姜黄素通过激活肝细胞自噬减轻脂多糖/D-氨基半乳糖诱导的大鼠急性肝损伤

目的:探讨姜黄素(CUR)对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GalN)联合注射诱导大鼠急性肝损伤(AHI)后肝细胞自噬的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、AHI组、CUR组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和3-MA+CUR组,每组6只。采用腹腔注射LPS及D-GalN制造急性肝损伤动物模型,在肝损模型建立后12 h检测各组大鼠肝功能,HE染色观察肝组织病理变化,透射电镜观察自噬体形成情况,Western blot法检测肝组织自噬相关蛋白LC3和beclin 1的表达,酶联免疫吸附实验检测血清TNF-α含量。结果:与对照组相比,AHI组大鼠的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平显著升高(P<0.05),肝组织病理损伤程度加重,血清TNF-α含量增加(P<0.01),自噬体数量增多,自噬相关蛋白LC3和beclin 1的表达均升高(P<0.01);与AHI组相比,姜黄素组大鼠的血清ALT和AST水平明显降低(P<0.05),肝组织病理损伤情况明显改善,血清TNF-α含量明显减少(P<0.01),自噬体明显增多,自噬相关蛋白LC3和beclin 1的表达明显增加(P<0.01);而与姜黄素组相比,3-MA组及3-MA+CUR组的血清ALT和AST水平升高(P<0.05),肝组织损伤加重,血清TNF-α含量增加(P<0.01),自噬体明显减少,自噬相关蛋白LC3和beclin 1表达显著减少(P<0.01)。结论:姜黄素可能通过激活肝细胞自噬从而减轻LPS/D-GalN诱导的大鼠急性肝损伤。     

自噬对肾大部切除大鼠肾小管上皮细胞程序性坏死的影响

目的:探讨自噬是否参与肾大部切除(SNx)大鼠肾小管上皮细胞的过度死亡,及其与程序性坏死的关系。方法:48只雄性SD大鼠随机分为control组(6只)和SNx组(42只),分别行假手术和SNx。将24只SNx大鼠分为0、4、8和12周组;其余SNx大鼠分为SNx+vehicle组、SNx+necrostatin-1(Nec-1)组和SNx+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组6只。检测0、4、8和12周组大鼠肾组织RIP1、RIP3、LC3和beclin-1的mRNA和蛋白表达水平;用Nec-1和3-MA干预SNx大鼠,Western blot法检测LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和beclin-1的蛋白水平,透射电镜和TUNEL染色判定Nec-1和3-MA对SNx大鼠肾小管上皮细胞死亡的影响,并观察Nec-1和3-MA对SNx大鼠肾组织的病理变化、活性氧簇(ROS)、血尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)含量的影响。结果:SNx术后8周大鼠肾组织RIP1、RIP3、LC3和beclin-1的mRNA和蛋白水平达最高值(P0.01);Nec-1和3-MA干预SNx大鼠的LC3-Ⅱ/Ⅰ和beclin-1蛋白水平、发生程序性坏死的肾小管上皮细胞及TUNEL阳性细胞数量均显著降低(P0.01)。另外,Nec-1减低SNx大鼠肾组织的ROS含量,但3-MA无此作用。结论:自噬参与了SNx大鼠肾小管上皮细胞过度死亡;抑制自噬可减轻SNx大鼠肾小管上皮细胞程序性坏死及其肾损伤。     

调节自噬对创伤性失血休克后血管功能障碍的影响

目的 研究自噬对创伤性失血休克（THS）后血管功能障碍的影响。方法 80只SD大鼠随机分为对照组、休克组、休克+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）1、2、4 mmol/L组、休克+自噬激动剂雷帕霉素（RAPA）0.1、1、2、10μmol/L组、休克+RAPA(1μmol/L)+3-MA(2 mmol/L)组,建立THS大鼠模型,观察上调或抑制自噬对THS大鼠血管反应性的影响。24只大鼠随机分为正常组、休克+乳酸林格氏液（LR）组、休克+LR+RAPA组,在体观察诱导自噬对休克大鼠平均动脉血压（MAP）及血流灌注的影响,同时检测血管组织中自噬标志物相关蛋白的表达。结果 离体血管功能检测结果显示,THS大鼠的血管反应性明显降低,RAPA处理可提高THS大鼠的血管反应性,而3-MA处理可使THS大鼠血管反应性进一步降低,并且可拮抗RAPA提高THS大鼠血管反应性的作用。在整体动物水平,THS大鼠在给予2倍失血量的LR复苏后,MAP和肝、肾血流灌注有所恢复,但仍显著低于正常大鼠;预先给予RAPA的THS大鼠在经LR复苏后,MAP和肝、肾血流灌注均得到了明显恢复,其效果明显优于单纯LR治疗。...     

齐墩果酸通过Nrf2抑制铁死亡并减轻重症急性胰腺炎大鼠肝损伤

目的：基于核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗铁死亡轴探讨齐墩果酸（OLA）对重症急性胰腺炎（SAP大鼠肝损伤的作用机制。方法：经逆行注射牛磺胆酸钠法构建SAP大鼠模型,大鼠被随机分为SAP组、OLA+SAP组、铁死亡抑制剂ferrostatin-1(FER1)+SAP组、OLA+Nrf2抑制剂brusatol(BRU)+SAP组和假手术（sham）组,每组8只。注射牛磺胆酸钠后0.5、3和6 h,依次给予相应药物或生理盐水灌胃及腹腔注射。HE和TUNEL染色分别观察胰腺和肝脏形态变化及肝细胞死亡情况;试剂盒检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆汁酸（TBA）、白蛋白（ALB）和淀粉酶（AMY）水平,肝组织丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、4-羟基壬烯醛（4-HNE）和总谷胱甘肽（t-GSH）水平,以及肝组织中铁含量;Western blot检测肝组织中cleaved caspase-3及Nrf2-抗铁死亡轴相关蛋白水平。结果：造模后12 h,相较于sham组,SAP组胰腺和肝细胞肿胀变形,有较多炎性细胞,血清ALT、AST、TBA和AMY水平,肝组织clea...     

细胞自噬水平在大鼠缺血/再灌注肺组织内变化及其作用

目的 探讨大鼠肺缺血再灌注后肺组织内自噬水平的变化和自噬在肺缺血再灌注损伤中的作用.方法 大鼠分为假手术组和缺血1 h再灌注0、2、6 和24 h组,免疫印迹法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达,电子显微镜观察细胞内自噬体.自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和安慰剂分别预处理假手术组和缺血再灌注2 h组大鼠,HE染色和血气分析检测肺组织损伤程度.结果 LC3-Ⅱ/Actin比值在缺血1h时即有升高,再灌注2～6h达高峰(P＜0.01),再灌注24 h恢复至接近假手术组水平.主要在Ⅰ型肺泡上皮细胞和血管内皮细胞内观察到自噬体.3-MA预处理降低肺组织损伤评分,升高血氧分压,减轻肺缺血再灌注损伤(P＜0.05).结果证实,肺缺血及再灌注诱发肺组织呼吸膜细胞自噬激活,3-MA预处理通过抑制自噬改善肺缺血再灌注损伤.结论 细胞自噬可能是肺缺血再灌注病理生理过程中加重损伤的因素.     

白藜芦醇通过调节SIRT1/AMPK信号通路介导自噬反应对膝关节骨性关节炎大鼠细胞凋亡的影响

目的：从沉默信息调节因子1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路介导自噬角度,探讨白藜芦醇对大鼠膝关节骨性关节炎（KOA）软骨细胞凋亡的影响。方法：50只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇组、白藜芦醇+SIRT1抑制剂组、自噬激活剂组,每组10只。除对照组外其余大鼠均通过注射弗氏完全佐剂造模法复制KOA大鼠模型,白藜芦醇组、白藜芦醇+AMPK抑制剂组、自噬激活剂组分别使用10μmol/kg白藜芦醇、10μmol/kg白藜芦醇+10 mg/kg EX527、2 mg/kg雷帕霉素进行干预,4周后,观察大鼠Lequesne MG膝关节级别;测定大鼠膝关节液中IL-6、肿瘤坏死因子β(TNF-β)水平;HE染色与TUNEL染色观测大鼠膝关节软骨组织形态及凋亡情况;透射电子显微镜观察大鼠软骨细胞自噬情况;Western blot法检测SIRT1、p-AMPK、AMPK、LC3、Beclin-1蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度加重（P<0.05）;与模型组相比,白藜芦醇组、自噬激活剂组局部反应、步态反应、关节活...     

雷帕霉素减轻碘佛醇诱导的模型大鼠急性肾损伤

目的 探讨自噬在造影剂诱导的大鼠急性肾损伤(CI-AKI)中的作用,并探讨其可能机制。方法 将SD大鼠随机分为对照(control)组、CI-AKI模型(尾静脉注射造影剂碘佛醇;model)组、雷帕霉素(RAPA)组和羟基氯喹(HCQ)组。测定血清中尿素氮(BUN)及肌酐(Scr)含量;HE染色检测肾脏组织病理学;透射电镜观察自噬超微结构;Western blot观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、泛素结合蛋白p62及组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)蛋白表达;RT-qPCR观察HDAC4 mRNA表达。结果 与对照组相比,模型组、HCQ组中BUN、Scr含量及HDAC4表达升高(P<0.01),肾脏近端小管出现明显损伤,其中模型组中自噬小体和自噬溶酶体增加,伴随着LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,p62水平降低(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,RAPA组出现较多自噬小体和自噬溶酶体,伴随着LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高和p62、HDAC4表达下降(P<0.05,P<0.01)。而HCQ组自噬相关结构明显减少,伴随着LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p62表...     

CP-25调控巨噬细胞来源的外泌体分泌对子宫内膜癌Ishikawa细胞系自噬性细胞死亡的影响

目的：探讨芍药苷-6’-O-苯磺酸酯（CP-25）通过调控巨噬细胞来源的外泌体对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬性细胞死亡的影响。方法：使用佛波酯（PMA）将人单核细胞THP-1诱导为巨噬细胞，并提取其外泌体，透射电子显微镜观察外泌体形态，Western blot鉴定外泌体标志蛋白表达；使用不同浓度CP-25(0.1、0.5、1.0μmol/L)干预巨噬细胞外泌体，并与Ishikawa细胞共培养24 h,CCK-8法检测各处理组Ishikawa细胞活性，Transwell小室检测各处理组Ishikawa细胞的迁移与侵袭；以自噬抑制剂3-MA干预细胞，实验分为对照组、3-MA组、Exo-CP-25组、3-MA+Exo-CP-25组，进行对应处理后，Hoechst 33342染色观察各处理组Ishikawa细胞凋亡形态，流式细胞术检测各处理组Ishikawa细胞凋亡率，透射电子显微镜观察各处理组Ishikawa细胞自噬体，免疫荧光染色检测各处理组Ishikawa细胞自噬相关标志物LC3表达，Western blot检测各处理组Ishikawa细胞自噬相关蛋白表达。结果：经鉴定成功分离了诱...     

右美托咪啶通过PINK1/Parkin信号通路调控线粒体自噬改善老年大鼠术后认知功能障碍

目的 探究右美托咪啶通过PINK1/Parkin信号通路调控线粒体自噬改善老年大鼠术后认知功能障碍的分子机制。方法 SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、右美托咪啶(40μg/kg)组、自噬抑制剂三甲基腺嘌呤(3-MA,100 mmol/L)组、右美托咪啶+3-MA组,每组8只。旷场和水迷宫实验检测大鼠认知能力;TUNEL染色检测大鼠海马神经元凋亡情况;透射电镜观察大鼠海马神经元自噬情况;Western blot检测各组大鼠脑组织PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病蛋白(Parkin)、自噬效应蛋白Beclin 1、微管轻链蛋白3B(LC3Ⅱ/Ⅰ)、线粒体自噬受体p62(p62)蛋白表达。结果 右美托咪啶显著改善老年大鼠术后认知功能,抑制神经元凋亡,改善线粒体结构,减少自噬小体数量,升高大鼠脑组织PINK1、Parkin、Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平,降低p62蛋白表达水平。而右美托咪定的上述改善作用均被3-MA减轻或抑制。结论 右美托咪啶通过激活PINK1/Parkin信号通路增强线粒体自噬改善老年大鼠术后认知功能障碍。     

3-甲基腺嘌呤对Aβ(25-35)引起的海马神经元凋亡的影响

目的: 探讨阿尔茨海默病(AD)大鼠海马神经元自噬对凋亡的影响。方法: SD大鼠随机分成模型组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理组和对照组。模型组大鼠用立体定位技术对海马CA1区微量注射Aβ(25-35)造成AD模型;3-MA预处理组大鼠在注射Aβ(25-35)之前对海马CA1区微量注射3-MA。Morris水迷宫检测大鼠记忆水平;行为学测试后,观察海马神经元超微结构变化、自噬泡的形成、beclin-1的表达以及细胞凋亡情况。结果: 3-MA预处理组与模型组比较,大鼠学习记忆能力显著下降(P<0.05),海马神经元凋亡率显著增加(P<0.05),而beclin-1的表达量减少;模型组海马神经元可见双层膜包裹形成的自噬泡,神经元破坏程度明显轻于3-MA预处理组。结论: 抑制神经元自噬水平增加神经元凋亡;诱导神经元自噬可能是防治阿尔茨海默病的一个潜在方法。     

欧前胡素通过提高自噬水平缓解大鼠雌激素缺乏性骨质疏松

目的探寻欧前胡素(Imp)对大鼠雌激素缺乏性骨质疏松的疗效及机制。方法将大鼠随机分为对照(control),OVX和OVX+Imp组。建模后10 d,给OVX+Imp组、对照组和OVX组大鼠分别尾静脉注射欧前胡素75 mg/kg或氯仿溶剂,2次/周,10周。μCT和HE切片分析股骨远端骨小梁形态及参数。应力测试股骨及L5椎骨力学强度。钙黄绿标记内源性矿物沉积。ELISA检测血清PINP和B-ALP。ALP染色检测BMMSCs成骨分化能力。Real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。HE染色检测皮下移植物异位成骨。结果 1)OVX组骨量、骨小梁参数、股骨和L5椎骨力学强度、矿物沉积速率、血清PINP和B-ALP均低于对照组和OVX+Imp组(P0.05)。2)OVX组内源性BMMSCs的ALP活性、成骨基因表达及异位成骨能力均低于对照组和OVX+Imp组(P0.05)。3)OVX组内源性BMMSCs自噬水平低于对照组和OVX+Imp组(P0.05)。4)BMMSCs+3-MA组自噬水平低于BMMSCs组,成骨能力相应降低(P0.05);BMMSCs+3-MA+Imp组自噬水平高于BMMSCs+3-MA组,成骨活性相应升高(P0.05)。结论欧前胡素通过提高自噬水平恢复内源性BMMSCs成骨能力,治疗雌激素缺乏性骨质疏松。     

雷帕霉素减缓大鼠被动Heymann肾炎的进展

 目的：观察雷帕霉素对大鼠被动Heymann肾炎（PHN）的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法：雄性SD大鼠随机分为3组,即对照组、PHN模型组和雷帕霉素治疗组。以造模后第21天为观察结点,采用全自动生化分析仪测定24 h尿蛋白总量、血尿素氮和血清肌酐,过碘酸-六次甲基四胺银染色观察肾脏病变,Weibel-Gomez点计数方法计数足细胞数量,免疫荧光染色检测肾小球内C5b-9的沉积,免疫组化染色观察caspase-3的表达,Western blotting检测肾小球LC3的表达。结果：雷帕霉素明显减轻PHN模型大鼠的蛋白尿排出（P<0.05）,同时各组大鼠的肾功能均正常,其间无显著差异;雷帕霉素使PHN大鼠肾小球基底膜增厚的程度和范围有所减轻;雷帕霉素明显改善PHN大鼠足细胞缺失情况,减少足细胞凋亡;雷帕霉素可增强肾小球内固有细胞的自噬水平。结论：在PHN的病变过程中,适度增强自噬减少足细胞凋亡,减轻肾脏病变和缓解蛋白尿,可能是雷帕霉素减缓大鼠PHN进展的重要机制之一。     

自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏后大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏(CA/CPR)后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组(sham)、CA/CPR模型组(model)、雷帕霉素(Rapa)组(CA/CPR+Rapa)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(CA/CPR+3-MA)。采用呼气末夹闭气管窒息法复制大鼠CA/CPR动物模型,分别给予自噬激动剂Rapa 0.2 mg/kg及自噬抑制剂3-MA 10 mg/kg进行干预。采用神经功能缺陷评分(NDS)评价CA/CPR大鼠神经功能;用TUNEL染色法检测大鼠海马神经元的凋亡变化;用RT-PCR和Western blotting法检测大鼠海马内微管蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1、Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,CA/CPR模型组大鼠NDS评分明显降低;海马神经元TUNEL染色阳性细胞数明显增多,凋亡率显著升高;海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,CA/CPR+Rapa大鼠NDS评分明显降低,而海马神经元凋亡率明显有所增加,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显上调,而Bcl-2表达则明显有所下降;CA/CPR+3-MA大鼠NDS评分明显升高,而海马神经元凋亡率下降,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显下调,而Bcl-2表达则有所升高(P<0.05,P<0.01)。结论 CA/CPR后自噬水平升高促进海马神经元凋亡,自噬水平降低抑制海马神经凋亡,两者相互作用共同参与CA/CPR的病理过程。     

细胞自噬对饥饿环境下椎间盘髓核细胞的保护作用

目的: 探讨饥饿条件下椎间盘髓核细胞是否发生自噬及自噬对髓核细胞的作用。方法: 原代培养SD大鼠髓核细胞,对细胞表型进行鉴定后,将细胞分为正常对照组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)加DMEM培养基组、3-MA加EBSS培养基组和EBSS饥饿组,接着用单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)染色、透射电镜和Western blotting观察各组细胞的自噬差异,最后采用CCK-8法测定细胞生长抑制率以及TUNEL法测定细胞凋亡率。结果: 成功培养出SD大鼠髓核细胞。与对照组相比,电镜和荧光显微镜下观察到EBSS培养基诱导的髓核细胞出现自噬囊泡,但是3-MA 抑制后细胞自噬泡明显减少;Western blotting检测发现LC3-II/LC3-I和Beclin-1/β-actin在EBSS处理组明显大于3-MA+EBSS处理组和对照组(P<0.05), 而3-MA+EBSS处理组的细胞抑制率和凋亡率明显高于EBSS处理组(P<0.05)。结论: 饥饿可以诱导大鼠椎间盘髓核细胞发生自噬,并且3-MA能抑制自噬发生。自噬对饥饿环境下的髓核细胞可能具有一定的保护作用。     

β-榄香烯对CLP诱导的脓毒症大鼠肝损伤的保护作用

目的：探讨β-榄香烯在盲肠结扎穿孔（CLP）诱导的脓毒症大鼠肝功能和炎症损伤中的保护作用。方法：50只Wistar大鼠分为健康对照组、模型组、模型+β-榄香烯25 mg/kg组、模型+β-榄香烯50 mg/kg组、模型+β-榄香烯100 mg/kg组。ELISA测定各组大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酸氨基转移酶（ALT）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、三酰甘油（TG）水平;HE染色观察肝脏病理损伤;Western blot检测肝组织中cleaved cas9、cleaved cas3蛋白表达水平,ELISA检测血清和肝组织中iNOS和IL-10含量,Western blot和免疫组化检测NF-κB P65蛋白表达水平。结果：与健康对照组相比,模型组大鼠血清中AST、ALT、LDL、TG水平升高,HDL水平降低（P<0.05）,肝脏病理损伤严重,cleaved cas9、cleaved cas3蛋白表达水平升高,血清和肝组织中iNOS和IL-10含量增多,p-P65/P65水平升高（P<0.05）。与模型组相比,25 mg/kg β-榄香烯给药...     

阿霉素诱导下多发性骨髓瘤细胞中自噬和氧化应激的相互作用

 目的: 探讨阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226细胞内自噬和活性氧簇(reactive oxidative species,ROS)生成的影响及其相互作用关系。方法: 不同浓度阿霉素诱导RPMI-8226细胞24 h,采用Western blot技术检测细胞内beclin 1、LC3等自噬相关蛋白的表达水平。采用DCFH-DA荧光染色法检测RPMI-8226细胞内ROS的水平,荧光显微镜采集图像。采用氧自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)及tempol处理RPMI-8226细胞后,通过Western blot技术检测阿霉素诱导下细胞内beclin 1、LC3等蛋白的表达水平。采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理PRMI-8226细胞后,检测阿霉素诱导下细胞内ROS和凋亡的表达水平。结果: RPMI-8226细胞内beclin 1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平呈阿霉素剂量依赖性增加,当阿霉素诱导浓度达2 mg/L时,与对照组比较显著增加(P<0.05)。采用2 mg/L阿霉素处理RPMI-8226细胞,通过荧光显微镜观察,ROS水平较对照组明显增加。氧自由基清除剂NAC和tempol处理RPMI-8226细胞后,beclin 1和LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平较阿霉素处理组下降。采用自噬抑制剂3-MA处理细胞后,RPMI-8226细胞内ROS和凋亡的水平较阿霉素处理组及对照组增加。结论: 阿霉素能增加RPMI-8226细胞内自噬和ROS的生成,抑制自噬能增加阿霉素诱导下ROS和凋亡的水平,抑制ROS后能减少阿霉素诱导下多发性骨髓瘤细胞中的自噬。     

厄洛替尼减轻STZ诱导的糖尿病肾病模型大鼠的肾损伤

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂厄洛替尼(erlotinib)对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法:采用大剂量(55 mg/kg)链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导大鼠糖尿病肾病模型,以1周后血糖值16.7 mmol/L的大鼠为造模成功的标准。将糖尿病大鼠随机分为2组[STZ组和STZ+erlotinib(100 mg·kg~(-1)·d~(-1))组],并以正常大鼠为对照组(control组)。Erlotinib处理4周后,检测大鼠空腹血糖、血清肌酐和24 h尿蛋白含量的变化;HE染色和Masson染色观察肾脏组织病理学改变;Western blot检测各组肾脏组织中EGFR、p-EGFR、转化生长因子β1(TGFβ1)、Smad2/3、p-Smad2/3、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)和纤连蛋白(fibronectin)的蛋白水平;活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测各组肾脏组织中ROS和MDA水平。结果:与control组相比,STZ组血糖、24 h尿蛋白和血清肌酐水平均显著升高(P0.01),肾组织形态学出现异常变化;与STZ组相比,STZ+erlotinib组的血糖、24 h尿蛋白水平和血清肌酐水平显著降低(P0.05),肾小球结构恢复正常,肾小球系膜细胞增生程度明显减弱。厄洛替尼明显抑制了STZ大鼠肾组织中p-EGFR、TGFβ1、p-Smad2/3、ColⅣ和fibronectin蛋白水平,也明显抑制了STZ大鼠肾组织中ROS和MDA水平。结论:厄洛替尼可能通过抑制EGFR/TGFβ1-Smad2/3信号通路的激活来抑制糖尿病肾病肾组织的纤维化和氧化应激反应,从而减轻肾损伤。     

PI3K/Akt信号通路在脓毒症肾脏损伤诱导的自噬中的调节作用*

 目的：研究脓毒症造成肾脏损伤时的自噬情况以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节作用。方法：对大鼠盲肠进行结扎与穿刺（CLP）,对肾脏组织切片进行HE染色,并测定血清尿素氮和肌酐。通过Western blotting定量分析CLP大鼠肾脏损伤发生后不同时点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3（LC3）Ⅰ/Ⅱ、beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况;体外用LPS诱导人近端肾小管上皮细胞株HK-2发生自噬,检测不同浓度LPS和不同刺激时间自噬相关分子LC3Ⅰ/Ⅱ和Akt蛋白磷酸化的表达情况;进一步使用PI3K抑制剂、Akt抑制剂和LPS刺激HK-2细胞观察自噬相关蛋白的表达情况及细胞的凋亡水平。结果：同对照组相比,CLP大鼠显微镜下可见肾损伤的典型病理改变,血清尿素氮和肌酐均有上升。CLP肾脏损伤发生后,自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ、beclin-1含量及Akt磷酸化水平均有上升。LPS刺激HK-2细胞后,随着刺激浓度的增加,p-Akt(308)表达量逐渐提高,而LC3Ⅰ/Ⅱ及p-Akt(472)的表达量在10 mg/L LPS刺激组最高。随着刺激时间的延长,p-Akt(308)表达量逐渐提高;LC3Ⅰ/Ⅱ表达量同p-Akt(472)在刺激8 h时最高;使用PI3K抑制剂及Akt抑制剂后,LPS诱导的LC3表达显著下调,HK-2细胞凋亡明显增加。结论：CLP肾脏损伤发生时可以诱导自噬发生, PI3K／Akt信号通路在其中发挥重要调节作用。     

丹酚酸B通过调控Cx43抑制铁死亡对心肌梗死大鼠模型的保护机制研究

目的：基于铁死亡探讨丹酚酸B(Sal B)对心肌梗死（MI）大鼠模型的保护作用,并分析缝隙连接蛋白43(Cx43)在其中的作用。方法：经结扎左冠状动脉法构建MI大鼠模型,随机分组为假手术（sham）组、MI组、Sal B组、Sal B+AAV9-GFP组、Sal B+AAV9-GFP-Cx43-siRNA组和Sal B+AAV9-GFP-Cx43-siRNA+铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)组,造模2 d后给予相应处理。4周后,HE染色和Perl blue染色分别观察心肌形态和铁累积;免疫荧光染色观察Cx43在心肌中分布;透射电镜观察心肌超微结构;试剂盒检测血清肌酸激酶MB(CK-MB)、心肌钙蛋白I(cTnI)和乳酸脱氢酶（LDH）水平,以及心肌丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）和铁含量;Western blot检测心肌p-Cx43和Cx43蛋白水平。结果：相较于sham组,MI组心肌纤维出现坏死、断裂,排列紊乱,心肌线粒体出现损伤,Cx43蛋白在心肌细胞侧侧连接处弥散分布,血清CK-MB、cTnI和LDH水平,以及心肌MDA、ROS、铁离子含...     

自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病发生中的表达及意义

目的 观察自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病模型中的表达及意义,并探讨其机制;从细胞自噬角度研究硅沉着病形成的分
子机制。方法 将90只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组,每组30只。采用非暴露式气管插管一次
性灌注二氧化硅粉尘混悬液法建立大鼠硅沉着病模型,并给予3-MA干预,各组分别于造模后第1、3、7、14及28 天分批处死6只大鼠。留取肺组织,
HE和Masson染色观察肺组织形态变化; 免疫组织化学染色检测LC-3、Beclin-1的表达及分布;免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果
与对照组相比,模型组有显著的肺泡炎改变、明显的矽结节形成及大量胶原沉积。LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均上调（P＜0.05）,并随
时间呈现动态变化趋势,SiO2 注入后1 d表达有升高趋势,14d达高峰（P＜0.05）,28 d回落,但仍高于基础表达。与模型组相比,3-MA组肺泡
炎减轻,矽结节减小,胶原沉积减少,LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均下调（P＜0.05）,各时间点的变化趋势无显著性改变。结论 细胞自
噬参与大鼠硅沉着病的病理进程,并在硅沉着病的发生与发展过程中起重要作用。