男性乳腺癌组织中p57~(kip2)、ER、PR的表达及其意义

目的 探讨p57~(kip2)、ER、PR在男性乳腺癌(male breast cancer,MBC)中的表达及意义。方法 采用免疫组化Eli Vision法检测50例MBC、20例男性乳腺导管内原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)和20例男性乳腺发育(gynecomastia,GYM)组织中p57~(kip2)、ER、PR蛋白的表达。结果 p57~(kip2)蛋白在GYM中的表达最高,在MBC中的表达最低;MBC与DCIS、GYM中的表达相比,差异有显著性(P0.05);p57~(kip2)蛋白表达在DCIS与GYM中相比,差异有显著性(P0.05)。ER、PR蛋白在GYM中的表达最高,在MBC中的表达最低;ER、PR蛋白表达在MBC与GYM中相比,差异有显著性(P0.05)。在MBC中,三者表达均与临床分期、组织学分级有关(P0.05),p57~(kip2)蛋白表达与淋巴结转移有关(P0.05);p57~(kip2)与ER呈负相关(P0.05),p57~(kip2)与PR、ER与PR均呈正相关(P0.05)。结论 男性乳腺组织从良性增生到恶性转化中p57~(kip2)、ER、PR蛋白表达逐渐降低,甚至完全丧失;联合检测p57~(kip2)、ER、PR有助于MBC的诊断及预后判断。     

卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与其他莫西芬敏感性及ER亚型及p160共激活因子表达关系的初步探讨

目的分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系(A2780、CAOV-3、SKOV-3和ES-2)IL-6、IL-8分泌与其他莫西芬(Tamoxifen,TAM)敏感性及雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型及p160共激活因子表达的关系,为今后研究IL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对内分泌治疗产生耐药的机制奠定基础。方法 IL-6、IL-8的表达采用RT-PCR及ELISA法进行检测,卵巢癌细胞对TAM的敏感性采用MTT试验进行分析,ERα、ERβ及p160共激活因子的表达采用免疫印迹和RT-PCR技术进行检测。结果 4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8;4种细胞对TAM的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,CAOV-3、SKOV-3和ES-2细胞则有不同程度的耐药性(耐药倍数分别为4.98、3.75和2.66);这些细胞均不同程度地表达ERα,其中A2780细胞较低,CAOV-3和SKOV-3细胞较高,ES-2细胞居中;ERβ的表达情况则与ERα恰好相反;3种p160共激活因子mRNA的表达水平均以A2780细胞为最低,而ES-2、SKOV-3和CAOV-3细胞则依次升高。结论卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平与其对TAM的敏感性呈负相关,与其ERβ(而非ERα)及3种p160共激活因子的表达水平相一致。     

人子宫内膜癌中p57 kip2、Cyclin D1的表达及意义

目的：探讨p57 kip2、Cyclin D1在人子宫内膜癌发生、发展中的作用。方法选取子宫内膜样腺癌( endometrioid adenocar-cinoma, EA)100例、子宫内膜上皮内瘤变(endometrial intraepithelial neoplasia, EIN)20例、子宫内膜增生性病变20例、增生期子宫内膜组织20例;选取不同子宫内膜细胞[高分化子宫内膜癌细胞( Ishikawa)、中分化子宫内膜癌细胞( JEC)、低分化子宫内膜癌细胞(KLE)及正常子宫内膜细胞(ESC)]进行细胞培养。应用免疫组化EliVision法检测不同子宫内膜组织中p57kip2、Cyclin D1蛋白的表达;Western blot法检测不同子宫内膜细胞中p57 kip2、Cyclin D1蛋白的表达。结果 p57 kip2蛋白在EIN组织中表达最高,在增生期子宫内膜、EA、子宫内膜增生性病变组织中表达逐渐降低,子宫内膜增生性病变与EIN组织中p57 kip2蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。 Cyclin D1蛋白在EA组织中表达最高,在增生期子宫内膜组织中表达最低,在子宫内膜增生性病变组织、EIN组织中表达依次增高,差异均有显著性( P<0.01)。 p57 kip2、Cyclin D1蛋白在EA组织中的表达随着组织学分级的增高呈依次递减趋势,但仅p57 kip2蛋白表达和组织学分级有关( P<0.05)。 p57 kip2蛋白在KLE中表达最高,在ESC中表达最低,两组相比差异有显著性( P<0.05);Cyclin D1在JEC、Ishikawa中的表达高于ESC,差异均有显著性( P<0.05)。结论 p57kip2、Cyclin D1均参与子宫内膜癌的发生、发展。 Cyclin D1表达是子宫内膜癌发生的早期事件,可能还存在异常合成的p57 kip2蛋白,其协同Cyclin D1促进子宫内膜的恶性转化。联合检测p57 kip2、Cyclin D1在子宫内膜癌中的表达,对预测子宫内膜癌患者预后有一定的临床意义。     

下调ERα36提高他莫昔芬对卵巢癌细胞作用的敏感性

目的探讨新型膜性雌激素受体ERα36在他莫昔芬(tamoxifen, TAM)治疗卵巢癌中的作用。方法转染特异性的siRNA,下调卵巢癌细胞SKOV3、HO8910中ERα36的表达;TAM处理肿瘤细胞后,采用CCK-8、流式细胞术及Western blot等方法检测卵巢癌细胞的增殖、凋亡及相关信号通路关键蛋白的表达。结果 siRNA特异性下调ERα36蛋白的表达;CCK-8检测显示,1μmol/L TAM作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度;不同浓度的TAM作用ERα36下调的肿瘤细胞后,与siRNA对照组相比,肿瘤细胞抑制率明显上升(P0.01);下调ERα36表达后,p-Akt蛋白表达显著下降(P0.01),凋亡相关Caspase-3、Bax蛋白表达量显著升高(P0.01),BCL-2蛋白表达显著降低(P0.01)。结论利用特异性siRNA下调ERα36的表达后,可以增强TAM对卵巢癌细胞作用的敏感性。     

ERα、ERβ、pS2蛋白在子宫平滑肌肉瘤组织中的表达及意义

目的研究ERα、ERβ、pS2蛋白在子宫平滑肌肉瘤组织中的表达及意义。方法选取1997年1月~2004年5月间,青岛大学医学院,青岛市第三人民医院,第八人民医院,收治的子宫肌瘤和平滑肌肉瘤患者128例的石蜡块,用免疫组化法测定ERα、ERβ、pS2表达。结果子宫平滑肌肉瘤中,ERα阳性率(36.1%),子宫肌瘤中ERα阳性率(83.6%),两者比较有显著性差异(P<0.01);其强度亦有显著性差异(P<0.01);平滑肌肉瘤ERβ阳性率(18.0%)子宫肌瘤中ERβ阳性率(59.7%),两者比较有显著性差异(P<0.01);其强度亦有显著性差异(P<0.01)。平滑肌肉瘤pS2阳性率(41.0%)子宫肌瘤pS2率(23.9%),两者比较有显著性差异(P<0.05);pS2在子宫平滑肌肉瘤中的表达强度比在子宫肌瘤中高,两者比较有显著性差异(P<0.05)。随着子宫肉瘤临床分期的增加,ERα、pS2的阳性表达率降低,差异有显著性(P<0.05);ERα、ERβ、pS2在绝经前比在绝经后高,各指标在绝经前后比较都有显著性差异P<0.01。结论ERα、ERβ、pS2与子宫平滑肌肉瘤的发病机制有关,与子宫平滑肌肉瘤的预后有关。     

前列腺组织中ERα、ERβ的表达及其意义

目的探讨雌激素及其受体ERα、ERβ与良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)、前列腺癌(prostate cancer,PCa)的关系。方法采用免疫组化SP法检测ERα和ERβ在20例正常前列腺(normal prostate,NP)、80例BPH及46例PCa标本中的表达。结果 ERα主要在前列腺组织间质细胞表达,上皮细胞中无表达,在NP中呈低表达,在BPH中高表达,而在PCa表达下降(P0.01);但ERα在PCa不同病理分级和临床分期中的表达强度差异无显著性(P0.05)。ERβ主要在前列腺组织上皮细胞表达,很少位于间质,在NP、BPH中高表达,而在PCa中表达下降甚至呈阴性(P0.01),ERβ表达与分化程度呈正相关(P0.01),且主要表达于A、B期组织中(P0.01)。结论 ERα主要在间质细胞表达,而ERβ主要在上皮细胞表达,提示雌激素对BPH及PCa的作用可能主要是通过ERβ途径发挥作用的。ERβ在PCa中的表达明显下降,提示其可能与PCa的发生、发展有关,推测PCa中大部分ERβ可能是更具有侵袭性的ERβ变异体,致使PCa恶性程度增加。     

印迹基因p57~(kip2)蛋白在水泡状胎块诊断和分型中作用

目的 探讨p57kip2蛋白表达在水泡状胎块诊断和分型中的作用和意义.方法 应用免疫组化SP法检测p57kip2蛋白30例在完全性水泡状胎块(complete hydatidiform moles,CHMs)、25例部分性水泡状胎块(partial hydatidiform mole,PHMs)和20例水泡状流产(hydropic abortions,HAs)三组病变中的表达情况,正常成熟胎盘(normal mature placentas,NMPs)为正常对照.结果 p57kip2蛋白在10例NMPs、20例HAs组织中的细胞滋养层细胞、绒毛间质细胞和绒毛外滋养细胞团核表达阳性,合体滋养层细胞不表达;CHMs的绒毛间质细胞和细胞滋养层细胞p57kip2蛋白不表达,阳性表达仅见于绒毛外散在滋养细胞团中;25例CHMs的绒毛间质细胞和细胞滋养层细胞p57kip2均表达阳性.结论 p57kip2蛋白在CHMs和PHMs的表达和分布有明显差异,可作为胎块分型诊断的客观辅助指标,值得在国内妇产科病理诊断常规工作中推广应用.     

ERα和ERβ在正常子宫内膜、异常增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的探讨雌激素受体（ER）亚型α和β mRNA及蛋白的异常表达与子宫内膜癌的发生发展的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法（SP法）,检测18例正常子宫内膜组织、29例异常增生组织和50例子宫内膜癌组织中ERα、ERβ mRNA及蛋白的表达。结果①ERα mRNA在内膜癌组织中的阳性表达率和阳性表达水平明显低于异常增生内膜组织及正常内膜组织,三者比较有显著性差异（P〈0．01）,ERα蛋白在这三组间的表达率变化相同（P〈0．05）。②ERβ mRNA在内膜癌组织中的阳性表达率和阳性表达水平明显低于增生性内膜组织及正常内膜组织,三者比较有显著性差异（P〈0．01）,ERβ蛋白在这三组间的表达率变化相同（P〈0．01）。③ERα和ERβ mRNA平均表达水平比值（ERα／ERβ）在内膜癌组低于异常增生子宫内膜组织和正常子宫内膜组（P〈0．05）。结论ERα和ERβ表达的下调可能与子宫内膜癌的发生有关,在这个过程中ERα的下调起的作用大于ERβ。     

雌激素受体在大鼠血管平滑肌细胞中的表达及其调控

目的：观察血管平滑肌细胞(VSMC)中雌激素受体(ER)的表达，研究雌激素和血清(含多种生长因子)对细胞中：ER表达的影响。方法：原位杂交和RT-PCR检测大鼠主动脉中层VSMC中的ERmRNA。分别在有或无他莫昔芬(TAM)(ER拮抗剂)预处理的情况下，免疫细胞化学观察VSMC中的ER蛋白，比较雌二醇(E2)以及新生小牛血清(NCS)对VSMC中ER表达的影响。结果：VSMC中存在ERmRNA和蛋白，E2以及NCS均能上调细胞中ER的表达，TAM能阻断其效应。结论：ER是雌激素作用于VSMC的靶基因之一。     

儿茶酚胺类应激激素促进小鼠肝癌细胞系H22中G0期细胞周期再入

目的探讨应激激素对小鼠肝癌细胞系H22中G_0期细胞周期再入的作用及机制。方法 CD44和CD133流式抗体染色确定H22细胞中是否存在肿瘤干细胞;体外应激激素皮质酮(CORT)、肾上腺素(EPI)和去甲肾上腺素(NE)处理H22细胞48 h后,Ki-67和PI流式抗体染色检测G_0期细胞比例以及细胞周期变化;相应的受体拮抗剂验证介导G_0期细胞周期再入的受体亚型;Western blot检测细胞周期相关蛋白Skp2和p27~(kip1)表达水平。结果 H22细胞中肿瘤干细胞(CD44~+CD133~+)比例为0.80%±0.15%;与对照组相比,皮质酮处理后G_0期细胞比例不变,而儿茶酚胺类应激激素EPI和NE处理后G_0期细胞分别降低了62.50%和53.00%,同时,EPI和NE组H22细胞总数增加,G_2/M和S期细胞比例升高;Skp2蛋白表达显著升高(P0.05),p27~(kip1)蛋白表达显著降低(P0.05);与EPI和NE组相比,添加α1肾上腺素能受体拮抗剂特拉唑嗪和哌唑嗪处理后G_0期细胞比例升高;哌唑嗪处理后Skp2蛋白表达显著降低(P0.05),p27~(kip1)蛋白表达显著升高(P0.05)。结论儿茶酚胺类应激激素通过激活α1肾上腺素能受体促进小鼠肝癌细胞系H22中G_0期细胞周期再入,其机制可能与S期激酶相关蛋白Skp2表达升高及其靶蛋白p27~(kip1)的降解有关。     

雌二醇通过ERα抑制miR-16表达并促进蜕膜间充质干细胞生长

目的:研究雌二醇(E2)通过调控微小RNA-16(miR-16)的表达对胎盘蜕膜来源间充质干细胞(MSCs)活力的影响。方法:分别检测E2在正常孕妇及重度子痫前期(PE)患者外周血中的浓度。CCK-8法分析不同浓度E2对MSCs活力的影响。Real-time PCR分析不同浓度E2处理MSCs对miR-16表达的影响。探索E2通过何种受体调控miR-16表达。结果:与正常孕妇相比,重度PE患者外周血中E2浓度显著降低(P0.01)。5、10和100 nmol/L E2分别处理MSCs 48 h后,MSCs活力显著增加(P0.05)。5、10和100 nmol/L E2分别处理MSCs12 h后,miR-16的表达水平下调(P0.05),而用10 nmol/L E2处理MSCs不同时间(0 h、3 h、6 h、12 h和24 h)后,miR-16表达水平随着时间呈现明显下调趋势。在E2处理之前预先转染miR-16,细胞活力被显著逆转。E2处理MSCs之前6 h,用雌激素受体拮抗剂ICI 182780和他莫昔芬预预处理,E2对miR-16失去抑制作用。雌激素受体α(ERα)激动剂丙基吡唑三醇(PPT)及ERβ受体激动剂二芳基丙腈DPN分别处理MSCs后,仅PPT可明显抑制miR-16表达。结论:雌二醇可能通过ERα抑制miR-16表达,从而促进蜕膜MSCs的生长。     

绝经妇女外周血单个核细胞骨代谢调控因子表达变化

目的:探讨绝经妇女雌激素水平下降所致免疫细胞骨代谢调控因子变化。方法:纳入绝经妇女、未绝经妇女各30例,电化学发光法检测血清雌二醇(E2)水平;RT-PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中雌激素受体(ERα、ERβ)、白细胞IL-6、TNFα-。核因子κB受体活化因子配基(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)mRNA表达;ELISA检测血清IL-6、TNFα-蛋白含量;双能X线骨密度仪检测腰椎2~4(L2-4)前后位骨密度(BMD)。结果:与未绝经组比较,绝经妇女E2水平明显下降,腰椎BMD显著降低(P<0.05),外周血单个核细胞ERα、ERβmRNA表达明显降低(P<0.05),IL-6、TNFα-、RANKL、RANKmRNA表达明显升高(P<0.05),IL-6及TNFα-血清蛋白含量明显升高(P<0.05)。相关性分析显示PBMC中ERα、ERβmRNA表达与血清E2水平、腰椎BMD呈显著正相关性(P<0.05),PBMC中IL-6、TNFα-、RANKL、RANKmRNA表达与血清E2水平、腰椎BMD呈显著负相关性(P<0.05)。结论:绝经后妇女雌激素水平下降伴随着外周血免疫细胞雌激素受体转录水平下降,同时,炎性骨吸收调控因子和溶骨性细胞因子表达升高,这种变化可能在绝经后骨丢失中发挥重要作用。     

雌激素对去势大鼠髁突软骨雌激素受体基因表达的影响

目的探讨不同浓度的雌二醇(E2)对去势大鼠髁突软骨雌激素受体(ER)基因ERα和ERβ表达的影响。方法将SD大鼠分为对照组(control)、假手术组(sham)、去势组(OVX)、及时和延迟替代治疗组(OVX/17β-E2),每天静脉注射不同浓度雌二醇(5×10、5×10~2和5×10~3μg/kg),阴道上皮脱落细胞涂片监测雌激素水平,用Western blot和real-time PCR法检测大鼠颞下颌关节髁突软骨ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。结果去势大鼠阴道上皮细胞MI指数180/12/8,表明雌激素水平低下(P0.05)。及时补给生理浓度雌二醇(5×10~2μg/kg)能维持髁突软骨ER于正常范围,延迟补给生理浓度雌二醇不能恢复或改善ER表达;及时和延迟补给高浓度(5×10~3μg/kg)及低浓度(50μg/kg)E2均抑制ER蛋白和mRNA合成(P0.05),且高浓度效应显著。结论及时补充合理浓度的雌激素对去势大鼠颞下颌关节的正常生理功能具有重要意义。     

p57kip2、cyclin D1在食管癌中的表达及意义

目的研究p57kip2在食管癌中的表达及意义,探讨其与cyclin D1在食管癌中表达的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测50例食管癌组织及15例正常食管上皮组织中p57kip2、cyclin D1的表达情况;应用流式细胞术对这些组织的DNA含量和细胞周期分布进行分析。结果免疫组化:p57kip2蛋白在食管癌组织中阳性表达率(34.0%)低于正常组织(80%)(P<0.01),与食管癌组织分化程度、浸润深度和淋巴结转移情况有关(P<0.05);cyclin D1蛋白在食管癌组织中的阳性表达率(64.0%)高于正常组织(13.33%)(P<0.01),与浸润深度和淋巴结转移情况有关(P<0.05),与食管癌组织分化程度无关(P>0.05)。p57kip2和cyclin D1之间表达负相关(r=-0.429,P<0.01)。流式细胞术:与正常组织相比,癌组织中DNA含量增高,异倍体细胞增加;G0/G1期细胞减少,而S期和G2/M期细胞增多,增殖指数(PI)高于正常组织。结论p57kip2蛋白低表达可能与食管癌的发生发展有关;p57kip2与cyclin D1联合检测可作为评估食管癌恶性程度指标。     

人ERβ AF1融合蛋白的表达及其多克隆抗体制备

目的: 制备雌激素受体β多克隆抗体.方法: 从人乳腺cDNA文库中PCR扩增ERβ AF1结构域(1～144位氨基酸), DNA 重组插入原核表达质粒pGEX-KG, 转化大肠杆菌DH5α, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-ERβ AF1融合蛋白.纯化后免疫BALB/c小鼠, 制备鼠多抗血清.通过Western blot和免疫组织化学实验鉴定血清特异性和效价.结果: 成功构建了pGEX-KG/ERβ AF1原核表达载体, 转化DH5α后可高效表达融合蛋白GST-ERβ AF1, 免疫产生的ERβ多抗可特异检测ERβ真核表达载体转染人293T细胞及乳腺癌细胞中ERβ的表达.结论: 制备的ER 抗体对ERβ有反应原性, 效价高, 特异性好, 为进一步研究ERβ的生物学功能奠定基础.     

龙血素A对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞生长和雌激素受体表达的影响

目的:观察龙血素A对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞生长和雌激素受体(ER)表达的影响。方法:采用龙血素A与MCF-7细胞体外共培养(药物组)干预手段,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞的增殖情况;Hoechst33258染色检测细胞凋亡率;免疫荧光和免疫印迹检测ERα和ERβ蛋白的表达。结果:与对照组相比,药物组细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加;免疫荧光和免疫印迹检测结果显示药物组ERα表达显著减少,而ERβ的表达显著增加。结论:龙血素A对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞具有明显抑制生长和促进凋亡作用,其机制可能与龙血素A能下调ERα表达和上调ERβ表达有关。     

异补骨脂素对人晶状体上皮细胞雌激素受体表达的上调作用

目的: 研究人晶状体上皮细胞(HLECs)雌激素受体(ER)表达的情况及中药植物雌激素异补骨脂素(ISR)对ER表达的影响,为中药植物雌激素防治老年性白内障提供实验依据。方法: 本研究将ISR与HLEC共同孵育,以雌二醇(E₂)作为阳性对照,再用H₂O₂对HLECs造成氧化损伤后,采用流式细胞术检测不同浓度的ISR对ER蛋白表达的影响。结果: 正常HLECs存在ERα、β的表达;H₂O₂组HLECs ERα、β表达明显下降,与空白组比较差异显著(P<0.01);E₂和ISR高、中、低浓度组HLECs的ERα、β表达明显升高,与H₂O₂组比较差异显著(P<0.01);且随ISR浓度的增高ERα、β表达逐渐升高,呈明显的浓度依赖关系。 结论: E₂、ISR能上调经H₂O₂处理的HLECs的ERα、ERβ表达,并呈明显的浓度依赖关系,其抗氧化损伤作用,可能是通过上调ERα、ERβ表达实现的。     

乳腺浸润性导管癌中p57kip2、cyclin D1和cyclin E的表达及意义

目的探讨p57kip2、cyclin D1及cyclin E蛋白在乳腺癌发生、发展中作用.方法用免疫组化S-P法检测64例乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)、15例乳腺导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)和15例癌旁正常乳腺组织中p57kip2、cyclin D1和cyclin E蛋白的表达情况.结果p57kip2、cyclin D1和cyclin E蛋白在IDC的阳性率与在乳腺不同组织之间相比,cyclin D1、cyclin E蛋白在DCIS的阳性率与癌旁正常乳腺组织之间相比差异均有显著性(P≤0.05,P＜0.01).在IDC中,三者表达均与腋窝淋巴结转移有关(P≤0.05,P＜0.01),cyclin D1蛋白的表达与组织学分级有关(P＜0.01),cyclinE蛋白的表达与肿块大小有关(P＜0.01);p57kip2与cyclin D1之间、p57kip2与cyclin E之间的表达均呈负相关(P＜0.01)、cyclinD1与cyclin E之间的表达呈正相关(P＜0.01).结论p57kip2蛋白低表达、cyclin D1和cyclin E蛋白高表达可能是乳腺组织恶性转变以及乳腺癌发生淋巴结转移的重要生物学标志,cyclin D1和cyclin E蛋白异常表达是乳腺癌发生的早期事件.联合检测p57kip2、cyclin D1及cyclin E蛋白对预测乳腺癌淋巴结转移有重要意义.     

雌激素对ERα-/ERβ-乳腺癌细胞增殖和侵袭的调节作用及分子机制

目的 研究雌激素对ERα-/ERβ-乳腺癌细胞增殖和侵袭的调节作用及分子机制.方法 选择乳腺癌细胞株SK-BR-3(GPR30+,ERα-/ERβ-)进行研究,用不同水平的雌二醇进行处理,同时将GPR30的siRNA和阴性对照的siRNA转染进入细胞.处理24h后,检测细胞的增殖情况和侵袭情况.结果 雌二醇处理能够以剂量依赖的方式增加细胞活力以及侵袭细胞的数目;转染GRP30-siRNA能够显著降低GPR30的mRNA含量,抑制效率为75.42％;雌二醇处理组的细胞活力以及侵袭数目均高于对照组,雌二醇联合GRP30-siRNA组的细胞活力以及侵袭数目均低于雌二醇处理组(P＜0.05).结论 雌激素能够促进ERα-/ERβ-乳腺癌细胞的增殖和侵袭,受体GPR30可能是雌激素发挥作用的分子机制.     

EP_2A体外可促进人CD34~+细胞归巢而不能促进其增殖

目的:探讨前列腺素E_2受体2激动剂(EP_2A)在体外对人CD34~+细胞的归巢与增殖作用。方法:收集健康供者经粒细胞集落刺激因子动员后的外周血,免疫磁珠法分选出人CD34~+细胞;同时收集健康供者动员前骨髓液,分离单个核细胞,并行骨髓间充质干细胞(BMMSC)培养。人CD34~+细胞和BMMSC经前列腺素E_2(阳性对照)、DMSO(阴性对照)、EP_2A和EP_2A+前列腺素E_2受体2拮抗剂(EP_2AA)处理后,对人CD34~+细胞用CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测集落形成数目,流式细胞术检测G_2/M期细胞比例,Western blot检测细胞中survivin、β-catenin及CXC趋化因子受体4(CXCR4)的蛋白表达;ELISA法检测BMMSC中基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的含量。结果:EP_2A组与阴性对照组相比,人CD34~+细胞在细胞活力、集落形成数目、G_2/M期比例及survivin和β-catenin蛋白表达方面均无明显差别。但EP_2A组人CD34~+细胞CXCR4及BMMSC SDF-1α的表达均明显高于阴性对照组。结论:EP_2A体外可促进人CD34~+细胞归巢但不能促进其增殖。