DAB显色后去黑色素法在免疫组化中的应用

<正>在病理科的日常工作中,经常会遇到含有黑色素的组织,由于未经染色的黑色素呈棕褐色或深褐色的颗粒,特别是在免疫组化的诊断中,DAB的显色与黑色素的颜色相近,会影响免疫组化结果的判读。去除黑色素的方法有很多,文献报道比较常用的是高锰酸钾草酸法和过氧化氢脱色法[1],但两者均为强氧化剂,在先去除黑色素后再进行相关免疫组化染色时,对抗原有一定的损伤。为解决上述问题,本科室     

强氧化剂脱黑色素对免疫组化染色影响的评估

正黑色素瘤是临床上较为常见的皮肤黏膜和色素膜恶性肿瘤,也是发病率增长最快的恶性肿瘤之一~([1])。免疫组化染色是黑色素瘤病理学诊断常用的检查方法。富含黑色素的瘤组织行免疫组化染色时,组织中沉积的大量黑色素与免疫组化阳性所显示的DAB棕黄色颗粒互相干扰,影响结果判读~([2])。因此,这一类组织染色前通常需要进行氧化脱黑色素处理。本实验在实践中发现强氧化剂处理切片不仅会造成组织脱片,还易破坏组织内抗原,造成假阴性结果。本文采用3组不同染色法评估富含黑色素的黑色素瘤组织中常规检测的4种抗原受氧化脱黑色素的影响程度,现报道如下。     

免疫组化染色中消除黑色素影响的方法

常规免疫组化通常采用辣根过氧化物酶检测系统，但在富有黑色素细胞的病变中，如S-100蛋白、黑色素相关抗原HMB-45等免疫组化染色阳性反应胞质中的棕黄色颗粒与组织内原有的棕褐色的黑色素颗粒混杂在一起，不易区别，往往给判断造成较大困难，甚至误诊。笔者利用氧化剂先将黑色素脱色，再进行免疫组化染色，效果满意。     

新型黑色素脱色利的配制和应用

某些人体和肿瘤组织中存在着内源性黑色素，常常影响病理医师对组织切片的观察和诊断，尤其是干扰免疫组化染色的定位表达，在实践工作中，我们结合文献资料，经过不断摸索，配制了一种新型黑色素脱色剂，能有效地脱去组织中的内源性黑色素，现介绍如下。     

新型黑色素脱色剂的配制和应用

某些人体和肿瘤组织中存在着内源性黑色素,常常影响病理医师对组织切片的观察和诊断,尤其是干扰免疫组化染色的定位表达.在实践工作中,我们结合文献资料[1,2],经过不断摸索,配制了一种新型黑色素脱色剂,能有效地脱去组织中的内源性黑色素,现介绍如下.     

小鼠恶性黑色素移植瘤模型的建立及其淋巴管内皮细胞透明质酸受体1的表达

目的:建立小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型,探讨小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤组织内淋巴管的生成情况。方法:体外培养B16瘤细胞,接种B16瘤细胞于C57BL/6小鼠右侧背部皮内,构建C57BL/6小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型;应用H-E染色、淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(1ymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1, LYVE-1)免疫组化染色确认模型和观察肿瘤组织内淋巴管的生成情况。结果:建立了恶性黑色素移植瘤模型;LY- VE-1主要着色于正常组织和移植瘤组织中淋巴管内皮细胞的细胞膜上;恶性黑色素瘤组织中淋巴管密度明显高于正常皮肤组织。结论:构建C57BL/6小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型是获得恶性黑色素瘤组织和进一步研究的有效手段;LYVE-1是特异性较高的淋巴管内皮标记物;小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤组织中可能存在淋巴管的新生。     

低浓度过氧化氢溶液在高温时用于组织脱黑色素的效果

临床上含有黑色素的肿瘤较多,良性的有痣,恶性的有黑色素瘤、原始神经外胚层肿瘤、透明细胞肉瘤等,免疫组化是鉴别上述肿瘤的重要辅助手段,然而黑色素的存在,严重影响免疫组化结果的判读。因此,寻找一种对组织结构及免疫组化指标表达影响尽可能小的脱黑色素方法对病理诊断意义重大。目前,常用的脱色素法有高锰酸钾/草酸法和过氧化氢法,均可以把色素脱除干净,但是会破坏组织。本科室采用两种pH的溶剂配制浓度为1.8%的H 2O 2溶液在70 ℃时对组织进行脱色素处理,并行免疫组化染色,取得良好效果,现报道如下。     

两种快速脱黑色素的方法

某些含有黑色素的肿瘤，由于肿瘤细胞中含有大量的黑色素，在冷冻切片染色中，大量色素遮盖了肿瘤的组织结构，无法正确做出诊断，必须进行脱色素处理。传统的脱黑色素疗法，耗时长（2～3h），易脱片，不适宜冷冻切片的诊断。我科采用快速脱黑色素法，不仅能够在1—8min内脱掉组织中的黑色素而且能够满足诊断要求，避免了因术中诊断不明确而造成的患者的二次手术，并且该方法适用于石蜡切片、免疫组化切片快速的脱色素。     

FR显色剂在含色素组织免疫组化染色中的应用

<正>免疫组化染色技术在现代病理诊断工作中起着十分重要的作用。了解常规HE染色无法区分或较难辨别的情况,为病理肿瘤的鉴别诊断、预后判断提供不可或缺的重要依据。但在一些病理组织标本中含有与免疫组化阳性颗粒相近的色素,如黑色素。这些色素沉积若大量存在会不同程度遮盖组织细胞的结构与形态。特别是免疫组化染色时会与DAB显色的阳性颗粒相互干扰,难以区分。对免疫组化结果判读造成一定的影响。这就需要有一些办法来解决。传     

一种显示黑色素的免疫组织化学新方法

一种显示黑色素的免疫组织化学新方法周素英张谷黑色素细胞肿瘤的诊断与鉴别诊断，往往需要依靠免疫组化染色。但常用的ＡＢＣ法或ＳＰ法中，由于经ＤＡＢ显色后阳性颗粒呈棕黄色，与组织内原有的黑色素难以区别，给免疫反应真假性的判断带来很大的困难。我们建立了一种较...     

亚甲基蓝对比染色法在黑色素瘤组织免疫组织化学染色中的应用

目的探讨亚甲基蓝对比染色法在黑色素瘤组织免疫组织化学染色中的应用。方法收集存档的黑色素瘤组织42例, 采用免疫组织化学染色苏木精对比染色后, 用亚甲基蓝染液对比染色(实验组)和未用亚甲基蓝对比染色(对照组)2种方法, 应用EnVision法检测Melan A、HMB45、S-100蛋白、SOX-10和Ki-67的表达, 分析2种方法对含黑色素的黑色素瘤组织不同免疫组织化学指标结果判读的影响。结果经亚甲基蓝对比染色处理后黑色素被染成了墨绿色, 与二氨基联苯胺(DAB)显色的棕黄色对比鲜明, 免疫组织化学染色结果定位准确, 易于判读。黑色素和肿瘤细胞染色对比度和染色清晰度评分显著高于对照组, 差异具有统计学意义(P<0.05), 而在组织完整度方面的评分和对照组差异不显著, 差异无统计学意义(P>0.05)。在中少量黑色素含量的组织中, Melan A、HMB45、S-100蛋白、Ki-67和SOX-10的免疫染色中黑色素与DAB的区分度均较明显, 实验组和对照组评分比较差异具有统计学意义(P<0.05);而在富含大量黑色素的组织中, 因为黑色素与DAB的显色相互重叠, ...     

胆囊原发性恶性黑色素瘤1例及文献复习

目的探讨胆囊原发性恶性黑色素瘤的I临床病理特征、组织发生及鉴别诊断。方法对1例原发于胆囊的恶性黑色素瘤进行光镜观察,并行组织化学及免疫组化染色标记。结果组织学特征为：在上皮和固有层交界处黑色素肿瘤细胞呈巢状或片状分布,肿瘤细胞大小不等,形态多样。瘤细胞内外可见粗大的黑色素颗粒,Masson—Fontana染色阳性,免疫表型HMB45、vimentin及S-100蛋白肿瘤细胞呈阳性表达。结论胆囊原发性恶性黑色素瘤罕见,诊断必须结合病史、全身检查及随访资料,以排除转移性恶性黑色素瘤。     

鼻腔恶性黑色素瘤的光镜、电镜及免疫组化研究

目的 探讨鼻腔恶性黑色素瘤的临床病理、免疫组化和超微结构特点.方法 对32例鼻腔黑色素瘤进行临床和病理(HE染色、免疫组织化学染色和电镜)资料观察.结果 临床症状为进行性鼻塞和或鼻衄,6例伴有轻重不等的头痛.12例临床诊断为鼻息肉、鼻窦炎,16例诊断为鼻肿瘤,4例诊断为恶性黑色素瘤.治疗为手术加放、化疗综合手段.生存时间为3-65个月.组织学特征为:黑色素瘤组织结构既有象癌的组织像,又有似肉瘤的组织像,肿瘤细胞大小不一,形态多样,部分病例瘤细胞内外可见粗大的黑色素颗粒.4例电镜检查各种瘤细胞胞浆内均可见数量不等的圆形或椭圆形黑色素小体.免疫组化阳性率分别为HMB4590.6%、S-100100%、Vim71.9%、CK21.1%、EMA8.3%,LCA及Actin不表达.结论 鼻腔性黑色素瘤是一种少见的肿瘤,其生存期短,恶性度高.根据其组织学特点,结合免疫组化染色及电镜下特征,可以作出明确的病理诊断.     

卵巢肿瘤继发腹膜黑色素沉着症的临床病理观察

目的探讨卵巢肿瘤继发腹膜黑色素沉着症的临床病理学特点和生物学行为。方法对3例卵巢肿瘤继发腹膜黑色素沉着症作了临床病理观察、免疫组化染色,并作了随访。结果3例患者年龄分别为17、29和23岁。例1卵巢囊性肿物,腹腔内多个大小不等的灰褐色肿物,切面囊内充满墨汁样液体。例2做了卵巢肿瘤姑息手术,术中检查腹腔和盆腔内有浓稠的墨汁样黑色素沉着。例3瘤体内有皮脂、毛发和充盈黑色液体的囊性结节。镜检:除例1伴发浆液性囊腺瘤,例3伴发囊性畸胎瘤外,3例病变基本相似,主要由胞质充满黑色素的细胞和胞质内无色素的细胞组成。绝大部分区域以前者占优势,纤维组织增生并纤维化,大量色素沉着使原有结构被掩盖。例1见少量破骨样多核巨细胞,腹膜和网膜内亦有大量黑色素沉着和纤维组织增生。例3Fontana染色阳性,普鲁士蓝染色阴性。例1免疫组化染色胞质内含有色素颗粒和无色素颗粒的细胞均有部分细胞HMB-45阳性,浆液性囊腺瘤内衬的上皮CK呈阳性,胞质内含有色素颗粒和无色素颗粒的细胞CK呈阴性,S-100、CD68、MC、CD34、ER、PR和NSE均阴性。结论腹膜黑色素沉着症为卵巢肿瘤和胃肠道发育畸形继发的一种良性病变。     

术中冷冻切片快速免疫组化染色及其应用

随着免疫组化技术的不断改进和标准化试剂盒的出现使免疫组化染色的质量不断提高 ,染色时间大大地缩短 ,同时也使术中冷冻切片的快速免疫组化染色成为可能。笔者尝试用标记的葡聚糖聚合物法 (labeleddextranpolymer,LDP)对 4 4例术中冷冻组织样本进行快速免疫组化染色 ,旨在探讨术中冷冻样本快速免疫组化染色在冷冻组织的快速病理诊断中的作用及其可操作性和实用性。1　材料与方法1.1　材料　收集四川大学华西医院病理科 2 0 0 2年 2～ 3月部分术中冷冻切片快速诊断的组织标本 ,包括 16个解剖部位共 4 4例病变组织。其中乳腺 13例 ,腹腔或…     

嗜铬素A阳性细胞在结肠癌组织中的表达

应用免疫组化方法检测嗜铬素Ａ阳性细胞在结肠癌组织中的表达。结果发现、嗜铬素Ａ阳性细胞在结肠癌组织中的表达为３５．４％，在正常结肠粘膜中内分泌细胞的表达率为１００％，与ＮＳＥ免疫组化染色和常用的Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ嗜银染色相比，嗜铬素Ａ免疫组化染色的阳性率明显高于ＮＳＥ染色和Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ嗜银染色。因此认为嗜铬素Ａ免疫组化染色可作为检测结肠癌组织中伴内分泌细胞分化的一种可靠指标。     

应用组化、免疫组化及电镜技术诊断腹水中恶性黑色素瘤细胞

利用腹水涂片诊断色素性恶性黑色素瘤细胞 (恶黑 )不难 ,而对无色素性恶性黑色素瘤细胞则比较困难。笔者采用组织化学Ｆｏｎｔａｎａ染色显示有无黑色素 ,应用柏林蓝铁反应染色鉴别是黑色素还是含铁血黄素 ,另应用ＨＭＢ4 5、Ｓ 10 0蛋白作Ｓ Ｐ免疫组化染色与上皮性癌细胞鉴别诊断 ,应用电镜微观瘤细胞内有无不同发育阶段的黑色素小体。通过以上各种检测以达到诊断和鉴别诊断的目的。1　材料与方法1.1　材料　收集 1例疑诊为恶性黑色素瘤患者的腹水 ,常规离心 ,2 0 0 0ｒ/ｍｉｎ ,取白细胞层涂片 ,95 %乙醇固定 ,分别作ＨＥ、组化及免疫组…     

无色素性恶性黑色素瘤23例临床病理分析

由于无色素性恶性黑色素瘤(amelanotic malignant melanoma,AMM)形态变化多样,瘤细胞内无黑色素,确诊需借助免疫组化,HE染色易漏诊或误诊.我们回顾分析23例AMM,旨在提高对该病的诊断与鉴别诊断.     

成骨细胞硷性磷酸酶显示新方法—真空负压法

应用真空负压组化和免疫组化方法，显示石蜡组织切片和体外培养成骨细胞内碱性磷酸酶，需时缩短６～１２倍，敏感性强，阳性物颜色鲜艳，背景清晰干净，利用观察摄影。真空负压孵化法降低了常规方法中切片剥落，杂质沉淀，孵育温度过高和酶扩散等现象的发生，提高了成功率，值得在组化和免疫组化染色中推广应用。     

微波解冻法对冷冻组织细胞角蛋白免疫组化检测影响的实验研究

目的：揭示微波解冻对冻结组织免疫组化染色效果的影响,为用微波解冻冷冻组织进行免疫组化染色提供实验依据。方法：将清洁级大耳白家兔分为常规对照组、自然解冻组、温水解冻组、微波解冻组。用空气将家兔栓塞致死后取其肝、肺、肾组织,包埋并制成切片,进行广谱细胞角蛋白免疫组化染色并观察染色结果。结果：微波解冻对肝、肾、肺冻结组织中细胞角蛋白抗原的影响不明显,均能正常显色。结论：冻结组织微波解冻对细胞角蛋白的免疫组化检查未见明显不良影响,提示温和的微波解冻对组织中细胞角蛋白抗原影响不明显。