长链非编码RNA TTTY15在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞活力和侵袭的影响

目的:观察长链非编码RNA TTTY15在骨肉瘤组织及细胞株中的表达,并探讨其对骨肉瘤细胞活力和侵袭的影响。方法:应用qPCR法检测11例骨肉瘤组织及其瘤旁组织中TTTY15的水平,同时检测TTTY15在骨肉瘤细胞株(143B、Saos2、MG-63、U2OS和HOS)和人成骨细胞株hFOB1.19中的表达。在表达量最高的细胞株(MG-63)中通过转染小干扰RNA敲减TTTY15的表达,CCK-8法检测TTTY15低表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,Transwell检测其对细胞侵袭能力的影响,qPCR检测miR-216b-5p和FOXM1 mRNA的表达,Western blot法检测相关蛋白的变化。结果 :与瘤旁正常组织相比,TTTY15在骨肉瘤组织中表达升高(P0.01);与人成骨细胞相比,TTTY15在骨肉瘤细胞株中表达升高(P0.05),其中在MG-63细胞中表达水平最高(P0.01)。敲减TTTY15在MG-63细胞的表达后,细胞活力降低(P0.05),细胞周期被抑制在G_0/G_1期(P0.01),细胞的侵袭能力降低(P0.01),miR-216b-5p mRNA表达水平升高(P0.01),FOXM1的mRNA表达降低(P0.01),同时FOXM1、CDK4、cyclin D1、MMP-2和N-cadherin的蛋白表达降低,而E-cadherin的蛋白表达升高(P0.05)。结论:TTTY15在骨肉瘤组织和细胞株中表达增高,敲减TTTY15的表达可抑制骨肉瘤细胞的活力和侵袭能力,其机制可能与TTTY15低表达导致miR-216b-5p的表达升高,引起FOXM1基因表达下调有关。     

抑制lncRNA LUCAT1表达通过靶向调控miR-204-3p减轻高糖诱导的心肌H9c2细胞损伤

目的:探讨敲减长链非编码RNA肺癌相关转录本1(LUCAT1)表达减轻高糖(HG)诱导的心肌H9c2细胞损伤是否与其靶向调控微小RNA-204-3p(miR-204-3p)表达有关。方法:将体外培养的大鼠心肌H9c2细胞分为对照组、HG组、HG+siRNA-NC组、HG+siRNA-LUCAT1组、HG+siRNA-LUCAT1+inhibitor-NC组和HG+siRNA-LUCAT1+miR-204-3p inhibitor组,采用生物信息学软件预测和双萤光素酶报告基因实验验证LUCAT1和miR-204-3p的靶向关系,RT-qPCR法检测细胞中LUCAT1和miR-204-3p的表达水平,CCK-8实验检测细胞活力,乳酸脱氨酶(LDH)试剂盒检测LDH漏出量,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平,比色法检测超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:生物信息学软件预测到LUCAT1和miR-204-3p之间存在互补的结合位点,双萤光素酶报告基因实验证实LUCAT1可与miR-...     

circ＿0023404通过靶向miR-153调控宫颈癌细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及EMT

目的 探讨环状RNA 0023404(circ＿0023404)是否靶向miR-153调控宫颈癌细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及上皮间充质转化（EMT）。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析circ＿0023404和miR-153在宫颈癌组织、癌旁组织中表达水平。CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合、Transwell实验分析circ＿0023404和miR-153对宫颈癌SW756细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。双萤光素酶报告基因实验、RT-qPCR用于确定circ＿0023404和miR-153相互作用。蛋白质印迹法（Western blot）分析Ki-67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)以及Bcl相关x蛋白（Bax）表达。结果 宫颈癌组织中circ＿0023404表达高于癌旁组织，miR-153表达低于癌旁组织（P<0.05）。敲低circ＿0023404表达或上调miR-153表达可显著降低SW756细胞活力、迁移和侵袭能力，增加细胞凋亡率，上调...     

miR-206过表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖和迁移的影响

目的:明确微小RNA-206(microRNA-206,miR-206)对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:采用RT-qPCR技术检测各组细胞miR-206的表达水平;CCK-8实验和台盼蓝染色活细胞计数检测K1细胞的增殖能力;Transwell小室迁移实验检测K1细胞的迁移能力;利用生物信息学软件预测miR-206的靶基因;采用双萤光素酶报告基因检测法验证miR-206和c-Met的靶向关系;Western blot检测c-Met/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果:K1细胞瞬时转染miR-206 mimic后,RT-qPCR检测实验组K1细胞中miR-206的相对表达量较空白组和阴性对照组明显升高(P<0.01);CCK-8及台盼蓝拒染实验表明,转染miR-206mimic的实验组中K1细胞的增殖较空白组和阴性对照组明显受到抑制(均P<0.01);Transwell实验发现,实验组K1细胞的迁移数低于空白组和阴性对照组(P<0.01);双萤光素酶报告基因检测表明,miR-206可负调控靶基因c-Met的表达;West...     

下调LRH1 对骨肉瘤细胞生长和Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：探讨下调肝受体类似物1(LRH1)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法：采用RT-qPCR和Western blot分别检测人骨肉瘤细胞U2OS和成骨细胞hFOB1.19中LRH1 mRNA和蛋白表达差异;将体外培养的U2OS细胞分为对照组（Ctrl）、阴性对照（NC）-siRNA组和LRH1-siRNA组,RT-qPCR检测各组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达,MTT、流式细胞术、Transwell小室和划痕实验分别检测各组U2OS细胞增殖活力、细胞周期分布情况、穿膜细胞数和划痕愈合率,Western blot检测各组U2OS细胞中LRH1和Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期素D1(CyclinD1)、c-Myc、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。结果：与hFOB1.19细胞相比,U2OS细胞中LRH1 mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）;与NC-siRNA组相比,LRH1-siRNA组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达、细胞增殖活力、S期细胞占比、穿膜细胞数、划痕愈合率和LRH1、β-...     

miR-125a-5p靶向LIMK1逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织及其细胞株A549和A549/DDP中miR-125a-5p和LIM激酶1(LIMK1)的表达;在A549/DDP细胞中上调或下调miR-125a-5p或LIMK1表达,分别采用MTT法、流式细胞术和Western blot检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达;TargetScan在线预测、萤光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和LIMK1的靶向关系;共表达miR-125a-5p和LIMK1,检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达。结果:在非小细胞肺癌组织及其细胞株中,miR-125a-5p表达下调,LIMK1表达上调(P0.05);萤光素酶报告基因实验表明miR-125a-5p可负向调控LIMK1表达。过表达miR-125a-5p或敲减LIMK1表达使A549/DDP细胞的活力下降,细胞凋亡率增加,顺铂的IC_(50)减小,耐药相关蛋白表达下调(P0.05)。过表达LIMK1则使miR-125a-5p对A549/DDP细胞活力和耐药相关蛋白表达的抑制作用减弱。结论:miR-125a-5p能通过抑制LIMK1基因表达,下调耐药相关蛋白表达,从而逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

miR-499通过靶向TGF-α抑制人骨肉瘤细胞系Saos2迁移和促凋亡

目的 探索miR-499靶向TGF-αmRNA蛋白水平调控人骨肉瘤细胞系Saos2细胞迁移和凋亡参与骨肉瘤的发病机制。方法 RT-qPCR检测miR-499和TGF-α在骨肉瘤组织中的表达差异;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-499和TGF-α靶向关系;Transwell小室法和TUNEL凋亡实验检测Saos2细胞迁移和凋亡;构建骨肉瘤裸鼠移植瘤模型,检测miR-499/TGF-α轴在体内实验中的调控机制。结果 骨肉瘤组织,miR-499表达降低(P<0.01),而TGF-αmRNA高表达(P<0.01)。miR-499靶向负调控TGF-αmRNA蛋白表达(P<0.01)。转染miR-499模拟物能抑制Saos2细胞迁移和促进凋亡(P<0.01),而TGF-α则促进细胞迁移和抑制凋亡(P<0.01),同时miR-499能抑制TGF-α的促癌效果。结论 miR-499抑制TGF-αmRNA蛋白水平从而抑制骨肉瘤细胞的生物学功能,提示miR-499可能具有抑制骨肉瘤发展的作用。     

LncRNA DANCR靶向miR-656-3p调控急性髓系白血病细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭北大核心CSCD

目的:探讨LncRNA DANCR对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:采集53例AML患者及53例健康体检者外周血,体外培养AML细胞系(U-937、HL-60和NB4)及HS-5细胞,RT-qPCR法检测外周血及细胞系中LncRNA DANCR和miR-656-3p表达。选择LncRNA DANCR和miR-656-3p表达较HS-5细胞差异最显著的U-937细胞为研究对象,转染si-LncRNA DANCR(si-LncRNA DANCR组)、si-NC(si-NC组)、miR-656-3p mimcs(miR-656-3p组)、miR-NC(miR-NC组)、共转染si-LncRNA DANCR与miR-656-3p抑制剂(si-LncRNA DANCR+anti-miR-656-3p组)、siLncRNA DANCR与miR-NC(si-LncRNA DANCR+anti-miR-NC组)。CCK-8法、流式细胞仪、Transwell及Western blot分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中CyclinD1、Cleaved-caspase-3、MMP2和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA DANCR与miR-656-3p调控关系。结果:与健康对照组比较,AML患者外周血和细胞系中LncRNA DANCR表达升高(P<0.05),而miR-656-3p表达降低(P<0.05)。敲减LncRNA DANCR或过表达miR-656-3p可降低U-937细胞A值、迁移和侵袭数量及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达(P<0.05),提高细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达(P<0.05)。LncRNA DANCR靶向负调控miR-656-3p,且敲减miR-656-3p逆转敲减LncRNA DANCR对U-937细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论:LncRNA DANCR在AML患者外周血及细胞系中呈高表达,敲减其表达可能通过靶向上调miR-656-3p抑制AML细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,可将此LncRNA DANCR作为AML治疗的分子靶点。     

miR-17-5p通过靶向调控PTEN表达抑制乳腺癌的增殖、侵袭及迁移

目的 探讨miR-17-5p在乳腺癌中的表达和对乳腺癌细胞的调控作用及其作用机制。方法 采用RT-qPCR和Western blot方法检测乳腺癌组织和细胞中miR-17-5p和PTEN的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移。Western blot检测PTEN蛋白表达变化;采用荧光素酶活性检测miR-17-5p与PTEN的相互作用。结果 与对照组相比,乳腺癌组织和细胞中miR-17-5p表达升高,同时PTEN水平降低。体外实验发现,miR-17-5p的敲减能够抑制乳腺癌细胞增殖和转移。荧光素酶报告基因实验发现PTEN是miR-17-5p的靶点。miR-17-5p下调促进乳腺癌细胞PTEN蛋白的表达。结论 miR-17-5p与乳腺癌患者预后相关,同时miR-17-5p下调能显著抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移。     

沉默长链非编码RNA CCAT2对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨靶向沉默长链非编码RNA肠癌相关转录子2(lncRNA CCAT2)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测骨肉瘤MG63细胞与人成骨hFOB1.19细胞中lncRNA CCAT2表达水平;转染小干扰RNA沉默MG63细胞中lncRNA CCAT2的表达,qPCR方法验证沉默效率。沉默MG63细胞中lncRNA CCAT2表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率,Western blot方法检测MG63细胞p53及Bcl-2蛋白的表达变化。结果lncRNA CCAT2在骨肉瘤MG63细胞中的表达显著高于人成骨hFOB1.19细胞(P<0.01);转染小干扰RNA能够显著降低MG63细胞中lncRNA CCAT2的表达水平(P<0.01)。沉默lncRNA CCAT2后,MG63细胞的增殖能力显著降低,凋亡率显著上升,Bcl-2蛋白表达显著降低p53蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论靶向沉默lncRNA CCAT2能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖并诱导凋亡。     

miR-24-3p靶向KLF6基因调控IL-6/STAT3信号通路影响食管癌细胞的活力和凋亡

目的:探讨微小RNA-24-3p(miR-24-3p)对食管癌细胞活力和凋亡的影响及机制。方法:以人正常食管上皮细胞HEEC为对照,采用RT-qPCR检测食管癌细胞TE11、Eca109和EC9706中miR-24-3p和KLF6 mRNA的表达,Western blot检测KLF6蛋白的表达。用anti-miR-24-3p和KLF6 siRNA转染EC9706细胞,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测检测细胞中与增殖、凋亡相关的蛋白以及IL-6/STAT3信号通路相关蛋白的表达,ELISA法检测IL-6的表达。双萤光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与KLF6靶向调控的关系。结果:食管癌癌细胞TE11、Eca109和EC9706中miR-24-3p表达上调(P<0.05),KLF6的mRNA和蛋白表达下调(P<0.05)。敲减EC9706细胞miR-24-3p表达可抑制其细胞活力,诱导其凋亡,并抑制细胞CDK4、cyclin D1、CDC25A、p-STAT3、IL-6及Bcl-2的表达,促进caspase-3和Bax的表达。结论...     

miR-137通过TWIST1调控乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移及凋亡

目的:探讨微小RNA-137(miR-137)对乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响和分子机制。方法:在乳腺癌MDA-MB-231细胞中转染miR-137模拟物(miR-137 mimics),RT-qPCR检测miR-137表达量,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western blot检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、cleaved caspase-3(C-caspase-3)和Bax的蛋白水平。生物信息学软件预测TWIST1可能是miR-137的靶基因后用萤光素酶报告基因鉴定。Western blot检测miR-137 mimics对TWIST1蛋白表达影响。在乳腺癌细胞中共转染TWIST1过表达载体和miR-137 mimics,测定细胞凋亡、侵袭、迁移及MMP-9、C-caspase-3、Bax蛋白水平的变化。结果:转染miR-137 mimics后的乳腺癌细胞中miR-137水平升高,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力降低,C-caspase-3和Bax的蛋白水平增高,MMP-9蛋白表达减少(P0.05)。萤光素酶报告载体鉴定显示miR-137靶向调控TWIST1,并且miR-137 mimics能够抑制乳腺癌细胞中TWIST1表达。与共转染阴性对照载体和miR-137 mimics的细胞比较,TWIST1过表达载体和miR-137 mimics共转染后的乳腺癌细胞TWIST1和MMP-9蛋白表达水平升高,C-caspase-3和Bax蛋白水平减少,细胞凋亡率降低,细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05)。结论:miR-137靶向TWIST1抑制乳腺癌细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

circAGFG1/miR-487a-3p轴调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的实验研究

目的 探讨circAGFG1对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响和作用机制。方法 RT-qPCR检测31例卵巢癌患者的癌组织和对应的癌旁组织中circAGFG1和miR-487a-3p表达。体外培养SKOV3细胞,分别转染circAGFG1小干扰RNA、miR-487a-3p模拟物或抑制剂后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell法对细胞迁移和侵袭进行检测,Western blot对细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9、Vimentin和E-cadherin蛋白表达进行检测。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-487a-3p调控关系。结果 circAGFG1在卵巢癌组织中表达升高,miR-487a-3p表达降低。下调circAGFG1或上调miR-487a-3p阻碍SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT。circAGFG1在SKOV3细胞中靶向负调控miR-487a-3p表达。敲减miR-487a-3p逆转下调circAGFG1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的影响。结论 下调circAGFG1可能通过靶向上调miR-...     

miR-195对肺癌A549细胞生物学行为的调控作用

目的:探讨微小RNA(mi R)-195对肺癌细胞株A549生长、凋亡及迁移等生物学行为的影响和其相关作用机制。方法:对体外培养的A549细胞转染mi R-195 mimics,分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力、周期分布及凋亡情况;Transwell实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测相关调控因子cyclin D1、CDK2、Bcl-2和p-Rb/Rb的蛋白水平;双萤光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因。结果:在A549细胞中过表达mi R-195可显著抑制细胞活力并引起细胞周期阻滞,同时细胞迁移率降低,而细胞凋亡率显著上升(P0.05);此外,细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白水平均显著下降(P0.05)。双萤光素酶报告基因分析显示MYB可能是mi R-195的靶基因,且在过表达mi R-195的A549细胞中回补MYB可部分逆转mi R-195对细胞活力、凋亡及迁移的影响。结论:mi R-195可靶向MYB抑制肺癌A549细胞的生长和迁移,并促进其凋亡。     

Linc00152靶向miR-376c-3p对宫颈癌细胞活力、凋亡和放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA Linc00152对宫颈癌细胞活力、凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞以及正常宫颈细胞Ect1/E6E7中Linc00152与微小RNA-376c-3p(miR-376c-3p)的表达水平。建立Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达的宫颈癌HeLa细胞系,MTT法、流式细胞术、集落形成实验和Western blot分别检测Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞的活力、凋亡、放射敏感性及相关蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证Linc00152与miR-376c-3p的调控关系。结果:与Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞中的Linc00152表达上调,miR-376c-3p表达下调(P<0.05)。Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达均可抑制HeLa细胞的活力,并诱导其凋亡,增强其放射敏感性,抑制cyclin D和Bcl-2蛋白表达,促进P21和Bax蛋白表达(P<0.05)。Linc0015...     

MicroRNA-126通过靶向抑制EZH2增加胃癌SGC-7901细胞的放射敏感性

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)增强胃癌细胞放射敏感性的分子生物学机制。方法:体外培养胃癌SGC-7901细胞,通过转染miR-126模拟序列上调细胞内的miR-126水平,使用RT-q PCR及Western blot检测miR-126上调后zeste基因增强子同源物2(EZH2)的mRNA及蛋白水平的变化。双萤光素酶报告基因实验确认miR-126与EZH2的靶向结合关系。在上调miR-126水平的同时,通过共转染pc DNA3.1-EZH2真核表达质粒提高细胞内的EZH2表达,CCK-8法及流式细胞术分析照射后胃癌细胞的活力及凋亡率的变化,从而评估EZH2过表达对miR-126放射增敏作用的影响。结果:上调胃癌SGC-7901细胞中的miR-126水平可以显著抑制EZH2的mRNA及蛋白水平(P0.05)。双萤光素酶报告基因实验提示miR-126与EZH2的mRNA间存在直接靶向关系。与仅上调miR-126的细胞相比,上调miR-126水平的同时过表达EZH2水平,将导致照射后SGC-7901细胞的活力增加,凋亡率减少(P0.05)。结论:对EZH2靶向抑制是miR-126增强胃癌SGC-7901细胞放射敏感性的机制之一。     

miR-96通过靶向调控KRAS蛋白抑制骨肉瘤的增殖和转移

目的 探讨miR-96在骨肉瘤组织和细胞中的表达情况及其对骨肉瘤细胞的调控作用。方法 采用RT-qPCR方法检测骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中miR-96的表达;miR-96 mimics转染骨肉瘤细胞后,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移;荧光素酶报告基因实验检测miR-96与鼠类肉瘤病毒癌基因（KRAS）的3’UTR区的靶向结合作用。Western blot检测KRAS蛋白表达变化。结果 与对照组相比,骨肉瘤组织和细胞中miR-96表达较低。体外实验中发现,miR-96的过表达能够抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭、转移。荧光素酶报告基因实验发现KRAS的3’UTR是miR-96的靶点。miR-96过表达能下调骨肉瘤细胞中KRAS蛋白的表达。结论 miR-96在骨肉瘤患者中表达下调,miR-96过表达能显著抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭转移,该作用与靶向调控KRAS蛋白相关。     

敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶靶向能量代谢逆转骨肉瘤恶性生物学的行为

目的 探讨敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH) 靶向能量代谢对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为及成骨分化的影响。 方法 Real-time PCR及Western blotting检测PHGDH在成骨细胞hFOB1.19和不同恶性程度骨肉瘤细胞TE85、MG63、143B中的表达。采用脂质体转染法将短发夹RNA（shRNA）-PHGDH重组质粒转染至143B细胞中, Real-time PCR和Western blotting检测PHGDH的表达变化；结晶紫染色法、细胞计数法、CCK-8实验检测细胞增殖；划痕实验检测细胞平行迁移能力，Transwell实验检测细胞垂直迁移及侵袭能力；Annexin V-FITC/PI双染法、DAPI染色法检测细胞凋亡；碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红S染色检测成骨分化作用,Western blotting检测成骨分化指标Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OC)的表达情况；Real-time PCR检测能量代谢相关基因葡萄糖转运蛋白1（(GLUT1）、6-磷酸果糖激酶1（PFK1）、M2型丙酮酸激酶（PKM2）、乳酸脱氢酶A（LDHA)的表达，乳酸检测试剂盒测定乳酸分泌量，三磷酸腺苷（ATP）检测试剂盒检测ATP产生量。 结果 PHGDH在143B细胞中的表达明显高于在hFOB1.19、MG63和TE85细胞中(P<0.01)；转染shRNA-PHGDH重组质粒使143B细胞中的PHGDH表达量降低(P<0.01)、增殖能力降低(P<0.01)、细胞迁移及侵袭能力减低(P<0.01)、凋亡率增高(P<0.01)、ALP染色阳性率增加(P<0.01)、茜素红染色阳性率增加(P＜0.05)、Runx2(P<0.05)和OC的表达增高(P<0.01)、能量代谢相关基因(GLUT1、PFK1、PKM2、LDHA)的表达下调(P<0.01)、乳酸减少(P<0.01)、ATP增多(P<0.05)。 结论 敲低PHGDH可通过能量代谢抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭, 促进其凋亡, 并促进其成骨分化。     

miR-194-5p通过FOXP2影响骨肉瘤SAOS-2细胞增殖和侵袭的研究

目的 探讨高表达miR-194-5p对骨肉瘤SAOS-2细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法 实时荧光定量PCR方法检测骨肉瘤SAOS-2细胞与人成骨hFOB1.19细胞中miR-194-5p的表达水平,应用瞬时转染将miR-194-5p模拟物转染至骨肉瘤SAOS-2细胞,实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-194-5p、FOXP2 mRNA的相对表达水平,Western blot检测各组细胞中FOXP2蛋白表达,Targetscan7.2和双荧光素酶实验分析FOXP2与miR-194-5p的靶向关系,采用CCK8法检测各组细胞的增殖能力,transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-194-5p在骨肉瘤SAOS-2细胞中的表达低于人成骨hFOB1.19细胞（P<0.05）;过表达miR-194-5p使SAOS-2细胞中FOXP2mRNA和蛋白表达下降;Targetscan7.2网站分析及双荧光素酶实验证实FOXP2为miR-194-5p的靶基因;过表达miR-194-5p使SAOS-2细胞增殖、侵袭能力下降。结论 过表达miR-194-5p可以抑制骨肉瘤SAOS-2细胞...