Nano-Se对镉致睾丸间质细胞凋亡保护作用的研究

目的探究纳米硒(nano-selenium,Nano-Se)通过调节Bax/Bcl-2比值对镉(cadmium,Cd)致小鼠睾丸间质细胞(TM3)凋亡的保护作用。方法试验分为5组,即对照组、镉染毒组、低剂量纳米硒组、中剂量纳米硒组和高剂量纳米硒组。其中镉染毒剂量为20μmol/L;纳米硒处理剂量分别为5、10和20μmol/L。采用CCK-8检测细胞活力,Hoechst染色检测凋亡,通过Western Blot检测Bax和Bcl-2蛋白的表达以及Bax/Bcl-2比值的变化情况。结果:与对照组相比,Cd能使TM3细胞形态改变,造成细胞损伤,导致细胞活力明显下降(P0.05),使Bax/Bcl-2比值明显升高(P0.05)诱发TM3细胞凋亡。而与Cd组相比,Nano-Se能够抑制Cd对TM3细胞的毒性作用,提高细胞活力(P0.05),降低Bax/Bcl-2比值(P0.05)和TM3细胞的凋亡水平。结论 Nano-Se对Cd致TM3细胞毒性损伤具有保护作用,可能降低TM3细胞中Bax/Bcl-2比值,从而抑制TM3细胞凋亡。[营养学报,2019,41(6):601-605]     

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的 探究活性氧(reactive oxygen species, ROS)在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl₂对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl₂染毒TM3细胞24 h, Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl<...     

CHOP通路在邻苯二甲酸单丁酯和邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯联合暴露致小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)和邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]染毒致体外培养的小鼠睾丸间质细胞(TM-3)凋亡过程中CHOP通路的作用。方法将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于0(对照)、50、100、200、400、800μmol/L的MBP和(或)MEHP溶液24、36、48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性。将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于完全培养基(对照)、MBP(400μmol/L)、MEHP(400μmol/L)和MEHP(400μmol/L)+MBP(400μmol/L)溶液24 h后,电镜下观察小鼠睾丸间质细胞内质网超微结构的变化。将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于完全培养基(对照)及200、400、800μmol/L MBP和(或)MEHP溶液24 h,流式细胞术检测细胞早期凋亡情况,免疫印迹法检测内质网应激标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CHOP的表达水平。结果与对照组相比,各浓度MBP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着MBP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈上升趋势。随着MBP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率除100μmol/L组呈上升趋势外,其余浓度组均呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异具有统计学意义(P0.05);且随着MEHP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈上升趋势。随着MEHP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率在50μmol/L组呈上升趋势,在100μmol/L组呈先下降后上升的趋势,在400μmol/L组呈下降趋势,200μmol/L和800μmol/L组抑制率呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MBP+MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异具有统计学意义(P0.05);且随着MBP+MEHP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈现上升趋势。随着MBP+MEHP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率除200、400μmol/L组呈现逐渐上升趋势外,其余浓度组均呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MBP和(MEHP)染毒组TM-3细胞的早期凋亡细胞比例均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着染毒浓度的升高,MBP、MEHP和MBP+MEHP染毒小鼠睾丸间质细胞的早期凋亡细胞比例均呈现上升趋势。在同一染毒浓度下,睾丸间质细胞早期凋亡比例依次为MBP+MEHPMBPMEHP,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,各浓度MBP和(或)MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞内GRP78和CHOP蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P0.05);且随着染毒浓度的升高,MBP和(或)MEHP染毒小鼠睾丸间质细胞内GRP78和CHOP蛋白的表达水平均呈逐渐上升的趋势。结论 MBP和(或)MEHP染毒可致内质网损伤,上调GRP78蛋白和CHOP蛋白的表达,这可能是MBP和(或)MEHP引起小鼠睾丸间质细胞凋亡的重要途径。     

N-乙酰半胱氨酸对镉致人胚肾细胞凋亡拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对氯化镉所致人胚肾(human embryonic kidney,HEK)细胞凋亡的拮抗作用。方法应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测不同CdCl₂浓度(0,10,20,40,80μmol/L)处理以及不同浓度NAC(1,2,4,8 mmol/L)和镉联合作用对HEK细胞相对存活率和凋亡率的影响。结果单纯染镉时,与对照组(0μmol/L)比较,20,40,80μmol/L CdCl₂3组HEK细胞相对存活率明显降低(P<0.01),HEK细胞凋亡率明显升高(P<0.01);NAC与镉联合作用时,与40μmol/L CdCl₂比较,40μmol/L CdCl₂+4,8 mmol/L NAC2组HEK细胞相对存活率明显提高,40μmol/L CdCl₂+2,4,8 mmol/L NAC3组HEK细胞凋亡率明显降低。结论一定浓度氯化镉可引起HEK细胞凋亡增加,NAC可以拮氯化镉引起的细胞凋亡。     

N-乙酰半胱氨酸和caspase-3抑制剂对镉诱导293细胞凋亡的拮抗作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(-Nacetyl cysteine,NAC)和caspase-3抑制剂(Z-DEVD-fmk)对镉致293细胞凋亡的影响,探讨氧化损伤和caspase途径在镉致细胞凋亡中的作用。方法体外培养的转化人胚肾293细胞分别以0、20、40、80、120、200μmol/L的氯化镉(CdCl2)处理0、3、6、12、24 h,NAC和Z-DEVD-fmk预处理组分别在镉处理前以2.5、5.0、10.0 mmol/L的NAC和0.1、1.0、10μmol/L的Z-DEVD-fmk预处理24 h和1 h,然后再以40μmol/LCdCl2处理24 h,MTT法测细胞相对存活率,流式细胞术Annexin-V-PI双染法检测细胞凋亡百分率。结果随着镉处理浓度的增加,CdCl2对细胞活力的抑制作用增强,细胞的相对存活率明显降低,与0μmol/L镉处理组比较,40、80、120、200μmol/L镉处理组293细胞的凋亡百分率显著升高(P<0.01);200μmol/L镉处理组与120μmol/L CdCl2组比较293细胞的凋亡百分率显著下降(P<0.01)。与40μmol/L镉处理组比较,5.0 mmol/L和10 mmol/L NAC预处理组细胞凋亡百分率显著降低,0.1、1.0、10μmol/L Z-DEVD-fmk预处理可使镉致293细胞凋亡百分率显著降低。结论NAC和Z-DEMD-fmk对镉诱导293细胞凋亡有明显的抑制作用,镉诱导细胞凋亡与氧化损伤和caspase途径密切相关。     

邻苯二甲酸二乙基己酯和镉对大鼠睾丸巨噬细胞分泌IL-1β的影响

目的研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)及镉(Cd)对大鼠睾丸巨噬细胞(TM)分泌细胞因子IL-1β的影响。方法利用贴壁法提取大鼠睾丸巨噬细胞。以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为对照组,用50μg/ml脂多糖(LPS)作为激活剂,以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L的DEHP或Cd Cl2单独及各自半量联合处理,作用24 h后用ELISA法检测上清液中细胞因子IL-1β的含量;用CCK8法测定各浓度DEHP或Cd Cl2单独处理对细胞活性的影响。结果 LPS可明显促进巨噬细胞分泌细胞因子IL-1β;0.5μmol/L DEHP+0.5μmol/L Cd和5μmol/L DEHP+5μmol/L Cd联合染毒可显著抑制细胞分泌功能,但IL-1β分泌量仍明显高于对照组,并介于两单独作用组之间;50μmol/L DEHP+50μmol/L Cd的联合处理可非常显著抑制细胞分泌功能,与对照组相比差异无统计学意义。随着剂量增加,DEHP或Cd单独作用都能抑制细胞分泌功能和细胞活性,但对两者抑制程度存在较大差异。结论 DEHP和Cd联合处理抑制大鼠TM分泌IL-1β表现出一定交互作用,对细胞活性的抑制可部分解释DEHP和Cd对细胞分泌功能的抑制效应。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在多菌灵致小鼠睾丸支持细胞增殖抑制和凋亡中的作用

目的通过建立多菌灵致小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤模型,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在多菌灵致小鼠TM4细胞增殖抑制和凋亡中的作用。方法将TM4细胞分别暴露于0(对照)、1、2、5、10、20μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用CCK-8法检测细胞存活率。将TM4细胞分别暴露于0(对照)、5μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期,采用Annexin V/PI双标法检测TM4细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞P38 MAPK和p-P38 MAPK蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、10、20μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着多菌灵暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率呈下降趋势。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组TM4细胞的存活率无明显改变。与对照组相比,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的凋亡率无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞G_1/G_0期细胞所占比例降低,而G2/M期和S期细胞所占比例升高,差异均有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组各期细胞所占比例均无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞仅G_2/M期细胞所占比例下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的p-P38 MAPK蛋白表达水平无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。各组TM4细胞的P38 MAPK蛋白表达水平间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多菌灵通过激活p38 MAPK信号通路抑制TM4细胞增殖,并诱导细胞凋亡及周期阻滞,从而造成细胞损伤。     

N-乙酰半胱氨酸对镉致大鼠肝线粒体损伤的影响

目的研究 N-乙酰半胱氨酸(NAC)对镉致大鼠肝线粒体损伤的影响。方法取6只清洁级雄性 Wistar 大鼠肝脏,梯度离心得线粒体液。将所得线粒体液分为6组,分别为对照组、镉染毒组(CdCl_2的浓度分别为10、100、1000、10000μmol/L)和 NAC 预处理组(线粒体液先用500 μmol/L 的 NAC 预处理30min 后,加1000μmol/L 的 CdCl_2)。于培养箱内37℃孵育1 h 后,测定各组锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力和还原型谷胱甘肽(GSH)、细胞色素 c(Cyt c)含量。结果与对照组相比,100、1000、10000μmol/L 镉染毒组 GSH 含量和 Mn-SOD 活力较低,差异均有统计学意义(P<0.05),且在10～10000μmol/L 范围内,随着 CdCl_2剂量的增加而呈降低趋势;1000、10000 μmol/L 镉染毒组 Cyt c 含量较高,差异均有统计学意义(P<0.05),且在0～10000μmol/L 范围内,随着 CdCl_2剂量的增加而呈升高趋势。与 NAC 预处理组相比,0、10、100、1000、10000 μmol/L 镉染毒组 GSH 含量和 Mn-SOD 活力以及0 μmol/L 镉染毒组 Cyt c 含量较低,1000、10000μmol/L 镉染毒组 Cyt c 含量较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论镉可剂量依赖性地诱导大鼠肝线粒体氧化损伤,NAC 能有效预防镉所致大鼠肝线粒体氧化损伤。     

邻苯二甲酸酯及双酚A或氯化镉对睾丸巨噬细胞分泌白细胞介素-10的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)及双酚A(BPA)或氯化镉对大鼠睾丸巨噬细胞(TM)分泌细胞因子IL-10的影响。方法原代提取大鼠TM细胞,以50μg/ml脂多糖(LPS)作为激活剂,分别设1、10、100μmol/L DEHP、BPA和1、10、50μmol/L氯化镉单独染毒组以及0.5μmol/L DEHP+0.5μmol/L BPA、5μmol/L DEHP+5μmol/L BPA、50μmol/L DEHP+50μmol/L BPA、0.5μmol/L DEHP+0.5μmol/L氯化镉、5μmol/L DEHP+5μmol/L氯化镉、50μmol/L DEHP+25μmol/L氯化镉联合染毒组。作用细胞24 h后,采用ELISA及细胞因子抗体芯片方法检测TM细胞上清液中细胞因子白细胞介素-10(IL-10)的浓度。结果与LPS组比较,1μmol/L氯化镉、10μmol/L BPA或100μmol/L DEHP单独染毒组的IL-10蛋白均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着剂量的增加抑制作用逐渐增强。无论与LPS组还是与1μmol/L BPA单独染毒组比较,0.5μmol/L DEHP+0.5μmol/L BPA混合染毒组的IL-10蛋白降低,差异有统计学意义(P0.05)。抗体芯片结果显示50μmol/L DEHP+50μmol/L BPA混合染毒组的荧光值是100μmol/L DEHP单独染毒组的76.9%,是100μmol/L BPA单独染毒组的115.0%。无论与LPS组还是100μmol/L DEHP单独染毒组比较,50μmol/L DEHP+25μmol/L氯化镉混合染毒组TM细胞上清液中IL-10蛋白浓度均较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 DEHP及BPA或氯化镉单独作用能明显抑制TM细胞分泌IL-10蛋白。低剂量(0.5μmol/L)DEHP和BPA的联合作用为协同作用,中、高剂量(5μmol/L、50μmol/L)的联合作用为拮抗作用。而DEHP和氯化镉对IL-10蛋白的交互作用为协同作用。     

铅镉联合染毒对小鼠初级精母细胞的毒性效应

目的研究乙酸铅和氯化镉对小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)的联合毒性效应。方法将处于对数生长期的GC-2 spd细胞分别暴露于0(对照),不同浓度(10、20、40、80μmol/L)乙酸铅和(或)不同浓度氯化镉(1、2、4、8、16μmol/L)染毒24 h,采用CCK-8法检测细胞的存活率。采用活性氧(ROS)试剂盒检测20μmol/L乙酸铅及500μmol/L ROS保护剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)分别与不同浓度氯化镉(0、1、2、4、8、16μmol/L)联合染毒24 h后的ROS水平。结果与对照组相比,20μmol/L乙酸铅染毒组GC-2 spd细胞的存活率上升,40、80μmol/L乙酸铅染毒组和2、4、8、16μmol/L氯化镉染毒组的细胞存活率均下降,差异均有统计学意义(P0.05);而10μmol/L乙酸铅染毒组和1μmol/L氯化镉染毒组的细胞存活率均无明显改变。与对照组相比,除10μmol/L乙酸铅+1μmol/L氯化镉染毒组和20μmol/L乙酸铅+1μmol/L氯化镉染毒组GC-2 spd细胞的存活率升高外,其他联合染毒组的细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P0.05);而20μmol/L乙酸铅+2μmol/L氯化镉组GC-2 spd细胞的存活率无明显变化。与相应浓度氯化镉单独染毒组相比,1μmol/L氯化镉+10、20μmol/L乙酸铅染毒组GC-2 spd细胞的存活率均升高,而1μmol/L氯化镉+40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P0.05);仅2μmol/L氯化镉+20μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率升高,而2μmol/L氯化镉+40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率降低,差异有统计学意义(P0.05);16μmol/L氯化镉+10、20、40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率均无明显变化,细胞基本全部死亡。与对照组相比,各浓度氯化镉染毒组GC-2 spd细胞的ROS水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);与相应浓度氯化镉单独染毒组相比,500μmol/L NAC与不同浓度氯化镉联合染毒组、20μmol/L乙酸铅与不同浓度氯化镉联合染毒组GC-2 spd细胞的ROS水平均下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论乙酸铅和氯化镉对GC-2 spd细胞毒性具有交互作用,表现为乙酸铅对低浓度氯化镉的GC-2 spd细胞毒性具有拮抗作用,对高浓度氯化镉的GC-2 spd细胞毒性具有协同作用。     

亚砷酸钠对人正常肝细胞凋亡及Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人正常肝(L-02)细胞凋亡及Bax、Bcl-2 m RNA和蛋白表达的影响。方法将L-02肝细胞分别暴露于含0(对照)、50、100、150μmol/L亚砷酸钠的培养基中暴露24 h。采用MTT法检测L-02肝细胞的存活率,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率,采用RT-PCR的方法检测Bax、Bcl-2 m RNA相对表达情况,采用Westernblotting方法检测L-02肝细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率均较低,凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率上升趋势。与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞中Bcl-2、Bax m RNA和蛋白的表达水平均较高,100μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值也较高,而150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值及50、150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2蛋白/Bax蛋白值均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可抑制L-02肝细胞的生长,诱导细胞凋亡的发生;其机制可能与Bcl-2家族的激活有关。     

铅暴露TM4细胞中Nrf2对Mrp1表达的调节作用

目的探讨铅暴露小鼠睾丸支持细胞(TM4细胞)核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)对多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein 1,Mrp1)表达的调节作用。方法将处于对数生长期的TM4细胞分别暴露于含20μmol/L乙酸铅(对照)和10、20、40、80μmol/L叔丁基对苯二酚(tBHQ,Nrf2激活剂)+20μmol/L乙酸铅及含1、2、4、8μmol/L全反视黄酸(ATRA,Nrf2抑制剂)+20μmol/L乙酸铅的培养基培养24 h,采用CCK-8法检测细胞的存活率。将TM4细胞分别暴露于含0(对照)、20μmol/L乙酸铅、20μmol/L乙酸铅+40μmol/L tBHQ、20μmol/L乙酸铅+2μmol/L ATRA继续培养24 h。采用原子吸收光谱法测定细胞铅含量,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Nrf2与Mrp1mRNA的表达水平,细胞免疫荧光法观察细胞中Nrf2的分布定位情况。结果随着tBHQ、ATRA暴露浓度的升高,铅暴露TM4细胞的存活率均呈先上升后下降的趋势。与对照组比较,80μmol/L tBHQ+20μmol/L乙酸铅组及8μmol/L ATRA+20μmol/L乙酸铅组TM4细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,乙酸铅组、乙酸铅+tBHQ组、乙酸铅+TARA组TM4细胞中的Nrf2与Mrp1 mRNA表达及铅含量均较高,差异有统计学意义(P0.05);与铅暴露组比较,乙酸铅+tBHQ组TM4细胞中的Nrf2 mRNA表达及乙酸铅+TARA组TM4细胞中的铅含量均较高,而乙酸铅+TARA组TM4细胞中的Mrp1 mRNA表达较低,差异有统计学意义(P0.05)。各处理组中Nrf2均未见明显核转位改变。结论铅暴露TM4细胞可以通过Nrf2的激活上调Mrp1的表达。     

邻苯二甲酸二乙基己酯和镉对大鼠睾丸

研究邻苯二甲酸二乙基己酯[BF](DEHP)及镉(Cd)对大鼠睾丸巨噬细胞(TM)[BFQB]分泌细胞因子IL-1β的影响? 方法 利用贴壁法提取大鼠睾丸巨噬细胞?以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为对照组,用50 μg/ml脂多糖(LPS)作为激活剂,以1 μmol/L?10 μmol/L?100 μmol/L的DEHP或CdCl2单独及各自半量联合处理,作用24 h后用ELISA法检测上清液中细胞因子IL-1β的含量;用CCK8法测定各浓度DEHP或CdCl2单独处理对细胞活性的影响? 结果 LPS可明显促进巨噬细胞分泌细胞因子IL -1β;0.5 μmol/L DEHP+0.5 mol/L Cd和5 μmol/L DEHP+5 μmol/L Cd联合染毒可显著抑制细胞分泌功能,但IL-1β分泌量仍明显高于对照组,并介于两单独作用组之间;50 μmol/L DEHP+50 μmol/L Cd的联合处理可非常显著抑制细胞分泌功能,与对照组相比差异无统计学意义?随着剂量增加,DEHP或Cd单独作用都能抑制细胞分泌功能和细胞活性,但对两者抑制程度存在较大差异? 结论 DEHP和Cd联合处理抑制大鼠TM分泌IL-1β表现出一定交互作用,对细胞活性的抑制可部分解释DEHP和Cd对细胞分泌功能的抑制效应?     

邻苯二甲酸酯和双酚A联合暴露对大鼠睾丸间质细胞活性的影响

目的研究环境内分泌污染物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)和双酚A(BPA)对原代大鼠睾丸间质细胞活性的影响。方法采用酶消化与贴壁法相结合提取大鼠睾丸间质细胞,分别暴露于终浓度0(对照)、1、10、100、1 000μmol/L的DEHP和(或)BPA溶液24 h。采用CCK8法检测细胞活性。结果与对照组比较,100、1 000μmol/L的DEHP暴露组和10、100、1 000μmol/L BPA暴露组及各浓度DEHP+BPA联合暴露组大鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着DEHP和(或)BPA暴露浓度的升高,大鼠睾丸间质细胞的抑制率均呈上升趋势。与相同浓度DEHP+BPA联合暴露组比较,1、1 000μmol/L的DEHP暴露组大鼠睾丸间质细胞的抑制率较低,1 000μmol/L的BPA暴露组大鼠睾丸间质细胞的抑制率较高,差异均有统计学意义(P0.05)。1μmol/L的DEHP与BPA联合暴露对细胞活性抑制表现为协同作用,1 000μmol/L的DEHP与BPA联合暴露表现为拮抗作用,10和100μmol/L的DEHP与BPA联合暴露对抑制细胞活性未表现出交互作用。结论 DEHP和BPA均能显著影响睾丸间质细胞活性,且以BPA作用更加明显;低剂量(1μmol/L)的DEHP和BPA联合作用为协同效应,高剂量(1 000μmol/L)的DEHP和BPA联合作用为拮抗效应。     

过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1-α对铅致小鼠睾丸支持细胞毒性的拮抗作用

目的研究过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1-α(PGC-1α)对铅致小鼠睾丸支持(TM4)细胞毒性的拮抗作用。方法将处于对数生长期的TM4细胞和慢病毒干扰技术构建稳定的PGC-1α过表达小鼠睾丸支持[PGC-1α(+)TM4]细胞株分别暴露于0(对照)、20、40、80、160μmol/L乙酸铅溶液染毒24 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并测定细胞内Caspase-9、Caspase-3的活力。结果与对照组比较,各浓度乙酸铅染毒组TM4细胞和PGC-1α(+)TM4细胞的凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着乙酸铅浓度升高,TM4细胞和PGC-1α(+)TM4细胞的凋亡率均呈上升趋势。与相同浓度TM4细胞比较,各浓度乙酸铅染毒组PGC-1α(+)TM4细胞的凋亡率较低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙酸铅染毒组TM4细胞和PGC-1α(+)TM4细胞内Caspase-9和Caspase-3的活力均升高,除20μmol/L乙酸铅染毒组TM4细胞内Caspase-3活力外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着乙酸铅染毒浓度的升高,TM4细胞和PGC-1α(+)TM4细胞内Caspase-9和Caspase-3的活力均呈上升趋势。与相同浓度TM4细胞比较,各浓度乙酸铅染毒组PGC-1α(+)TM4细胞内Caspase-9和Caspase-3的活力较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论PGC-1α可能通过下调细胞内凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3的活力,来拮抗铅诱导的小鼠睾丸支持细胞凋亡。     

DNA依赖蛋白激酶抑制剂对1,4-苯醌诱导的非p53依赖的HL60细胞凋亡的影响

目的 探讨DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)抑制剂NU7026和渥曼青霉素(Wortmannin)对1,4-苯醌(1,4-BQ)诱导的人早幼粒白血病细胞(HL60)细胞凋亡的影响.方法 HL60细胞分为染毒组(0、5、10、25和50μmol/L1,4-BQ染毒24 h)和NU7026 、Wortmannin预处理组(10μmol/L NU7026、25μmol/L Wortmannin分别预处理1h后以0、5、10、25和50 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),用流式细胞仪Annexin V/PI双染法和DNA Ladder法分析检测细胞凋亡水平.将HL60细胞分为空白对照组、NU7026处理组(10 μmol/L)、Wortmannin处理组(25 μmol/L)、1,4-BQ染毒组(10 μmol/L)、NU7026+1,4-BQ组(10μmol/L NU7026预处理1h,以10 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),25 μmol/L Wortmannin+1,4-BQ组(25μmol/L Wortmannin预处理1h,以10 μmol/L 1,4-BQ染毒24 h),用real-time PCR法检测Bax mRNA基因表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HL60细胞的p53蛋白表达.结果 流式细胞仪Annexin V/PI双染法结果显示,NU7026+10 μmol/L 1,4-BQ处理组细胞凋亡率为17.6％±1.19％,Wortmannin+ 10μmol/L 1,4-BQ处理组细胞凋亡率为15.2％±1.22％,两组细胞凋亡率均高于10 μmol/L 1,4-BQ染毒组(6.3％±1.04％);NU7026+25tμmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为46.2％±3.55％,Wortmannin+25 μmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为26.9％±2.62％,两组细胞凋亡率均明显高于25 μmol/L 1,4-BQ染毒组(14.1％±1.54％);NU7026+50 μmol/L1,4-BQ处理组细胞凋亡率为61.8％±1.78％,明显高于50 μmol/L1,4-BQ染毒组(35.9％±4.51％),以上各组的差异均有统计学意义(P＜0.05).DNA Ladder法结果与流式细胞仪检测数据基本一致.与NU7026组和1,4-BQ染毒组比较,NU7026+1,4-BQ组Bax mRNA表达水平升高;与Wortmannin组和1,4-BQ组比较,Wortmannin+1,4-BQ组Bax mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测HL60细胞不表达p53蛋白.结论 DNA-PK抑制剂NU7026和Wortmannin促进1,4-BQ诱导的非p53依赖的HL60细胞凋亡.     

镉诱导293细胞凋亡与Caspase-3和p53表达关系

目的研究镉致细胞凋亡过程中Caspase-3和p53表达的变化,探讨Caspase-3和p53基因在镉致细胞凋亡中的作用。方法离体培养的转化人胚肾293细胞以40μmol/L氯化镉分别处理0~24h,N-乙酰半胱氨酸(NAC)和Caspase-3特异性三肽抑制剂(Z-DEVD-fmk)预处理组分别在镉处理前以5mmol/LNAC和10μmol/LZ-DEVD-fmk预处理24h和1h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测Caspase-3和p53水平,流式细胞Anexin-V-PI双染法检测细胞凋亡率。结果40μmol/L镉处理293细胞,6~24hCaspase-3基因mRNA水平显著增高,0~24h内p53基因mRNA无显著变化。40μmol/L镉处理293细胞,6~24h内Caspase-3相对分子质量20000的活性亚单位条带显著增强,与镉处理24h组比较,NAC预处理组Caspase-3相对分子质量20000的活性亚单位条带显著减弱(P<0·01),Z-DEVD-fmk预处理组无明显变化(P>0·05);40μmol/L镉处理293细胞,p53蛋白在6~24h表达增强(P<0·01),与单纯镉处理24h组比较,NAC和Z-DEVD-fmk预处理组p53蛋白表达无显著变化(P>0·05)。结论Caspase-3基因在镉诱导细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

乙酸铅和氯化镉暴露对小鼠睾丸支持细胞乳酸水平的影响

目的探究乙酸铅、氯化镉单独或联合染毒对小鼠睾丸支持细胞(15P-1细胞)乳酸(LD)水平的影响。方法将15P-1细胞分设对照(空白培养基)组和乙酸铅(0.05~160μmol/L)单独染毒组、氯化镉(0.05~160μmol/L)单独染毒组,染毒24 h后,测定细胞存活率。后续实验分别设对照(空白培养基)组和乙酸铅(1~60μmol/L)单独染毒组、氯化镉(0.5~30μmol/L)单独染毒组及乙酸铅(1、10、20μmol/L)+氯化镉(0.5、5、10μmol/L)联合染毒组,染毒24 h后,测定细胞内葡萄糖摄取量、乳酸脱氢酶(LDH)活力以及细胞内、外LD浓度和p H值。结果与对照组比较,2.5~160μmol/L乙酸铅和2.5~160μmol/L氯化镉分别单独染毒组15P-1细胞存活率均降低(P0.05)。与对照组比较,0.5~10μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞内的葡萄糖摄取量较高(P0.05)。与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,仅0.5μmol/L氯化镉单独染毒组细胞内葡萄糖摄取增加(P0.05)。与对照组比较,1、10μmol/L乙酸铅染毒、各浓度氯化镉染毒及10μmol/L乙酸铅+5μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞内的LD浓度较高,而20~60μmol/L乙酸铅染毒及20μmol/L乙酸铅+10μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞内的LD浓度较低(P0.05);与对照组比较,1~30μmol/L乙酸铅染毒及15、30μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞外的LD浓度均较低,而0.5、5μmol/L氯化镉染毒及1μmol/L乙酸铅+0.5μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞外的LD浓度较高(P0.05)。与对照组比较,10~60μmol/L乙酸铅染毒及5~15μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞内的p H值较低(P0.05)。与对照组比较,20~60μmol/L乙酸铅染毒及各浓度氯化镉染毒15P-1细胞外的p H值较高(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙酸铅+氯化镉染毒组15P-1细胞内、外的p H值均较高(P0.05)。与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,1、10、20μmol/L乙酸铅单独染毒组及0.5、5、10μmol/L氯化镉染毒组细胞内p H值较高,而1、10、20μmol/L乙酸铅单独染毒组及0.5、10μmol/L氯化镉单独染毒组细胞外p H值较高(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙酸铅染毒15P-1细胞内的LDH活力较低,而各浓度氯化镉染毒15P-1细胞内的LDH活力较高(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙酸铅+氯化镉染毒组15P-1细胞内LDH活力均较高(P0.05)。与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,1、10、20μmol/L乙酸铅单独染毒组及5、10μmol/L氯化镉单独染毒组细胞内的LDH活力较高(P0.05)。结论乙酸铅对生精系统的损伤可能通过降低细胞内LDH活力进而抑制细胞内乳酸生成来实现,而氯化镉则可能通过抑制细胞内LD转运到细胞外供给精子发生需要的能量来实现。