真武汤含药血清对异丙肾上腺素致大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨真武汤对心肌细胞损伤的保护作用机制。方法:采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量。筛选真武汤含药血清的最佳浓度。实验分为空白组、模型组[异丙肾上腺素(10-6mol/L)]、西药组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)]、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)。硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)的含量来衡量心肌细胞的损伤程度。免疫荧光检测线粒体膜电位。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:1、异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;2、异丙肾上腺素10μmol/L作用6 h后,细胞存活率降低较明显;3、TBA法检测MDA含量:与异丙肾上腺素作用相比,真武汤使心肌细胞内MDA含量减少,使心肌细胞受损伤的程度降低;4、免疫荧光检测线粒体膜电位:模型组与空白组比较线粒体膜电位明显变化,而真武汤与西药组较模型组线粒体荧光表达有所下降;5、TUNEL分析心肌细胞凋亡率:异丙肾上腺素组心肌细胞凋亡率明显升高,与空白组相比有显著性差异(P0.05);卡托普利组及真武汤10%含药血清组心肌细胞凋亡率与异丙肾上腺素组相比明显降低,有显著性差异(P0.05);6、Western Blotting检测结果:异丙肾上腺素组心肌细胞Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增加,与空白对照组比较有显著性差异(P0.01);真武汤10%含药血清组和西药组与模型组相比较,Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能有效降低异丙肾上腺素引起的心肌细胞损伤,抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与其能够保护心肌细胞内线粒体,调节Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

抗纤益心方对去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨抗纤益心方对去甲肾上腺素(NE)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法采用CCK-8法筛选抗纤益心方最佳给药浓度。大鼠H9c2心肌细胞常规培养,饥饿8 h后细胞进行分组,正常组未做处理,模型组加100μmol/L的NE 100μl,抗纤益心方组加入筛选最佳浓度抗纤益心方溶液2μl+100μmol/L的NE 100μl、卡托普利组加入2×10~(-5)mol/L卡托普利5μl+100μmol/L的NE 100μl,各组设3个复孔,作用24 h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,并检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果最终筛选以0. 25 mg/ml的抗纤益心方为干预浓度进行实验。与正常组比较,模型组细胞凋亡率升高,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P 0. 01)。与模型组比较,抗纤益心方组和卡托普利组细胞凋亡率降低,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(P 0. 05或P 0. 01)。结论抗纤益心方可抑制NE诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

心衰合剂对大鼠心肌细胞肥大模型内质网应激因子Grp78、Caspase-12表达的影响

目的观察心衰合剂对大鼠体外心肌细胞肥大模型细胞内质网应激因子Grp78及Caspase-12表达的影响。方法培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)建立肥大心肌细胞模型(模型组),分别用心衰合剂(10%含药血清组)卡托普利(卡托普利组)干预细胞。Western-blot测定胞内Grp78及Caspase-12表达的蛋白表达水平。结果模型组心肌细胞Grp78、Caspase-12蛋白表达水平明显上调(P0.01);与模型组比较,10%含药血清组及卡托普利组可以显著下调Grp78、Caspase-12蛋白表达水平(P0.01),2组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论心衰合剂可下调内质网应激相关蛋白Grp78、Caspase-12表达水平,提示心衰合剂通过减轻内质网应激防止细胞发生凋亡,保护心肌细胞。     

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P0.01),细胞内ROS水平升高(P0.001),线粒体膜电位降低(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleavedCaspase-3/proCaspase-3比值升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P0.01,P0.05),ROS水平显著降低(P0.001),线粒体膜电位升高(P0.001),细胞凋亡率降低(P0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P0.001,P0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。     

化痰活血益气方含药血清对异丙肾上腺素作用下大鼠H9c2细胞株Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

目的:探讨化痰活血益气方含药血清的抗心肌肥厚作用及对细胞间质Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响。方法:分别制备生理盐水、化痰活血益气方低、中、高剂量(24.42、48.83、97.66 g/kg)及卡托普利(0.1 g/kg)含药血清。采用异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥厚模型(10μmol/L,48 h)。各组细胞给予相应20%含药血清干预后,行免疫荧光染色并测定细胞表面积,BCA法检测细胞蛋白浓度,实时荧光定量RT-PCR检测胚胎基因心房利钠肽(atrial natriuretie peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,Western blot检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组细胞的表面积、蛋白浓度、胚胎基因(ANP、BNP)mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达均显著升高(P0.05)。与模型组比较,化痰活血益气方中剂量组上述指标均显著降低(P0.05)。结论:(1)化痰活血益气方含药血清可有效改善ISO诱导的H9c2心肌细胞肥厚并降低Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;(2)在化痰活血益气方含药血清干预的各组细胞中,等效于成人给药剂量的中剂量组细胞改善最为显著,且效果优于卡托普利组。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的H9C2心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法:H9C2心肌细胞传代后随机分为正常对照组、异丙肾上腺素(10μmol/L)组、普萘洛尔(2μmol/L)组和黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)组,采用流式细胞术检测H9C2心肌细胞凋亡率;运用JC-1荧光探针检测各组细胞线粒体膜电位的变化;采用Western Blot分别测定线粒体和胞浆中细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,异丙肾上腺素组的凋亡率显著增加,线粒体膜电位降低,细胞色素C外流,线粒体细胞色素C表达减少而胞浆中表达增多。与模型组相比,黄芪甲苷(50、100μmol/L)组能明显降低凋亡率,提高线粒体膜电位及减少细胞色素C外流,且呈一定剂量依赖性。结论:黄芪甲苷可通过线粒体凋亡途径抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡。     

天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、美多巴组、天麻钩藤饮2.85、5.7、11.4、22.8g/kg剂量组,天麻钩藤饮按照相应剂量灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,美多巴片(0.05g/kg)溶于生理盐水灌胃。采血制备含药和空白血清,常规培养PC12细胞,空白组和模型组给予空白血清,其他5组给予10%含药血清,孵育30min后,再加500μmol/L MPP+共孵育48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞存活率,LDH释放检测细胞毒性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3及Caspase-9活性。结果:模型组较空白组细胞活力明显降低,LDH释放率增加,诱导细胞发生凋亡,同时Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平增加,而Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3及Caspase-9活性明显增加。与模型组比较,10%的天麻钩藤饮5.7、11.4、22.8g/kg含药血清组细胞活力显著增加,LDH释放率减少,凋亡细胞量减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3及Caspase-9活性降低;而10%的天麻钩藤饮2.85g/kg含药血清组无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能密切相关。     

疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:探讨疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的影响以及作用机制。方法:体外培养大鼠BMSCs,以不同浓度双氧水(H2O2)诱导BMSCs凋亡,取最适宜浓度1.0 mmol·L~(-1)用于实验。疏血通脉胶囊低、中、高剂量(含生药1.81,3.62,7.24 g·kg~(-1))灌胃给药制备大鼠含药血清。选择第3代BMSCs,随机分正常组(不做处理,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液),模型组(H2O2诱导细胞凋亡,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液)和疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组(H2O2诱导细胞凋亡,分别加入对应剂量、体积分数为15%的疏血通脉胶囊含药血清培养液),共5组,作用24 h后噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞相对存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA的表达。结果:H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导BMSCs凋亡。MTT结果显示疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组细胞存活率较模型组有明显提高(P0.01),且存活率随剂量增加而增高(P0.05);Annexin V-FITC/PI流式细胞术结果显示疏血通脉胶囊含药血清可以降低H2O2诱导的BMSCs凋亡率(P0.01)。Real-time PCR结果显示H2O2诱导可以增加BMSCs的Caspase-3 mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA表达。疏血通脉胶囊含药血清处理下调了Caspase-3 mRNA的表达(P0.01),上调了Bcl-2 mRNA的表达(P0.01)。结论:疏血通脉胶囊含药血清可通过上调Bcl-2基因表达,负性调控Caspase-3基因,从而抑制H2O2导致的BMSCs凋亡。     

天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导PC12细胞凋亡JNK通路的影响

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP~+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其是否通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路发挥神经保护作用。方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、天麻钩藤饮低、中、高剂量组,每组8只。天麻钩藤饮按照5.7,11.4,22.8 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备空白和含药血清。PC12细胞常规培养并分为空白组、模型组、天麻钩藤饮含药血清低、中、高剂量组,空白组和模型组加空白血清,其他3组加10%的天麻钩藤饮含药血清,孵育30 min后,模型组和含药血清组再加500μmol·L~(-1)MPP~+共孵育48 h后收集细胞,采用Cell Titer 96Aoueous MTS Reagent powder(MTS法)检测细胞存活率。后续实验分为5组,即:空白组,MPP~+组,MPP~++含药血清高剂量组,MPP~++SP600125组,MPP~++含药血清高剂量+SP600125组,采用Annexin VFITC/PI双染色法检测细胞凋亡,分光光度法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JNK,p-JNK,c-Jun,p-c-Jun蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低(P0.05);与模型组比较,10%的天麻钩藤饮低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加(P0.05)。后续试验中,与空白组比较,MPP~+组细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显升高(P0.05)。与MPP~+组比较,MPP~++含药血清高剂量组,MPP~++SP600125组均能够使细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显降低(P0.05),而MPP~++含药血清高剂量+SP600125组的作用明显高于MPP~++含药血清高剂量组(P0.05),但不高于MPP~++SP600125组。JNK和c-Jun蛋白表达无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与JNK信号通路密切相关。     

参附益心方对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞凋亡及线粒体含量、膜电位的影响

目的探讨参附益心方对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2心肌细胞损伤的干预作用及相关机制。方法采用CCK-8法筛选参附益心方、辅酶Q10、氯沙坦钾实验药物浓度,MTT法筛选AngⅡ实验药物浓度。以H9c2心肌细胞为研究对象,以AngⅡ诱导H9c2心肌细胞损伤为模型,将细胞分为正常对照组、模型组、辅酶Q10组、氯沙坦组和参附益心方低、高剂量组。正常对照组正常培养24 h;模型组用含筛选浓度的AngⅡ的培养基培养24 h;参附益心方低、高剂量组及氯沙坦组、辅酶Q10组用含筛选出相应药物浓度及AngⅡ的培养基培养24 h。检测各组H9c2心肌细胞活性、线粒体含量及膜电位、活性氧簇(ROS)含量、细胞凋亡率,凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2基因表达,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白活性。结果最终选择参附益心方低、高浓度为0. 25、0. 5 mg/ml,辅酶Q10研究浓度为1×10~(-4)mol/L,氯沙坦钾研究浓度为1×10~(-4)mol/L,AngⅡ建立实验模型浓度为1×10~(-5)mol/L。与正常对照组比较,模型组大鼠心肌细胞活性、线粒体数量及膜电位、Bcl-2基因表达降低,ROS含量、细胞凋亡率及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax基因表达升高,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白活性亦升高(P 0. 05);与模型组比较,参附益心方高剂量组和氯沙坦组、辅酶Q10组细胞活性、线粒体数量及膜电位升高,ROS含量、细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、Bax基因表达降低,Caspase-3、Caspase-9蛋白活性亦降低(P 0. 05)。结论参附益心方可能通过改善心肌细胞线粒体功能,降低ROS含量,从而减少AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞发生凋亡。     

温阳振衰颗粒对阿霉素致心肌细胞损伤MEF2表达的影响

目的观察温阳振衰颗粒含药血清对H9C2心肌细胞损伤模型肌细胞增强因子2(MEF2)表达的影响。方法实验分为正常对照组、H9C2损伤组、5%含药血清组和10%含药血清组。H9C2损伤组的细胞培养基中加入2.67μmol/L的阿霉素(ADR),两含药血清组培养基中加入2.67μmol/L的ADR和5%,10%温阳振衰颗粒含药血清,共培养44 h。检测实验末各组H9C2心肌细胞中p-MEF2、MEF2表达量。结果各损伤组细胞存活率和p-MEF2表达量均明显低于正常对照组(P均0.05),5%含药血清组和10%含药血清组细胞存活率和p-MEF2表达量均明显高于H9C2损伤组(P均0.05),且10%含药血清组均明显高于5%含药血清组(P均0.05);各组间H9C2心肌细胞MEF2表达量比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论温阳振衰颗粒能抑制MEF2蛋白的过度去磷酸化,这可能是其治疗慢性心力衰竭的重要机制之一。     

芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:培养H9C2大鼠心肌细胞,与芝麻素含药血清或空白血清预孵12 h后,加入AngⅡ孵育24 h。MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测BCL-2、BAX、Caspase-3、SOD和p47phox蛋白表达水平,比色法测定细胞总抗氧化能力、细胞内活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量。结果:芝麻素含药血清预孵可显著改善AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡和活力损伤(P0.05或P0.01),下调BAX、Caspase-3及p47phox蛋白表达,上调BCL-2、SOD蛋白表达水平(P0.05或P0.01)。此外,芝麻素含药血清可显著提高心肌细胞总抗氧化能力降低细胞内ROS和培养上清MDA含量(P0.05或P0.01)。空白血清对上述指标均无显著影响。结论:芝麻素可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡和活力损伤,其机制与改善氧化应激状态、调节BCL-2/BAX蛋白表达水平,进而下调Caspase-3蛋白表达有关。     

苓桂术甘汤含药血清对TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞株H9c2凋亡的影响

目的:观察苓桂术甘汤含药血清对转化生长因子-β1(Transforming growth factor,TGF-β1)诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡的影响,探讨苓桂术甘汤抗心肌细胞凋亡的机制。方法 :分别用苓桂术甘汤(2.1、4.2、8.4 g/kg)大鼠含药血清(10%)与大鼠心肌细胞H9c2共培养12 h后,加入TGF-β1(20 ng/ml)继续培养12 h。用MTT法检测心肌细胞H9c2的存活率、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态学变化、流式细胞术(Annexin V/PI双染色法)检测细胞凋亡率、ELISA法检测H9c2细胞半胱氨酸蛋白酶-3和半胱氨酸蛋白酶-8的表达量。结果:与正常对照组比较,TGF-β1模型组H9c2细胞存活率明显降低,细胞染色质边聚,细胞核致密浓染且固缩并呈现蓝白色,细胞凋亡率明显升高,半胱氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸蛋白酶-8表达量明显升高;与TGF-β1模型组比较,苓桂术甘汤(4.2、8.4 g/kg)含药血清组细胞存活率均明显升高,苓桂术甘汤(2.1、4.2、8.4 g/kg)含药血清组凋亡率由(25.7±1.1)%分别下降至(22.2±1.0)%、(14.7±0.9)%和(10.1±1.3)%;苓桂术甘汤(2.1、4.2、8.4 g/kg)含药血清组半胱氨酸蛋白酶-3的表达量由(33.1±1.0)pmol/l分别明显下降至28.9±2.0、27.5±2.8和(24.2±2.3)pmol/L,苓桂术甘汤(4.2、8.4 g/kg)含药血清组半胱氨酸蛋白酶-8的表达量由(20.8±2.4)pmol/L分别明显下降至(16.4±1.3)、(13.7±0.7)pmol/L。结论:苓桂术甘汤含药血清能够明显抑制TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞H9c2的凋亡,该作用与其抑制半胱氨酸蛋白酶-3和半胱氨酸蛋白酶-8表达有关。     

滋阴明目丸含药血清对视网膜色素上皮细胞光损伤模型细胞凋亡率及Caspase-1、Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨滋阴明目丸对视网膜色素上皮(RPE)细胞光损伤后的保护作用及可能机制。方法60只SD大鼠分为滋阴明目丸低、中、高剂量组和空白组,每组15只。滋阴明目丸各剂量组分别予以滋阴明目丸浓度为0. 39、0. 78、1. 56 g/ml的混悬液灌胃,灌胃量均为34 ml/(kg·d),空白组予以生理盐水34 ml/(kg·d)灌胃,各组均给药7天。灌胃结束后制备含药血清,并采用MTT法筛选后续实验的含药血清浓度。实验分为空白组(不加含药血清)、血清组(加含药血清)、模型组(光损伤造模、不加含药血清)及中药组(光损伤造模、加含药血清)。培养24 h后模型组和中药组建立体外RPE细胞光损伤模型。检测各组细胞凋亡率,测定半胱氨酸蛋白酶1 (Caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)蛋白及mRNA表达。结果中剂量血清为最佳给药剂量并用于后续实验。与空白组比较,血清组细胞凋亡率、Caspase-1和Caspase-3蛋白及mRNA表达差异均无统计学意义(P> 0. 05),模型组细胞凋亡率、Caspase-1和Caspase-3蛋白及mRNA表达显著上升(P <0. 05);与模型组比较,中药组细胞凋亡率、Caspase-1和Caspase-3蛋白及mRNA表达显著下降(P <0. 05)。结论滋阴明目丸含药血清能有效抑制RPE细胞光损伤后的细胞凋亡,可能与抑制细胞凋亡因子Caspase-1、Caspase-3蛋白及mRNA表达有关。     

活血解毒方对糖尿病视网膜病变细胞凋亡及相关细胞因子的影响

目的观察中药复方活血解毒方(HXJD)对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡及凋亡相关因子NF-κB和Caspase-3 mRNA和蛋白表达的影响。方法采用链脲佐菌素(65 mg/kg)一次性腹腔注射的方法,建立糖尿病大鼠模型,将50只SD大鼠随机分为模型组和HXJD高剂量组(15.4 g/kg)、中剂量组(7.70 g/kg)、低剂量组(3.85 g/kg)及导升明组(0.167 g/kg),每组10只,另设10只正常对照组。造模成功后,灌胃给药,20周后处死动物。应用TUNEL法检测细胞凋亡程度,免疫组化和蛋白印迹技术检测视网膜全层中NF-κB和Caspase-3的表达;采用Real-time PCR法检测视网膜NF-κB和Caspase-3 mRNA的表达。同时,体外培养大鼠视网膜神经节细胞株(RGC-5),制备HXJD含药血清。利用55.5 mmol/L葡萄糖浓度模拟高糖环境诱导,将细胞分为5组:空白组、高糖组、含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组。采用CCK-8和AnnexinⅤ-FITC法检测不同血清干预高糖诱导下RGC细胞24 h增殖活性及细胞凋亡的影响。结果与正常对照组比较,模型组凋亡细胞增加,大鼠视网膜组织NF-κB和Caspase-3蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.05);与模型组比较,活血解毒方各剂量组和导升明组视网膜细胞凋亡的程度、视网膜NF-κB和Caspase-3蛋白和mRNA的表达量均降低(P0.05)。与空白组比较,高糖组细胞活性降低,细胞凋亡比例增加(P0.05)。与高糖组比较,含药血清高、中剂量组细胞活性增高(P0.05),含药血清各剂量组细胞凋亡比例减少(P0.05,P0.01)。结论活血解毒方可能通过改善糖尿病大鼠视网膜中细胞凋亡的相关细胞因子NF-κB和Caspase-3的表达,同时调节视网膜神经节细胞活力,改善高糖条件下RGC细胞的凋亡程度。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的:探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞损伤模型存活率及维生素D受体mRNA表达的影响。方法:取正常生长的细胞,用80μmol·L~(-1)的异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导H9C2心肌细胞肥大的模型,并随机分为5组:正常组,模型组,模型组+黄芪甲苷(10μmol·L~(-1))组,模型组+黄芪甲苷(30μmol·L~(-1))组,模型组+黄芪甲苷(60μmol·L~(-1))组。运用MTT法检测心肌细胞的存活率,Real-Time PCR法检测各组H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA的表达量。结果:MTT法显示使用异丙肾上腺素会诱导H9C2心肌细胞损伤,而不同剂量的黄芪甲苷可提高心肌细胞的活性,且黄芪甲苷的浓度在30μmol·L~(-1)时,细胞存活率最高。Real-Time PCR检测结果显示,不同剂量的黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的肥大H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量与模型组相比,其表达均明显上调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其通过维生素D轴调节VDR基因表达水平有关。     

白藜芦醇对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法利用ISO建立乳鼠心肌细胞凋亡模型,分为正常对照组(无血清DMEM培养液)、模型组(无血清DMEM培养液加入ISO 1μmol/L作用48 h),白藜芦醇干预组(分别向培养基中加入ISO 1μmol/L和Res 50μmol/L作用48 h)和白藜芦醇对照组(向无血清DMEM培养液中加入Res 50μmol/L)。Hochest33258染色检测细胞凋亡率;电镜观察心肌细胞超微结构;检测培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量;Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果模型组心肌细胞数量减少,细胞核形态不规则,可见凋亡小体,细胞凋亡率增加。白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组细胞膜完整,核膜清晰,核内染色质浓缩,细胞损伤程度减轻。与正常对照组比较,模型组心肌细胞凋亡率和LDH漏出量均增加,Bcl-2蛋白水平下调,Bax蛋白水平上调,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型组比较,白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组心肌细胞凋亡率和LDH漏出量均降低,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Res明显减轻ISO诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与逆转凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

黄芪苷Ⅳ对多柔吡星诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨黄芪苷Ⅳ对多柔吡星诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用1~3 d的SD大鼠分离心肌细胞,培养72 h后随机分为正常组、多柔吡星模型组(1.0 mol·L-1)、不同剂量黄芪苷Ⅳ(18 g·m L-1、36 g·m L-1、72 g·m L-1)与多柔吡星(1.0 mol·L-1)同时给药组(黄芪苷Ⅳ低、中、高剂量组)。培养24 h,检测心肌细胞存活率,以及培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,检测Caspase-3活性及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与正常组比较,多柔吡星模型组心肌细胞存活率明显降低(P0.01),培养基中CK、LDH含量显著增加(P0.01);与多柔吡星模型组比较,黄芪苷Ⅳ中、高剂量组细胞存活率升高(P0.05或P0.01),培养基中CK、LDH释放量降低(P0.05或P0.01),TUNEL实验表明心肌细胞凋亡比率减少(P0.01),Caspase-3含量降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达增加(P0.01),Bax表达降低(P0.05)。结论:黄芪苷Ⅳ对多柔吡星诱导的大鼠心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制心肌细胞凋亡、提高Bcl-2表达有关。     

实验性大鼠急性心肌缺血心肌细胞凋亡与Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的药物干预相关性研究

目的:探讨三七苦碟子提取物(简称SK,下同)干预实验性大鼠急性心肌缺血细胞凋亡表达的影响。方法:将60只健康雄性Wistar大鼠随机分成空白组、模型组、SK治疗高、中、低剂量组、阳性对照组,空白、模型组每日灌服生理盐水10mL/kg,SK治疗高、中、低剂量组分别给予SK稀释液340/274.72mg/kg、170/137.86mg/kg、85/68.68mg/kg灌胃,阳性对照组给予丹参滴丸稀释液405mg/kg灌胃,给药10日,末次给药30min后,采用盐酸异丙肾上腺素(ISO)腹部多点注射复制大鼠急性心肌缺血模型,于造模成功6h后开胸取心脏,将心室肌分别切开固定,采用免疫组化法检测各组Bcl-2、Caspase-3两种蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:SK能分别增加Bcl-2、抑制Caspase-3基因的蛋白表达,抑制和阻断急性心肌缺血大鼠心肌细胞过度凋亡的发生。结论:三七苦碟子提取物抗大鼠急性心肌缺血损伤的分子病理机制可能是通过调节Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,进而抑制心肌细胞凋亡来实现的。     

心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:观测心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法:H9c2细胞随机分为对照组、模型组、心肌片低中高剂量组,预给药24h后,建立心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)模型。检测细胞存活率,LDH释放水平,蛋白印迹法检测心肌细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3,Cyt-C蛋白的表达以及AMPK磷酸化水平。结果:与模型组比较,心肌片提高细胞存活率,减少LDH水平,稳定线粒体膜电位,减少Bax,Caspase-3以及Cyt-C蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax的比值(P0.05)。进一步研究发现,这些保护作用被AMPK抑制剂Compound C取消。结论:心肌片能减轻心肌缺血再灌注损伤,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能通过激活AMPK信号通路实现的。