虎杖苷与顺铂联合增强卵巢癌SKOV3细胞的凋亡作用

目的考察虎杖苷和顺铂联合给药对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的作用机制。方法 SKOV3细胞分为虎杖苷和顺铂分别及联合给药组,采用MTT法检测对细胞增殖抑制的影响;流式细胞仪检测细胞的凋亡率,并观察细胞晚期凋亡(48h)的形态学变化;Western blot检测凋亡蛋白和线粒体通路相关蛋白的表达水平。结果 MTT结果显示SKOV3细胞在虎杖苷和顺铂联合给药后明显降低细胞存活率,且呈时间和浓度依赖性;单克隆形成实验结果显示虎杖苷与顺铂联合给药抑制细胞增殖的能力增强;AnnexinV-FITC单染检测细胞凋亡率显示,与顺铂给药组相比,联合给药组细胞凋亡率增加11.5%;Western blot检测结果表明联合给药组与顺铂单药给药组相比,凋亡蛋白cleaved PARP、cleaved caspase-9的表达均增强;线粒体凋亡相关蛋白Bax升高,Bcl-2降低。结论虎杖苷和顺铂联用能增强顺铂对细胞增殖的抑制作用,促进细胞凋亡,初步阐明联合给药的抗癌机制是通过线粒体凋亡途径所介导。     

姜黄素联合顺铂调控PI3K/Akt信号通路对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:讨论姜黄素联合顺铂对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移及凋亡能力的作用,并分析其与PI3K/Akt通路的关系。方法:首先用不同浓度的姜黄素及顺铂单独处理细胞株,根据各浓度细胞的存活率确定35µmol/L姜黄素、4.0 mg/L顺铂疗效最好,用于后续实验。将卵巢癌耐药细胞分为空白对照组、姜黄素单独处理组(35µmol/L)、顺铂单独处理组(4.0 mg/L)、姜黄素+顺铂联合处理组(35µmol/L+4.0 mg/L),采用MTT法、Transwell小室、流式细胞术检测四组细胞的生长抑制率、迁移细胞数及细胞凋亡率;Western blot检测四组细胞中p-PI3K及p-Akt蛋白表达水平;PCR检测四组细胞中PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,其余三组细胞生长抑制率及细胞凋亡率均显著升高,迁移细胞数显著减少(P<0.05),且姜黄素+顺铂联合组细胞生长抑制率及细胞凋亡率显著高于姜黄素组、顺铂组,迁移细胞数则低于姜黄素组、顺铂组(P<0.05);与空白对照组比较,姜黄素处理组及姜黄素+顺铂联合组细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低、Bax mRNA显著升高(P<0.05),且联合组细胞表达量明显低于姜黄素处理组(P<0.05),而顺铂单独处理组细胞中PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素联合顺铂能够提高卵巢癌耐药细胞的敏感性,抑制细胞的增殖及迁移,同时诱导细胞凋亡,这一过程可能通过下调PI3K/Akt通路的表达实现。     

p38 MAPK在顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨p38 MAPK在顺铂诱导大鼠近端肾小管上皮细胞(RPTC)凋亡中的作用。方法:首先采用Western blot实验检测0、5、10和20μmol/L顺铂处理24 h对细胞凋亡的影响,确定最佳处理剂量;而后采用20μmol/L顺铂联合50 mg/L p38 MAPK抑制剂SB203580刺激RPTC,实验分为对照组、顺铂组及顺铂+SB203580(加入SB203580处理RPTC 1 h后再给予顺铂处理24 h)。采用相差荧光显微镜观察和流式细胞术分析顺铂处理后RPTC的凋亡情况;采用Ac-DEVD-AFC试剂盒检测RPTC裂解液中的caspase活性;Western blot实验检测p38、磷酸化p38、cleaved PARP和cleaved caspase-3等的蛋白水平;pH计检测顺铂处理后RPTC外环境pH值改变。结果:20μmol/L顺铂处理RPTC 24 h,可以明显诱导细胞凋亡;顺铂处理15 min后RPTC中p38 MAPK开始磷酸化并达到高峰。顺铂处理后12.08%的RPTC呈凋亡形态,具有增强的caspase活性,并且cleaved PARP和cleaved caspase-3水平明显升高(P0.05);p38 MAPK抑制剂SB203580可抑制p38的磷酸化,降低RPTC的凋亡率和caspase活性,并减少cleaved PARP和cleaved caspase-3的蛋白水平。同时,SB203580可逆转顺铂诱导的RPTC培养基pH值的改变。结论:p38 MAPK的磷酸化在顺铂诱导的RPTC凋亡中发挥作用。顺铂诱导RPTC凋亡后,可改变细胞外酸性环境,并可被p38 MAPK抑制剂SB203580所抑制。     

异氟醚对膀胱癌 5637 细胞恶性生物学行为及化疗敏感性的影响

目的 探究异氟醚对膀胱癌 5637 细胞恶性生物学行为及化疗敏感性的影响。 方法 单独或联合 给予异氟醚及顺铂处理膀胱癌 5637 细胞, 将细胞随机分为 4 组: 对照组、 异氟醚组、 顺铂组和异氟醚 + 顺 铂联合处理组。 BrdU 染色检测 BrdU 阳性细胞数; 流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布; Transwell 检测侵袭细胞数; 划痕愈合实验检测划痕愈合率; Western 印迹检测 Ki67、 PCNA、 Bax、 Bcl-2、 cleaved caspase-3 和 caspase-3 蛋白表达; 结果 与顺铂组相比较, 异氟醚 + 顺铂联合处理组 BrdU 阳性细胞数和 Ki67、 PCNA 蛋白表达降低, G0 / G1期比率和 S 期细胞数降低, G2 / M 期比率升高, 细胞凋亡率和 Bax / Bcl-2、 cleaved caspase-3 / caspase-3 比值升高, 侵袭细胞数、 划痕愈合率降低, 均有显著性差异 (P< 0. 05)。 结论 异氟醚可通过抑制细胞增殖、 侵袭、 迁移, 诱导细胞凋亡, 提高 5637 细胞对顺铂的敏感性。     

紫草素对卵巢癌细胞SKOV3/DDP顺铂耐药的逆转作用

目的:探讨紫草素是否逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP的顺铂耐药效应及其作用机制。方法:采用CCK-8法确定紫草素和顺铂的最佳作用条件,流式细胞术检测细胞的周期分布及凋亡率;Western blot检测周期及凋亡相关调控因子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、P18、p-Rb、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:CCK-8实验结果显示,相较于单用顺铂,联合使用紫草素对顺铂耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP的生长抑制作用较为显著。此外,联用紫草素和顺铂可显著抑制细胞周期G_1/S转化,并增加细胞早期凋亡率。Western blot结果显示,相较于顺铂处理组,紫草素和顺铂联用组的cyclin D1、CDK2、p-Rb及Bcl-2的蛋白水平显著降低,而P18、Bax及cleaved caspase-3的蛋白表达显著增加。结论:紫草素可逆转卵巢癌SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药效应,其作用机制可能与影响细胞周期及凋亡相关因子的表达,进而抑制细胞活力促进细胞凋亡相关。     

Smac基因过表达增强顺铂对食管癌Eca109细胞化疗的敏感性

目的:探讨Smac基因过表达对食管癌细胞株Eca109顺铂化疗敏感性的影响。方法:脂质体介导将带有GFP的pcDNA3.1-Smac重组体及带有GFP的pcDNA3.1空白载体转染入食管癌细胞株Eca-109,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot检测转染前后细胞内Smac蛋白表达水平的变化。顺铂处理组(1、5、10 mg/L)和顺铂未处理组分别处理转染前后的食管癌细胞株Eca109,Annexin V/PI双染法经流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:分别建立稳定表达Smac基因+GFP基因,新霉素抗性基因(neo)+GFP基因的食管癌亚克隆细胞株Eca109/Smac,Eca109/neo。Eca109/Smac的Smac蛋白表达水平明显高于Eca109/neo和Eca109(P<0.05)。在顺铂未处理组,Eca109/Smac、Eca109/neo和Eca109的细胞凋亡率组间无明显统计学差异。在顺铂处理组,顺铂浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L,Eca109/Smac的细胞凋亡率明显高于Eca109/neo和Eca109,组间具有统计学差异(P<0.05),且随着顺铂浓度的升高,Eca109/Smac细胞凋亡率随之升高(P<0.05)。Eca109/neo和Eca109组间无明显统计学差异。结论:Smac基因转染未经顺铂处理的Eca109细胞株中不诱发凋亡,在顺铂处理组其过表达能增强Eca109对顺铂的化疗敏感性。     

西红花苷通过LKB1/AMPK/mTOR通路抑制食管癌细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨西红花苷对食管癌细胞细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其可能机制。方法 以人食管癌Eca-109细胞为受试对象，采用CCK-8法检测不同浓度西红花苷对细胞的抑制作用，筛选最佳浓度和干预时间。将食管癌Eca-109细胞分为对照组、西红花低、中、高剂量组，分别按照0μmol/L、17μmol/L、34μmol/L、68μmol/L给予西红花苷干预，采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力；Western blot及RT-qPCR法分别检测各组细胞LKB1、AMPK、m TOR mRNA和蛋白表达水平。结果 Transwell侵袭和细胞凋亡实验结果表明，与空白对照组比较，低、中、高剂量西红花苷组细胞穿过基膜的数量减少，凋亡率增高，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;Western blot和RT-qPCR结果显示，与空白对照组比较，低、中、高剂量西红花苷组细胞LKB1、AMPK m RNA和蛋白表达水平升高，mTOR mRNA和蛋白表达水平降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 西红花苷对食管癌可能有抑制作用，其机制可能与调控...     

黄芪总苷通过介导mTOR信号通路抑制H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞自噬和凋亡

目的:探讨黄芪总苷(astragalosides)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠心肌细胞H9c2自噬和凋亡作用的影响及作用机制。方法:建立大鼠心肌细胞H_2O_2氧化应激损伤模型,并用20 mg/L的黄芪总苷和0.1 mg/L的雷帕霉素分别处理对应组细胞。采用流式细胞技术检测细胞凋亡率;采用吖啶橙染色观察细胞自噬情况;采用Western blot检测p-mTOR蛋白、P70S6K蛋白、自噬蛋白(LC3)和凋亡蛋白(cleaved caspase-3和caspase-3)的表达。结果:与模型组和雷帕霉素组比较,黄芪总苷组的细胞凋亡率显著降低(P0.05);黄芪总苷组的大鼠心肌H9c2细胞形态完整,细胞核染色为黄绿色荧光,染色质分布均匀,细胞形状规则;细胞中p-mTOR蛋白和P70S6K蛋白的表达显著升高(P0.05),LC3-II/LC-3-I和cleaved caspase-3相对表达量显著降低(P0.05)。结论:黄芪总苷可通过mTOR信号通路提高心肌细胞成活率,抑制细胞凋亡和自噬,减轻H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤。     

柚皮苷对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞的逆转作用

目的:探究柚皮苷(naringin,NRG)对人肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测柚皮苷和顺铂对A549/DDP细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法对两药的联合效应进行评价;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)、p-Akt、CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4, CXCR4)、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:顺铂耐药株A549/DDP细胞中P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4蛋白的水平显著高于非顺铂耐药株A549细胞(P0.05);柚皮苷和顺铂可剂量依赖性地抑制A549/DDP细胞活力(P0.05),IC_(50)分别为36.92μmol/L和129.77μmol/L;当抑制率超过15%时,二者联用呈协同效应;柚皮苷与顺铂可诱导A549/DDP细胞凋亡(P0.05),并且两药联用组的细胞凋亡率高于顺铂组(P0.05);柚皮苷和顺铂可上调Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05),下调Bcl-2的蛋白水平(P0.05),同时柚皮苷还可剂量依赖性地下调P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4的蛋白水平(P0.05)。结论:柚皮苷可增强人肺癌A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。这可能与柚皮苷上调Bax的蛋白水平,下调Bcl-2、P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4的蛋白水平有关。     

虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系Eca109凋亡

目的研究虫草素与顺铂联合用药对食管癌细胞Eca109凋亡的影响及其作用机制。方法将食管癌细胞Eca109分为对照组、不同浓度虫草素处理组、不同浓度顺铂处理组和虫草素(70μg/m L)与顺铂(0.8μg/m L)联合处理组。MTS法检测Eca109细胞增殖;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测Eca109细胞凋亡;Western blot法检测细胞核内NF-κB P65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平;ELISA法检测细胞核内NF-κB P65与DNA的结合活性。结果虫草素与顺铂联合应用使顺铂对Eca109细胞的抑制率由29.30%增加至70.41%(P0.05),增强了顺铂对Eca109的敏感性;与顺铂单独用药相比,联合用药能够显著增加顺铂诱导的细胞凋亡(P0.05);与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κB P65的活性,而虫草素却能抑制NF-κB P65的活性,联合用药后NF-κB P65的活性下调;与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达则显著增高(P0.05)。结论虫草素可能通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子Bcl-2和Bax的表达,增强顺铂对Eca109的凋亡诱导效应。     

奥沙利铂联合柔红霉素诱导结肠癌细胞系HT-29凋亡

目的研究奥沙利铂联合柔红霉素对结肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法分别用不同浓度的奥沙利铂和柔红霉素处理结肠癌细胞HT-29,MTT法检测细胞增殖并计算半数抑制浓度。分别用半数抑制浓度的奥沙利铂、柔红霉素及二者联合处理HT-29细胞,MTT法测定细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中活化的caspase-3(cleaved caspase-3)、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果不同浓度的奥沙利铂和柔红霉素均可以抑制HT-29细胞增殖(P<0. 05),其半数抑制浓度为:柔红霉素约0. 23μmol/L,奥沙利铂约40 mg/L。柔红霉素、奥沙利铂和奥沙利铂联合柔红霉素处理后的HT-29细胞增殖能力、克隆形成能力降低;细胞凋亡率升高;细胞中cleaved caspase-3蛋白表达升高;细胞中p-Akt蛋白表达降低;PTEN蛋白表达升高。奥沙利铂联合柔红霉素作用高于单纯柔红霉素或奥沙利铂处理(P<0. 05)。结论奥沙利铂联合柔红霉素能够诱导结肠癌细胞HT-29凋亡,其作用机制可能与PTEN/Akt信号调控有关。     

Sitravatinib联合Niraparib对黏膜黑色素瘤细胞系增殖、凋亡和自噬的影响及其机制

目的 研究抗血管生成药物Sitravatinib联合多聚(腺苷二磷酸[ADP]-核糖)聚合酶抑制剂(PARPi)Niraparib对黏膜黑色素瘤细胞的作用及其可能的机制。方法 CCK8法检测Sitravatinib和Niraparib在黏膜黑色素瘤(MM)细胞系的半数抑制浓度(IC₅₀);CompuSyn模型计算不同浓度联合条件下的联合指数(CI)。细胞集落形成实验测定细胞增殖;流式细胞测量术测定细胞凋亡;Western blot检测蛋白质表达;RT-qPCR检测mRNA表达。结果 在人阴道黏膜来源黑色素瘤细胞系(HMVⅡ)和人外阴黏膜黑色素瘤腹股沟淋巴结转移病灶来源细胞系(GAK)中Sitravatinib(2μmol/L)联合Niraparib(20μmol/L)条件下CI值分别为0.19和0.15;与对照组及单药组相比,联合组细胞增殖能力显著下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001);细胞凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.001),凋亡标志物蛋白质和mRNA表达均显著升高(P<0.001);细胞自噬标志物蛋白质...     

右美托咪定减轻缺氧诱导的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y损伤

目的 研究右美托咪定(DEX)在缺氧环境下对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y的保护作用及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为对照组、缺氧组(终浓度为1.2 mmol/L CoCl₂处理24 h)和DEX干预组(终浓度为1.2 mmol/L CoCl₂和10μmol/L DEX处理24 h)。显微镜观察细胞形态;MTT比色法、TUNEL染色法和annexin V-FITC/PI染色法检测细胞活性和细胞凋亡;Western blot检测cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、p75^NTR和p-NF-κB蛋白表达。结果 与对照组比较,缺氧组细胞的胞体变小(P<0.01)、细胞活性降低(P<0.01)、凋亡增加(P<0.01),细胞中cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、p75^NTR和p-NF-κB蛋白表达水平均明显增加(P<0.01)。DEX干预能显著缓解缺氧组的上述变化(P<0.01)。结论 DEX可能通...     

TRAIL与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡时Fas和cFLIP表达的改变及其意义

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其基因Ad／GT-TRAIL和顺铂(DDP)联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用,并分析细胞表面Fas蛋白和细胞内cFLIPmRNA表达对凋亡的影响。方法:将TRAIL(100μg/L)、Ad／GT-TRAIL和顺铂作用于培养的人RD横纹肌肉瘤细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪检测细胞凋亡和Fas蛋白表达、RT-PCR检测cFLIPmRNA表达,观察和分析TRAIL及其基因Ad／GT-TRAIL对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂协同作用的机制。结果:Ad／GT-TRAIL和100μg/LTRAIL对横纹肌肉瘤细胞的生长抑制率分别为52.5%和43.5%,凋亡诱导率为12.95%和10.26%,联合应用顺铂,生长抑制率和凋亡诱导率均显著高于单独应用(P<0.05),FCM分析显示联合应用提高了Fas蛋白的表达,RT-PCR显示cFLIPmRNA表达下降,与联合应用组细胞凋亡率增加相一致。结论:TRAIL和Ad／GT-TRAIL能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长,联合应用顺铂可显著提高疗效。     

双氢青蒿素通过调控细胞自噬性死亡增强宫颈癌细胞的化疗敏感性

目的:探究双氢青蒿素(DHA)对宫颈癌HeLa细胞化疗敏感性的影响及作用机制。方法:用5、10、20μmol/L的DHA处理细胞,CCK8检测细胞存活率;顺铂联合不同浓度DHA处理细胞并检测细胞活性;将细胞分为Control、DHA(20μmol/L)、Cisplatin(10μg/ml)和DHA+Cisplatin组,分别用溶媒、DHA(20μmol/L)、顺铂(10 mg/L)和DHA联合顺铂处理细胞24 h,CCK8检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,免疫荧光检测LC3表达,免疫印迹检测Ki67、Cleaved Caspase-3、Beclin1、LC3、P62、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、p-mTOR、p-Ulk1和Ulk1的表达。结果:DHA处理细胞4 d后,细胞增殖倍数明显降低;DHA (10,20μmol/L)联合顺铂处理细胞后,细胞活性显著降低,并具有量效关系;与Control组比较,DHA(20μmol/L)组Ki67表达水平明显降低,细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3的表达水平明显升高;与Cisplatin组比较,DHA+Cisplatin组Ki67表达水平明显降低,凋亡率和Cleaved Caspase-3的表达水平显著降低;同时,DHA(20μmol/L)组自噬相关蛋白Beclin1的表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及LC3在细胞质的表达率均显著低于Control组,P62的表达水平明显升高; DHA+Cisplatin组细胞Beclin1的表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及LC3在细胞质的表达率与Cisplatin组比较均显著降低,P62的表达水平升高;此外,DHA还能明显升高降低He La细胞p-mTOR/m TOR和p-Ulk1/Ulk1的比值。DHA能显著减弱顺铂下调p-mTOR/m TOR和p-Ulk1/Ulk1的作用。结论:DHA能通过激活m TOR/Ulk1信号通路抑制自噬增强宫颈癌He La细胞的化疗敏感性。     

Fas过表达逆转胃癌细胞顺铂耐药

目的:探究Fas在胃癌细胞顺铂耐药中的作用及可能的作用机制。方法:Western blot及RT-q PCR检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中Fas的表达情况。构建Fas过表达腺病毒载体,上调胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中Fas的表达,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Western blot法检测Fas、P38/p-P38、JNK/p-JNK、cleaved caspase-8/caspase-8和cleaved caspase-3/caspase-3蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中Fas的mRNA及蛋白表达水平均明显低于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中,Fas的蛋白表达水平随着顺铂的浓度增加不断降低。过表达Fas可抑制胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的细胞活力,并诱导其凋亡;同时上调p-P38、p-JNK、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:胃癌顺铂耐药细胞中过表达Fas可恢复细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡并抑制细胞生长,其机制可能与JNK和P38MAPK信号通路的激活有关。     

赖氨大黄酸与顺铂联合对人肺癌A549细胞系增殖和凋亡的影响简

 目的 研究赖氨大黄酸（RHL）、顺铂和两者联合对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制,为RHL联合顺铂抗肺癌的临床实验研究提供理论依据。方法 肺癌细胞株A549随机分为对照组、顺铂组、RHL组和顺铂联合RHL组,用MTT法和流式细胞术分别检测细胞48 h增殖和凋亡。Western blot 法检测细胞48h后凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达。结果 细胞培养48 h后,顺铂组和RHL组的细胞增殖受到一定的抑制并有细胞凋亡发生,但两药联合后的增殖抑制作用和凋亡诱导作用显著高于单用顺铂和RHL组(P<0.05)。顺铂和RHL均能上调caspase-3、caspase-7和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的切割片断蛋白表达,但两药联合后caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达进一步增高(P<0.05),并显著下调Bcl-2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白的表达水平,同时RHL还能降低顺铂上调的ERK蛋白磷酸化。结论 RHL能够通过抑制顺铂对ERK的激活、上调caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达,增强顺铂对肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。     

脂质体槲皮素抑制热休克后 人肝癌HEP G-2和肾癌ORSC-2细胞系HSP70表达

目的比较不同浓度脂质体槲皮素(LQ)对人肝癌HEPG-2细胞和肾癌ORSC-2细胞热疗后热休克蛋白70的表达变化及其作用机制。方法用旋转蒸发法制备LQ。将细胞分为37℃培养组、42℃培养组和槲皮素干预组。MTT法检测细胞抑制率,优选出合适浓度。用10、15和30 mg/L的LQ处理上述两种肿瘤细胞,于热休克后2、4、6、8和10 h取出细胞。流式细胞计量术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测HSP70mRNA的表达,Western blot检测细胞HSP70的表达水平。结果 42℃热疗后人肝癌HEPG-2细胞和肾癌ORSC-2细胞的HSP70在基因和蛋白水平上均明显升高(P0.05)。随着脂质体槲皮素浓度的增加,HSP70表达逐渐降低。结论脂质体槲皮素能通过抑制热休克状态肿瘤细胞HSP70的表达诱导肝癌和肾癌肿瘤细胞凋亡。     

miR-146a通过靶向CCNJ调控鼻咽癌细胞HNE-1/DDP对顺铂敏感性的影响

目的　探讨miR-146a对鼻咽癌耐顺铂细胞HNE-1/DDP顺铂敏感性的作用及可能机制。 方法　实验分空白组、阴性对照组及mimics-miR-146a组。MTT检测HNE-1/DDP细胞在不同方法处理后的增殖抑制作用;Annexin V-FITC／PI双染法检测细胞凋亡情况;Western blot检测周期蛋白CCNJ、MRP1、P-gp的相对表达水平;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测CCNJ mRNA的相对表达水平。 结果　与其他两组相比,mimics-miR-146a组存活率降低,凋亡率升高,MRP1、P-gp、CCNJ蛋白表达量降低,CCNJ mRNA的相对表达量降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论　miR-146a可增加HNE-1/DDP对DDP的敏感性,机制可能是miR-146a抑制CCNJ的表达而调控下游蛋白MRP1、P-gp,降低细胞耐药性。