孕酮抑制Aβ诱导星形胶质细胞活化所致神经元损伤

目的探究孕酮抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化,发挥神经元保护作用及其机制,为孕酮在阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)防治中的应用提供实验依据。方法将原代培养的星形胶质细胞随机分为对照组、Aβ组及Aβ加3个浓度孕酮组,分别处理24 h后,与神经元共培养。MTT法检测神经元的存活率;ELISA检测条件培养液中炎症因子IL-1β和TNF-α的水平;免疫荧光法和Western blot检测星形胶质细胞NF-κB的活性。结果孕酮浓度依赖地抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化引起的神经元存活率下降;抑制Aβ诱导的星形胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的升高;抑制Aβ诱导星形胶质细胞NF-κB的活性增加。结论孕酮通过抑制Aβ诱导的星形胶质细胞活化,发挥神经元保护作用,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。     

基于TLR4/NF-κB/IL-1β通路研究人参皂苷Rg3对缓解慢性炎症痛的作用机制

目的 研究人参皂苷Rg3缓解慢性炎症痛的作用机制。方法 采用脚掌注射完全弗氏佐剂构建慢性炎症痛小鼠模型，鞘内注射人参皂苷Rg3进行脊髓给药。采用完全随机方法分为对照组、模型组和人参皂苷Rg3组，每组10只。连续给药3 d后观察小鼠足肿胀、痛觉行为及体能变化；采用免疫印迹法检测各组小鼠脊髓组织蛋白表达量。结果 给予完全弗氏佐剂干预后，小鼠各项指标均有不同程度变化，脊髓组织星形胶质细胞标志物——神经胶质纤维酸性蛋白、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88和核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平均增加。人参皂苷Rg3鞘内给药后，减少了小鼠自发缩足次数，提高了机械痛阈值，延长了转棒停留时间及运动距离，使神经胶质纤维酸性蛋白、IL-1β、TLR4、髓样分化因子88、NF-κB蛋白表达水平被抑制。结论 人参皂苷Rg3通过降低TLR4/NF-κB/IL-1β炎症信号缓解慢性炎症痛。     

人参皂苷Rg1对寡聚肽Aβ_(1-42)增加JNK活性及诱导凋亡的影响

目的在寡聚肽Aβ1-42诱导的神经元凋亡过程中,探讨人参皂苷Rg1的保护作用和可能机制;方法运用寡聚肽Aβ1-42来诱导原代培养的皮层神经元损害,把神经元分为空白对照组、Aβ组、sp600125与Aβ共同孵育组以及人参皂苷Rg1与Aβ共同孵育组,然后观察JNK、p-JNK、caspase-3活性和TUNEL细胞数的变化。结果寡聚肽Aβ1-42作用15 min,皮层神经元的JNK磷酸化水平明显增加;经过预先孵育24 h人参皂苷Rg1(2.5~10μmol·L-1)后,再与寡聚肽Aβ1-42共同孵育15 min,JNK磷酸化水平明显降低;寡聚肽Aβ1-42孵育24 h,caspase-3活性和TUNEL数明显升高;人参皂苷Rg1(10μmol·L-1)预处理24 h后,再与Aβ1-42共孵育24 h组中caspase-3和TUNEL阳性数目明显下降。结论人参皂苷Rg1可通过JNK通路减轻寡聚肽Aβ1-42诱导的神经元凋亡。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

文冠果壳苷对Aβ25-35/IFN-γ诱导小胶质细胞炎症因子的抑制作用

目的探讨文冠果壳苷对Aβ25-35/IFN-γ诱导原代小胶质细胞及N9细胞炎症因子的抑制作用。方法 Aβ25-35/IFN-γ作用于原代小胶质细胞及N9细胞24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率,Griess法检测细胞的亚硝酸盐含量,ELISA法测定IL-1β及TNF-α含量,Western印迹法检测NF-κB和MAPK路径相关蛋白表达,RT-PCR法测定TLR2及相关炎症因子mRNA的表达。结果 Aβ25-35/IFN-γ诱导小胶质细胞后,文冠果壳苷对其细胞生存率无影响,但可减少IL-1β,TNF-α及亚硝酸盐含量(P<0.05),降低NF-κB及MAPK路径相关蛋白表达(P<0.05),抑制TLR2,iNOS,COX-2,IL-1β及TNF-αmRNA表达(P<0.05)。结论文冠果壳苷可抑制炎症因子的产生,机制可能与抑制NF-κB及MAPK路径蛋白及mRNA表达有关。     

知母皂苷BⅡ对Aβ_(25-35)诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用

目的研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD(超氧化物歧化酶)活力、MDA(丙二醛)含量以及AChE(乙酰胆碱酯酶)活力。结果知母皂苷BⅡ10-4、10-5mol.L-1能明显增强Aβ25-35(20μmol.L-1)诱导的神经细胞增殖活性,降低LDH漏出率,并能明显提高其SOD活力、降低MDA含量,同时对AChE活力具有一定的降低作用。结论知母皂苷BⅡ能明显改善Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤,可能与其提高模型细胞的抗氧化能力,改善胆碱能系统相关。     

苦参碱对缺血性脑中风小鼠神经元及星形胶质细胞的保护作用

目的：观察苦参碱（Matrine）对缺血性脑中风小鼠的神经保护作用及对缺氧缺糖诱导的神经元和星形胶质细胞损伤的减轻作用,并初步探讨可能的作用机制。方法：采用原代培养小鼠大脑皮层神经元及星形胶质细胞缺氧缺糖模型（Oxy-gen and glucose deprivation,OGD）,MTT法和测定乳酸脱氢酶（LDH）观察Matrine对OGD神经元及星形胶质细胞的损伤是否有减轻作用;建立小鼠永久性大脑中动脉阻塞（Permanent mid-dle cerebral artery occlusion,pMCAO）模型,观察Matrine 10min、1h、3h及6h四个不同时间点给药后,脑梗死面积和神经症状的改善情况及其分子机制是否与抑制神经元及星形胶质细胞NF-κB信号通路有关。结果：经OGD诱导后,原代培养小鼠大脑皮层神经元及星形胶质细胞活力明显下降,与OGD模型组比较,给予Matrine（50μmol/L）干预后,神经元及星形胶质细胞的存活率明显提高（P〈0.01）;与此同时,OGD可使小鼠大脑皮层星形胶质细胞LDH漏出量增高（P〈0.01）,Matrine（50μmol/L）与模型组比较,LDH漏出量明显降低（P〈0.01）;Matrine（37.5mg/kg）10min、1h两个给药时间点的脑梗死面积与模型组比较明显减少（P〈0.01）;与模型组比较,Martine 10min、1h两个给药时间点术后24h的神经症状评分明显降低（P〈0.01）;Matrine可降低pMCAO缺血区IκBα与IKK蛋白的表达水平（P〈0.01,P〈0.05）,同时降低细胞核NF-κB蛋白的表达（P〈0.01）。结论：Matrine可通过直接保护神经元及星形胶质细胞改善缺血性脑中风症状,其作用时间窗可能在发病1h以内,Matrine保护作用可能与NF-κB信号通路有关。     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导大鼠海马神经元tau蛋白异常磷酸化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对Aβ2535所致大鼠海马神经tau蛋白异常磷酸化的抑制作用及其可能机制。方法应用脑立体定向技术向成年大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ25355nmol制备AD样大鼠模型,术后分别给予腹腔内注射不同浓度的人参皂苷Rg1(625、125、25μmol·kg-1)处理,14d后处死,采用镀银染色方法观察海马组织神经元病理改变;免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹技术显示大鼠脑内[pS396]tau、[pSpS199/202]tau、[pT231]tau的表达水平情况,以及总tau蛋白的水平(tau5);免疫蛋白印迹技术检测海马组织中GSK3β和磷酸化GSK3β的水平变化。结果凝聚态Aβ2535注射组神经元纤维走行紊乱,增粗、肿胀密集成宽带状,轴突深染;而人参皂苷Rg1对神经元具有明显的保护作用,脑内总tau的水平下降,[pS396]tau、[pSpS199/202]tau、[pT231]tau的表达明显低于Aβ2535注射组(P<001),以25μmol·kg-1保护作用最明显;GSK3β和磷酸化GSK3β的水平亦明显低于Aβ2535注射组,与正常和假注射组差异无显著性(P>005),以25μmol·kg-1作用最明显。结论人参皂苷Rg1对Aβ2535诱导的AD样大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能是通过阻断GSK3β的活性而降低磷酸化tau蛋白的表达而实现的。     

人参皂苷Rg_1通过作用于炎性因子和糖皮质激素受体减少金葡菌对肺上皮细胞的损伤(英文)

本文旨在探讨人参皂苷Rg_1体外对金葡菌感染肺上皮细胞所致病变的作用及其可能的机制。实验采用体外大鼠原代肺上皮细胞感染模型。RT-PCR和Western blot方法观察肺细胞中integrinβ1,NF-κB和糖皮质激素受体(GR)等相关因子的表达。结果表明人参皂苷Rg_1可以明显抑制金葡菌感染后肺上皮细胞整合素integrinβ1的表达,下调炎性因子NF-κB,ICAM-1,TNF-α,IL-2和IL-6,上调GR的表达。人参皂苷Rg_1可以明显抑制金葡菌感染肺上皮细胞后的炎性因子,从而对肺脏起到一定的保护作用。     

京尼平苷对LPS诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应的抑制作用

目的明确京尼平苷对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应的抑制作用。方法以LPS诱导原代培养的星形胶质细胞为细胞模型,随机分为对照组、LPS组、LPS+白藜芦醇组和LPS+不同浓度京尼平苷组,采用Western Blot法检测星形胶质细胞活化标记物GFAP水平及NF-κB p65水平,ELISA法检测致炎细胞因子水平。结果京尼平苷可显著抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化,降低TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,同时NF-κB p65蛋白的表达也明显降低。结论京尼平苷能通过NF-κB途径抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化,并抑制致炎细胞因子水平。     

人参根提取物对原代培养的星形胶质细胞的神经保护作用

人参提取物可以保护神经细胞免受氧化损害。然而人参对培养的星形细胞的抗氧化能力鲜有报道。研究人参根标准水提取物对H2O2诱导的原代培养的大鼠星形胶质细胞氧化应激的抗氧化作用。将原代培养的星形胶质细胞以一种适当的密度接种,经含有不同质量浓度(0.0001、0.001、0.01、0.     

人参皂苷Rg3的抗肿瘤作用研究进展

人参皂苷Rg3是人参的主要活性成分,临床研究发现具有促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,抗肿瘤细胞侵袭和转移以及抑制肿瘤新生血管形成的作用。同时人参皂苷与临床化疗联合使用,能够增敏化疗效果,其机制可能与抑制NF-κB活性有关。人参皂苷Rg3作为辅助用药,在综合治疗模式中有重要作用。     

NF-κB靶向性哑铃形“圈套”寡核苷酸对海马神经元及神经元样细胞中COX-2表达的影响

目的设计合成靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对神经元样细胞及海马神经元中NF-κB及环氧化酶-2(COX-2)的抑制作用。方法采用NF-κB靶向性哑铃形圈套ODNs转染培养的PC12细胞,用Western blot方法对PC12细胞内NF-κB和COX-2的蛋白表达进行分析;转染培养的海马神经元再经LPS刺激后,用RT-PCR法检测COX-2mRNA。结果经靶向性NF-κB哑铃形圈套ODNs处理的PC12细胞中NF-κB的表达明显降低(P<0.01),同时伴有COX-2表达明显减少(P<0.01);海马神经元中COX-2mR-NA的表达明显降低(P<0.01)。结论靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs可抑制神经元样细胞及神经细胞中NF-κB和COX-2的表达,且NF-κB对COX-2具有调控作用。     

参乌胶囊对β-淀粉样肽大鼠模型脑内炎症反应的影响

目的:观察中药新复方参乌胶囊对Aβ25-35肽段海马注射大鼠模型脑内炎症反应的影响.方法:大鼠单侧(左侧)海马内注射Aβ25-35,用免疫组化方法观察海马内小胶质细胞和星形胶质细胞数量,放免法检测海马内炎性因子IL-1β和TNFα含量,用尼氏染色法检测海马神经元数量.结果:参乌胶囊灌胃给药2周,能够明显抑制Aβ模型大鼠海马内胶质细胞的活化状态,减少小胶质细胞和星形胶质细胞的数量和面积,并且减少炎性因子IL.1β和TNFα的产生,减轻神经元损伤.结论:参乌胶囊能够抑制Aβ引起的神经炎性反应,起到保护神经元的作用.     

人参皂苷Rg1通过抗氧化应激保护冈田酸诱导的PC12细胞损伤

目的体外细胞水平研究人参皂苷Rg1在冈田酸(Okadaic Acid,OKA)诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样神经毒性模型中的保护作用,并初步探索其作用机制。方法选用PC12细胞模拟神经元,采用OKA造模的同时给予Rg1(1、5、10μmol·L~(-1)-),选用褪黑素(Melatonin,Melat)10μmol·L~(-1)-作为阳性对照。分别采用MTT、LDH法检测细胞存活率及死亡率,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用DCFH-DA荧光探针法检测胞内ROS的堆积,并用试剂盒检测细胞内一系列抗氧化酶活性的变化。结果与对照组相比,OKA组细胞存活率明显降低、死亡率明显增加,细胞早期凋亡数量明显增多(P<0.01);氧化应激相关指标检测发现,OKA组胞内ROS堆积明显增多(P<0.01),总抗氧化能力(ABTS)明显降低(P<0.01),过氧化物酶(Catalase,CAT)(P<0.01),超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性都明显降低(P<0.05),GSSG/GSH比率明显升高(P<0.01)。与模型组相比,Rg1不同剂量组均能显著提高OKA模型中PC12细胞的存活率,降低细胞死亡率,并抑制胞内ROS水平、提高抗氧化酶活力增强抗氧化能力。结论人参皂苷Rg1在OKA诱导的AD样病理模型中可以通过抗氧化应激作用发挥抗细胞死亡、保护神经细胞的作用。     

促红细胞生成素抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制

目的研究促红细胞生成素(EPO)抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制。方法胰酶消化法提取大鼠视网膜神经细胞进行原代培养,随机分为对照组、模型组及不同浓度EPO治疗组,培养48 h后TUNEL法测定细胞凋亡情况,免疫细胞化学法(SP法)测定NF-κB蛋白表达。结果细胞凋亡检测显示模型组同对照组相比凋亡细胞明显增多(P<0.01),各EPO治疗组同模型组相比凋亡细胞明显减少(P<0.01);免疫细胞化学法见NF-κB蛋白在对照组仅有极少量表达,在模型组呈弱阳性表达,而各EPO治疗组较模型组表达明显增强(P<0.01)。随着EPO浓度从5 kU.L-1增加到40 kU.L-1,视网膜神经细胞的凋亡明显减少,NF-κB蛋白的表达明显上升,呈一定浓度依赖性。结论高糖状态是引发大鼠视网膜神经细胞发生凋亡的损伤性因素之一,EPO能抑制高糖引发的凋亡,发挥神经保护作用,其机制可能是通过上调NF-κB的表达来实现,这为临床早期糖尿病视网膜病变的治疗提供了理论依据。     

银杏叶提取物对Aβ25-35诱导的神经细胞毒性的防治作用

目的探讨银杏叶提取物对Aβ25-35诱导体外培养神经细胞毒性的防治作用。方法 培养大鼠大脑皮质神经元细胞,构建AD细胞模型,制模前后加用银杏叶提取物(EGb)干预,四甲基噻唑蓝比色法(MTT)测定神经细胞活力,West-ern印迹分析法测Caspase3、Bcl-2、Bax表达。结果 EGb显著提高预防组细胞活力(P<0.01),增强预防组及治疗组Bcl-2表达(P<0.01),明显抑制预防组及治疗组Caspase3、Bax表达(P<0.01)。结论 EGb可有效的对抗Aβ25-35的神经毒性作用,抑制细胞凋亡。     

人参皂苷Rbl对阿霉素心力衰竭大鼠心肌细胞核因子-κB的影响

目的探讨人参皂苷Rbl(Gs-Rb1)改善阿霉素(Adr)慢性心力衰竭(CHF)效应是否与抑制核因子-κB(NF-κB)有关。方法 Adr诱导CHF大鼠模型被随机分为Adr组(n=15)和Gs-Rbl组(70 mg.kg-1.d-1,n=17),另随机选取同龄健康大鼠作为对照(n=10);同时培养乳鼠心肌细胞并随机分为对照组、Adr组(1μmol.L-1)和Gs-Rbl组(1μmol.L-1Adr+200μmol.L-1 Gs-Rbl)。干预完毕后,检测心脏超声、NF-κB、IκBα、p-IκBα和NF-κB DNA结合活性。结果 (1)Gs-Rb1组LVEF明显改善(P=0.003);(2)在NF-κB p50和NF-κB p65方面,体内或体外的Gs-Rbl组均明显低于Adr组(P<0.001);(3)体内、体外的Gs-Rbl组NF-κBDNA结合活性明显低于Adr组(P<0.01);(4)体内、体外的Adr组IκBα蛋白明显高于对照组,而Gs-Rbl组IκBα最高(P<0.01);Gs-Rbl组p-IκBα和p-IκBα/IκBα比值明显低于Adr组(P<0.01)。结论 Gs-Rb1改善CHF效应与其抑制NF-κB活性有关。     

人参皂苷Rb_1与Rg_1对肾小管细胞缺氧复氧损伤模型的影响

目的:探讨人参皂苷的2种单体成分Rb1、Rg1在肾小管细胞缺氧复氧(HRO)损伤模型中的作用及机制。方法:将大鼠肾小管上皮细胞分为对照组、HRO组、Rb1+HRO组和Rg1+HRO组。除对照组外,其余各组给药同时缺氧复氧培养36h后分别检测肾小管细胞增殖活性、增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达情况、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:人参皂苷Rb1、Rg1可促进HRO性肾小管细胞增殖(P<0.01),增强细胞中PCNA阳性表达(P<0.05),减少肾小管细胞MDA生成及LDH释放,增强SOD活性。结论:人参皂苷Rb1和Rg1对HRO性肾小管细胞损伤模型具有保护作用。