益气除痰方治疗冠心病52例疗效观察

52例冠心病人分为痰浊型、痰瘀型和非痰浊型三型,均以益气除痰方治疗。结果:一般症状和心绞痛总有效率分别为86.5％和79％,心电图统计34例,总有效率44.1%,三型各有效率之间差别无显著性,表明该方对冠心病各型病人均有一定的疗效。此外,该方有降低全血粘度的作用,提示其疗效机理与促进血液循环、改善心肌缺血有关。     

活血益气方对心梗后大鼠缺血心肌血管新生及VEGF表达的影响

目的:观察活血益气方对心肌梗死后大鼠缺血心肌血管新生的作用及其相关生长因子VEGF表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠行左冠状动脉前降支结扎术致急性心肌梗死模型,随机分为模型组、活血益气方组和倍他乐克组,并设立假手术组,假手术组只穿线不结扎。连续给予相应药物4周后,处死大鼠,迅速摘取心脏在乳头肌横切面切取心肌组织,4%的多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片。以免疫组化法测定心梗边缘区微血管数和VEGF的表达;取梗塞边缘区心肌组织,进行总RNA抽提,RT-PCR法检测心梗边缘区VEGF mRNA的表达。结果:(1)假手术组、模型组、倍他乐克组和活血益气方组均可看到新生的微血管。假手术组可见微血管增生不明显,模型组可见少量微血管增生,倍他乐克组和活血益气方组可见较多增生的微血管。模型组与假手术组比较,有统计学差异;倍他乐克组和活血益气方组与模型组比较,有统计学差异;(2)各组大鼠梗塞边缘区均可见到VEGF表达,模型组VEGF表达高于假手术组(P<0.05),倍他乐克组和活血益气方组VEGF表达高于模型组(P<0.01);(3)模型组VEGF mRNA表达水平高于假手术组(P<0.05),活血益气方组VEGF mRNA表达高于模型组(P<0.05)。结论:活血益气方对心肌梗死后大鼠缺血心肌血管新生具有促进作用,其作用机制可能与上调心肌局部VEGF及其mRNA表达有关。     

益气除痰方防治化疗相关性疲劳的疗效观察

目的:观察益气除痰方防治恶性肿瘤患者化疗相关性疲劳的临床疗效,以寻求治疗化疗相关性疲劳的有效方法。方法:将符合纳入标准的63例患者,随机分为治疗组32例,对照组31例。两组病例的化疗方案基本相同。治疗组在化疗基础上加益气除痰方。治疗2周期后,观察治疗前后疲劳评分、生活质量评分、血细胞三系的变化。结果:益气除痰方组较对照组化疗相关性疲劳程度轻(P0.05);益气除痰方组在生活质量的角色功能、情绪功能、社会功能、总健康状况、疲倦、恶心呕吐、失眠、食欲丧失、便秘腹泻领域评分优于对照组(P0.05);益气除痰方组白细胞下降较对照组低(P0.05)。结论:益气除痰方可以防治恶性肿瘤患者的化疗相关性疲劳,减轻癌症治疗相关证候群,提高患者生活质量。     

益气除痰方对小鼠lewis肺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨益气除痰方对小鼠Lewis肺癌生长的抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法 复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,将96只接种Lewis肺癌的小鼠随机分为6组:益气除痰方高、低剂量组,顺铂对照组,顺铂联合中药高、低剂量组,模型组,每组16只。给药1周后停药观察1周,其中一半动物处死观察细胞凋亡相关指标,另一半动物用于观察生存期。结果 与模型组比较,益气除痰方高、低剂量组均能明显降低瘤质量指数,差异有统计学意义(P < 0.05,P < 0.01)。益气除痰方低剂量组肺转移抑制率为 28 %、高剂量组为 52 %,顺铂对照组为 50 %,顺铂联合低剂量组为40 %、高剂量组为50 %,与模型组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05)。与模型组比较,益气除痰方组高、低剂量组和顺铂对照组、联合用药组均能明显提高肿瘤细胞凋亡率,差异均有统计学意义(P < 0.05,P < 0.01,P < 0.001)。与模型组比较,益气除痰方低剂量组及顺铂对照组能有效延长模型小鼠的生存期,差异均有统计学意义(P < 0.01)。结论 益气除痰方有抑制肿瘤生长、延长肿瘤动物生存期及促进Lewis肺癌细胞凋亡的作用。     

益气除痰方下调vimentin表达与逆转 EMT相关性研究

目的：观察益气除痰方肺癌肿瘤生长、肺转移的影响,并通过差异蛋白组学技术筛选出差异表达蛋白vimentin,并结合相关技术分析其可能的意义。方法：C57BL小鼠40只,接种Lewis肺癌细胞,造模第2天,随机分为对照组（生理盐水）和低、中、高剂量观察组予益气除痰方1.0g·kg^-1·d^-1,3.0g·kg^-1·d^-1,9.0g·kg^-1·d^-1,每组10只,灌胃21d后,检测肿瘤体积、重量、肺转移灶,分别提取最佳剂量治疗组和模型组肿瘤组织的总蛋白,应用双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）系统获得蛋白点表达差异信息,运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-TOF）鉴定出差异蛋白质。并以荧光定量PCR和Western blot法对差异蛋白进行表达差异鉴定。培养A549细胞,20%益气除痰方含药血清干预,划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变,RT-PCR检测其对A549肺癌细胞MMP-1、MMP2、MMP9、MMP14mRNA基因表达的影响。结果：益气除痰方3.0g·kg-1·d^-1治疗组肿瘤体积、瘤重、肺转移灶数均明显小于LEWIS模型组（P〈0.01）,肿瘤抑制率为57.21%。蛋白质组学研究鉴定受益气除痰方调控影响的蛋白37个,其中vimentin下调尤其明显。20%益气除痰方含药血清可抑制A549细胞的侵袭和转移能力,并能降低MMP2、MMP14mRNA基因的表达,与空白组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论：益气除痰方明显下调vimentin表达,抑制A549细胞的运动能力,减少基质金属蛋白酶MMP2、MMP14的分泌,这可能与益气除痰方逆转肺癌细胞上皮-间质转化有关,值得进一步研究。     

益气复生方对人结肠癌细胞及血管新生能力的影响

目的探讨益气复生方对人结肠癌HCT-116细胞及血管新生能力的影响。方法①取对数生长期人结肠癌细胞株HCT-116,采用不同浓度的益气复生方（7.8125 g/L、15.625 g/L、31.25 g/L、62.5 g/L、125 g/L、250 g/L）干预,MTT法检测其对HCT-116细胞生长的影响。②取对数生长期人结肠癌细胞株HCT-116,分为对照组,益气复生方高、中、低剂量组,进行相应干预,以流式细胞仪分析各组对HCT-116细胞凋亡和细胞周期的影响。③对照组,益气复生方高、中、低剂量组干预后,以酶联免疫吸附法检测对HCT-116细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响。结果①益气复生方能显著抑制HCT-116细胞的生长,随着药物浓度的增加其抑制作用逐渐增大。②与对照组比较,不同浓度的益气复生方组细胞的凋亡率从18.27%增加至32.54%,呈剂量依赖性,差异有统计学意义（P〈0.05）;与对照组比较,益气复生方干预组G0/G1期的细胞比例明显减少,G2/M期的细胞比例明显增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。③与对照组比较,益气复生方高剂量组VEGF蛋白表达水平下降,差异有统计意义（P〈0.05）。结论益气复生方对人结肠癌HCT-116细胞增殖具有明显的抑制作用,且随着剂量的增加抑制作用增强,其抗肠癌作用与抑制VEGF的分泌有关。     

益气除痰方对缺氧人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法采用氯化钴(Co Cl2)化学诱导建立细胞缺氧模型,加入不同浓度YQCTF干预,设HUVEC常氧(Norm)组,缺氧造模(Hyp)组,缺氧+YQCTF低、中、高剂量(L、M、H)组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVE活力;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验测定细胞修复迁移能力;Transwell小室实验测定细胞侵袭能力;Western Blot法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、粘着斑激酶(FAK)、p-ERK、p-FAK的蛋白水平;qPCR法检测HIF-1α、GRP78、ERK1、ERK2、FAK的mRNA表达水平。结果 Norm组与Hyp组比较,Hyp组HUVEC无明显细胞增殖(P0.05),但细胞迁移和侵袭能力增强(P0.05),上调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白表达(P0.05,P0.01)及基因mRNA表达(P0.01),ERK、FAK磷酸化水平增强(P0.01);与Hyp组比较,YQCTF可明显抑制缺氧HUVEC增殖(P0.01,P0.05),抑制细胞周期有丝分裂(P0.05,P0.01),降低细胞迁移和侵袭能力(P0.01),并可下调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白和基因mRNA表达水平(P0.05,P0.01),降低ERK、FAK磷酸化水平(P0.05,P0.01),并呈剂量依赖性。结论 YQCTF可抑制缺氧诱导的HUVEC迁移和侵袭,可能与其调控HIF-1α、GRP78、ERK、FAK的蛋白和基因mRNA表达水平有关。     

益气除痰方对缺氧微环境下A549细胞上皮间质转化及P4HB表达的影响

目的 研究益气除痰方对缺氧条件下A549细胞上皮间质转化的影响并初步探讨其与脯氨酸4-羟化酶β亚基(P4HB)、波形蛋白(Vimentin)表达的相关性。方法 将A549细胞分为3组培养:常氧对照组(常规培养),缺氧模型组(加入CoCl2培养模拟缺氧微环境诱导A549细胞上皮间质转化),益气除痰方含药血清组(在CoCl2培养基础上加入益气除痰方含药血清培养)。相差显微镜下观察3组A549细胞形态的变化;RT-PCR检测3组549细胞P4HB、Vimentin mRNA的表达含量。结果 相差显微镜下常规培养的A549细胞呈不典型上皮细胞形态,经CoCl2刺激后,大部分细胞形态明显拉长,呈现明显的间质细胞形态。益气除痰方含药血清组与常氧对照组比较间质细胞形态的细胞增多,较缺氧模型组间质细胞形态的细胞明显减少。缺氧模型组A549细胞P4HB、Vimentin mRNA的表达量较常氧对照组明显上调,差异有统计学意义(P < 0.01);益气除痰方含药血清组P4HB、Vimentin mRNA的表达量较缺氧模型组明显下调,差异有统计学意义(P < 0.01,P < 0.05)。结论 益气除痰方可抑制缺氧诱导的上皮间质转化,可能与其下调P4HB mRNA表达相关。     

益气除痰方对肺癌系列基质金属蛋白酶表达的影响

目的 研究益气除痰方对人肺腺癌A549细胞及LEWIS肺癌小鼠肿瘤组织基质金属蛋白酶MMP1、MMP2、MMP9、MMP14等促肿瘤转移因子表达的影响.方法:培养A549细胞,20%益气除痰方含药血清干预,划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变,RT-PCR检测其对A549肺癌细胞MMPl、MMP2、MMP9、MMP14 mRNA基因表达的影响.建立C57BL/6)小鼠Lewis肺癌模型,治疗组每日予益气除痰方3.0 g·kg-1,处理,灌胃21d后,处死,检测肿瘤体积、重量、肺转移灶,并用免疫组化法比较各组肿瘤组织MMP2、MMP14的表达.结果:20%益气除痰方含药血清可抑制A549细胞的侵袭和转移能力,并能降低MMP2、MMP14转录水平基因的表达,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),MMP1、MMP9 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);益气除痰方3.0 g·kg-1组LEWIS肺癌小鼠肿瘤体积、重量、肺转移灶数明显降低,肿瘤组织MMP2,MMP14的表达降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:益气除痰方能抑制肺腺癌A549细胞的侵袭和转移,降低MMP2,MMP14 mRNA转录水平的表达;能抑制LEWIS肺癌小鼠肿瘤肺转移,降低其肿瘤组织MMP2,MMP14的表达,抗转移可能是益气除痰方治疗肺癌的作用机制之一.     

益气除痰方调控AKT/mTOR信号通路抑制弥漫大B细胞淋巴瘤的实验研究

目的:观察益气除痰方对于DLBCL的体外、体内抑瘤活性及机制,并初步探讨益气除痰方对AKT/mTOR信号通路的调控作用。方法:将人DLBCL淋巴瘤细胞株OCI-ly10和SUDHL-6细胞进行培养传代,CCK-8法观察益气除痰方对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式检测益气除痰方诱导DLBCL细胞凋亡。Western blot检测益气除痰方对DLBCL细胞株AKT及pAKT、pS6、pPRAS40及pGSK表达的影响。构建BALB/c-nu裸鼠DLBCL荷瘤模型,给予益气除痰方处理后观察测量肿瘤体积,测量瘤体重量,计算肿瘤抑制率。结果:益气除痰方对DLBCL细胞株OCI-ly10和SUDHL-6具有生长抑制作用,且具有时间依赖性和浓度依赖性。流式检测中,低、中、高浓度中药组均发现淋巴瘤细胞存在凋亡,且凋亡率逐渐升高,其中高浓度中药组较阴性对照组凋亡率明显升高(P<0.001)。Western blot结果发现益气除痰方可显著降低OCI-ly10和SUDHL-6细胞系pAKT及其底物pGSK,mTOR通路相关分子pS6和pPRAS40的表达。动物实验显示,中药、阿霉素组和联合组瘤重均较对照组小(P<0.001),联合组的抑瘤率(47.3%)高于中药(26.4%)和阿霉素组(31.2%)。结论:细胞和动物实验发现,益气除痰方可以抑制DLBCL细胞的生长,具有时间依赖性和浓度依赖性,其作用机制与促进肿瘤细胞凋亡有关。益气除痰方通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键蛋白pAKT及其底物pGSK,mTOR通路相关分子pS6和pPRAS40来发挥调控DLBCL生长的作用。     

益气除痰方对缺氧人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭能力的影响北大核心CSCD

目的探讨益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法采用氯化钴(Co Cl2)化学诱导建立细胞缺氧模型,加入不同浓度YQCTF干预,设HUVEC常氧(Norm)组,缺氧造模(Hyp)组,缺氧+YQCTF低、中、高剂量(L、M、H)组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVE活力;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验测定细胞修复迁移能力;Transwell小室实验测定细胞侵袭能力;Western Blot法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、粘着斑激酶(FAK)、p-ERK、p-FAK的蛋白水平;qPCR法检测HIF-1α、GRP78、ERK1、ERK2、FAK的mRNA表达水平。结果 Norm组与Hyp组比较,Hyp组HUVEC无明显细胞增殖(P>0.05),但细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.05),上调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白表达(P<0.05,P<0.01)及基因mRNA表达(P<0.01),ERK、FAK磷酸化水平增强(P<0.01);与Hyp组比较,YQCTF可明显抑制缺氧HUVEC增殖(P<0.01,P<0.05),抑制细胞周期有丝分裂(P<0.05,P<0.01),降低细胞迁移和侵袭能力(P<0.01),并可下调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白和基因mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),降低ERK、FAK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 YQCTF可抑制缺氧诱导的HUVEC迁移和侵袭,可能与其调控HIF-1α、GRP78、ERK、FAK的蛋白和基因mRNA表达水平有关。     

益气通脉解毒方治疗心肌梗死疗效观察及对血管新生指标的影响

目的:观察益气通脉解毒方对心肌梗死患者的疗效及患者体内血管新生指标的影响.方法:将心肌梗死患者96例,分为2组.对照组给予常规对症治疗,观察组在对照组基础上给予益气通脉解毒方治疗,分析2组患者治疗后的临床疗效.结果:2组治疗前血管新生指标、炎症因子水平组间比较,差异无统计学意义(P＞ 0.05).观察组治疗后血管内皮生...     

益气除痰方下调MALAT-1表达对肺癌细胞发生上皮间质转化的影响

目的:研究益气除痰方对肺癌细胞发生上皮间质转化(EMT)的抑制作用及可能的分子机制。方法:聚合酶链式反应(PCR)检测并筛选出MALAT-1明显上调的肺癌细胞系H1229,及相对表达偏低的A549,用含益气除痰方的培养基分别进行干预。通过CCK8(Cell Counting Kit-8)试剂盒比色法检测肿瘤细胞的增殖能力;细胞划痕实验以及Transwell侵袭小室实验检测细胞的侵袭转移能力;用蛋白质免疫印记法(Western-blot)检测上皮间质转化相关蛋白转录是否上调;聚合酶链式反应(PCR)检测MALAT-1表达情况;并用蛋白质印记法检测TGF诱导的相关通路蛋白Smad2/3磷酸化水平。结果:与空白对照组相比,益气除痰方可抑制不同肺癌细胞株的增殖,抑制作用与MALAT-1表达上调与否关系不大,但是可在较低浓度即可对侵袭转移能力有明显抑制,抑制作用对MALAT-1上调的细胞株更明显,提示抑制水平与MALAT-1的表达下调有关,进一步检测发现益气除痰方可以下调TGF诱导的Smad2/3蛋白磷酸化。结论:益气除痰方抑制肺癌细胞侵袭转移的机制可能是通过下调MALAT-1,抑制Smad2/3磷酸化,从而抑制肺癌细胞发生上皮间质转化的进程。     

益气化瘀方促进糖尿病难愈创面血管新生的AGEs/RAGE/NF-κB信号通路研究

目的:从AGEs/RAGE/NF-κB信号通路探讨益气化瘀方促进糖尿病难愈创面血管新生的作用机制。方法:32只雄性SD大鼠除正常对照组外,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,随机分为模型组、益气化瘀方组、氨基胍组,灌胃8周后在大鼠背部制造全层皮肤缺损开放性创面,于创面造模后第7天取各组大鼠背部创面肉芽组织标本,通过免疫组化及图像分析法检测创面肉芽组织中AGEs、VEGF、CD34含量,用Western blot法检测创面肉芽组织中RAGE、e NOS蛋白水平和NF-κB活性。结果:模型组与正常对照组比较,创面肉芽组织AGEs含量、RAGE蛋白水平、NF-κB活性均明显上升(P0.01),e NOS蛋白水平、VEGF及CD34含量均明显下降(P0.01);益气化瘀方组、氨基胍组与模型组比较,创面肉芽组织AGEs含量、RAGE蛋白水平、NF-κB活性均明显下降(P0.01,P0.05),e NOS蛋白水平、VEGF及CD34含量均明显上升(P0.01,P0.05);益气化瘀方组创面肉芽组织AGEs含量的下降较氨基胍组更为明显(P0.05)。结论:益气化瘀方可以减少糖尿病大鼠创面肉芽组织AGEs的蓄积及组织细胞表面RAGE的表达,阻断两者结合所导致的组织细胞内NF-κB被激活,细胞受损和功能紊乱,使组织细胞合成和分泌VEGF、NO增加。益气化瘀方可以通过调节AGEs/RAGE/NF-κB信号通路从而促进糖尿病性难愈创面血管新生,加速创面修复愈合。     

益气除痰方对肺癌移植瘤小鼠内质网应激蛋白GRP78/BIP、caspase-12的影响

目的探讨益气除痰方治疗肺癌的可能作用机制。方法 15只BALB/c小鼠采用人肺腺癌细胞A549建立人肺癌小鼠皮下移植瘤模型,随机分为模型组和益气除痰方低、高剂量组,每组5只。益气除痰方低、高剂量组分别予益气除痰方生药量27.3g/(kg·d)、54.6g/(kg·d),造模后第8天开始灌胃,每天1次,连续2周;模型组予同体积生理盐水。采用常规HE染色法、透射电镜观察各组小鼠移植瘤组织形态学改变;应用免疫组织化学法、免疫蛋白印迹法检测GRP78/BIP、caspase-12蛋白的表达。HE染色观察各组小鼠主要脏器病理学改变。结果益气除痰方治疗后移植瘤细胞呈现凋亡形态学改变,以高剂量较典型。与模型组比较,益气除痰方低、高剂量组GRP78/BIP表达下降,caspase-12、cleaved caspase-12表达升高(P0.05或P0.01),且益气除痰方高剂量组优于益气除痰方低剂量组(P0.01)。各组小鼠主要脏器无明显病理学改变。结论益气除痰方诱导肺癌细胞发生凋亡具有剂量依赖性,其机制可能与内质网应激凋亡特异性蛋白caspase-12活化,启动内质网应激凋亡通路有关。     

益气除痰方通过抑制Akt信号通路诱导顺铂耐药肺癌细胞凋亡的作用及分子机制研究

目的探讨益气除痰方诱导顺铂耐药肺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法制备益气除痰方含药血清,采用Annexin V/PI双染结合流式细胞术检测益气除痰方对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP1细胞凋亡的影响。采用Caspase分光光度法检测试剂盒检测益气除痰方对A549/DDP细胞内Caspase-8和Caspase-3激酶活性的影响。采用Western blotting检测益气除痰方对A549/DDP细胞Akt/FoxO信号通道相关蛋白的影响。结果与空白血清对照组比较,A549/DDP细胞经不同浓度益气除痰方作用后,凋亡相关蛋白Caspase-8和Caspase-3激酶活性增强(P0.05),呈剂量依赖性效应。益气除痰方能明显抑制Akt的磷酸化(P0.05),随着剂量的增加,其抑制作用增强,而Akt总蛋白的水平基本未受影响;相对应FoxO3a蛋白磷酸化水平逐渐降低(P0.05),而Fox O3a总蛋白的水平基本未受影响;并且经益气除痰方作用后,FoxO3a下游的Bim的表达显著升高(P0.05),均呈现明显的剂量依赖性效用。结论益气除痰方可能通过抑制Akt/FoxO信号转导从而激活内源性凋亡通路,诱导肿瘤细胞凋亡,进而逆转肺癌细胞顺铂耐药。     

益气除痰方通过caspase-4途径诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的:研究益气除痰方血清(YQCT)对人肺腺癌A549细胞促凋亡作用并探讨其通过caspase-4途径诱导凋亡的机制。方法:运用血清药理学方法,予YQCT与人肺腺癌A549细胞共同孵育后,MTT法检测细胞生长状况;Hoechst 33258荧光法、流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;透射电镜观察细胞超微结构改变;免疫印迹法检测caspase-4、IRE1α、TRAF2、calpain-2、caspase-7蛋白表达情况;并采用化学抑制剂抑制caspase-4表达。结果:30%YQCT血清作用A549细胞24 h生长率为(92.09±4.39)%,48 h达(85.69±4.31)%,与同浓度空白组比较有统计学差异;24 h凋亡率为(14.12±1.41)%,48 h达(23.68±1.74)%,与同浓度空白组比较有统计学差异;荧光显微镜(×10)下细胞呈现凋亡形态学改变,透射电镜(×9700)下核周间隙加大,粗面内质网扩张,空泡形成;线粒体肿胀,嵴断裂;免疫印迹法检测30%YQCT血清作用A549细胞48 h后,calpain-2、caspase-7、caspase-4蛋白表达上升,IRE1α、TRAF2表达改变不明显;抑制caspasse-4表达后,Z-LEVD-FMK(+)组细胞凋亡率有所下降,与Z-LEVD-FMK(-)组比较仍有统计学差异。结论:益气除痰方可抑制肺癌细胞生长,诱导细胞凋亡,部分通过激活calpain-2、caspase-7,启动caspase-4起始的内质网特异性凋亡途径发挥其抗肺癌作用。     

益气化痰祛瘀方对慢性间歇缺氧大鼠肺血管重塑的影响及其机制研究

目的 探讨益气化痰祛瘀方对慢性间歇缺氧大鼠肺血管重塑的影响及其机制。方法 将24只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和中药干预组,8只/组。除了正常对照组外,其余两组大鼠置于低氧舱中制备慢性间歇缺氧模型。4周后,中药干预组给予益气化痰祛瘀方灌胃,正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,3组大鼠每次灌胃量均为19.2 mL/kg·次^-1,连续灌胃28 d。干预结束后,处死各组大鼠,取肺组织进行HE染色,观察病理形态学特征,采用qPCR法检测肺组织PI3K、Akt、mTOR的基因表达水平,Western Blot法检测肺组织p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达水平。结果 模型组大鼠肺组织HE染色结果显示,肺血管壁增厚,管壁周围炎性细胞浸润增多,肺泡腔扩大甚至融合成肺大疱;中药干预组大鼠的肺血管壁厚薄较均匀,未见明显增厚,管壁周围炎性细胞浸润减少,肺泡形态结构较完整。qPCR检测结果显示,模型组大鼠肺组织PI3K、Akt、mTOR的mRNA表达水平较正常对照组明显升高(P<0.05),中药干预组则较模型组显著降低(P<0.05)。Western Bl...     

益气除痰方对BALB/c-nu裸小鼠A549肺癌转移的抑制作用及其机制探索

目的研究益气除痰方对BALB/c-nu裸小鼠A549肺癌肿瘤生长及转移的抑制作用并初步探讨其作用机制。方法构建裸鼠A549肺癌移植瘤模型,随机分为空白对照组和益气除痰方组(15.5 g·kg~(-1)·d~(-1)),连续灌胃给药21 d,期间每3天测体质量和瘤体体积;21 d后脱颈处死小鼠,剥取瘤体测瘤质量,计算抑瘤率;摘取肺组织,固定后观察肺表面转移灶个数,计算肺转移抑制率;采用免疫组化法检测瘤体组织上皮间质转化(EMT)标志物及相关信号蛋白表达。结果与空白对照组比较,益气除痰方组小鼠的瘤体体积和瘤质量明显下降(P0.05),抑瘤率为27.6%,提示益气除痰方对肿瘤的生长具有一定的抑制作用;益气除痰方组小鼠肺转移结节明显少于对照组(P0.05),其转移抑制率为39.6%,提示益气除痰方在体内可抑制肺癌的转移;益气除痰方组瘤体组织的上皮标志蛋白E-cadherin较对照组升高(P0.05),而EMT关键标志蛋白vimentin和fibronectin明显下降(P0.05),提示益气除痰方可抑制EMT的发生,从而降低肿瘤细胞的侵袭转移能力;益气除痰方组的GRP78、smad2/3、SRC、P38、ERK、JNK的表达及其磷酸化激活程度均较对照组下降(P0.05),提示益气除痰方抑制肿瘤生长及其抑制EMT的作用可能与其多靶点抑制GRP78、smad2/3、SRC、P38、ERK、JNK等信号蛋白有关。结论益气除痰方可抑制肺癌肿瘤细胞的生长并抑制肺癌的转移,其抑制肿瘤转移的机制与其抑制细胞EMT的发生有关。益气除痰方可能通过多靶点的抑制GRP78、smad2/3、SRC、MAPK(JNK、P38、ERK)等信号通路来实现对EMT的逆转作用。     

柴胡陷胸汤调控HIF-1α/VEGF信号通路对动脉粥样硬化大鼠血管新生的影响

目的:探究柴胡陷胸汤对动脉粥样硬化(AS)大鼠血管新生的影响以及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的作用。方法:高脂饲料喂养法构建AS大鼠模型,分为正常对照组、模型对照组、辛伐他汀5 mg/kg组、柴胡陷胸汤5.8、11.6、23.3 g/kg组。检测大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;苏木素-伊红和油红O染色观察胸主动脉中病变和脂质沉积情况;免疫组化测定胸主动脉中新生血管率以及HIF-1α、VEGF蛋白表达;蛋白质免疫印迹技术(WB)检测胸主动脉中细胞间黏附分子-1(VCAM-1)和血管细胞黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达。结果:相较于正常对照组,模型对照组血清TC、TG、LDL-C含量、主动脉病变比例、新生血管率均显著升高,HIF-1α、VEGF、VCAM-1和ICAM-1蛋白表达显著上调(P<0.01);相较于模型对照组,辛伐他汀5 mg/kg组和柴胡陷胸汤23.3 g/kg组上述各项指标均显著降低(P<0.01)。结论:柴胡陷胸汤可对HIF-1α/VEGF信号通路产生抑制作用,...