不同脱钙方式对骨组织样本不同病理分析的影响

<正>骨与软组织肿瘤生物学特性复杂,在临床病理工作中有时依据形态学较难做出准确的病理诊断,需行免疫组化、FISH、PCR、Sanger测序及NGS等检测^[1]。骨组织质地坚硬,应使用脱钙液将组织软化后制片。目前,临床使用较多的仍为混合酸性脱钙液,其脱钙速度快,但易对组织抗原及DNA造成不可逆的损伤; EDTA性质温和,对组织抗原及核酸保存较好,但缺点是脱钙时间久且效果差。有研究显示改良EDTA常温处理骨髓样本20～24 h,HE染色佳,免疫组化染色强度适中,定位准确^[2]。     

骨组织脱钙及其脱钙后染色的研究

近年来为配合白血病、淋巴瘤等疾病的诊断而开展了骨髓穿刺活体组织病理检查,特别是2003年以来,为了配合“非典”患者治疗后期相继出现股骨头坏死等病症的科研工作,我科先后为中国医学科学院实验动物研究所及中国人民解放军军事医学科学院等科研单位制作了大量实验动物的骨组织标本的病理学切片。在制作这些骨组织病理切片的“脱钙-染色过程中”遇到了一些问题：骨组织脱钙不足（脱钙液浓度过低、时间过短）造成组织太硬,不易切片且极易脱片;骨组织脱钙过度（脱钙液浓度过高,时间过长）严重影响骨髓组织细胞染色效果,造成细胞核无法正常着色,要么细胞核不着色或着色很浅亦或被伊红染成红色,从而影响对病变组织的病理诊断及实验动物的研究工作。为解决出现的上述问题,我们在工作中认真仔细地分析研究了骨组织的特点,经过反复实验,摸索总结出一套适用于骨穿组织及实验动物骨组织的“脱钙-染色方法”,并获得了满意的结果,现将将此方法作一简单介绍以供读者参考。     

三种脱钙液对骨组织表面脱钙效果的比较

<正>骨组织是一种致密的结缔组织,细胞基质含有大量钙盐沉积,质地坚硬^[1]。骨组织必须进行脱钙处理才能制片,而脱钙过度会导致骨组织的结构被破坏,相关细胞表面抗原丢失,严重影响HE染色制片和免疫组化制片效果,影响病理诊断^[2]。脱钙液种类繁多,且尚未有相关文献报道各种脱钙液表面脱钙效果的优劣。本实验拟采用临床工作中常用的三种脱钙液对骨组织表面脱钙效果进行比较,为病理医师选用合适的表面脱钙液提供参考。     

免疫组化染色中骨组织脱钙方法

由于骨组织的特殊性,制备好的骨组织标本免疫组化并不是一件容易的事。由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶,因而脱钙是制备标本的重要一环。一些强酸如盐酸,硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐,但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏。本实验仿照目前国外利用EDTA低温脱钙方法,取得了比较满意的结果。     

三种骨组织脱钙方法的比较

骨组织制片是一重要环节,也是技术的一个难点。如果骨组织脱钙方法不当,会直接妨碍制片切片以及染色结果。作者对目前科研常用三种不同的脱钙方法进行了比较,从中筛选出一种较好的脱钙方法。认为10%甲酸-中性缓冲福尔马林脱钙液处理骨组织标本是一种较为理想的脱钙方法,具有很好的应用价值和推广作用。     

四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响

<正>骨是由黏多糖和蛋白纤维构成的有机质及沉积于其中的无机盐组成,无机盐主要是羟基磷灰石结晶,其中大部分为磷酸钙和碳酸钙;由于骨的特殊构成,使骨组织质地较硬,较难制成切片影响诊断工作,因此制片过程中必须对其脱钙。目前临床工作中较常见的脱钙液是复合酸类脱钙液,是将2种或2种以上酸类脱钙液联合使用,或在单纯酸内加入     

Formical-4脱钙剂在骨组织脱钙中的应用

在骨组织病理制片中，脱钙是至关重要的步骤之一。目前使用的脱钙剂多为无机强酸类制剂，虽脱钙效果较好，但常造成组织形态，特别是细胞结构的破坏，使得病理形态观察受到影响。笔者使用一种快速脱钙剂Formical-4，不仅能够保持组织形态良好，亦能用于特殊染色和免疫组化标记，现介绍如下。     

有脱钙骨组织标本超薄切片的制作方法

在骨超微结构研究和临床外检工作中，我们利用Epon812含钙盐的骨组织标本来制备超薄切片。由于不脱钙的超薄切片在电镜下显示了骨组织的真实结构，更利于深入地研究骨组织的形态学。     

加热式磁力搅拌器在骨组织脱钙中应用

骨组织脱钙制片是临床病理诊断中常用的一种手段 ,而选择适当的脱钙液、脱钙方法以及掌握脱钙的时间往往与骨组织的制片质量密切相关。为了了解经脱钙后的骨组织能否应用于免疫组化和特殊染色 ,进行必要的鉴别诊断 ,我们在实践工作中特对需要脱钙的骨组织进行了实验比较 ,现将结果报道如下。1　材料与方法1 1　材料和仪器　收集临床手术切除的骨肿瘤、病变骨以及钙化组织标本共 5 0例 ,不同的标本根据制片要求用骨锯或骨锉处理成薄片备用。用于脱钙的磁力加热搅拌器为江苏省金坛医疗仪器厂生产的金怡牌 78 1型。1 2　方法　将准备脱钙的标本…     

脱钙液在微波辐射下对骨组织作用效果及免疫组织化学染色的影响

骨组织脱钙常规多采用酸性液体（如硝酸、盐酸、甲酸等）进行脱钙，一般需较长时间，组织细胞结构很难保持完整清晰，有些甚至破坏组织结构很严重，从而影响病理学的诊断和研究。骨组织中的蛋白抗原得不到很好的保存，有时甚至丢失。为此我们对９例骨组织用乙二胺四乙酸二...     

EDTA脱钙在骨组织大切片制片中的应用效果

骨肿瘤病理大切片可以观察组织全貌,准确评估病灶大小、侵袭范围以及手术切缘,对于确定骨肿瘤的边界和临床预后非常重要.但骨组织中丰富的钙盐导致完整制片困难,尤其是大切片的制作.普通酸性脱钙液因破坏细胞及组织结构,影响染色、镜下观察和分子检测,已不适用于日常工作,而EDTA脱钙液性质温和,能有效保护组织内的核酸和组织抗原,日...     

216例骨髓脱钙时间的探讨

骨髓活检不仅关系到造血系统疾病的诊断 ,而且影响治疗及预后 ,由于骨组织是由无机钙盐构成 ,骨盐主要是羟基磷灰石的结晶 ,即磷酸钙和碳酸钙。致组织质硬 ,难以直接制片。必须经过脱钙处理后 ,才能进行常规HE制片、特染及免疫组化检查。然而 ,在临床实践中常因脱钙不全或脱钙过度等原因 ,制作不出良好的组织切片而影响病理诊断。为此 ,笔者对 2 16例骨髓活检标本脱钙时间加以总结 ,并进行改良方法以寻求最佳的制片效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　骨髓活检标本 ,4 %盐酸脱钙液 ,70 %乙醇 ,密闭容器。1.2　方法　标本签收后立即…     

介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用

骨、含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织很坚硬,将其制成几微米切片相当困难,常用的方法是先经脱钙处理,使其变软后再切片,所以脱钙是这类组织制作病理切片的关键技术.脱钙液和脱钙方法很多,传统方法脱钙一般用硝酸,其效果不稳定,骨组织脱钙不足,切片破碎甚至切不成片且极易脱片;骨组织脱钙过度,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,造成细胞核不着色或着色很浅,从而影响对病变组织的病理诊断.已有学者对此进行了改进[1~4], 但目前尚无公认的理想方法.为此我们在工作中反复摸索,结合Plank-Rycho脱钙液总结出一套改良的脱钙液并获得了满意效果,现将此方法介绍如下.     

荧光定量PCR检测病理组织中结核分枝杆菌的临床价值

目的探讨应用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术在病理组织中检测结核分枝杆菌DNA（TB-DNA）的临床应用价值。方法对196例临床诊断结核的穿刺病理活检标本进行石蜡包埋切片,采用实时荧光定量PCR技术检测TB．DNA,并行抗酸染色及组织病理学检查,对三种检测与临床诊断符合率进行比较。结果在196例临床诊断结核的石蜡包埋组织中,荧光定量PCR检测阳性136例,阳性率为69．39％,抗酸染色检测阳性69例,阳性率为35．20％,组织病理学检查阳性102例,阳性率为52．04％,荧光定量PCR检测阳性率最高。结论荧光定量PCR技术简便、快捷,敏感性强、特异性高,可作为结核病分子病理诊断的重要检测方法,具有较高的临床应用价值。     

微波快速脱钙及其脱钙液的选择

微波快速脱钙及其脱钙液的选择杨传红，赖晃文，唐赓云，姜秀英骨组织超薄切片的制备是进行骨组织超微结构研究的先决条件。常规脱钙方法时间太长且超微结构保存不良，不利于临床病理的快速诊断。我们选择不同脱钙液在微波条件下探讨快速脱钙的方法，以达到快速诊断的目的...     

不脱钙骨组织包埋技术的改进

在骨组织切片上同时进行组织形态学计量与免疫组化有较大难度。这是因为常用的包埋介质石蜡只能用于不含钙或含钙很少的组织,而骨组织富含钙盐,所以必须先脱钙。脱钙的骨组织可做免疫组化与原位杂交,但骨小梁的结构遭到了破坏,不能进行组织形态学计量,从而丢失了骨的生长与钙化方面的信息。塑料包埋的不脱钙骨组织虽能行组织形态学计量,却难以兼顾免疫组化与原位杂交。因此,建立一种可靠的、简便的且同时适应于三者的不脱钙骨组织包埋方法是骨病理学研究的关键。     

表面脱钙法在骨髓组织病理诊断中的应用

<正>病理工作中常遇到骨或含骨的组织、伴大片钙化的组织,这些组织无法常规直接制片,传统方法是将这些组织固定后进行脱钙,使钙盐溶解组织变软后再脱水、透明、浸蜡、包埋制片。然而,常规脱钙处理往往导致组织染色效果欠佳、组织抗原丢失及DNA等核酸分子严重片段化等[1],有时     

脱钙率对同种异体骨理化性能的影响

目的 脱钙程度是影响脱钙骨基质物理性能的主要因素,完全脱钙的骨组织质地柔软,力学传导性不好,使用时易发生修补处的塌陷。故研究不同脱钙率的脱钙骨物理性能,为优选关节软骨支架材料提供理论基础。方法通过原子吸收分光光度计检测同种异体骨的钙含量,然后将骨块浸泡于脱钙液中,实时检测脱钙液中的钙离子,根据脱钙液中的钙离子含量,控制脱钙率。分别检测脱钙率为0%、30%、50%、70%、80%、99.9%时同种异体骨的孔隙率、吸水率、孔径、力学性能和降解率。结果 随着脱钙率的增加,同种异体骨的孔径、孔隙率、吸水率、降解率均明显增加,钙的流失,使骨块的强度降低、韧性增加,与关节软骨的匹配性增强。结论 80%脱钙率条件下,同种异体骨块的性能最优,在保证拥有合适的孔径、孔隙率的前提下,还具有一定的机械强度,其降解速率与成骨速率也相当,是一种非常有前景的关节软骨修复支架材料。